安徽农业大学学报．２００２ｔ ２９（２）：１７８～１ ８１
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｎｈｕｉ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
大黄鱼溃疡病致病菌的初步分离与鉴定
毛芝娟 ，刘国勇。，陈昌福
（１．浙江省宁波市水产研究所，宁波３１５０１２；２．华中农业大学农业部农业微生物重点开放实验室）
摘 要：本文报道了从浙江省宁波市象山港内养殖罔葙中惠病太黄童体内和体表分离致病茵的初步鉴定结
果。从患病太黄鱼上共分离到５个茵株，经注射和浸泡ｈ，ｔｒＡ．：ｒ－感染试验，证明其中４个茵株能导致试验鱼１０Ｏ
的兄亡 撮据对菌株的形态和生化特性的刹定结果．５个茵椿分属于２种不同的弧茵，其中Ｙ６２００１和Ｙ８０７２１
等２个茵株属于哈雏氏弧茵（Ｖｉｂｒｌｏ ｈａｒｖｅｙｉ）．而Ｙ７０３０ｌ、Ｙ７０７０１和Ｙ８０７０４等３个茵株属于副溶血弧茵
（ ．ｐａｒａｔ￣ｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ） 关键词：太黄童｛溃疡痛｛致病茵；分离；鉴定
中图分类号：￥９４３．３２２ 文献标识码：Ａ 文章编号：１０００ ２１９７（２００２）０２ ０１７８ ０４
大黄鱼（Ｐｓｅｕｄｏｓｃｉａｅｎａ ｃｒｏｃｅａ）是产于东海的主要名贵鱼类之一。近年来，大黄鱼养殖业在福建、浙
江、广东等省沿海地区迅速发展。据报道，福建省１ ９９９年养殖大黄鱼的嗣箱已超过１ ５万只 ］。在浙江省
宁波市象山港一带，２０００年养殖大黄鱼的网箱也已超过２万只。但是随着大黄鱼养殖业的迅速发展，疾
病的流行和危害也日益严重 根据作者对浙江省宁渡市象山港内网箱养殖大黄鱼发病情况的调查结果，由
细菌性疾病引起的死亡率已达到养殖期问大黄鱼总死亡率的４０ 以上（调查结果另文发表）。关于福建省
沿海养殖大黄鱼的主要细菌性疾病，已有人先后分离和鉴定了几种病原菌＋如副溶血弧菌（Ｖｉｂｒｉｏ
ｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ）、哈维氏弧菌（ ．ｈａｒｖｅｙｉ）、溶藻弧菌（ ．ａｌｇｉｎｏｌｙｔｉｃｕｓ）和腐败假单胞菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ
吉林医学２０１４年４月第３５卷第ｌ０期
实验室内质量控制与食源性致病菌盲样分离鉴定
蔡剑辉，李贻汉，何小媚（广东省深圳市龙华新区疾病预防控制中心，广东深圳５１８１０９） ・２０３９・
［摘要］ 目的：通过参加湘粤两地疾病预防控制系统组织开展的２０１２年度食源性致病菌质控考核，以检验本实验窒室内
质控效果及检验能力。方法：样品的检验方法按国家标准食品微生物学检验ＧＢ４７８９的相关章节进行。结果：从该半固体样品中
检出都柏林沙门氏菌和单核增生性李斯特氏菌。结论：本次质检盲样考核提高了本实验室食源性致病菌检测水平和实验室工作
人员自信心。 ［关键词］ 沙门菌；单核增生性李斯特菌；质量控制
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｑｕａｌｉｔｙ ｃｏｎｔｒｏｌ ａｎｄ ｂｌｉｎｄ ｓａｍｐｌｅ ｏｆ ｆｏｏｄｂｏｒｎｅ ｐａｔｈｏｇｅｎｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ＣＡ１ Ｊｉａｎ—ｈｕｉ，ＬＩ
