微生物菌种保藏及复壮 5.1. 微生物菌种保藏 在发酵工业中，具有良好性状的生产菌种的获得十分不容易，如何利用优良的微生物菌种保藏技术，使菌种经长期保藏后不但存活健在，而且保证高产突变株不改变表型和基因型，特别是不改变初级代谢产物和次级代谢产物生产的高产能力，即很少发生突变，这对于菌种极为重 要。 微生物菌种保藏技术很多，但原理基本一致，即采用低温、干燥、缺氧、缺乏营养、添加保护剂或酸度中和剂等方法，挑选优良纯种，最好是它们的休眠体，使微生物生长在代谢不活泼，生长受抑制的环境中。具体常用的方法有：蒸馏水悬浮或斜面传代保藏；干燥-载体保藏或冷冻干燥保藏；超低温或在液氮中冷冻保藏等方法。 5.1.1. 蒸馏水悬浮法 这是一种最简单的菌种保藏方法，只要将菌种悬浮于无菌蒸馏水中，将容器封好口，于10℃保藏即可达到目的。好气性细菌和酵母等可 用此法保存。 5.1.2. 斜面传代保藏 斜面传代保藏方法是将菌种定期在新鲜琼脂斜面培养基上、液体培养基中或穿刺培养，然后在低温条件下保存。它可用于实验室中各类微生物的保藏，此法简单易行，且不要求任何特殊的设备。但此方法易发生培养基干枯、菌体自溶、基因突变、菌种退化、菌株污染等不良现象。
因此要求最好在基本培养基上传代，目的是能淘汰突变株，同时转接菌量应保持较低水平。斜面培养物应在密闭容器中于5℃保藏，以防止培养基脱水并降低代谢活性。此方法一般不适宜作工业生产菌种的长期保藏，一般保存时间为3~6个月。如放线菌于4~6℃保存，每3个月移接一次；酵母菌于4~6℃保存，每4~6个月移接一次；霉菌于4~6℃保存，每6个月移接一次。 5.1.3. 矿物油中浸没保藏 此方法简便有效，可用于丝状真菌、酵母、细菌和放线菌的保藏。特别对难于冷冻干燥的丝状真菌和难以在固体培养基上形成孢子的担子菌等的保藏更为有效。是将琼脂斜面或液体培养物或穿刺培养物浸入矿物油中于室温下或冰箱中保藏，操作要点是首先让待保藏菌种在适宜的培养基上生长，然后注入经160℃干热灭菌1~2h或湿热灭菌后120℃烘去水分的矿物油，矿物油的用量以高出培养物1cm为宜，并以橡皮塞代替棉塞封口，这样可使菌种保藏时间延长至1~2年。以液体石蜡作为保藏方法时，应对需保藏的菌株预先作试验，因为某些菌株如酵母、霉菌、细菌等能利用石蜡为碳源，还有些菌株对液体石蜡保藏敏感。所有这些菌株都不能用液体石蜡保藏，为了预防不测，一般保藏菌株 2~3 年也应做一次存活试验。 5.1.4. 干燥-载体保藏 此法适用于产孢子或芽孢的微生物的保藏。是将菌种接种于适当的载体上，如河砂、土壤、硅胶、滤纸及麸皮等，以保藏菌种。以沙土保藏用得较多，制备方法为：将河砂经24目过筛后用10%~20%盐酸浸泡
一、柬埔寨铁矿资源 由于勘探工作滞后，柬埔寨至今尚未绘制出完整的国家矿产资源分布图。因而，已知的矿产资源分布至今无法用图表予以说明，只能作粗略的文字叙述。 1、主要铁矿的分布 柬埔寨的铁矿石资源主要在柬北部的柏威夏、上丁两省，系次火山热液充填交代型铁矿床，有原矿和堆积矿。柏威夏——上丁矿带的铁矿相对比较零星，不具备大型铁矿的成矿条件，其特点表现为矿体散、大矿少、品位低。 其中，铁矿资源的储量最“亮眼”，仅百囊达克矿带的储量就达200多万吨，普农德克铁矿床资源量估计为500万吨-600万吨矿石，平均含Fe203为51%一56%，矿石 含Si0214%-27%，含磷、硫很低，不超过0.33%。
二、柬埔寨主要铁矿企业 1、柬埔寨龙土铁矿情况介绍 （1）、龙土铁矿的背景： 柬埔寨龙土铁矿面积36平方公里，位于柬埔寨柏威夏省的东北部，与上丁省相邻，距离柬埔寨首都金边约300公里，矿区都是丘陵地貌。 84坐标为： A: 5°52’000”15°12’000” B: 5°58’000”15°12’000” C: 5°58’000”15°06’000” D: 5°52’000”15°06’000” 经纬度坐标为： A: 105°29’06.31579” 13 °40’39.24324” B: 105°32’09.97230” 13 °40’39.24324” C: 105°29’06.31579” 13 °37’18.64865” D: 105°32’09.97230” 13 °37’18.64865” （2）柬埔寨东华集团有限公司情况介绍： 东华公司于2009年5月在柬埔寨金边成立，注册资金2500万美元，由陈陆荣、陈正芬、陈宇春3个自然人发起设立，公司股权关系简单，无借款欠款。2009年10月变更取得探矿权证壹份（有效期二年，自2010年2月至2012年2月，可续2年），未进行其它业务，是专为取得龙土铁矿探矿权证而设立的。 东华公司股东均为浙江人，改革开放以来依靠出口外贸服装起家，积累了一定的资金，后转投国内黄金及有色金属的开采，于2008年进入柬埔寨开展黄金探采业务，后经过努力，取得了龙土矿区矿权。 （3）龙土1号铁矿地质： 矿床的地质特征
