培养基灵敏度验证方案

培养基的灵敏度测试培养基的灵敏度测试是其质量控制的一个重要检测部分。

方法如下：1.用于菌数计数的半固体琼脂培养基促菌生长（灵敏度）检查的方法：对每个不同批号的脱水培养基均应进行灵敏度检查（促菌生长检查）。

取预先制备好的琼脂培养基平皿3~5个，用表面涂布法每块平板表面接种30~100个试验菌，同时用已知质量保证的同型号培养基平皿3~5个（如较著名的如MERCK，DIFICOL产品）做对照试验，待培养基表面的菌液被琼脂培养基吸干或风干后，将培养皿倒置于培养箱的使用温度下培养48~72小时，（也可采用浇碟法进行）取出培养后的平皿点计菌落数。

样品培养基上的微生物数量应不得低于对照培养基上微生物生长数量的70%。

否则，需重新检查，或该培养基被视为不符合促生长要求。

2.用于控制菌检查的富集培养基的促菌生长（灵敏度）检查的方法：对每个不同批号的脱水培养基均应进行灵敏度检查。

每100ml培养基内分别接入试验菌小于100cfu，每个菌种接种两瓶培养基，将接过种的培养基置于指定条件下培养。

应在16~18小时后可明显观察到培养基内有微生物生长，则证明此培养基合格。

原则上无论是采用脱水培养基还是按相关处方配制的培养基，一旦制成成品培养基，则应对每个配制批号培养基进行促菌生长（灵敏度检查）试验，以考察培养基的质量。

按脱水培养基的生产批号做灵敏度检查是基于培养基的灭菌程序已经经过验证。

如果实验室使用的是商购的成品培养基，供应商应随培养基提供相应批次的培养基质量检测报告，报告包括培养基的PH值、无菌检查结果和促菌生长（灵敏度）试验结果等项目。

建议在使用某一新的成品培养基（新供应商或新培养基品种）时，应至少考察三个不同批次的培养基质量，只有三批质量均合格方可使用该培养基。

微生物限度检查用成品培养基一旦初试确认合格后，可审查供应商的质检报告，而不必每批再作无菌检查和灵敏度检查，但半年应至少检查一次，以复核其质量。

用于无菌检查试验的每批培养基，均必须按规定进行灵敏度检查试验，此规定同样适用于实验室自行配制的培养基。

培养基灵敏度验证方案1．验证目的：通过对培养基的灵敏度验证来增加无菌检查的可信度。

2．原理：不同种培养基内加入符合其生长条件的已知菌株做生长实验，根据加入定量细菌的生长情况来评价该培养基灵敏度。

菌量越少说明培养基灵敏度越高。

3．仪器设备：无菌室(操作间净化级别小于10000级，局部净化小于100级，室温18-26︒C，相对湿度40-60%)、恒温培养箱（30-35︒C）、恒温培养箱（20-25︒C）、高压灭菌器、干烤箱（250︒C）、相差显微镜等。

培养基：需气菌、厌氧菌培养基（硫乙醇酸盐培养基，中国药品检定所购买，生产批号：980115）；真菌培养基（改良马丁培养基，中国药品检定所购买，生产批号：980115）。

测试菌种：金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、白色念珠菌、生孢梭菌。

4．验证实施4．1培养基配制：分别称取硫乙醇酸盐培养基7.5克，改良马丁培养基7.0克，分别加250ml蒸馏水,热溶解，分装10ml/管，高压灭菌116︒C 20 分钟。

4．2测试菌的培养：在无菌操净台内，分别取金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、生孢梭菌菌液少量，接种在硫乙醇酸盐流体培养基（10ml/管）中，在30-35︒C培养24小时；取白色念珠菌菌液少量，接种在改良马丁培养基中在20-25︒C培养24小时。

