医学检验实验室方法学验证

传统统计法与稳健统计法评价医学检验实验室能力验证结果比较郭晓俊;朱岭峰;徐翀;居漪【摘要】目的探讨传统统计法(Dixon检验法剔除离群值后计算x和s)与稳健统计法[计算中位值和标准化四分位间距(NIQR)]医学检验实验室能力验证结果评价的适用范围.方法对2016年上海市临床检验中心快速C反应蛋白检测能力验证计划上报结果按检测系统分为A组(29家实验室)、B组(15家实验室)和C组(9家实验室).应用传统统计法和稳健统计法分别对各组的统计量进行比较分析.结果对于A 组结果,稳健统计法和传统统计法的指定值基本相同,但前者计算出的NIQR和指定值的标准不确定度(ux)都小于后者计算出的s和指定值的ux;对于B组结果,Dixon 检验法剔除离群值后用传统统计法计算的指定值与稳健统计法计算所得较为接近,但前者所得到的ux<0.3σ,而后者所得到的ux>0.3σ;对于C组结果,Dixon检验法剔除离群值后用传统统计法计算的指定值与稳健统计法计算所得较为接近,2种方法计算所得的ux>0.3σ,但前者计算所得的s均小于后者计算所得的NIQR.结论当实验室的数量较多(>18)时,可采用稳健统计法给出严格的评价结论;当利用Dixon 检验法剔除离群值后,参加实验室的数量较少(12~18)的情况下,应对余下的数据采用传统统计法进行统计和分析;当剔除离群值后实验室的数量更少(≤12)时,除了对余下的数据采用传统统计法进行统计和分析,还需考虑指定值的ux的影响.%Objective To investigate the scopes of conventional statistics(x and s after removal of outliers by Dixon method) and robust statistics [median and normalized interquartile range(NIQR)] for proficiency testing in laboratory medicine.Methods Participants of the Proficiency Testing Program 2016 on C-reactive protein organized by Shanghai Center forClinical Laboratory were classified into group A(29 laboratories),group B(15 laboratories)and group C(9 laboratories)according to determination systems. The results of conventional statistics and robust statistics were analyzed and compared.Results As for group A,the designated values were same for the 2 methods. However,the NIQR and standard uncertainty(ux)of designated values by conventional statistics were smaller thans anduxby robust statistics. As for group B,the designated values were close betweenthe 2 methods. Convention al statistics hadux<0.3σ,and robust method hadux>0.3σ. As for group C,the designated values were close between the 2 methods. Both methods hadux>0.3σ. Thesof conventional statistics was smaller than the NIQR of robust statistics.Conclusions When the number of participants is >18,robust statistics can be used. When the number of participants is 12-18,conventional statistics may be used. When the number is≤12,besides conventional statistics should be used,theuxof designated values should be considered as well.【期刊名称】《检验医学》【年(卷),期】2017(032)005【总页数】5页(P435-439)【关键词】统计方法;医学检验实验室;能力验证;稳健统计法;传统统计法;Dixon检验法;不确定度【作者】郭晓俊;朱岭峰;徐翀;居漪【作者单位】上海市临床检验中心,上海 200126;上海市临床检验中心,上海200126;上海市临床检验中心,上海 200126;上海市临床检验中心,上海 200126【正文语种】中文【中图分类】R446.1Key words：Statistical methods；Clinical laboratories；Profi ciency testing；Robust statistics；Conventional statistics；Dixon method；Uncertainty能力验证利用实验室间比对，按照预先制定的准则评价参加者的能力，也称为能力验证活动[1]。

乙肝表面抗原的ELISA法定量分析方法学验证姓名 Z P学号 0925400072班级 09级医学检验本科二班指导老师沈富兵二〇一三年四月乙肝表面抗原定量测定的方法学验证作者：ZP（成都医学院检验医学院09级医学检验本科二班，610500）【摘要】目的用福州蓝图生物工程有限公司出品的乙肝表面抗原ELISA法定量分析试剂盒对乙肝表面抗原定量测定的方法进行验证，以判断是否能用于教学以及临床分析。

方法运用ELLISA法定量测定乙肝表面抗原，应用试剂盒HBsAg标准从浓度为8ng/ml的2倍稀释的6个浓度梯度，根据OD值绘制标准曲线再计算相对回收率和板内和板间精密度，通过资料数据综合分析。