微生物制药技术介绍 工业微生物技术是可持续发展的一个重要支撑，是解决资源危机、生态环境危机和改造传统产业的根本技术依托。工业微生物的发展使现代生物技术渗透到包括医药、农业、能源、化工、环保等几乎所有的工业领域，并扮演着重要角色。欧美日等国已不同程度地制定了今后几十年内用生物过程取代化学过程的战略计划，可以看出工业微生物技术在未来社会发展过程中重要地位。 微生物制药技术是工业微生物技术的最主要组成部分。微生物药物的利用是从人们熟知的抗生素开始的，抗生素一般定义为：是一种在低浓度下有选择地抑制或影响其他生物机能的微生物产物及其 衍生物。(有人曾建议将动植物的具有同样生理活性的这类物质如鱼素、蒜素、黄连素等也归于抗生素的范畴，但多数学者认为传统概念的抗生素仍应只限于微生物的次级代谢产物。)近年来，由于基础生命科学的发展和各种新的生物技术的应用，报道的微生物产生的除了抗感染、抗肿瘤以外的其他生物活性物质日益增多，如特异性的酶抑制剂、免疫调节剂、受体拮抗剂和抗氧化剂等，其活性已超出了抑制某些微生物生命活动的范围。但这些物质均为微生物次级代谢产物，其在生物合成机制、筛选研究程序及生产工艺等方面和抗生素都有共同的特点，但把它们通称为抗生素显然是不恰当的，于是不少学者就把微生物产生的这些具有生理活性（或称药理活性）的次级代谢产物统称为微生物药物。微生物药物的生产技术就是微生物制药技术。可以认为包括五个方面的内容：
根据资料直接向有科研单位、高等院校、工厂或菌种保藏部门索取或购买；从大自然中分离筛选新的微生物菌种。 分离思路新菌种的分离是要从混杂的各类微生物中依照生产的要求、菌种的特性，采用各种筛选方法， 快速、准确地把所需要的菌种挑选出来。实验室或生产用菌种若不慎污染了杂菌，也必须重新进行分离纯化。具体分离操作从以下几个方面展开。 定方案：首先要查阅资料，了解所需菌种的生长培养特性。 采样：有针对性地采集样品。 增殖：人为地通过控制养分或培条件，使所需菌种增殖培养后，在数量上占优势。 分离：利用分离技术得到纯种。 发酵性能测定：进行生产性能测定。这些特性包括形态、培养特征、营养要求、生理生化特性、发酵周期、产品品种和产量、耐受最高温度、生长和发酵最适温度、最适pH值、提取工艺等。 工业上生产用菌株都是经过选育过的。工业菌种的育种是运用遗传学原理和技术对某个用于特定生物技术目的的菌株进行的多方位的改造。通过改造，可使现存的优良性状强化，或去除不良性质或增加新的性状。 工业菌种育种的方法：诱变、基因转移、基因重组。
常用的几种微生物接种方法 接种细菌应用接种针（环）来沾取细菌标本，进行接种。接种环与接种针为用白金丝或合金丝所制，亦可用电炉丝代替，因它能耐高热且散热快，便于接种前后通过火焰灭菌（整个接种环烧红即达到灭菌目的）。在使用接种环时一般用右手持笔式较为方便，左手可持培养基进行配合，其接种程序可分为：灭菌接种环→稍冷→沾取细菌样品→进行接种（包括：启盖或塞、接种划线、加盖或塞）→进行接种环灭菌等五个程序。不同培养基，接种方法也不同，分述如下： 一、平板划线接种法（分离培养法） 是将细菌分离培养的常用技术，其目的是将混有多种细菌的培养物，或标本中不同的细菌（病原菌与非病原菌）使其分散生长，形成单个菌落或分离出单一菌株，便于识别鉴定。平板划线接种方法较多，其中以分段划线法与曲线划线法较为常用。 （一）分段划线法 平板分段划线(左)及培养后菌落分布图 本法多用于含菌量较多的标本。方法是以接种环沾取少许样品先涂布于平板培养基表面一角作为第一段划线（划线时接种环与培养基表面呈45度角），然后将接种环置火焰上灭菌，俟冷（可接触平板试之，如不融化琼脂，即已冷却），于第二段处再作划线，且在开始划线时与第一段的划线相交接数次，以后划线不必再相接，待第二段划完时，再如上法灭菌，接种划线，依次划至最后一段，灭菌接种环。这样每一段划线内的细菌数逐渐减少，即以获得单个菌落，划线接种完毕，盖好平皿盖，倒置（平板底部向上）于37℃温箱中培养。 （二）连续划线法：此法多用于接种材料中含菌数量不太多的样品或培养物。方法是先将样品或培养物涂于平板表面的一角，然后用接种环自样品涂擦处开始，向左右两侧划开并逐渐向下移动，连续划成若干条分散的平等线。
菌种保藏 （一）、菌种保藏的目的 微生物在使用和传代过程中容易发生污染、变异甚至死亡,因而常常造成菌种的衰退,并有可能使优良菌种丢失.菌种保藏的重要意义就在于尽可能保持其原有性状和活力的稳定,确保菌种不死亡、不变异、不被污染,以达到便于研究、交换和使用等诸方面的需要. （二）、菌种保藏的原理 无论采用何种保藏方法,首先应该挑选典型菌种的优良纯种来进行保藏,最好保藏它们的休眠体,如分生孢子、芽孢等.其次,应根据微生物生理、生化特点,人为地创造环境条件,使微生物长期处于代谢不活泼、生长繁殖受抑制的休眠状态.这些人工造成的环境主要是干燥、低温和缺氧,另外,避光、缺乏营养、添加保护剂或酸度中和剂也能有效提高保藏效果. （三）、菌种保藏的方法 1、斜面低温保藏法 将菌种接种在适宜的斜面培养基上,待菌种生长完全后,置于4℃左右的冰箱中保藏,每隔一定时间（保藏期）再转接至新的斜面培养基上,生长后继续保藏,如此连续不断.此法广泛适用于细菌、放线菌、酵母菌和霉菌等大多数微生物菌种的短期保藏及不宜用冷冻干燥保藏的菌种.放线菌、霉菌和有芽孢的细菌一般可保存6个月左右,无芽孢的细菌可保存1个月左右,酵母菌可保存3个月左右.如以橡皮塞代替棉塞,再用石蜡封口,置于4℃冰箱中保藏,不仅能防止水分挥发、能隔氧,而且能防止棉塞受潮而污染.这一改进可使菌种的保藏期延长. 该法的优点是简便易行,容易推广,存活率高,故科研和生产上对经常使用的菌种大多采用这种保藏方法.其缺点是菌株仍有一定程度的代谢活动能力,保藏期短,传代次数多,菌种较容易发生变异和被污染. 