参莲提取物对TNF_刺激下单核细胞株THP_1功能的影响

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清热_活血类中药有效成分对THP_省略_成及分泌IL_1_TNF_的影响_潘华新

论著　清热、活血类中药有效成分对THP -1巨噬泡沫细胞形成及分泌IL -1β、TNF -α的影响潘华新,王培训,周　联,曹柳英,梁瑞燕(广州中医药大学,广东广州510405) [摘要]　目的　探讨清热、活血类中药有效成分抑制巨噬细胞泡沫化的作用及机制。

方法　以氧化型低密度脂蛋白(ox -LDL )和细菌脂多糖(LPS )诱导T HP -1细胞成为巨噬泡沫细胞,采用油红O 染色脂质半定量分析法和EL ISA 法检测中药有效成分对T HP -1巨噬泡沫细胞形成及培养上清中白细胞介素1β(I L -1β)和肿瘤坏死因子α(TN F -α)含量的影响。

结果　20μmo l /L 的黄连素、黄芩苷、大黄素、丹参酮ⅡA 和100mg /L 的三七总皂苷可显著降低T HP -1巨噬泡沫细胞油红O 染色阳性率;20μmol /L 的大黄素、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA 可显著降低THP -1巨噬细胞的I L -1β分泌量;20μmol /L 的黄连素可显著降低THP -1巨噬细胞的T N F -α分泌量。

结论　清热、活血类中药有效成分可抑制巨噬细胞泡沫化及其炎症因子I L -1β和/或T N F -α的分泌,抑制炎症因子的释放可能是其抗泡沫细胞形成的机制之一。

[关键词]　T HP -1;巨噬泡沫细胞;白细胞介素1β;肿瘤坏死因子α;清热类中药;活血类中药[中图分类号]　R285.6 [文献标识码]　A [文章编号]　1008-8849(2009)35-4325-04Influence of effective ingredient of clearing heat and activating blood circulation kinds of traditional Chinese medicine on formation of THP -1macrophages foam cells and secreting IL -1βand TNF -αPan Huaxin ,Wang Peix un ,Zhou Lian ,Cao Liuying ,Liang Ruiyan(Guangzhou T raditional Chinese M edical University ,Guangzhou 510405,Guangdo ng ,China )Abstract :Objective It is to approach the actio n and its mechanism of effective ingredient of clearing heat and activating blood circulation kinds of traditional Chinese medicine inhibiting the transformation of macrophages into foam cells .Methods T HP -1cells were induced into macrophag e foam cells by ox -LDL and LPS .T he influence of effective ing redient of tradi -tio nal Chinese medicine on the fo rmation of T HP -1macrophage foam cells and the content of IL -1βand T NF -αin super -natant of culture solution were detected with oil red O staining lipid semiquantitative analysis and ELISA methods .Results 20μmol /L berberine ,baicalin ,emodin and tanshinone I IA and 100mg /L Panax N otoginsenosides could significantly low er the positive ra te of THP -1macrophage foam cells oil red O stained .20μmol /L emodin ,tanshinone I and tanshinone IIA could significantly lower I L -1βsecreto ry volume of THP -1macrophage .20μmol /L berberine could sig nificantly lower T N F -αsecretory volume of T HP -1macrophage .Conclusion Effective ingredient of clearing heat and activating blood circulation kinds of traditional Chinese medicine can inhibit the transfo rma tio n o f macrophages into foam cells and the secretion of in -flammatory factor IL -1βand /or TN F -α.I nhibiting the release of inflammatory factor may be one of the mechanisms of anti -foam cell formation .Key words :T HP -1;macrophage source foam cells ;IL -1β;T NF -α;clearing heat kind of traditio nal Chinese medicine ;activating blood circulation kind of traditional Chinese medicine [作者简介]　潘华新(1964—),男,博士,副研究员,主要从事中药药理的研究工作。

黄芪多糖对LPS诱导的THP-1源巨噬细胞产生细胞因子TNF-α、IL-12和IL-10的影响

• 448 •浙江中医杂志2019年6月第54卷第6期实验研究黄罠多糖对LPS 诱导的THP-1源巨噬细胞产生细胞因子TNF-a JL-12和IL-10的影响**基金项目：浙江省自然科学基金资助项目中药蛇六谷主要抗癌成分——魔芋葡甘露聚糖诱导DC-CIK 细胞过继免疫抗肿瘤作用.LY13H290012# 通讯作者：陈培丰，E-mail ： cpfl2345@费煜畅'郑戴波' 潘磊'陈培丰"1浙江中医药大学第一临床医学院浙江杭州3100532 浙江省中医院浙江杭州310006摘要目的：探讨黄英多糖(APS)对脂多糖(LPS)诱导的THP-1源巨噬细胞产生细胞因子TNF-a JL-12和 IL-10的影响及其抗肿瘤的机制。

