石蜡切片制作注意事项

病理制片技术――组织石蜡切片

组织经石蜡包埋后制成的蜡块，用切片机制成切片的过程为石蜡切片法。石蜡切片法现使用的切片机有平推式切片机、轮转式切片机两种。

一、平推式切片机石蜡切片法

1．切片前的准备：清洗过的载物片(或免清洗的)，毛笔，铅笔，小竹片，水槽，雾化器，摊片器，切片刀，刀架。

2．切片制作步骤：刀架的粗削部放在头端，在切片机刀架部夹紧。组织蜡块装在切片机蜡块固定器上夹紧。右手握切片机刀头运动手柄，左手转动切片机蜡块运动 旋钮。先转动此钮，后平拉刀架运动手柄，进行粗削，直至组织切全。停止，将刀架移到细削部，轻轻转动蜡块运动旋钮，后拉刀架手柄进行细削。削至组织光滑发 亮，右手拿毛笔扫净刀架及蜡块上的蜡屑，组织屑，放下毛笔，再用右手握住刀架运动手柄。左手拿小竹片，用竹片头蘸一下水槽中的水。左手中指搬动薄切钮，雾 化器的喷头对准蜡块。右手拉刀架运动手柄。左手中的小竹片在蜡块空白处等待切片刀切起蜡片一端挑起粘住，随切片刀移动，完整的蜡片切出后，粘在竹片上，移 入水槽中，捞片，放在摊片器上摊片5 min后，装在染色篮上，放入75℃烤箱烤片。

3．注意事项

(1)无冷台的病理科可以将包埋好的组织蜡块放到冰箱内，但如放置时间过久温度太低切片时蜡块会产生热涨，切片会厚，要多切几张，后面的片子就会薄一些。

(2)雾化器是去除静电的，但也有增加切片厚度的缺陷。尤其雾气大时，使蜡块热涨，厚度增加更明显。为了保证切片厚度，一定要控制好风力、雾力。雾化器使用自来水，水位控制在30刻度。

(3)切片机使用前一定要检查各部位情况。先检查固定器是否固定在你所要的厚度上。切片机刀架角度与蜡块呈90。。从蜡块右上角进刀。

二、轮转式切片机石蜡切片法

1．切片前的准备：清洗过的载玻片、毛笔、铅笔、盛有30％乙醇的小烧杯、牙科镊、展片槽、切片机、一次性刀片及刀架。检查轮转式切片机切片厚度的钮是否固定于你所要切的厚度刻度上。

2．切片制作步骤：将放在－5℃冷台上的组织蜡块装在切片机固定器上夹紧，空白蜡多的一端在上。将切片刀固定一端为粗削部，左手旋动蜡块推动器，右手旋动 切片机把手。先摇动蜡块推动器，后摇动切片机机头半轮上下运动，进行粗削，一进一削，直至组织切全。而后将切片刀移至另一端进行细削，削至蜡块光滑平整。 用毛笔将其刀架、蜡块面清扫干净。左手持毛笔，右手整轮转动切片机手柄进行切片。将毛笔贴于刀架背不时转动，轻轻托起连片的蜡片。右手停止转动机头，换持 牙科镊，夹住连片蜡片头端，放入盛30％乙醇的烧杯内。用牙科镊去除不好的蜡片。放入水温45～50℃水槽内展片后捞片。