2、石蜡油封藏法 此法是在无菌条件下,将灭过菌并已蒸发掉水分的液体石蜡倒入培养成熟的菌种斜面（或半固体穿刺培养物）上,石蜡油层高出斜面顶端lcm,使培养物与空气隔绝,加胶塞并用固体石蜡封口后,垂直放在室温或4℃冰箱内保藏.使用的液体石蜡要求优质无毒,化学纯规格,其灭菌条件是：150～170℃烘箱内灭菌lh；或121℃高压蒸汽灭菌60～80min,再置于80℃的烘箱内烘干除去水分. 由于液体石蜡阻隔了空气,使菌体处于缺氧状态下,而且又防止了水分挥发,使培养物不会干裂,因而能使保藏期达1～2年,或更长.这种方法操作简单,它适于保藏霉菌、酵母菌、放线菌、好氧性细菌等,对霉菌和酵母菌的保藏效果较好,可保存几年,甚至长达10年.但对很多厌氧性细菌的保藏效果较差,尤其不适用于某些能分解烃类的菌种. 3、砂土管保藏法 这是一种常用的长期保藏菌种的方法,适用于产孢子的放线菌、霉菌及形成芽孢的细菌,对于一些对干燥敏感的细菌如奈氏球菌、弧菌和假单胞杆菌及酵母则不适用. 其制作方法是,先将砂与土分别洗净、烘干、过筛(一般砂用60目筛,土用120目筛),按砂与土的比例为(1～2)：1混匀,分装于小试管中,砂土的高度约1cm,以121℃蒸汽灭菌1～1.5h,间歇灭菌3次.50℃烘干后经检查无误后备用.也有只用砂或土作载体进行保藏的.需要保藏的菌株先用斜面培养基充分培养,再以无菌水制成108～1010个/ml菌悬液或孢子悬液滴入
柬埔寨铁矿资源简介 Company Document number：WTUT-WT88Y-W8BBGB-BWYTT-19998
一、柬埔寨铁矿资源 由于勘探工作滞后，柬埔寨至今尚未绘制出完整的国家矿产资源分布图。因而，已知的矿产资源分布至今无法用图表予以说明，只能作粗略的文字叙述。 1、主要铁矿的分布 柬埔寨的铁矿石资源主要在柬北部的柏威夏、上丁两省，系次火山热液充填交代型铁矿床，有原矿和堆积矿。柏威夏——上丁矿带的铁矿相对比较零星，不具备大型铁矿的成矿条件，其特点表现为矿体散、大矿少、品位低。 其中，铁矿资源的储量最“亮眼”，仅百囊达克矿带的储量就达200多万吨，普农德克铁矿床资源量估计为500万吨-600万吨矿石，平均含Fe203为51%一56%，矿石 含Si0214%-27%，含磷、硫很低，不超过%。
二、柬埔寨主要铁矿企业 1、柬埔寨龙土铁矿情况介绍 （1）、龙土铁矿的背景： 柬埔寨龙土铁矿面积36平方公里，位于柬埔寨柏威夏省的东北部，与上丁省相邻，距离柬埔寨首都金边约300公里，矿区都是丘陵地貌。 84坐标为： A:5°52’000”15°12’000” B:5°58’000”15°12’000” C:5°58’000”15°06’000” D:5°52’000”15°06’000” 经纬度坐标为： A:105°29’”13°40’” B:105°32’”13°40’” C:105°29’”13°37’” D:105°32’”13°37’” （2）柬埔寨东华集团有限公司情况介绍： 东华公司于2009年5月在柬埔寨金边成立，注册资金2500万美元，由陈陆荣、陈正芬、陈宇春3个自然人发起设立，公司股权关系简单，无借款欠款。2009年10月变更取得探矿权证壹份（有效期二年，自2010年2月至2012年2月，可续2年），未进行其它业务，是专为取得龙土铁矿探矿权证而设立的。 东华公司股东均为浙江人，改革开放以来依靠出口外贸服装起家，积累了一定的资金，后转投国内黄金及有色金属的开采，于2008年进入柬埔寨开展黄金探采业务，后经过努力，取得了龙土矿区矿权。 （3）龙土1号铁矿地质： 矿床的地质特征 龙土铁矿1号矿体位于探区36平方公里的中部，海拔高度在+110—+142米间，相对最大高差32米左右。从矿体露头看：整体矿化强度高，矿体以赤铁矿和磁铁矿为主，呈铁黑色至灰黑色，较为致密、质硬，完整性好，局部氧化后呈褐色，偶见气孔及残留冲填物。矿床生成于一北东向绵延的山丘上，出露点标高总体在+130米以上，由1条铁矿体组
设计实验：微生物菌种的分离纯化、培养、、鉴定以及保藏技术 一．实验目的 1.学习大肠菌群分离纯化、鉴定的原理。 2.掌握平板表面涂布法、平板划线法的分离技术。 3.学习掌握菌种保藏的原理和方法。 二.实验原理 菌种的分离纯化 从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物分离与纯化。在分子生物学的研究及应用中，不仅需要通过分离纯化技术从混杂的天然微生物群中分离出特定的微生物，而且还必须随时注意保持微生物纯培养物的“纯洁”，防止其他微生物的混入。 1.涂布平板法 因为将微生物悬液先加到较烫的培养基中再倒平板易造成某些热敏感菌的死亡，且采用稀释倒平板法也会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间缺乏氧气而影响其生长，因此在微生物学研究中常用的纯种分离方法是涂布平板法。 2.平板划线法 最简单的分离微生物的方法是平板划线法，其原理是将微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离目的的。划线的方法很多，常见的比较容易出现单个菌落的划线方法有斜线法、曲线法、方格法、放射法、四格法等。 大肠菌群的培养鉴定 大肠菌群能在乳糖胆盐液体培养液中生长，并且产气产酸，使培养液变色。