方法：实验设置THP-1组(空白对照组)、THP-1+LPS 组(模型组)、THP-1 + LPS+APS 低浓度组、THP-1+LPS+APS 高浓度组，通过佛波酯(PMA )诱导THP-1细胞分化成巨噬细胞，并通过 LPS 刺激建立炎症模型，将APS 作用于THP-1源巨噬细胞进行24h 、48h 体外实验，分别采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及酶联免疫法(ELISA)检测THPT 源巨噬细胞的IL-10 JL-12和TNF-a mRNA 转录水平及蛋白的表达水平。

结果：模型组细胞IL-10JL-12和TNF-a mRNA 及蛋白表达水平均明显增加，与空白对照组细胞比较，均有显著意义(P<0. 05)：不同浓度APS 组能够上调由LPS 刺激引起的IL-12.TNF- a mRNA 及其蛋白表达水平的增加，下调IL-10的表达，结论：黄英多糖(APS)可能通过影响THP-1源巨噬细胞的IL- 12.IL-10,TNF-a mRNA 及蛋白的表达水平，从而起到调节细胞免疫功能，抑制肿瘤生长的作用，并呈一定的浓度与时间依赖性，其具体作用机制仍值得进一步探讨及研究。

熟地黄水提液对小鼠单核细胞分泌TNF-α的影响

熟地黄水提液对小鼠单核细胞分泌TNF-α的影响
李玮;王秀丽;王青;李际君;李仲兴;单保恩
【期刊名称】《标记免疫分析与临床》
【年(卷),期】2009(016)001
【摘要】为研究熟地黄水提液对Balb/C小鼠的抗肿瘤活性,用L929生物法研究熟地黄水提液刺激Balb/C小鼠单核细胞分泌TNF-α的作用.结果表明,熟地黄组单核细胞分泌TNF-α活性与对照组相比有显著性差异(P＜0.05),提示熟地黄水提液具有抗肿瘤活性.
【总页数】2页(P27-28)
【作者】李玮;王秀丽;王青;李际君;李仲兴;单保恩
【作者单位】北京煤炭总医院,北京,100028;河北医科大学第二医院,河北,石家庄,050000;北京煤炭总医院,北京,100028;沧州市中心医院,河北,沧州,061001;河北医科大学第二医院,河北,石家庄,050000;河北医科大学第四医院,河北,石家
庄,050011
【正文语种】中文
【中图分类】R282.71.07;R446.6
【相关文献】
1.西洛他唑对脂多糖诱导的人THP-1单核细胞分泌TNF-α的影响及机制探讨 [J], 陈添华;颜程光;王俊谊;李志樑;
2.免疫球蛋白G对2型糖尿病合并阿尔茨海默病患者外周血单核细胞分泌TNF-α
的影响 [J], 帅红霞;丁娟;章激
3.熟地黄水提液对小鼠红细胞Na＋,K＋—ATPase活性及MDA含量的影响 [J], 田丽华;白书阁
4.木犀草素对哮喘患儿外周血单核细胞TNF-α和IL-6分泌的影响及机制研究 [J], 余洁;彭哲;谢婷;莫运波
5.右归丸水提液对小鼠卵巢颗粒细胞雌激素、孕酮分泌的影响及机制 [J], 徐晓娟;金沈锐;秦旭华
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熊果酸对脂多糖诱导的THP-1细胞的作用及其机制

熊果酸对脂多糖诱导的THP-1细胞的作用及其机制陈虹;杨杰;崔伟曦;王强【期刊名称】《中国药科大学学报》【年(卷),期】2011(42)5【摘要】探讨熊果酸对THP-1细胞的保护作用及其机制。

以脂多糖诱导的THP-1炎症细胞为模型,观察不同浓度的熊果酸(10,30,50μmol/L)对细胞黏附、迁移功能的影响,RT-PCR法检测MCP-1、CCR2 mRNA的表达,继而探讨NF-κB活性。