此时的培养液称为原菌液。

4．3测试菌计数：采用原菌培养液直接稀释、计数板计数法：1．分别取已经培养好的原菌液1 ml，用生理盐水稀释10倍。

2．用一片干净的盖玻片盖在一干净计数玻片上。

3．吸少量含菌培养液接触盖玻片的边缘。

4．在相差显微镜400倍下观察，并且按一小方块所见的每一个细菌大约相当2 107细菌/ml 计算细菌浓度。

4．4原菌液稀释：将上述原菌液根据细菌计数结果，分别用生理盐水稀释至 10~100个菌/ml。

4．5灵敏度实验：分别将（4）稀释菌液1ml接种到（1）配制的10 ml/管培养基中，每种菌液接种3管培养基，以未接种的培养基为阴性对照，按规定的条件培养5天并逐日记录。

1. 目的建立支原体灵敏度检测操作规程，保证检测结果的真实可靠。

2. 范围用于自制支原体培养基和外购支原体培养基灵敏度的检测。

3. 职责3.1.质量管理部：负责本规程的起草。

3.2. 质量管理部检验人员：负责本规程的操作。

3.3. 总经理：负责本规程的审批。

4. 定义5. 引用标准无。

6. 材料6.1. 所需材料6.1.1. 菌种：肺炎支原体（ATCC 15531）、口腔支原体（ATCC 23714）购自北京中原公司。

6.1.2. 培养基:6.1.2.1 支原肉汤培养基猪胃消化液 500ml 氯化钠 2.5g牛肉浸出液（1：2） 500ml 葡萄糖 5.0g酵母浸粉 5.0g 酚红 0.02g6.1.2.2 支原体半流体培养基按6.1.2.1项处方配制，培养基中不加酚红，加入琼脂2.5～3.0g。

6.1.2.3 支原体琼脂培养基按6.1.2.1项处方配制，培养基中不加酚红，加入琼脂13.0～15.0g。

6.2. 仪器设备无6.3. 器械、用具6.3.1 灭菌玻璃移液管7. 流程图无8. 内容8.1.变色单位试验法：将菌种接种于适宜的支原体培养基中，经36℃±1℃培养至培养基变色，盲传2代后。

将培养物接种到待检培养基中，做10倍系列稀释，肺炎支原体稀释至10-7～10-9，接种到支原体肉汤培养基内；口腔支原体稀释至10-3～10-5，接种在精氨酸支原体肉汤培养基内，每个稀释度接种3支试管，置36℃±1℃培养7～14天，观察培养基变色结果。

8.2. 结果判定以接种后培养基管数的2/3以上呈现变色的最高稀释度为该培养基的灵敏度。

8.3. 液体培养基的灵敏度肺炎支原体（ATCC 15531）应达到10-3，口腔支原体（ATCC 23714）应达到10-4。

9. 注意事项无10. 附录及派生记录无11. 相关文件无12. 修订记录。

SOP-QC-03000培养基灵敏度检查标准操作规程471 GMP标准文件分发号: 流水号:471 编码: SOP-QC-03000 共2页第1页题目: 培养基灵敏度检查标准操作规程制定人 QA审核批准人制定日期审核日期批准日期颁发部门质量技术部颁发日期生效日期质量技术部分发部门目的:建立培养基灵敏度检查标准操作规程，保证无菌检查结果的准确性、可靠性。

范围:适用于培养基灵敏度检查。

职责:QC无菌检验员。

规程:1 实验设备及用具:高压蒸汽灭菌器、恒温培养箱、注射器、针头、注射器盒、试管、试管架、搪瓷托盘、时钟、75,酒精棉球、无菌服。

2 培养基:需气菌、厌气菌培养基(硫乙醇酸盐液体培养基)、真菌培养基，培养基的配制详见《培养基配制标准操作规程》。

3 测试用菌种3.1 藤黄微球菌[CMCC (B) 28 001]3.2 生孢梭菌[CMCC (B) 64 941]3.3 白色念珠菌[CMCC (F) 98 001]4 操作4.1 取藤黄微球菌的营养琼脂斜面和白色念珠菌的真菌培养基琼脂斜面的新鲜培养物，分别用0.9,无菌氯化钠溶液制成均匀的菌悬液;将生孢梭菌不含琼脂的需气菌、厌气菌培养基新鲜培养物，吸至无菌离心管，离心，弃去上清液,菌体用0.9,无菌氯化钠溶液制成均匀的菌悬液。