还能在伊红美兰固体培养上生长，形成黑紫色的菌落，有的还有金属光泽。其他病原菌的菌落呈粉红色。再做镜检观察是无芽孢的革兰氏阴性杆菌（呈红色）。即可鉴定是有大肠菌群的菌存在。 菌种保藏 菌种保藏是将微生物的菌种经长时间的保存，不污染其它杂菌，及可保持其形态特征和生理性状，减少变异，防止衰老，以便于将来使用。 保藏菌种一般是选用它的休眠休，如孢子；芽孢等等，并且要创造一个低温；干燥；缺氧；避光和缺少营养的环境条件，以利于休眠体能长期地处于休眠状态。对于不产孢子的微生物，应使其新陈代谢处于最低状态，又不会死亡，从而达到长期保存的目的 三.实验器材 1.菌种：污水中的大肠菌群、酵母菌和霉菌 2、培养基：乳糖胆盐液体培养基、伊红美蓝琼脂（EMB）、营养琼脂培养基、麦芽汁固体斜面培养基 和马铃薯固体斜面培养基。 3.器材：接种环、安培瓶、干燥器、冰箱、产气管、试管、培养皿、无菌平皿、无菌玻璃涂棒移液管、电炉、双目显微镜、恒温培养箱、无菌操作台、高压灭菌锅、恒温干燥箱等。 4.试剂：革兰氏一(草酸铵结晶紫)、革兰氏二(路哥氏碘液) 、革兰氏三（95%乙醇）、 革兰氏四（蕃红）；试剂：医用液体石腊（比重0.83～0.89）。 四．试验方法及步骤 1.大肠菌群的分离纯化 第一天 a．涂布平板法：将已熔化的营养琼脂培养基倒入无菌平皿，制成无菌平板，冷却凝固后，将一定量的含大肠菌群的污水滴加在平板表面，再用无菌玻璃涂棒将菌液均匀分散至整个平板表面，置培养箱中37℃培养24小时。经培养后挑取单个菌落。 第二天 b．平板划线法：经培养后挑取单个菌落，接种环以无菌操作沾取少许菌落，在无菌伊红美兰琼脂培养基平板表面进行连续划线，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来，如果
世界铁矿石资源储量概况与中国铁矿资源情况世界钢铁工业尤其中国钢铁工业的快速发展，对铁矿石的需求不断增加。就目前掌握的资料，世界铁矿石资源总体储量丰富，能够满足钢铁工业发展的需求。随着科学技术的不断进步，世界铁矿石产能将不断提高，国际铁矿石市场长期将呈现供大于求的局面。 1.世界铁矿资源概况 世界铁矿资源丰富，美国地质调查所2007年公布数据显示，世界铁矿石储量为1900亿吨，储量基础为3400亿吨；铁金属储量为730亿吨，储量基础为1600亿吨，见表1。 表1：世界铁矿资源储量现状
界世2. 资矿铁特点源世 矿界铁集资源少中在家数国地和
中区，集 较度 统据高。个国家铁矿石储量计，俄罗斯、乌克兰、澳大利亚、巴西、哈萨克斯坦和中国等6。资源集中的地区也正是当今世界铁矿石的集中生产区，如占世界总储量的75.6%巴西淡水河谷公司，澳大利亚必和必拓公司和哈默斯利公司的铁矿石产量占世界总 35.5%。产量的所示。世界着名的大型铁矿区和相关着名的铁矿生产企业生产情况如表2 ：世界铁矿区和相关着名的铁矿生产企业生产情况表2
世界铁矿资源集中在少数国家和地区，集中度较高。据统计，俄罗斯、乌克兰、澳大利亚、巴西、哈萨克斯坦和中国等6个国家铁矿石储量占世界总储量的75.6%。资源集中的地区也正是当今世界铁矿石的集中生产区，如巴西淡水河谷公司，澳大利亚必和必拓公司和哈默斯利公司的铁矿石产量占世界总产量的35.5%。 从成因类型上看，受变质沉积型铁矿床居多，其他类型铁矿床少。在世界铁矿资源中，铁矿储量80%均属于自受变质沉积型铁矿床。目前，澳大利亚、巴西、印度、美国、加拿大、独联体、委内瑞拉、中国等国的铁矿石，主要都是来自此种矿床。 从矿石质量上看，南半球富铁矿多，北半球富铁矿少。巴西、澳大利亚和南非都位，澳大利亚赤铁富矿44%于南半球，其铁矿石品位高，质量好。世界铁矿平均品位 Fe56%-63%，成品矿粉矿含铁一般62%，块矿含铁一般能达到64%。巴西矿含铁品位53%-57%，成品矿粉矿一般为Fe65%-66%，块矿Fe64%-67%。 3.世界铁矿资源开发态势 钢铁工业发展刺激了铁矿增产，澳大利亚AME曾预测2010年世界铁矿产量将达20.91亿吨，比2007年增加1.04亿吨；2012年产量21.67亿
微生物菌种资源库 建设方案 通过建立微生物菌种资源库，进一步整合我公司的菌种库，以及南开大学和天津市各大医院的菌种资源。业务包括：菌种收集、保存、复核、鉴定、销售与评估；专利微生物的寄存；产业用优良菌种之开发及应用；各项与微生物有关之委托试验和合作开发。基地除了保存各类微生物，如细菌、酵母菌、丝状真菌，也保存质体和宿主、病毒和细胞株，从而整合具有一定科学意义、有实际或潜在研究应用价值的细菌、真菌、病毒及相关的信息资源，重点开展农、林、医、药、食品、兽医、海洋基础研究及教学实验用微生物菌种资源的共享体系建设；建立国家微生物菌种资源库和服务管理信息系统。 将进一步建设和完善应用于微生物菌种分离鉴定的生化实验室和分子生物 学实验室，配置PCR仪、高速冷冻离心机、电泳仪、凝胶成像仪、微生物生化鉴定仪等先进设备，以及DNAMAN、BIOEDIT、CLUSTALX、TREEVIEW等系列序列分析软件。开辟100m2的微生物菌种库库房，配置-80℃低温冷冻保藏冰箱20台、液氮超低温冰箱2台及自动监控系统2套。 任务包括： ●菌种的收集：微生物菌种收集途径主要包括：自行分离、交换、购买、接受 捐赠、接受委托保藏。 ●菌种的分离与鉴定：利用先进的生物科学仪器和从事分类鉴定的专业化人员 队伍，为国内科研机构、大专院校和生产企业等提供微生物菌种的鉴定服务，可鉴定细菌、病毒、酵母和丝状真菌等多种微生物。菌种鉴定手段包括常规鉴定、Biolog碳源自动分析鉴定和分子生物学鉴定等。 ●菌种的保藏：针对不同的微生物的特点，采用合适的保存方法，包括：定期 移植法，液体石蜡保藏法，沙土管保藏法，冷冻干燥，-80℃低温冷冻保藏，液氮超低温保藏等。 建设合理性 最近，在自然科技资源平台建设方面，国家启动了“微生物菌种资源描述标准和规范研究制定及共享试点建设”和“微生物菌种资源收集、整理、保藏技术规程”项目。项目立足于中国微生物菌种资源的保藏现状，紧密跟踪科学发展前沿，以微生物菌种资源整理、整合、安全保藏、保障生物安全、共享和利用为主要目标，规定了微生物菌种资源基本信息和性状描述的要求，规定了微生物安全操作
世界铁矿石资源储量概况与中国铁矿资源情况 世界钢铁工业尤其中国钢铁工业的快速发展，对铁矿石的需求不断增加。就目前掌握的资料，世界铁矿石资源总体储量丰富，能够满足钢铁工业发展的需求。随着科学技术的不断进步，世界铁矿石产能将不断提高，国际铁矿石市场长期将呈现供大于求的局面。 1.世界铁矿资源概况 世界铁矿资源丰富，美国地质调查所2007年公布数据显示，世界铁矿石储量为1900亿吨，储量基础为3400亿吨；铁金属储量为730亿吨，储量基础为1600亿吨，见表1。 表1：世界铁矿资源储量现状 2.世界铁矿资源特 点 世界铁矿资源集中在少数国家和地区，集中度较高。据统计，俄罗斯、乌克兰、澳大利亚、巴西、哈萨克斯坦和中国等6个国家铁矿石储量占世界总储 量 的75.6%。资源集中的地区也正是当今世界铁矿石的集中生产区，如巴西淡水河谷公司，澳大利亚必和必拓公司和哈默斯利公司的铁矿石产量占世界总产量的35.5%。 世界着名的大型铁矿区和相关着名的铁矿生产企业生产情况如表2所示。 表2：世界铁矿区和相关着名的铁矿生产企业生产情况 国家矿区名称储量品位e （%）相关着名铁矿企业 澳大利亚哈默斯利32057哈默斯利公司、必合必拓公司、罗布洱公司 巴西铁四角30035～69淡水河谷公司、MBR 公司 巴西卡拉加斯18060～67淡水河谷公司 玻利维亚、巴西水通（玻） 乌鲁库姆（巴西）58050～53 印度比哈尔、奥里萨67＞60MMTC 公司 国家、地区 铁矿品位 资源储量（含铁量） 铁矿石储量 基础储量 储量 基础储量 储量 巴西 67% 140 89 270 160 俄罗斯 56% 310 140 560 250 澳大利亚 61% 280 100 450 160 乌克兰 30% 200 90 680 300 中国 33% 150 70 400 210 哈萨克斯坦 40% 74 33 190 83 印度 64% 62 42 98 66 瑞典 60% 50 22 78 35 美国 30% 46 21 150 69 委内瑞拉 60% 36 24 60 40 加拿大 65% 25 11 39 17 南非 65% 15 6.5 23 10 伊朗 15 10 25 18 毛里塔尼亚 10 4 15 7 墨西哥 9 4 15 7 其他 170 62 300 110 全球合计 1600 730 3400 1900
世界各国铁矿石资源储量概况与开发情况 世界钢铁工业尤其中国钢铁工业的快速发展，对铁矿石的需求不断增加。就目前掌握的资料，世界铁矿石资源总体储量丰富，能够满足钢铁工业发展的需求。随着科学技术的不断进步，世界铁矿石产能将不断提高，国际铁矿石市场长期将呈现供大于求的局面。 1、世界铁矿资源概况 世界铁矿资源丰富，美国地质调查所2007年公布数据显示，世界铁矿石储量为1900亿吨，储量基础为3400亿吨；铁金属储量为730亿吨，储量基础为1600亿吨，见表1。 表1：世界铁矿资源储量现状 国家、地区 xx 俄罗斯56% 310 140 560 250 乌克兰30% 200 90 680 300 中国33% 150 70 400 210 哈萨克斯坦40% 74 33 190 83 xx64% 62 42 98 66 xx60% 50 22 78 35 xx30% 46 21 150 69 xx60% 36 24 60 40 xx65% 25 11 39 17 xx65% 15 6.5 23 10
xx15 10 25 18 xx10 4 15 7 xx9 4 15 7 其他170 62 300 110铁矿品位资源储量（含铁量）铁矿石储量67%基础储量 140储量 89基础储量270160澳大利亚61% 280 100 450 160 全球合计1600 730 3400 1900 世界铁矿资源集中在澳大利亚、巴西、俄罗斯、乌克兰、哈萨克斯坦、印度、荚国、加拿大、南非等国。世界著名的大型铁矿区和相关著名的铁矿生产企业生产情况如表2所示。 表2：世界铁矿区和相关著名的铁矿生产企业生产情况 国家矿区名称储量品位e（%）相关著名铁矿企业 澳大利亚哈默斯利320 57哈默斯利公司、必合必拓公司、罗布洱公司 巴西铁四角300 35～69淡水河谷公司、MBR公司 巴西卡拉加斯180 60～67淡水河谷公司 xx、xx水通（玻） xx库姆（xx）580 50～53 印度比哈尔、奥里萨67＞60 MMTC公司 加拿大拉布拉多206 36～38加拿大铁矿公司、魁北克卡蒂尔矿山公司 美国苏必利尔163 31明塔克、帝国铁矿、希宾公司、带尔登公司等 俄罗斯库尔斯克435 46列别金、米哈依塔夫、斯托依连公司