结果HBsAg线性较好，其准确度、精密度、LOD值均在正常范内。

结论ELISA法定量检测HBsAg能较准确、快速地反映体内乙肝病毒复制情况，可以用于教学以及临床分析。

【关键词】乙肝表面抗原方法学验证标准曲线精密度ELLISA病毒性肝炎中乙型肝炎的危害较大，我国是病毒性乙型肝炎的高发流行区，普通人群的乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)感染率接近60％，约占世界HBV携带者的1/3。

乙型肝炎病毒的病原体不仅具有传染性，还可能导致发展成肝硬化，甚至肝癌，所以乙型肝炎病毒的早期、准确、定量检测对乙型肝炎临床诊断、疗效观察及预防具有重要的意义。

酶免分析法HBV—EIA是HBV抗原和抗体最常用的检测技术，其方法简便、价廉，适合一般实验室推广，其中酶联免疫吸附技术(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)目前应用最为广泛，它常用聚苯乙烯为固相载体，使其与待测标本中的相应抗体或抗原结合，然后加酶标记的抗原或抗体，再加底物显色，最后根据色泽深浅来推算待测抗原或抗体的含量。

此方法特异性高，有效测定范围可达到20500 ng/ml，且酶免疫法有标记的试剂比较稳定并且无放射线危害等优点。

方法学验证的相关内容学习内容提要：（方法学验证的应用、依据、类型、一般参数、要求）验证应用：方法验证是对测定方法的评价，是建立新方法的研究内容和依据。

（新建方法、已建立方法的修订验证、已建方法的复现）验证依据：方法应用领域对方法验证要求的“指导原则”验证类型：全部验证Fall validation、部分验证Partial validation、交叉验证cross validationFull validation：第一次新建方法；一个已建方法，但增加分析对象（精密、回收）。

Partial validation：（已建方法的部分改变）1) 分析方法改变（检测器改变）；2) 生物样品（抗凝剂改变）；3) 基质改变（血－尿）；4) 前处理方法改变；5) 生物样品种属改变（rat大鼠－mouse小鼠）；6) 仪器改变工作软件改变；7) 稀有生物样品，取样量有限。

Cross validation：样品分析在不同场所或实验室进行时，不同实验室需进行加样生物样品或实际样品分析，建立实验室间的重现性数据。

当分析数据由不同检测技术产生时LC－MS vs ELSD 需交叉验证部分验证：准确度，精密度（都做）交叉验证：加样准确度，实际样品分析（任一）一般参数：精密度precision:同一匀质样品的一组测量值，彼此符合的程度。

1) SD 标准偏差standard deviation2) ％RSD 相对标准偏差relative SD，CV 变异系数n>8标准差SD=开方（求和（xi－x均值）/（n－1））％RSD＝SD/x均值×100％日内精密度（intraday precision）：同一次测定，7～10份，按方法做。

测定，SD 值，RSD限度（生物制品5％，药品2％）。

日间精密度（interday precision）：不同一次测定，7～10份，按方法做。

测定，SD值，RSD限度（生物制品15％，药品5％）。

·465·药品评价 Drug Evaluation 2021,18（08）吡拉西坦颗粒微生物限度检查方法学验证王杰1，刘澎浩邦2，肖钦钦1，章瑛1，张春华1，刘绪平11.江西省药品检验检测研究院，国家药品监督管理局中成药质量评价重点实验室，江西省药品与医疗器械质量工程技术研究中心，江西 南昌 330029；2.江西中医药大学，江西 南昌 330029［摘要］目的：建立吡拉西坦颗粒的微生物限度检查方法。

方法：根据《中国药典》2015 年版的规定，通过常规法对吡拉西坦颗粒进行微生物限度检查方法适用性试验并进行方法学验证。

结果：采用常规法测定需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数，回收率比值分别为 0.8~1.1、0.9~1.1；采用常规法验证大肠埃希菌，阳性对照菌生长良好，阴性对照未检出。