分别取上述菌悬液,用0.9,无菌氯化钠溶液稀释至与细菌浊度标准管相同的浓度，然后作10倍系列稀释，制成1ml中含10-100个菌并计数。

4.2 取藤黄微球菌、生孢梭菌的需气菌、厌气菌培养基新鲜培养物，白色念珠菌的真菌培养基的新鲜培养物1ml，用0.9%无菌氯化钠溶液作10倍系列稀释，制成1ml中含10—100个菌并计数。

4.3 将藤黄微球菌的上述4.1或4.2的稀释菌液各1ml，分别接种至每管装量为9ml的需气菌、厌气菌培养基3管，生孢梭菌的上述4.1或4.2的稀释菌液各1ml，分别GMP标准文件接种至每管装量为12ml需气菌、厌气菌培养基3管，白色念珠菌的上述4.1或4.2的稀释菌液各1ml，分别接种至每管装量为9ml的真菌培养基3管，以未接种的培养基作对照，按规定的温度培养5天并逐日记录结果。

培养基的灵敏度检查名词解释培养基的灵敏度检查是微生物学中一项重要的实验技术，用于评估和确定某种微生物对特定药物或化合物的敏感程度。

该检查通常用来确定微生物对抗生素、抗菌剂或其他抑菌物质的敏感性，从而帮助医生选择最适合的治疗方案。

本文将对培养基的灵敏度检查进行详细解释，包括其原理、方法和应用范围。

1. 培养基培养基是一种提供营养物质供微生物生长繁殖的物质，它们通常由水、气体、有机和无机化合物组成。

培养基可以分为固体和液体培养基，具体根据实验需求选择。

2. 灵敏度检查灵敏度检查是通过培养微生物在含有不同浓度药物或化合物的培养基上的生长情况来评估微生物对其的敏感程度。

这一方法是通过比较不同浓度的药物或化合物在培养基上对微生物的抑制效果来判断微生物对药物的敏感性。

3. 原理灵敏度检查的原理是基于微生物的生长特性。

在含有抗菌物质的培养基中，微生物的生长受到抑制，这是因为抗菌物质影响了微生物的代谢、细胞壁合成、蛋白质合成等生物学过程。

通过在不同浓度的药物或化合物培养基上培养微生物，可以观察到不同浓度下微生物的生长情况，根据其生长状况判断微生物对药物的敏感性。

4. 方法培养基的灵敏度检查通常采用标准化的方法进行。

首先，将从患者体内或环境中分离的微生物菌株接种于含有不同浓度药物的培养基上。

然后，将培养皿放入恒温培养箱中，在适宜的温度和湿度下培养一段时间。

观察培养皿中微生物的生长情况，通常通过裸眼观察，也可辅助使用显微镜。

根据微生物在不同药物浓度下的生长情况，可以确定微生物对药物的敏感程度。

5. 应用范围培养基的灵敏度检查在医学领域中具有广泛应用。

首先，在临床诊断中，该检查可以帮助医生选择最适合的抗菌药物，从而提高治疗效果。

其次，在药物研发中，通过灵敏度检查可以评估新药物对微生物的抑制作用，为药物的临床应用提供依据。

此外，在环境监测中，对环境中的微生物进行灵敏度检查可以评估环境中的微生物群落对抗菌物质的变化情况，为环境卫生和生物安全提供参考。

目的：建立培养基灵敏度检验标准操作规程，保证检查结果的准确性和可靠性。

应用范围：适用于培养基灵敏度的检查。

责任人：QC无菌检验员。

编订依据：《中国药典》2010年版二部、《中国药品检验标准操作规范》2010年版。

内容：
1 细菌、霉菌及酵母菌计数用的培养基应进行培养基的灵敏度检查及适用性检查，成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应检查。