结果显示,与模型组比较,熊果酸(30,50μmol/L)能够显著降低THP-1细胞与人纤维连接蛋白的黏附,各给药组均能显著降低THP-1细胞的迁移,降低MCP-1、CCR2 mRNA的表达并下调NF-κB活性。

初步判断,熊果酸对脂多糖诱导的THP-1炎症细胞的保护功能可能是通过下调NF-κB活化及降低MCP-1、CCR2表达而实现的。

【总页数】5页(P447-451)【关键词】熊果酸;THP-1细胞;MCP-1;NF-κB【作者】陈虹;杨杰;崔伟曦;王强【作者单位】中国药科大学中药分析教研室【正文语种】中文【中图分类】R285【相关文献】1.西洛他唑对脂多糖诱导的人THP-1单核细胞分泌TNF-α的影响及机制探讨 [J], 陈添华;颜程光;王俊谊;李志樑;2.西洛他唑对脂多糖诱导的人THP-1单核细胞分泌TNF-α的影响及机制探讨 [J], 陈添华;颜程光;王俊谊;李志樑3.丹红注射液对脂多糖诱导THP-1巨噬细胞促炎因子分泌的影响及机制 [J], 曾海燕;方勇;曾高峰4.丹红注射液对脂多糖诱导THP-1巨噬细胞促炎因子分泌的影响及机制 [J], 曾海燕;方勇;曾高峰;5.阿托伐他汀对脂多糖诱导的THP-1巨噬细胞炎症因子分泌的影响及机制 [J], 喻思扬;曾高峰;刘洋;徐健强;曾梦雅;唐业华;曾志英;石小桥;陈莹;王燕;赵国军因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

灵芝三萜对人血单核细胞白血病细胞株THP_1的作用

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参莲提取物对M1巨噬细胞的影响

参莲提取物对M1巨噬细胞的影响该实验探讨参莲提取物对动脉粥样硬化发展中的M1巨噬细胞的影响。

MTT法检测参莲提取物对RAW264.7细胞的毒性作用；γ干扰素（IFN-γ）及脂多糖（LPS）诱导RAW264.7细胞成M1型巨噬细胞，然后加入高、中、低剂量的参莲提取物（50，25，12.5 mg·L-1）作用，流式细胞术检测M1巨噬细胞膜分子CD86的表达，RT-PCR法检测M1巨噬细胞中iNOS和TNF-α mRNA的水平，ELISA法检测M1巨噬细胞上清中IL-6和TNF-α的含量。

结果发现IFN-γ及LPS 能诱导RAW264.7细胞极化为M1型巨噬细胞，M1巨噬细胞膜分子CD86的表达、细胞中iNOS和TNF-α mRNA的表达以及细胞分泌的IL-6和TNF-α的含量均有显著性地提高；参莲提取物各剂量均可抑制M1型巨噬细胞膜分子CD86、细胞中iNOS及TNF-α mRNA的表达，降低细胞分泌炎症细胞因子IL-6及TNF-α的含量。

通过以上研究表明IFN-γ及LPS能诱导RAW264.7细胞极化为M1型巨噬细胞；参莲提取物对M1型巨噬细胞有一定的抑制作用。

标签：参莲提取物；M1巨噬细胞；细胞因子；动脉粥样硬化巨噬细胞在体内外不同的局部微环境影响下，可分化为M1，M2型巨噬细胞[1-2]。

M1型巨噬细胞又被称为经典激活的巨噬细胞（classically activated macrophage），诱导后能分泌大量的炎性细胞因子，参与抗原递呈，加速As的发展；M2型巨噬细胞被称为替代激活的巨噬细胞（alternatively activated macrophage），诱导后能高表达炎症抑制因子，抑制炎症反应，促进组织损伤修复[2-3]。