结论：所建立的方法可作为吡拉西坦颗粒微生物限度的检查方法，准确可行，可用于产品的质量控制。

［关键词］吡拉西坦；常规法；微生物限度检查；质量控制DOI: 10.19939/ki.1672-2809.2021.08.06Validation of Microbial Limit Test Method for Piracetam GranulesWANG Jie 1, LIU Penghaobang 2, XIAO Qinqin 1, ZHANG Ying 1, ZHANG Chunhua 1, LIU Xuping 11. Jiangxi Institute for Drug Control, NMPA Key Laboratory of Quality Evaluation of Traditional Chinese Patent Medicine, Jiangxi Province Engineering Research Center of Drug and Medical Device Quality, Nanchang Jiangxi 330029, China;2. Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine, Nanchang Jiangxi 330029, China.[Abstract] Objective: To establish a microbial limit inspection method for piracetam granules. Methods: According to the regulations of the 2015 edition of the "Chinese Pharmacopoeia", piracetam granules were tested for the applicability of the microbial limit inspection method and the methodology was verified by conventional methods. Results: The total number of aerobic bacteria, molds and yeasts were determined by the conventional method, and the recovery ratios were 0.8-1.1, 0.9-1.1; the conventional method was used to verify Escherichia coli, the positive control bacteria grew well, and the negative control was not detected. Conclusion: The established method can be used as an inspection method for the microbial limit of piracetam granules, is accurate and feasible, and can be used for product quality control.[Key Words] Piracetam; Conventional method; Microbial limit test; Quality control作者简介：王杰，硕士，药师。

临床检验方法学评价目前，临床实验室中所使用的检验方法，多为常规分析方法，一般使用商品试剂，基本上可以满足临床检验的要求。

由于作为常规分析方法的商品试剂种类繁多，其检验结果的质量也不相同，因此，临床实验室在建立新的检验方法时，应对该方法的基本性能进行评价，以掌握方法的特征，判断其能否满足使用要求。

在选择方法并对其进行评价时，可主要考虑以下几个方面：检验结果的可溯源性检验结果的准确性，是临床医生对疾病进行诊断和治疗的重要依据。

在临床实验室中如何确保检验结果的准确，是每个检验人员必须关心的问题。

通常，在检验过程中使用可溯源性校准品是保证检验结果准确性的前提，而参加室间质评价活动，可以发现实验室结果准确性的偏倚。

检验方法学分类包括：决定性方法（definitive method ）：经详尽研究尚未发现不准确度或不确定性原因的方法；参考方法（reference method ）：经详尽研究证实其不准确度与不精密度可以忽略的方法；常规方法（routine method ）：可满足临床或其他目的需要的日常使用的方法。

标准物质又称参考物质（reference material ），是一类充分均匀，并具有一个（或多个）确定的特性值的材料或物质，用以校准仪器设备、评价测量方法，或给其它物质赋值。

标准物质的定值结果一般表示为：标准值±总不确定度。

“ 标准物质证书“是介绍标准物质的技术文件，是研制单位向用户提出的质量保证书和使用说明。

附有证书的标准物质称为有证标准物质（certified reference material, CRM ），其特性值由建立了溯源性的程序确定，使可溯源至准确复现的表示该特性值的计量单位，且每个标准值都附有给定置信水平的不确定度。

一级标准物质（primary reference material ）：稳定、均一，采用高度准确、可靠的若干方法定值，可用于校准决定性方法及为二级标准物质定值。

医学实验室运用室内质控与能力验证数据程序化评定测量不确定度摘要：目标: 建立一个实用和可行的方法来评估测量不确定度 (MU) 肿瘤标志物测试。

方法基于中国国家合格评定委员会(CNAS)的“医学实验室 - 测量不确定度的评估和表达”技术报告,从检查部门收集长期室内质量保证(IQC)并参加北京临床检验中心的实验室质量评估(EQA)的“自上而下”方法,使用AFP,CEA,糖蛋白125(CA125),糖蛋白153(CA153),糖蛋白199(CA199),血小板特异性抗原(t-PSA)和七项测试的相对合成标准不确定性和高级不确定性。

在法新社的实验室中,七项肿瘤标志物测试的相对放大不确定度为11.9%。

CEA:11.5%CA 125,11.8%CA 15 - 3.9%;CA19-9.80%;T-PSA:11.6%F-PSA,15.9%(k=2),7项试验指标符合TEA对临床试验中心房间质量评价的要求;CEA、CA125、CA153、CA199和t-PSA的相对膨胀不确定度满足基于生物可变性的TEA最佳质量规范的要求,AFP的相对膨胀不确定度不符合基于生物可变性的TEA最佳质量规范的要求。

结论选择top-down 法，运用IQC与PT数据评定分析测量阶段的测量不确定度是可行的，且在Excel 软件上能便捷地计算出结果，适合医学检验实验室普及应用测量不确定度。

关键词：医学实验室；室内质控；评定测量引言测量不确定度作为医学实验室各种测量结果的一部分，合理表征了被测量量值的分散性，对测量结果的可信性、可比性和可接受性有重要影响，是评价测量活动质量的重要指标。