实验十 微生物菌种保藏方法 [日期：2009- 5-30]来源： 作者：孔庆学 [字体：大 中 小] 实验十微生物菌种保藏方法 菌种是一种重要的生物资源，菌种保藏是重要的微生物基础工作。菌种保藏就是利用一切条件使菌种不死、不衰、不变，以便于研究与应用。 (一)常规保藏方法 1 目的 1.1 了解菌种保藏的基本原理 1.2 掌握几种常用的菌种保藏方法。 2 原理 菌种保藏的方法很多。其原理却大同小异，不外乎为优良菌株创造一个适合长期休眠的环境,即干燥、低温、缺乏氧气和养料等。使微生物的代谢活动处于最低的状态，但又不至于死亡，从而达到保藏的目的。依据不同的菌种或不同的需求，应该选用不同的保藏方法。一般情况下，斜面保藏、半固体穿刺,石蜡油封存和砂土管保藏法较为常用，也比较容易制作。 3 材料 3.1菌株 待保藏的适龄菌株斜面 3.2培养基 肉汤蛋白胨斜面，半固体及液体培养基。 3.3 试剂 10%HCl无水氯化钙、石蜡油、五氧化二磷。 3.4 器具 用于菌种保藏的小试管(10*100毫米)数支、5毫升无菌吸管、l毫升无菌吸管等、灭菌锅、真空泵、干燥器、冰箱无菌水、筛子(40目、120目)、标签、接种针、接种环、棉花、牛角匙等等。 4 流程 斜面保藏→半固体穿刺保藏→石蜡油封存→砂土管保藏
5 步骤 5.1斜面保藏 5.1.1流程 标记试管→接种→培养→保藏 5.1.2步骤 5.1.2.1贴标签 取无菌的肉汤蛋白胨斜面数支。在斜面的正上方距离试管口2-3厘米处贴上标签。在标签纸上写明接种的细菌菌名、培养基名称和接种日期。 5.1.2.2斜面接种 将待保藏的细菌用接种环以无菌操作在斜面上作划线接种。 5.1.2.3培养 置37恒温箱中培养48小时。 5.1.2.4保藏 斜面长好后，直接放入4℃的冰箱中保藏。这种方法一船可保藏三个月至半年。 5.2半固体穿刺保藏 5.2.1流程 标记试管→穿刺接种→培养→保藏 5.2.2 步骤 5.2.2.1贴标签 取无菌的半固体肉汤蛋白等直立柱数支，贴上标签，注明细菌菌名、培养基名称和接种日期。 5.2.2.2穿刺接种 用接种针以无菌方式从待保藏的细菌斜面上挑取菌种，朝直立柱中央直刺至试管底部，然后又沿原线拉出。 5.2.2.3培养 置37恒温箱中培养48小时。 5.2.4保藏 半固体直立柱长好以后，放入4℃的冰箱中保藏。这种方法一般可保藏半年至一年。
第14章 微生物的保存技术 工业、农业、医学和科学研究的需要促进了微生物保存技术的发展。例如，当发现微 生物就是某些传染性疾病的特殊病原时，为发展疫苗、抗生素和化学药品，人们需要分离、鉴定和保存微生物。农业上最明显的例子就是对固氮菌的研究，关于工业应用微生物的例 子更是不胜枚举。微生物发酵还提供了大量的食品、饮料和药品。在分子生物学研究中， 用先进的DNA重组技术可以修饰微生物（U.S.Congress 1981），微生物是基因工程的基础。 微生物是重要的生物资源，保存微生物的目的，不仅使微生物菌株以活的生命状态保 存下来，并使其遗传性状从分离时或从实验开始就一直保持不变。这也是保护微生物多样 性的重要手段，还使后人能更好地应用先进技术开发和运用微生物，为人类造福。为此， 世界各发达国家都设有专门的菌种保藏机构。如美国的典型菌种保藏中心（ATCC），英国的 国家典型菌种保藏所（NCTC），日本的大阪发酵研究所（IFO）等。我国也设有中国微生物 菌种保藏委员会（CCCCM）。 微生物的保存方法很多，根据不同的微生物菌（毒）株或不同的实验要求，可选用不 同的保存方法。这些保存方法的原理大同小异。首先要挑选典型菌种的优良纯种，再创造 一个适合其长期休眠的环境条件，诸如低温、干燥、缺氧、避光、缺少营养等，使被保存 的微生物减少代谢率及繁殖和利用营养的比率（Halliday，Baker 1985）。然而，所有减少 代谢率的方法都会导致一定比率的活力下降。为了防止菌株的丢失，还需要开发出不仅能 减少代谢率，而且能防止活力下降的方法。 与保存技术有关、但较为费时的另一项关键性工作是档案记录（Halliday，Baker1985）。这一工作不仅包括菌种或毒株的培养史和诊断特征等方面的准确记录，还包括对保存物的 定期复苏和培养记录，以确定其活力、验证其纯度及基因的稳定性。 最常用的微生物保存法有冻干保存法和超低温冻存法（Gherna 1981；Halliday，Baker 1985；Malik 1990；Rudge 1991）。这两种方法均可保存相当长的时期（通常可长达30年）。其他保存微生物的方法还有：低温保存法、传代培养保存法、砂土保存法等（Gherna 1981）。 14.1 细菌的冻干保存法 14.1.1 一般概念 冻干是目前最常用的微生物保存技术（Day，Mclellan 1995）。美国ATCC在1985年第16版《细菌、噬菌体和rDNA载体目录册》及1987年第17版《真菌／酵母目录册》中，记载有 11 000株细菌、噬菌体和rDNA载体及 21 000株真菌、酵母用冻干法保存（Gherna等 本章作者：田保平，韦剑珊，俞乃胜