Ｙｉ—ｈａｎ，ＨＥ Ｘｉａｏ—ｍｅｉ（Ｌｏｎｇｈｕａ Ｄｉｓｔｒｉｃｔ Ｃｅｎｔｅｒｆｏｒ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ ａｎｄ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ，Ｓｈｅｎｚｈｅｎ ５１８１０９，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｂｙ ｐａｒｔｉｃｉｐａｔｉｎｇ ｉｎ Ｈｕｎａｎ ａｎｄ Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ ｄｉｓｅａｓｅ ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｏｎｔｒｏｌ ｓｙｓｔｅｍ ｏｆ ｔｈｅ ｔｗｏ ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｔｈｅ ２０１２ ａｎｎｕａｌ ｑｕａｌｉｔｙ ｃｏｎｔｒｏｌ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ ｆｏｏｄｂｏｍｅ ｐａｔｈｏｇｅｎｓ ｔｏ ｐｌｕｇ ｉｎ ｏｕｒ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｉｎｔｅｒｎａｌ ｑｕａｌｉｔｙ ｃｏｎｔｒｏｌ ｔｅｓｔ ｒｅｓｕｌｔｓ ａｎｄ ｔｅｓｔ ｃａｐａｂｉｌｉ— ｔｉｅｓ．Ｍｅｔｈｏｄ Ｓａｍｐｌｅ ｔｅｓｔ ｍｅｔｈｏｄｓ ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ｎａｔｉｏｎａｌ ｓｔａｎｄａｒｄｓ ｏｆ ｆｏｏｄ ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ＧＢ４７８９ ｒｅｌｅｖａｎｔ ｃｈａｐｔｅｒｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ Ｄｕｂ—
山东畜牧兽医 ２０１３年第３４卷
腹泻猫肠道细菌的分离鉴定
和再昌① 王江豪②李建生③ 李海昌② 张佳② 肖啸② （①云南省迪庆州香格里拉县畜牧兽医局６７４４００ ②云南农业大学动物科学技术学院 云南昆明 ③昆明桔和工贸有限公司 云南昆明） 摘要试验将采集的新鲜粪样接种到培养基上培养观察茵落形态结构、颜色特点。然后挑取培养基上的茵落进行革 兰氏染色、镜检，在生物显微镜视野内找到大量散在两端钝圆的短杆菌，初步确定致病细菌为短棒革兰氏阴性菌。之后 用麦康凯培养纯化，用纯化得到的茵落进行生化鉴定，确定致病菌为大肠杆菌。药敏试验结果表明，头孢曲松对其抑制 作用最强，其次是恩诺沙星。 关键词猫细菌性腹泻分离鉴定药敏试验 中图分类号：￥８５８．２９３ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００７—１７３３（２０１３）０７．００１０．０２ 关于动物胃肠正常菌群的研究报道很多，但细菌性 腹泻的却甚少。猫的肠道内有大量潜在的致病菌，但不 是每种细菌都与临床疾病有明确的联系【”。致病菌包括： 肠致病性大肠埃希氏菌、无致病性大肠杆菌、沙门氏菌 属、小肠结肠炎耶尔森菌、弯曲菌属、毛状芽孢杆菌、 梭菌属、葡萄球菌和志贺菌属，其中以由大肠杆菌引起 的最为常见［２】０ ＣａｎｄｌｅｒＩ （１９８４）研究发现除了新生仔畜大 肠杆菌病和出血性胃肠炎外，还有一些细菌，如沙门氏 菌、弯曲菌能引起腹泻综合症。 １材料与方法 １．１试验材料 １．１．１ 试验药物 呋喃妥因、头孢氨苄、环丙沙星、庆 大霉素、卡那霉紊、林可霉素、氧氟沙星、诺氟沙星、 氯霉素、菌必治等药敏纸片。 １．１．２试验器材培养基、恒温培养箱、超净工作台、 接种环、酒精灯等。 １．１．３试验试剂 糖类、磷酸氢二钾、氯化钠、琼脂、 胆盐、超纯水、中性红、结晶紫、蛋白胨、伊红．