2 菌种试验所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学特性。

大肠埃希菌（Escherichia coli）[CMCC(B) 44 102]
金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）[CMCC(B) 26 003]
枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）[CMCC(B) 63 501]
白色念珠菌（Candida albicans）[CMCC(F) 98 001]。

培养基灵敏度检查计划方案一、引言培养基灵敏度检查是一种常见的微生物实验室技术，用于评估微生物对不同抗生素的敏感性。

该检查对于指导临床使用抗生素和防控细菌耐药性具有重要意义。

本文旨在介绍培养基灵敏度检查的计划方案，以确保检查的准确性和可靠性。

二、目标和背景培养基灵敏度检查计划的主要目标是评估微生物对抗生素的抵抗能力，以确定临床治疗中最佳的抗生素选择。

通过此计划，可以培养出对不同抗生素具有不同耐药性的细菌菌株，为耐药性研究和抗生素合理使用提供依据。

三、实验步骤和方法1. 样品采集和处理从临床病例中采集所需的微生物样品，并进行初步处理。

确保采样和处理符合卫生与实验室安全规范，避免污染和误差。

2. 培养基准备准备适当的培养基，根据不同抗生素的需求进行调整。

确保培养基无污染，并能提供细菌正常生长所需的养分。

3. 培养微生物将样品接种到培养基中，通过孵育箱或恒温培养箱，为微生物提供适宜的温度和湿度条件，以促进细菌的生长。

4. 抗生素试纸片制备和测定按照厂家说明书的指导，制备不同抗生素的试纸片。

将试纸片分别放置在含有培养细菌的琼脂培养基平板上，并在指定时间内孵育。

5. 结果评价观察试纸片周围的抑菌圈直径，使用规定的标准参考表来解读结果。

根据抑菌圈直径的大小，判断细菌对抗生素的敏感性。

6. 数据分析和报告将结果数据记录下来，并根据标准参考表评估每个抗生素的灵敏度。

最后，通过报告的形式将灵敏度结果提供给临床医生或研究人员。

四、质量控制和安全措施1. 质量控制- 确保培养基质量良好，符合规定的配方和自凝性能要求。

- 重视实验室清洁和消毒，避免污染。

- 使用符合标准的试纸片，并按照说明书操作。

- 严格按照标准参考表评估结果。

2. 安全措施- 操作人员需佩戴个人防护装备，如手套和口罩，避免直接接触微生物和抗生素。

- 遵循实验室安全规范和卫生要求。

- 正确处置实验废物，避免环境和人员污染。

五、预期结果和讨论通过培养基灵敏度检查，可以获得各个抗生素对不同菌株的抑菌效果。

培养基灵敏度检查SOP1．目的规范无菌检查用培养基灵敏度检查，确保无菌试验用培养基的灵敏度，防止无菌试验结果出现假阳性现象。

2．范围本标准规程适用于本公司无菌检查用培养基的灵敏度检查，每批无菌试验用干粉培养基均做灵敏度检查。

3．定义3.1.菌种：检查所用菌株传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），以保证试验菌株的生物学特性。

3.2.金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)〔CMCC(B) 26003〕：用于无菌检查培养基灵敏度检查及微生物限度培养基的适用性检查；3.3.铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa) 〔CMCC(B) 10104〕：用于无菌检查培养基灵敏度检查；3.4.枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）〔CMCC（B）63501〕：用于无菌检查培养基灵敏度检查及微生物限度培养基的适用性检查；3.5.白色念珠菌(Candida albicans)〔CMCC(F) 98001〕：用于无菌检查培养基灵敏度检查及微生物限度培养基的适用性检查；3.6.生孢梭菌(Clostridium sporogenes)〔CMCC(B) 64941：用于无菌检查培养基灵敏度检查；3.7.黑曲霉(Aspergillus niger) 〔CMCC(F) 98003〕：用于无菌实验培养基灵敏度检查及微生物限度培养基的适用性检查；4．职责4.1.QC负责本规程的起草、修订、培训及执行；4.2.QA、QC组长质量管理部经理负责本规程的审核；4.3.质量总监负责批准本规程；4.4.QA负责本规程执行的监督。