虽然中国合格评定国家认可委员会（CNAS）对ISO15189认可（CNAS-CL02认可）实验室提出明确要求“合格评定机构应评定和应用测量不确定度，并建立维护测量不确定度有效性的机制”，但是由于测量不确定度的概念不易理解，计算过程相对复杂，绝大部分检验人员不知如何处理，且对其重要意义认识不到位，致使许多医学实验室未能将其用于评价测量活动的质量。

医学实验室ISO15189认可性能验证实验方案德信诚咨询为了满足目前医学实验室认可的需求保证实验室检测结果的准确性,特制定本方案。

本方案从准确度、精密度、参考范围、线性范围以及方法学比对5个方面对各个试验项目进行评价。

一、精密度(Precision):精密度是指在规定条件下所获得的检测结果的接近程度,表示测定结果中随机误差大小程度的指标。

精密度通常用不精密度表示。

可以分别评价连续精密度(批内精密度)、重复性不精密度(中间精密度,包括批间、日间精密度等)和再现性精密度。

本方案采用批内和天间两种方法对各个试验项目的精密度进行评价。

全部实验过程使用同批号试剂和质控品,并且保证检测当日质控在控。

1、批内精密度(连续精密度):方法:在检测患者标本过程中,连续运行高低水平质控品各20次,记录检测结果。

计算批内精密度的CV值和SD值。

结果评价(1)厂家评价标准:计算精密度指数=验证SD/厂商SD,精密度指数要求小于等于1,或者实测CV小于等于厂家要求的CV,两者符合其一即可。

具体见《精密度评价》表格。

(2)按照国际推荐标准:批内精密度应在CLIA88允许误差的1/4以内,见美国CLIA’88能力比对检验的分析质量要求。

2、天间精密度(中间精密度):方法:同样使用两个水平的质控品,若需复溶冻干质控品做实验,要注意选择产品的稳定性和瓶间差。

要严格控制每次复溶冻干品时的操作手法。

连续测试20天,每天检测1次。

在次过程中不能更换试剂批号及质控品批号,是否需要重新定标则取决于实验室。

测试完成后记录检测结果。

结果评价(1)厂家评价标准: 计算天间的SD及CV值,并计算精密度指数=验证SD/厂商SD。

精密度指数要求小于等于1,或者实测CV小于等于厂家要求的CV,两者符合其一即可。

具体见《精密度评价》表格。

(2)按照国际推荐标准:批内精密度应在CLIA88允许误差的1/3以内,见美国CLIA’88能力比对检验的分析质量要求。

医学实验室管理制度第一章总则第一条为规范和管理医学实验室的运行，保障患者和医护人员的健康安全，提高诊断和治疗水平，特制定本管理制度。

第二条医学实验室是医疗卫生机构的重要组成部分，主要承担临床检验、科研试验、学术教学等任务。

第三条医学实验室管理制度的适用范围包括医学实验室的组织管理、人员素质、设备设施、质量控制、安全环保、信息管理等方面。

第四条医学实验室应依法、依规、依质、依标管理，推行科学管理，充分发挥医学实验室的作用和效益。

第五条各级卫生机构应当建立医学实验室质量管理体系，建立健全医学实验室管理制度，明确医学实验室管理的组织结构和职责分工。

第二章组织管理第六条医学实验室应当根据业务量和业务性质向卫生行政部门报批，并年度报告。

第七条医学实验室应当建立健全医学实验室管理体系，明确实验室的管理体制。

第八条医学实验室应当设立实验室负责人，由具有医学检验专业技术资格证书，具有中级职称以上医师担任。

第九条医学实验室负责人的主要职责是负责医学实验室的日常工作，保证检测结果的准确性和可靠性。

医学实验室负责人不仅要具备较高的业务素质，还应具备良好的卫生管理能力和良好的职业道德素质。

第十条医学实验室负责人应当遵守医疗卫生机构规章制度，严格管理和督促实验室技术人员执行各项工作规程和标准操作规程，确保检验结果的准确性和可靠性。

第十一条医学实验室应当设置质量管理科，建立实验室质量管理工作小组，开展各项质量管理活动。

第十二条医学实验室负责人要坚持质量第一、安全第一的原则，认真贯彻落实实验室质量管理要求，全面提高医学实验室的管理质量。

第十三条医学实验室应当建立严密的内部质量控制和外部质量保障体系，加强实验室品管活动，提高实验室自检能力。

第十四条医学实验室应当定期组织进行实验室内部质量控制和外部质量评价，确保检验结果的准确性和可靠性。

第十五条医学实验室应当建立和完善各种实验室的管理文件和记录，包括设备档案、仪器档案、耗材档案等。