Ｙ、美 ｊ｝＝；＝、硫化氢、苯丙氨酸、枸橼酸盐、尿素、赖氨酸、鸟 氨酸、棉子糖、山梨醇、木胶糖等。 １．２试验方法 １．２．１ 粪便采集挑选腹泻猫，排除病毒性、寄生虫性 和其他条件性腹泻，确诊为细葡性腹泻后，用无菌棉签 采集患病猫的新鲜粪便ｌ０份；再采集１Ｏ只临床健康的猫 作对照。 １．２．２细菌培养将采集的２Ｏ份样品在超净工作台上分 别接种到普通培养基、麦康凯琼脂培养基、伊红美蓝琼 脂培养基上，并且标明接种的编号。接种完后将培养皿 放／￣３７＂Ｃ恒温培养箱培养１８—２４ｈ，观察３种培养基上菌落 的形态结构和颜色特点。根据菌落形态及颜色进行分离 培养。 １．２．３ 生化鉴定 使用精氨酸、鼠李糖、乳糖、水杨 基金项目：云南省高端科技人才引进项目（２００９Ｃ１ １２５－６） 通讯作者 ｌ０ 素、甘露醇、蔗糖、七叶苷、半乳糖、果糖、山梨醇、 葡萄糖、懒氨酸、麦芽糖、阿拉伯糖、棉籽糖、术糖、 卫矛醇、甲基红实验、Ｖ－Ｐ试验、＂￣７１ Ｊ朵等分别配制生化鉴 定管【４】。将培养皿中纯化的典型菌种在超净工作台上接种 至生化鉴定管中，２４ｈ后观察结果【５Ｊｄ １．２．４药敏试验将纯化所得的细菌接种于普通培养基 上，干燥后贴上药敏试剂片，３７℃恒温培养１８～２４ｈ观察 结果，用游标卡尺测量抑菌圈直径。 ２试验结果与分析 ２．１接种培养结果 接种病猫粪便的麦康凯培养基中均有均匀红色，边 缘整齐，中心突起，中等大小，表面光滑湿润的散存菌 落长出，疑似大肠杆菌。 ２．２生化试验结果 表１生化试验结果
肠道致病菌分离鉴定的实验教学质量评价
标签：肠道致病菌；实验教学；考核标准；教学质量
文献标志码：B
肠道致病菌的分离与鉴定是临床检验专业学生必须掌握的一项技术，是教学大纲要求熟练掌握的重要内容。该实验技术程序较为复杂，学生不容易掌握。因此，在实验教学时必须充分准备，科学设计，严格操作，客观评价。为此，本教研室建立了一套实验与考核方法，并尝试制定考核标准，促进肠道致病菌实验教学质量的不断提高。
1 实验材料与试剂
1.1实验材料
正常粪便+伤寒沙门氏菌为1号标本；正常粪便+志贺氏菌为2号标本。
1.2培养基
SS琼脂、麦康凯琼脂、KIA培养基、MIU培养基、赖氨酸与鸟氨酸脱羧基培养基、甘露醇微量发酵管。
1.3试剂
革兰氏染液，生理盐水，靛基质试剂，AFO多价O2因子，O7、O9、Ha、Hb因子血清，VP试剂，志贺氏多价诊断血清。
1.4器材
无菌操作台，显微镜，酒精灯，接种环，载玻片，培养箱，试管。
2 实验设计与操作步骤
2.1实验流程
制定考核标准－实验用品的准备－标本编号－实验分组－实验实施－实验结果与现象记录－实验小结及分析－考核与评价。
2.2实验分组
2010年全班总人数48人，分6小组，每组8人。
2.3实验与操作
分离培养：1～3組取1号标本，4～6组取2号标本。每人取SS琼脂平板、麦康凯琼脂平板和血平板进行细菌划线接种，置37℃温箱，孵育18～24h后观察结果。
生化反应与形态观察：从SS琼脂平板或MAC平板上挑取可疑菌落一无色半透明菌落，涂片、染色，油镜下观察染色细菌(正常情况下为G-杆菌)。
血清学鉴定：从SS琼脂平板或麦康凯琼脂平板上挑取无色半透明中等大小菌落，接种在KIA培养基、MIU培养基和甘露醇鸟氨酸培养基中，置37℃温箱孵育，次日观察结果。
2.4实验结果记录
(1)准确记录①②号标本在SS琼脂平板和血平板上的菌落特征。(2)客观如实记录①②号标本在KIA培养基中(斜面、底层、产气、H2S、动力等)现象及特征；记录①②号标本对MIU氨酸、赖氨酸、甘露醇的微量管中的生化反应特征。(3)记录单一菌落的血清学鉴定结果(包括标准诊断AHO多价志贺氏多价血清和O2、O7、O9、Ha、Hb因子血清检测结果等)。