龙源期刊网 https://www.doczj.com/doc/3f9485192.html, 矿物微生物风化作用在环境生物技术应用中的研究进展 作者：谌书等 来源：《安徽农业科学》2014年第02期 摘要矿物-微生物相互作用在地球岩石圈的塑造方面起着重要作用。笔者分析了土壤形成、植物生长、污染环境修复、文物古迹生物侵蚀的研究进展，认为利用生物修护技术开发矿物风化微生物，是一种经济的、环保的、具有竞争力的方法。未来，研究和应用对矿物有风化作用的微生物将会促进环境生物技术的发展。 关键词矿物风化；土壤；生物修复；矿物-微生物；环境生物技术 中图分类号S181.3文献标识码A文章编号0517-6611（2014）02-00559-03 AbstractMineralmicrobe interaction has been a key factor shaping the lithosphere of the earth. To investigate the research advances on interaction between mineral and microbe in soil formation，plant growth， pollution bioremediation and cultural heritage conservation， exploitations of bioweathering microbe is economical， environmental competitive solution in environmental biotechnology. In the future the study and application of microbe capable of weathering can promote the development of the environmental biotechnology. Key wordsMineral weathering； Soil； Bioremediation； Mineralmicrobe； Environmental biotechnology 生物对矿物岩石的风化作用，是通过微生物和植物生长过程中生物物理与化学过程来实现的[1]。生物风化不仅对地表地质演变起着重要作用，还能通过影响地表水、土壤和农业来影 响人类。利用微生物与矿物风化之间的相互作用关系能提供一种新的思路去解决农业、环境和工业上遇到的问题，如提高酸性土壤的肥力与作物产量、修复污染土壤，以此建立一套环境友好型的微生物处理技术[2]。笔者分析了在人为和自然生态系统中微生物风化作用的重要性，探讨微生物矿物相互作用在增加土壤肥力、作物产量、生物修复与提高微生物降解无机污染物方面的潜力。 1微生物矿物风化在土壤形成中的作用 岩石通常是由一种或多种矿物组成，矿物岩石的风化主要依靠气候的变化，但它可因酸雨和空气污染而加强风化作用[3]。细菌矿物溶解机制包括氧化还原反应，有机酸和螯合作用。 在微生物的代谢过程中矿物被风化，同时矿物质还可作为微生物的能量来源加以利用，如作为最终电子受体或微生物的营养源[4]。土壤是风化的岩石碎片、有机化合物和生物体相结合的 混合物。土壤团聚体的形成与稳定性与粘土矿物转化过程有直接的联系，还与土壤中生物有机
如何根据不同微生物种类对生态环境的不同要求以及不同的营养要求指导微生物菌种资源的的分离纯化？请举出1个应用实例。 首先分析筛选菌种的生态分布状况，以减少采样工作的盲目性。土壤是自然界微生物生活的大本营，土壤一般都是首选的采样目标；采样地点选好后，先除去表土，取离地面5—20cm深处的土样约数十克，盛入事先灭过菌的牛皮纸袋或塑料袋等容器中，并记录样品的编号、采样时间、地点、立地条件、植被情况等。采到的样品应尽快带回实验室内使用。若暂时不能分离使用，应置冰箱中保存。 各种天然生境中的微生物群体实质上是一种混合培养物，其中的目标菌可能非常少，因此需要设计一些方法把需要的目标微生物从混合的微生物群体分离出来或者使其丰度提高。常用的方法是选择性培养和富集培养。 选择性培养：提供一个特别设计的培养环境，以有利于所要分离的微生物的生长，而不适于其它微生物的生长。 富集培养：在培养中，通过添加某些特殊营养物质或控制培养条件，使本来数量极少的待筛选微生物丰度提高，从而增加其分离几率的培养方法称为富集培养。 富集培养本质上和选择性培养无很大差异，可以认为是选择性培养的一种类型。如果经一次富集培养后该微生物数量还太少，则可根据需要进行多次富集培养，直至达到可进行稀释分离的程度为止。 分离与纯化：从混杂的微生物群体中获得只含某一种或单一微生物克隆（菌株）的过程。常用的分离、纯化方法：单细胞挑取法、稀释涂布平板法、稀释混合平板法、平板划线法。 微生物的性能测定：分离得到纯种微生物，只是选种工作的第一步。所得到的纯种是否具有符合生产或科研要求的性能，还必须通过测定才能知道。性能测定的方法一般分初测和复测。主要的有培养特性测定、酶活性测定、产孢性能测定、次生代谢产物产生量测定等。具体方法包括透明圈测定、最适培养温度、需氧测定，最适pH条件测定等。 不同的微生物种类，对生态环境的要求和营养需要是不同的，在分离纯化微生物时，应该根据它的生活习性进行，选择合适的分离方法，达到纯化目的。一般常用的分离方法包括如下几种： 1、用固体培养基分离和纯化 单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞生长群体，称为菌落。