M1和M2巨噬细胞在体内相互转化，其平衡影响着As的发展和转归[4-5]。

参莲（SL）提取物是以活血化瘀、清热解毒为法组方，用现代工艺制备而成的中药复方提取物。

TNF-α、IL-1β、LPS对人多核白细胞、脐静脉内皮细胞血小板内皮细胞粘附分子-1表达的影响

TNF-α、IL-1β、LPS对人多核白细胞、脐静脉内皮细胞血小板内皮细胞粘附分子-1表达的影响王建春;毛宝龄;钱桂生【期刊名称】《微循环学杂志》【年(卷),期】2000(010)001【摘要】目的: 初探炎性刺激对人多核白细胞(PMN)和脐静脉内皮细胞(HUVEC)的血小板内皮细胞粘附分子-1(PECAM-1)表达的影响和PECAM-1的可能作用. 方法: 使用流式细胞仪和免疫组化法, 观察脂多糖(LPS)、白介素(IL)-1β和肿瘤坏死因子(TNF)-α对PMN和HUVEC PECAM-1表达的变化. 结果: LPS、 IL-1β和TNF-α可引起PMN表达PECAM-1蛋白减少, 而对HUVEC PECAM-1的表达无显著影响, 但组化显著在HUVEC连接部的PECAM-1染色变淡. 结论: 上述炎性刺激物不仅可引起PMN表达PECAM-1减少、激活PMN, 而且可改变内皮细胞PECAM-1的分布, 因此PECAM-1在炎症中可能起重要作用.【总页数】3页(P6-8)【作者】王建春;毛宝龄;钱桂生【作者单位】中国人民解放军第三军医大学新桥医院呼吸内科研究所,重庆,400037;中国人民解放军第三军医大学新桥医院呼吸内科研究所,重庆,400037;中国人民解放军第三军医大学新桥医院呼吸内科研究所,重庆,400037【正文语种】中文【中图分类】R33;Q46【相关文献】1.TNF-α和IL-1β对人脐静脉内皮细胞蛋白C受体mRNA表达的影响 [J], 郭小芳;刘海波;任惠龙;龚维坤;成兴波2.TNF-α、IL-1β、LPS对人多核白细胞、脐静脉内皮细胞血小板内皮细胞粘附分子-1表达的影响 [J],3.LPS、TNF-α、IL-1β对人脐静脉内皮细胞COX-2表达的影响 [J], 王建春;毛宝龄;钱桂生4.LPS、TNF-α、IL-1β对大鼠多核白细胞环氧合酶2表达的影响 [J], 王建春;毛宝龄;钱桂生5.TNF-α、IL-1β和LPS诱导人脐静脉内皮细胞增殖和凋亡的研究 [J], 段辉因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

二氢丹参酮Ⅰ对白血病THP1细胞的增殖抑制作用及其机制探讨

二氢丹参酮Ⅰ对白血病THP1细胞的增殖抑制作用及其机制探讨李慧;何莹;王慧洁;向洪;王春森【期刊名称】《实用医院临床杂志》【年(卷),期】2018(015)002【摘要】目的探讨二氢丹参酮I对白血病THP1细胞的增殖抑制作用,并探讨其作用机制.方法将不同浓度的二氢丹参酮Ⅰ与THP1细胞共孵24、48及72 h,分别采用CCK8法、Annexin V/PI双染法检测其对THP1细胞的增殖抑制与促凋亡作用;采用Western blot法检测NF-κB、MAPK及PI3K细胞信号通路的蛋白表达.结果二氢丹参酮I与THP1细胞共孵24、48及72 h,其IC50值分别为6.2、4.3及4.1 μmol/L.浓度为5 μmol/L的二氢丹参酮Ⅰ与THP1细胞共孵24 h后,G0/G1期细胞比率均显著增加(P<0.01).二氢丹参酮Ⅰ可使NF-κB、PI3K信号通路的蛋白表达下调,对MAPK信号通路的蛋白表达无显著影响.结论二氢丹参酮Ⅰ对THP1细胞具有增殖抑制作用并呈浓度及时间依赖性,其通过阻滞THP1细胞周期而促凋亡;其发挥抗肿瘤作用的机制可能与抑制NF-κB、PI3K细胞信号通路的蛋白表达有关.【总页数】4页(P19-22)【作者】李慧;何莹;王慧洁;向洪;王春森【作者单位】四川省医学科学院·四川省人民医院血液科,四川成都610072;川北医学院,四川南充637000;四川大学华西药学院&靶向药物及释药系统教育部重点实验室,四川成都610041;川北医学院,四川南充637000;四川省医学科学院·四川省人民医院血液科,四川成都610072【正文语种】中文【中图分类】R733.7【相关文献】1.丹参酮ⅡA对大鼠血管平滑肌细胞增殖的抑制作用及机制探讨 [J], 李泽争;王葳;王巍巍;张金元2.去氢雌马酚对急性早幼粒白血病NB4细胞的增殖抑制作用及其初步机制研究[J], 张艳锋;张刘珍;善亚君;余祖胤;崔宇;柳晓兰;杨日芳;马百平;从玉文3.三萜皂苷混合物ardisiacrispin(A+B)对人白血病HL-60细胞的增殖抑制作用及机制探讨 [J], 魏少荫;李敏;刘岱琳;姚新生;崔景荣4.二甲双胍对巨核细胞白血病细胞株Dami细胞增殖的抑制作用及其机制 [J], 李长岭;蔺迪;邢思宁;赵松;陈惠鹏;周凡;马东初5.哈尔明碱对人白血病HL-60细胞增殖的抑制作用及机制探讨 [J], 孙亚军;张春德因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