第1篇

一、实验目的

1. 掌握石蜡切片的基本操作步骤。

2. 了解石蜡切片的染色原理和方法。

3. 观察细胞组织的结构特征。

二、实验器材与试剂

1. 器材：

- 石蜡切片机

- 石蜡包埋机

- 恒温箱

- 显微镜

- 载玻片

- 盖玻片

- 毛笔

- 镊子

- 刀片

- 染色缸

- 烤片机

- 试剂瓶

2. 试剂：

- 4%多聚甲醛固定液

- 无水乙醇

- 二甲苯 - 苏木素染液

- 伊红染液

- 1%盐酸酒精溶液

- 1%氨水溶液

- 甘油蛋白粘片剂

- 中性树胶

三、实验步骤

1. 取材与固定：取新鲜组织，用4%多聚甲醛固定24小时以上。

2. 脱水：将固定好的组织放入脱水盒，依次用75%、85%、90%、95%、无水乙醇进行脱水，每级酒精处理1小时。

3. 浸蜡：将脱水后的组织放入二甲苯中浸泡，每缸浸泡1小时。

4. 包埋：将浸好蜡的组织块放入包埋机中，加入融化的石蜡，待石蜡凝固后取出，修整蜡块。

5. 切片：将修整好的蜡块固定在切片机上，切成4微米厚的切片。

6. 水化：将切片放入水中，用毛笔轻轻搅动，使切片展平。

7. 脱蜡：将水化的切片放入二甲苯中，依次浸泡30分钟，然后放入无水乙醇中，浸泡10分钟。

8. 苏木素染色：将脱蜡后的切片放入苏木素染液中，染色0.5-1分钟。

9. 自来水漂洗：将染色后的切片放入自来水中漂洗。

10. 盐酸酒精分化：将漂洗后的切片放入1%盐酸酒精溶液中分化数秒。

11. 自来水漂洗：将分化后的切片放入自来水中漂洗。

12. 氨水返蓝：将漂洗后的切片放入1%氨水溶液中返蓝1分钟。

13. 自来水漂洗：将返蓝后的切片放入自来水中漂洗。

14. 伊红染色：将漂洗后的切片放入伊红染液中染色1分钟。 15. 自来水漂洗：将染色后的切片放入自来水中漂洗。

石蜡切片基本步骤

（一）取材和固定

根据实验目的选择材料。 将整个虫体或虫体的内部器官 （如肠道、 马氏管、唾液腺等）取出后，立即投入固定液。

取材大小：0.5cm>0.5 cm迥.2或者1.0 cm X.0 cm迥.2，厚度不宜 超过

3mm。

固定液： 2.5%的戊二醛固定液， Bouin 氏液， 10%甲醛等。

固定时间： 4oC 固定 24 小时。

注意事项：

取材： 1．勿使组织块受挤压 切取组织块所用刀、剪要锋利， 切割时不可来回切割。夹取组织时，镊子要轻，切勿挤压，以免损伤 组织。取材时，组织块可稍大一点，以便在固定后，将组织块的不平 整部分修去。

2. 选好组织块的切面 应熟悉器官组织的组成， 并根据观察目的 来确定纵切或横切。

3．保持材料的清洁 组织块上如有血液、污物、粘液、食物等， 先用生理盐水冲洗干净，再入固定液。

4．切除（清除）不需要的部分 特别是组织周围的脂肪等，应

尽可能清除掉，以免影响以后的程序和观察。

固定： 1．材料新鲜 取出组织后须立即固定。否则时间相隔过 久，体积就要收缩变形或发生自溶现象。

2．抽气 生物组织常有气体的存在， 使材料不能沉入固定液中， 抽气使得固定液有效渗入。 真空泵抽气或者用空针管抽气。 昆虫整体 固定，固定前用解剖针刺数个小孔，以利用固定液渗透。

3．固定剂用量 一般为组织体积的 10~20倍。勿使组织贴于瓶 底或瓶壁，以免影响固定剂的渗入。

4．避免阳光 尽可能避免接触阳光以免失去固定作用。

5．加速固定 轻轻摇动盛器使组织移动有利于固定液渗入，对 长期固定的标本可经常更换固定液。

（二）洗涤 2.5%戊二醛固定液固定的组织： 0.2M, pH7.2 磷酸缓冲液漂洗三 次，每次 10min

Bouin氏固定液固定的组织：直接入70%酒精更换数次即可脱水， 注意苦味酸。

甲醛固定的组织：直接投入 50%或 70%酒精脱水，不经水洗。 但如果在甲醛中时间过长，则仍应当用流水冲洗。

石蜡切片制作超详细步骤

1．取材

颈椎脱臼法处死小鼠，打开腹腔，剪取肝组织（或其他组织）。

切取的组织块不宜太大，以利于固定剂穿透，通常以5mm×5mm×2mm或10 mm×10 mm×2 mm为宜。取下所需要的肝组织，切成一小块2－3mm厚。

注意事项：

（1）取材动作要迅速，不宜拖太久，以免组织细胞的成分、结构等发生变化。

（2）切片材料应根据需要观察的部位进行选择，尽可能不要损伤所需要的部分。

2．固定

将切好的肝组织用生理盐水洗一下，立即投入中性福尔马林固定液中固定30－50min。

注意事项：

（1）一般固定液，都以新配为好，配好后应贮存在阴凉处，不宜放在日光下，以免引起化学变化，失去固定作用。

（2）有些混合固定液的成分之间会发生氧化还原作用，一定要在使用前混合，如果混合太早，固定时就没有作用了。

（3）固定材料时，固定液必须充足，一般为材料块的20~30倍，有些水分多的材料，中间应更换1-2次新液。

（4）材料固定完毕后，保存于严密紧塞或加盖的容器里，同时在容器外贴上标签，并随同材料在溶液中投入相应的标签，以免混淆。标签上注明固定液、材料来源、日期等。标签上的文字，用黑色铅笔写。

3.洗涤

材料经固定后,流水冲洗，数小时或过夜。

4.脱水

材料依次经70%、80%、90%各级乙醇溶液脱水，各30min，再放入95%、100%各2次，每次20min。

注意事项：

（1）脱水必须在有盖的玻璃瓶中进行，防止吸收空气中的水分。

（2）在更换高一级的脱水剂时，最好不要移动材料以免损坏，可用吸管吸出器皿中的脱水剂，再用吸水吸尽器皿内剩余液，然后于皿中加入高一级脱水剂。

（3）在低浓度酒精中，每级停留不宜太长，否则易使组织变软，助长材料的解体。

（4）在高浓度或纯酒精中，每级停留的时间也不宜太长，否则会使组织变脆，影响切片。

（5）如需过夜，应停留在70%酒精中。

（6）脱水必须彻底，否则不易透明，甚至使透明剂内出现白色混浊现象