5．引用标准《中华人民共和国药典》2020年版三部6．材料6.1.房屋、设备、试验用具6.1.1.房屋：阳性实验室。

6.1.2.设备：100级洁净工作台，30～35℃培养箱，20～25℃培养箱，灭菌器。

6.1.3.试验用具：隔离服、洁净工作服、工作鞋、口罩、帽子、10ml刻度吸管、1ml刻度吸管、毛巾、吸耳球、记号笔、中试管架、酒精灯、镊子、酒精棉、托盘、电子天平、药勺、量筒、6.2.培养基：营养琼脂斜面培养基（中管）、硫乙醇酸盐流体培养基（中管）、改良马丁琼脂斜面培养基（中管）。

1. 目的：通过培养基适用性检查，确保购买的培养基符合实验要求。

2. 范围：本规程适用于技术质量部实验员对培养基适用性的检查。

3. 职责：质量部实验员负责执行此规程。

4. 内容：4.1 检验依据：《中华人民共和国药典》2015版4.2 试验用具：烧杯、三角瓶、酒精灯、接种环、平皿、试管、吸管、移液枪、滴管、电子天平、电热恒温培养箱、生化培养箱或恒温恒湿培养箱、单人净化工作台、高压蒸汽灭菌器、微生物限度仪、漩涡混合器、试验菌种、检查用培养基等。

4.3 无菌培养基适用性检查：本检查可在供试品的无菌检查前或与供试品的无菌检查同时进行。

4.3.1 培养基：硫乙醇酸盐流体培养基、胰酪大豆胨液体培养基或胰酪大豆胨琼脂培养基（培养基的配制按《培养基配制操作规程》配制）。

4.3.2 稀释液、冲洗液及其制备方法稀释液、冲洗液配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。

a) 0.1%无菌蛋白胨水溶液取蛋白胨1.0g，加水1000ml，微温溶解，滤清，调节pH值至7.1±0.2，分装，灭菌。

b) pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液取磷酸二氢钾3.56g，无水磷酸氢二钠5.77g，氯化钠4.30g，蛋白胨1.00g，加水1000ml，微温溶解，滤清，分装，灭菌。

c) 根据供试品的特性，可选用其他经验证过的适宜的溶液作为稀释液、冲洗液（如0.9%无菌氯化钠溶液）。

如需要，可在上述稀释液或冲洗液的灭菌前或灭菌后加入表面活性剂或中和剂等。

4.3.3 无菌性检查：每批培养基随机取不少于5支（瓶），置各培养基规定的温度培养14天，应无菌生长。

4.3.4 灵敏度检查4.3.4.1 菌种培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的干燥菌种为第0 代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。

金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus ）〔CMCC（B）26 003〕铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa ）〔CMCC（B）10 104〕枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）〔CMCC（B）63 501〕生孢梭菌（Clostridium sporogenes）〔CMCC（B）64 941〕白色念珠菌（Candida albicans）〔CMCC（F）98 001〕黑曲霉（Aspergillus niger）〔CMCC（F）98 003〕4.3.4.2 菌液制备a) 接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30～35℃培养18～24小时；b) 接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20～25℃培养24～48小时，上述培养物用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu（菌落形成单位）的菌悬液。