当固体培养基表面众多菌落连成一片时，便成为菌苔。不同微生物在特定培养基上生长形成的菌落或菌苔一般都具有稳定的特征，可以成为对该微生物进行分类、鉴定的重要依据。大多数细菌、酵母菌、以及许多真菌和单细胞藻类能在固体培养基上形成孤立的菌落，采用适宜的平板分离法很容易得到纯培养。最常用的分离、培养微生物的固体培养基是琼脂固体培养基平板。固体培养基分离方法又分为稀释倒平板法、涂布平板法、平板划线法、稀释摇管法。 2、用液体培养基分离和纯化 大多数细菌和真菌，用平板法分离通常是满意的，因为它们的大多数种类在固体培养基上长得很好。然而迄今为止并不是所有的微生物都能在固体培养基上生长，例如一些细胞大的细菌、许多原生动物和藻类等，这些微生物仍需要用液体培养基分离来获得纯培养。 稀释法是液体培养基分离纯化常用的方法。接种物在液体培养基中进行顺序稀释，以得到高度稀释的效果，使一支试管中分配不到一个微生物。如果经稀释后的大多数试管中没有微生物生长，那么有微生物生长的试管得到的培养物可能就是纯培养物。如果经稀释后的试管中有微生物生长的比例提高了，得到纯培养物的机率就会急剧下降。因此，采用稀释法进行液体分离，必须在同一个稀释度的许多平行试管中，大多数（一般应超过95%）表现为不生长。 3、单细胞（孢子）分离
欢迎阅读 世界铁矿石资源储量概况与中国铁矿资源情况 世界钢铁工业尤其中国钢铁工业的快速发展，对铁矿石的需求不断增加。就目前掌握的资料，世界铁矿石资源总体储量丰富，能够满足钢铁工业发展的需求。随着科学技术的不断进步，世界铁矿石产能将不断提高，国际铁矿石市场长期将呈现供大于求的局面。 1.世界铁矿资源概况 世界铁矿资源丰富，美国地质调查所2007年公布数据显示，世界铁矿石储量为1900亿吨，储量基础为3400亿吨；铁金属储量为730亿吨，储量基础为1600亿吨，见表1。 表1：世界铁矿资源储量现状 2.世界铁矿资 源特点 世界铁矿资源集中在少数国家和地区，集中度较高。据统计，俄罗斯、乌克兰、澳大利亚、巴西、哈萨克斯坦和中国等6个国家铁矿石储量占世界总储量的75.6%。资源集中的地区也正是当今世界铁矿石的 集中生产区，如巴 西淡水河谷公司， 澳大利亚必和必 拓公司和哈默斯 利公司的铁矿石 产量占世界总产量的 35.5%。 世界着名的大型铁矿区和相关着名的铁矿生产企业生产情况如表2所示。 表2：世界铁矿区和相关着名的铁矿生产企业生产情况 国家 矿区名称 储量 品位e （%） 相关着名铁矿企业 澳大利亚 哈默斯利 320 57 哈默斯利公司、必合必拓公司、罗布洱公司 巴西 铁四角 300 35～69 淡水河谷公司、MBR 公司 巴西 卡拉加斯 180 60～67 淡水河谷公司 玻利维亚、巴西 水通（玻） 乌鲁库姆（巴西） 580 50～53 国家、地区 铁矿品位 资源储量（含铁量） 铁矿石储量 基础储量 储量 基础储量 储量 巴西 67% 140 89 270 160 俄罗斯 56% 310 140 560 250 澳大利亚 61% 280 100 450 160 乌克兰 30% 200 90 680 300 中国 33% 150 70 400 210 哈萨克斯坦 40% 74 33 190 83 印度 64% 62 42 98 66 瑞典 60% 50 22 78 35 美国 30% 46 21 150 69 委内瑞拉 60% 36 24 60 40 加拿大 65% 25 11 39 17 南非 65% 15 6.5 23 10 伊朗 15 10 25 18 毛里塔尼亚 10 4 15 7 墨西哥 9 4 15 7 其他 170 62 300 110 全球合计 1600 730 3400 1900
中国铁矿资源分布和特点 中国铁矿资源有两个特点：一是贫矿多，贫矿出储量占总储量的80%；二是多元素共生的复合矿石较多。此外矿体复杂；有些贫铁矿床上部为赤铁矿，下部为磁铁矿。 一、东北地区铁矿 东北地区铁矿主要是鞍山矿区，它是目前我国储量开采量最大的矿区，大型矿体主要分布在辽宁省的鞍山（包括大弧山、樱桃园、东西鞍山、弓长岭等）、本溪（南芬、歪头山、通远堡等），部分矿床分布在吉林省通化附近。鞍山矿区是鞍钢、本钢的主要原料基地。 鞍钢弓长岭铁矿
鞍钢齐大山矿卫星摄影图 鞍山矿区矿石的主要特点： （1）除极少富矿外，约占储量的98%为贫矿，含铁量20-40%，平均30%左右，必须经过选矿处理，精选后含铁量可达60%以上。 （2）矿石矿物以磁铁矿和赤铁矿为主，部分为假象赤铁矿和半假象赤铁矿。其结构致密坚硬，脉石分布均匀而致密，选矿比较困难，矿石的还原性较差。 （3）脉石矿物绝大部分是由石英石组成的，SiO2在40-50%。但本溪通远堡铁矿为自溶性矿石，其碱度（Ca+Mg／SiO2）在1以上，且含锰1.29-7.5%可代替锰矿使用。 （4）矿石含S、P杂质很少，本溪南芬铁矿含P很低，是冶炼优质生铁的好原料。 二、华北地区铁矿
主要分布在河北省宣化、迁安和邯郸、邢台地区的武安、矿山村等的地区，以及内蒙和山西各地，这些矿是首钢、包钢、太钢和邯郸、宣化及阳泉等钢铁厂的原料基地。 迁滦矿区的矿石为鞍山式贫磁铁矿，含酸性脉石，S、P杂质少，矿石的可选性好。 邯邢矿区主要是赤铁矿和磁铁矿，矿石含铁量在40-55%之间，脉石中含有一定的碱性氧化物，部分矿石S高。 首钢迁安水厂铁矿海平面下130米深坑