活血化瘀中药对内毒素诱导THP-1细胞增殖及蛋白质组的影响

活血化瘀中药对内毒素诱导THP-1细胞增殖及蛋白质组的影响张萃;王培训;周联;董燕【期刊名称】《中国免疫学杂志》【年(卷),期】2006(022)007【摘要】目的:通过内毒素诱导的炎症细胞模型,筛选抗炎活血化瘀中药单体,并探讨蛋白质表达谱.方法:用LPS诱导THP-1细胞株增殖和产生TNF-α,作为内毒素诱导的炎症细胞模型.以此筛选活血化瘀中药单体抗炎成分,用双向电泳技术,分析差异蛋白点.结果:通过筛选活血化瘀中药单体发现丹参酮ⅡA对内毒素诱导的炎症细胞模型有明显抑制作用,双向电泳图象分析筛选出差异性明显的蛋白质点26个.模型组有16个蛋白点增高,丹参酮ⅡA组能下调13个蛋白点(占50%),有3个蛋白点进一步上调(占11.5%);在模型组下调表达的10个蛋白点(占38.5%),丹参酮ⅡA组均有不同程度上调趋势.结论:内毒素感染的细胞模型适合实验室小剂量中药单体的筛选,丹参酮ⅡA的抗炎作用与这些差异表达蛋白质有关,能够改善一些蛋白质的表达.【总页数】5页(P662-665,670)【作者】张萃;王培训;周联;董燕【作者单位】广州中医药大学免疫与分子生物学研究室,广州,510405;广州中医药大学免疫与分子生物学研究室,广州,510405;广州中医药大学免疫与分子生物学研究室,广州,510405;广州中医药大学免疫与分子生物学研究室,广州,510405【正文语种】中文【中图分类】R392.11;R285.5【相关文献】1.苯妥英钠对内毒素作用下人牙周膜成纤维细胞增殖和表达TNF-α的影响 [J], 余方方;叶新;陈栋;范云;李玮2.血必净对内毒素刺激的THP-1细胞的影响 [J], 蒋巍;张顺财3.异丙酚对内毒素诱导人单核细胞系THP-1细胞TREM-1表达的影响 [J], 陆立仁;张良清;卢燕4.膜表面核仁素对内毒素所致THP-1细胞炎症介质表达的影响 [J], 方立;王慷慨;蒋碧梅;邓恭华;陈广文;涂自智;肖献忠5.羊栖菜多糖对内毒素诱导的大鼠肝星状细胞增殖活化、氧化损伤及凋亡的影响[J], 张雪琴;吴金明;黄智銘;吴建胜;方红龙因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