纯化水需氧菌总数计数用培养基适用性检查验证方案纯化水需要氧菌总数计数，是用来检查水中的氧需求微生物的数量。

这项检测可以确认水样品的纯度和卫生质量，以确保水可以安全使用。

本文将介绍一种用于验证纯化水需氧菌总数计数用培养基的适用性的方法，包括准备培养基、验证培养基的选择以及验证培养基性能的实验方案。

1.准备培养基首先，需要选择适用于需氧菌的培养基。

通常使用含有可溶性碳源和其他适当营养物质的培养基。

常用的培养基有碳水化合物培养基、富含氨基酸的培养基等。

可以根据具体需求来选择合适的培养基。

2.培养基选择验证为了验证培养基的选择是否适用于需氧菌的计数，可以进行以下实验验证。

2.1.培养基对需氧菌的支持能力验证：将需氧菌接种在待验证的培养基上，并进行恒温（通常在30-37°C 之间）和恒氧（使用压力式培养器或其他适当方法）条件下的培养。

培养一段时间（通常为24-48小时），观察生长情况。

如果培养基能够支持需氧菌的生长并产生可见的生长，说明培养基是适合用于需氧菌计数的。

2.2.培养基对其他微生物的选择性验证：将其他非需氧菌或其他微生物接种在待验证的培养基上，并进行相同的培养条件下的培养。

观察生长情况，如果其他微生物能够在该培养基上生长，说明培养基存在选择性差异性，可能不适用于需氧菌计数。

3.验证培养基性能实验方案在验证培养基适用性之后，可以进行以下实验方案来验证培养基性能。

3.1.验证培养基的灵敏度：根据纯化水需氧菌总数预期浓度的范围，使用不同的稀释比例将水样接种在培养基上。

根据菌落形成情况和数量，可以确定培养基的灵敏度。

通常，预期浓度越高，菌落数量越多。

3.2.验证培养基的线性范围：在一定的时间内，使用不同浓度的需氧菌接种培养基，观察菌落数量和接种浓度的关系。

如果菌落数量和接种浓度呈线性关系，则说明培养基的线性范围较好。

3.3.验证培养基的重复性：使用相同浓度的需氧菌接种培养基的多个平行样品，进行培养。

生物培养基验证方案1. 验证目的：为证明硫乙醇酸盐流体培养基、改良马丁培养基适合于细菌，真菌的无菌检查，营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基的微生物限度检查。

特制定本验证方案。

2. 参照标准：2010版中国药典3. 验证项目：营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基的适用性检查。

硫乙醇酸盐流体培养基、改良马丁培养基灵敏度检查。

4. 验证小组5.试验材料：4.1. 被验证培养基：品名：硫乙醇酸盐流体培养基规格：批号：生产厂家：品名：改良马丁培养基规格：批号：生产厂家：品名：营养琼脂培养基规格：批号：生产厂家：品名：玫瑰红钠琼脂培养基规格：批号：生产厂家：4.2. 仪器设备：BSC-1000-Ⅱ-A2 生物安全柜YXQ.SG41.280 压力蒸汽灭菌器SW-CJ-1F 净化工作台HNZ-1-1F 净化工作台HN303-4 电热恒温培养箱250B 数显生化培养箱MJ-160B 霉菌培养箱4.3. 稀释剂：0.9%无菌氯化钠溶液5培养基的灵敏度检查1.菌种培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学特性。

大肠埃希菌(Escherichia coli)[CMCC(B) 44 102]大肠埃希菌(Escherichia coli)[CMCC(B) 44 102]金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus)［CMCC(B) 26 003］铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)［CMCC(B) 10 104］枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis )［CMCC(B) 63 501］生孢梭菌(Clostridium sporogenes)[CMCC(B) 64 941]白色念珠菌(Candida albicans)[CMCC(F) 98 001]黑曲霉(Aspergillus niger )[CMCC(F) 98 0032.菌液制备1）.金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌菌液的制备接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物至营养肉汤或营养琼脂培养基中，30～35℃培养18～24小时，上述培养物采用液体培养物直接稀释法或细菌标准浓度比浊法，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100 cfu（/50~100cfu）的菌悬液（一般稀释至10-7）。