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的多种细胞功能可能均有一定的影响。本实验从 SL 提取物对单核细胞附着、迁移、摄脂、分泌等角度深入观察 SL 提取物对炎症因子作用下单核细胞功能变化的影响。 1 材料 111 仪器和试剂 J 2 301 低温超速离心机 (美国
组迁移至 transwell膜下层的细胞数明显增多 , 与对照组比较有显著性差异 ( P < 0105 ) 。 SL 提取物 5 个剂量组均可显著减少迁移细胞数 , 与模型组比较有显著性差异 ( P < 0105, P < 0101, P < 0105, P < 0101, P < 0101 ) 。见图 1。 314 SL 提取物对单核细胞摄脂功能的影响与对 ( 照组比较 , 模型组细胞内 TC 值明显升高 P < 0101 ) 。 SL 提取物各剂量组均可显著降低 TC 值 ( P < 0101 ) 。见表 2。 315 SL 提取物对单核细胞分泌功能的影响与对照组比较 , 模型组细胞上清中 I L2 6 含量明显升高 ( P < 0101 ) , I L2 10 含量明显降低 ( P < 0101 ) 。 SL1 可显著降低异常增高的 I L2 6 值 ( P < 0101 ) ,同时升高细胞上清中 I L2 10 的含量 ( P < 0101 ) , 其他剂量未见明显作用。见表 3。 4 讨论 AS早期炎症反应过程中迁移、渗出到血管损伤局部的细胞以单核、淋巴细胞为代表 ,单核细胞黏附 [ 13 ] 于内皮表面的数量可高出正常时的 10 ～15 倍。・1 0 3 3E 紫外 2 可见分光光度计 (美国 Aglient) 。 550 型 MODEL 酶标仪 (美国 B io 2 Rad ) 。 HUVEC 由北京大学医学部分子免疫教研室王露馈
赠。 THP 2 1 (中国协和医科大学基础部细胞中心 ) ; RPM I 1640 培养基 ( GI B CO 2 BRL , 批号 1165062 ) ; 高糖型 DM EM 培养基 ( GI B CO 2 BRL , 批号 1292294 ) ; α ( Pep 2 胎牛血清 (B iochrom AG,批号 0379H ) 。 TNF 2 rotech, 批号 0604CY25 ) 。考马斯蓝 G2 250 ( Sigm a, 批号 BA 9719 ) 。大鼠抗人 I L2 6 Kit,批号 110371,大鼠抗人 I L2 10 Kit, 批号 A011, ADL。其他试剂均为国产分析纯。 SL 提取物采用醇提取、大孔吸附树脂富集纯化的方法制备 ,主要含丹参酮类、丹酚酸类及穿心莲内酯类等有效组分 , 可控成分达 50%以上 , 由中国中医科学院中药研究所化学室提供。 112 动物健康雄性新西兰兔 ,体重 212 ～218 kg, 北京市通力实验动物养殖场提供 , 合格证号 SCXK (京 ) 2005 2 0003。 2 方法 211 药物处理 SL 提取物用 DM SO 配成储备液 , 使用前用培养基稀释到所需浓度 ( DM SO 终浓度不超过 011% ) 。 212 高脂血清 ( hyperlip idem ic serum , HLS ) 制备以球囊导管内皮损伤术和高脂饵食法建立家兔 AS 模型 ,模型家兔无菌条件下经腹主动脉取血 , 4 ℃ 静 - 1 置 1 h, 3 000 r・m in 离心 15 m in 分离血清。用酶比色法检测 TC 值为 12107 mmol・L 。过滤分装 ,
α 20 μg [摘要 ] 目的 : 观察参莲 ( SL )提取物对炎症因子刺激下单核细胞功能的影响。方法 : SL 提取物预孵育 ,以 TNF 2 ・L 为刺激因子 , 观察 SL 提取物对单核细胞株 THP2 1 黏附、迁移、摄脂、分泌功能变化的影响。结果 : SL1 ～3 ( 015 ～2 g・
10 μg・L 已具有显著的诱导作用 , 10 ～ 40 μg ・
- 1
α各组对黏附率的影响无明显的量效关系 L TNF 2 ( 61107% , 73111% , 75189% , 81156% ) 。故选用 20
- 1
α (M 组 ) 、 α (在 M 组的基础上 , 组 )、 TNF 2 SL + TNF 2 - 1 加入 SL 提取物 2, 1, 015, 0125, 01125 g ・L , 为 SL1 ～5 组 ) ,培养 24 ～48 h,进行细胞功能检测。
214 HUVEC 与 THP 2 1 黏附功能检测将 HUVEC
以 5× 10 接种于 48 孔板 ,每组均设 4 个平行孔。待细胞生长融合后吸弃培养基 , PB S洗孔 1 遍 ,分别加 5 入 5× 10 个 /mL 的 THP 2 1 细胞悬液、同时加入 SL α 20 μg・L - 1继续培养提取物孵育 , 24 h后以 TNF 2