微生物计数培养基适用性检查验证方案微生物计数是一种重要的质量控制方法，用于评估和监控产品或环境中微生物的数量。

微生物计数培养基适用性检查验证方案，是为了确认所使用的培养基是否适合特定的样品类型和目标微生物，并确保结果准确可靠。

本文将详细介绍微生物计数培养基适用性检查验证方案的内容和步骤。

一、背景和目的：在进行微生物计数之前，必须先选择合适的培养基。

不同的微生物对培养基的成分和条件有不同的要求，选择不当的培养基可能导致微生物无法生长或生长受限，从而影响计数结果的准确性。

因此，验证培养基的适用性是确保测试结果可靠的关键步骤。

二、验证方案步骤：1.确定实验目的和验证对象：明确要验证的培养基和目标微生物的种类和数量。

2.设计验证实验方案：选取一批合适的培养基和标准菌株进行验证实验。

可以选择常用的微生物计数培养基，如营养琼脂培养基和肉汤葡萄糖琼脂培养基。

3.校验培养基成分：检查所选培养基是否符合国家或行业标准的要求，包括pH值、含水量、蛋白质含量等。

4.检查培养基适宜性：将所选培养基分别接种种菌株，在适宜的培养条件下观察菌落的生长情况，并与预期结果进行比较。

5.验证培养基选择性：将所选培养基分别接种多种目标微生物和一种非目标微生物，观察是否能明确区分出目标微生物。

6.验证培养基的灵敏度：在适宜的培养条件下，使用一系列稀释液接种目标微生物，观察在各个浓度下生长的情况，确定培养基的最小检出浓度。

7.比对验证实验结果：将验证实验结果与已有的参考数据进行比较，评估培养基的适用性和准确性。

8.结果分析和报告编写：根据实验结果进行统计分析，并编写验证报告，包括验证实验的步骤、结果和结论等。

三、验证结果的解释和处理：验证实验结果可能出现以下情况：-培养基能够支持目标微生物的生长，并与预期结果一致，表明培养基适用性良好；-培养基不能支持目标微生物的生长，可能是培养基成分不合适或有特定成分的抑制作用。

此时，需要进行进一步检查和优化；-培养基能够分辨目标微生物和非目标微生物，表明培养基具有选择性；-培养基的灵敏度和检出限满足要求，表明培养基可以准确检测目标微生物的数量。

目的：建立培养基灵敏度检验标准操作规程，保证检查结果的准确性和可靠性。

应用范围：适用于培养基灵敏度的检查。

责任人：QC无菌检验员。

编订依据：《中国药典》2010年版二部、《中国药品检验标准操作规范》2010年版。

内容：1 细菌、霉菌及酵母菌计数用的培养基应进行培养基的灵敏度检查及适用性检查，成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应检查。

2 菌种试验所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学特性。

大肠埃希菌（Escherichia coli）[CMCC(B) 44 102]金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）[CMCC(B) 26 003]枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）[CMCC(B) 63 501]白色念珠菌（Candida albicans）[CMCC(F) 98 001]黑曲霉（Aspergillus niger）[CMCC(F) 98 003]3 菌液制备接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基或营养琼脂培养基上，接种生孢梭菌的新鲜培养物到硫乙醇酸盐流体培养基中，30～35℃培养18～24小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基或改良马丁琼脂培养基上，23～28℃培养24～48小时。

上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为100cfu的菌悬液。

接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，23～28℃培养5～7天，加入3～5ml含0.05％（ml/ml）聚山梨酯 80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。

然后，采用适宜方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05％（ml/ml）聚山梨酯 80的 0.9%无菌氯化钠溶液制成每 1ml含孢子数100cfu的孢子悬液。

菌液制备后若在室温下放置，应在 2小时内使用；若保存在2～8℃，可在 24小时内使用。

无菌培养基灵敏度验证××公司无菌检查用培养基适用性验证资料文件编号：YZ-GC -0041.验证目的：为证明硫乙醇酸盐流体培养基、营养肉汤、改良马丁培养基适合于细菌，真菌的无菌检查，特制定本验证方案。