ICAM 2 1 无明显影响 , 但可选择性地作用于其配基— — — 单核细胞表面黏附分子 CD18 , 且疗效显 [ 62 7] 著。基于单核细胞在 A S 早期形成过程中的复杂作用 , 推测 SL 提取物对单核细胞黏附之外
[关键词 ] 动脉粥样硬化 ; 参莲提取物 ; 炎症 ; THP2 1
单核细胞与内皮细胞的相互作用是动脉粥样硬化 ( artherosclerosis, AS)的始动环节和 AS早期炎症发生典型特征之一。这种相互作用不仅是 AS损伤局部炎症修复的重要方式 , 而且在此过程中 2 种细胞的功能均发生相应变化 , 如单核细胞分化、增殖 , 受体表达改变等。单核 2 内皮细胞的相互作用过程中表达和产生的诸多炎症相关生物活性因子及其继发效应所致的血管局部级联放大的失控性炎症反 [ 42 5] 应 ,与 AS的发生、发展密切相关。前期研究显 ( 示 , 防治 A S有效药物 SL 提取物由丹参、穿心莲 ) 组成对 A S 家兔模型内皮细胞表面黏附分子
P < 0101; 与 M 组相比 3) P <
0105, 4) P < 0101 (表 2, 3 同 ) 。
313 SL 提取物对单核细胞迁移功能的影响模型
α刺激 HUVEC 与 THP 2 311 TNF 2 1 黏附的量效关 α 5 μg・L - 1对细胞黏附率无明显影响 ,从系 TNF 2
[8] - 1
剂量
/ g・L 2100 1100 0150 0125 01125
1) -1
α TNF 2
/μg・L - 1 20 20 20 20 20 20
P < 0105,
2)
A 570
01336 1 ± 01031 2 01360 1 ± 01008 52) 01340 4 ± 01016 84) 01330 9 ± 01013 93) 01337 8 ± 01033 73) 01356 4 ± 01008 3 01349 8 ± 01011 9
218 统计学处理数据均以 x ±s 表示 , 采用 SPSS1210 软件进行检验 , 多组间差异比较采用 ANOVA , P < 0105 为有显著性差异。 3 结果 217 SL 提取物对单核细胞分泌功能的影响
[ 12 ]
注 : 与 C 组相比
第 35 卷第 8 期
2010 年 4 月
Vol135, Issue 8 Ap ril, 2010
α刺激下单核细胞株参莲提取物对 TNF2 THP2 1 功能的影响
李玉洁 , 杨庆 , 翁小刚 , 朱晓新 , 王怡薇 , 刘小霓 , 韩晓
(中国中医科学院中药研究所 ,北京 100700 )
THP2 1 黏附有明显抑制作用。见表 1。
表 1 SL 提取物对 HUVEC和 THP 2 1 黏附 ( ) 的影响 x ± s, n = 8
组别
C M SL1 SL2 SL3 SL4 SL5
检测黏附细胞量 ,每孔加 012 mol・L NaOH 200 μL 溶解各孔细胞。取待测各孔细胞溶解液 100 μL 于标记管 ,每管加 500 μL 稀释的考马斯亮蓝 G2 250 染液 , 充分混匀 , 静置 10 ～ 30 m in, 570 nm 测定 A
・1 0 3 0 ・
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用于 THP 2 1 摄脂功能检测。
213 细胞分组及处置常规培养 THP 2 1, HUVEC, 据实验需要按不同浓度接种细胞 ,分别设对照组 ( C
值 ,其数值大小代表黏附细胞的多少。 [ 92 10 ] 215 THP 2 1 摄脂功能检测将 THP 2 1以 5 × 5 10 接种于 48 孔板 , 每组均设 4 个平行孔。 SL 提取物孵育 24 h 后加入终浓度为 5%的 HLS 37 ℃ 孵育 - 1 48 h。收集细胞 , 1 000 r ・m in 离心 10 m in, 弃上清。用 PB S洗细胞沉淀 1 次 , 加入异丙醇 011 mL , - 1 超声振荡 10 s/次 × 3 次 , 再以 1 000 r・m in 离心 15 m in,吸取上清液 ,酶比色法测定 TC 值。 [ 11 ] 5 216 THP 2 1 迁移功能检测将 THP 2 1以 5 × 10 接种于 Transwell双层培养板上室 , 以含 SL 提取物 α 20 的无血清培养基孵育 24 h。下室加入含 TNF 2 - 1 μg・L 及 5%血清的培养基 , 37 ℃, 5% CO2培养箱中温育 4 h。将上室取出 ,甲醇固定 ,结晶紫染色 ,显微镜下观察各孔迁移至膜外侧细胞情况 , 取 4 个视野进行计数 ,以细胞数的平均值为细胞迁移数。 THP 2 1 细胞接种于 48 孔培养板 , SL 提取物孵育 24 α 20 μg・L - 1 37 ℃, 5% CO2培养箱中 h。加入 TNF 2 温育 4 h。收集各组细胞培养上清液 100 μL , EL ISA 法检测 I L2 6和 I L2 10。