2.参照标准：2005版中国药典二部附录XI H无菌检查法。

3.验证项目：硫乙醇酸盐流体培养基、营养肉汤、改良马丁培养基灵敏度检查。

4.验证小组4.试验材料：4.1. 被验证培养基：品名：硫乙醇酸盐流体培养基规格：批号：生产厂家：品名：营养肉汤培养基规格：批号：生产厂家：品名：改良马丁培养基规格：批号：生产厂家：4.2. 仪器设备：4.2.1. YM50立式压力蒸汽灭菌器4.2.2. SW-CJ-2F双人净化工作台4.2.3. JC101型电热鼓风干燥箱4.2.4.JY-B型生化培养箱(23～28℃)4.2.5.PHX-DHS-40x50恒温培养箱(35～37℃)4.3. 稀释剂：0.9%无菌氯化钠溶液4.4. 验证用培养基：4.5. 验证用菌株：5.菌液制备：5.1.取经培养18~24小时的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的营养肉汤新鲜培养物1ml加入到9ml 0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍稀释至小于100cfu∕ml的菌悬液备用。

5.2.取经培养24~48小时的白色念珠菌的改良马丁培养物1ml加入到9ml 0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍稀释至小于100cfu∕ml的菌悬液备用。

6.菌液计数：（每种菌液接种2个平皿）分别取上述制备的金黄色葡萄糖球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌各1ml加入培养皿，每种菌液平行做2皿，注入不超过45℃营养琼脂培养基15~20ml，置30～35℃培养箱培养二天，取上项制备的白色念珠菌菌液1ml加入培养皿，平行做2皿，注入不超过45℃的玫瑰红钠琼脂培养基约15~20ml，置23～28℃培养箱培养三天。

7.无菌培养基的无菌性检查7.1培养基的配制硫乙醇酸盐流体培养基的配制：取硫乙醇酸盐流体培养基29.25g，加1L蒸馏水，加热煮沸使其完全溶解，摇匀分装到试管中，每只试管装量12ml。

需厌氧菌无菌试验培养基灵敏度试验法
1 菌种
1.1 需氧菌
乙型溶血性链球菌（32210株），短芽胞杆菌（7316株）。

1.2厌氧菌
生孢子梭状芽胞杆菌（64941株）。

以上菌株均由中国药品生物制品检定所分发。

2 培养基
凡应用于无菌试验的培养基（增菌和试验用）都应进行灵敏度试验。

3 操作
3.1 不应在同一无菌操作室内同时操作2个菌株。

3.2 将菌种接种于适宜的培养基，经30～35℃培育一定时间（乙型溶血性链球菌和生孢子梭状芽胞杆菌培育24～48小时，短芽胞杆菌培育18～20小时）后，将乙型溶血性链球菌和短芽胞杆菌分别刮入灭菌的生理盐水内制成均匀菌液，生子孢梭状芽胞杆菌先将菌液吸入灭菌的试管内，再用灭菌生理盐水稀释适宜
浓度制成均匀菌液，再将菌液稀释至与标准比浊管相同之浓度。

然后用0.1%蛋白胨水作10倍系列稀释。

3.3 将10-6～10-8（短芽胞杆菌、生子孢梭状芽胞杆菌为
10-6～10-8，乙型溶血性链球菌为10-7～10-9）菌液各1ml分别接种到9ml（用于厌氧菌的培养基在试管中装置高度不得低于7cm）试验用培养基中，每个稀释度至少接种3管，并用未接种的培养基做对照，将接种乙型溶血性链球菌、生子孢梭状芽胞杆菌的培养基，置30～35℃培育3天，接种短芽胞杆菌的培养基培育5天，记录结果。

4 结果判定
以接种后培养基管数的2/3以上呈现生长的最高稀释度为
该培养基的灵敏度，3次试验中，以2次达到的最高灵敏度为判定标准。