生物技术免疫学技术.pptx

和分布情况.阳性细胞以拟标记的细胞为前提,
阳性表达必须在细胞特定的抗原部位,若不在
抗原所在部位的阳性表达和非目标细胞即使
阳性也不应作为判断依据.根据抗原在细胞中
分布和阳性颗粒沉淀部位可分5种类型：
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⑴ 胞膜型 阳性颗粒主要分布于细胞膜表 面,形成一薄层棕黄色颗粒包绕整个细胞.此类 型常见于某些膜抗原,如上皮膜抗原（EMA） 、白细胞共同抗原（LCA）及B细胞、T细胞 、粒细胞相关抗原（GAA）
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ELISA试验用耗材、试剂及仪器
耗材:移液器、吸头、酶标板、滤纸 试剂:酶标抗体、抗体稀释液、封闭液、底物
溶液、终止液 仪器:酶标仪
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ELISA结果分析
1.根据标准品的含量及检测OD值结果,应用线
性回归方程进行统计分析,可求得待测样品
的定量值
2.上机前将标准品的数量及含量按要求在酶
标仪上进 行设置,机器自动计算打印出标准
c.加入可能含特异性抗原的待检液
d.温育后清洗
e.加入酶标记特异性抗体
f.温育后清洗
g.加入酶作用底物
h.测定颜色反应深浅
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竞争法
a、将已知抗体吸附于载体上 b、温育后清洗 c、加入可能含特异性抗原的待检
液和酶标记的已知抗原液 d、温育后清洗 e、加入酶作用底物 f、测定颜色反应深浅
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生物素-亲和素系统
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Ⅰ.ELISA Ⅱ.免疫组化 Ⅲ.荧光抗体标记 Ⅳ.荧光原位杂交（FISH） Ⅴ.分光光度法
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Ⅰ.酶联免疫吸附实验（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）

B淋巴细胞
B淋巴细胞是产生特异性抗体的细胞， 在体液免疫应答中发挥关键作用。
细胞因子与信号转导
细胞因子
细胞因子是由免疫细胞或其他类型细胞 分泌的调节因子，能够调节免疫细胞的 活化和分化，以及参与炎症反应和组织 修复。
VS
信号转导
信号转导是指免疫细胞通过特定的信号转 导通路将外部刺激转化为内部反应，从而 调控细胞的生长、分化、迁移和功能。
03
免疫细胞
非特异性免疫细胞
巨噬细胞
作为非特异性免疫细胞的主要代表，巨噬细胞在体内起着“ 清道夫”的作用，能够吞噬和清除入侵的病原体、细胞碎片 以及衰老的细胞。
自然杀伤细胞（NK细胞）
NK细胞是机体天然免疫的重要承担者，能够直接杀伤某些肿 瘤细胞或被病毒感染的细胞。
特异性免疫细胞
T淋巴细胞
T淋巴细胞是特异性免疫应答中的核 心细胞，根据其功能和分化阶段可分 为辅助性T细胞、细胞毒T细胞和调节 性T细胞等。
免疫药物的应用
针对肿瘤、感染性疾病和自身免疫性疾病等疾病，免疫 药物在临床治疗中广泛应用，并取得了良好的疗效。
免疫疗法的前景与挑战
ห้องสมุดไป่ตู้免疫疗法的前景
随着免疫学研究的深入和技术的进步，免疫疗法将会有更多的突破和创新，为人 类健康带来更多福祉。
免疫疗法的挑战
免疫疗法的应用仍面临许多挑战，如个体差异、耐药性问题等，需要进一步研究 和探索解决的方法。
免疫系统的组成
总结词
免疫系统由免疫器官、免疫细胞和免疫分子三部分组成。
详细描述
免疫器官包括骨髓、胸腺、淋巴结、脾脏等，是免疫细胞产生、发育、分化和定居的场所。免疫细胞包括淋巴细 胞、巨噬细胞、树突状细胞等，它们在体内不断循环，发挥不同的免疫功能。免疫分子包括抗体、补体、细胞因 子等，它们在体内发挥信号传递、杀菌、调理吞噬等作用。

• 测量时，抗原（抗体）先结合在固相载体上，但仍 保留其免疫活性，
• 然后加一种抗体（抗原）与酶结合成的偶联物（ 标记物），此偶联物仍保留其原免疫活性与酶活 性，
• 当偶联物与固相载体上的抗原（抗体）反应
结合后，再加上酶 的相应底物，即起 催化水解或氧化还 原反应而呈颜色。
➢ 颜色反应的深浅与相应的抗体或抗原量成正比 ，因此可借助于颜色反应的深浅来定量抗体或 抗原。
ELISA
ELISA的基本原理和方法
ELISA的种类和变化
ELISA的特点
ELISA的应用实例
4.2.1 基本原理
它采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接，然 后通过酶与底物产生颜色反应，用于定量测定。测定 的对象可以是抗体也可以是抗原。
在这种测定方法中有3种必要的试剂： ①固相的抗原或抗体（免疫吸附剂） ②酶标记的抗原或抗体（标记物） ③酶作用的底物（显色剂）
其优点是灵敏度高、特异性强、精确性好、样品用量 少，而且不需要复杂的提纯步骤。缺点是需要特殊的 仪器设备和一定的防护条件，而且有些同位素标记物 的半衰期较短以及试验废物难以处理，对环境造成放 射性污染。
放射免疫测定法
基本原理
放射免疫测定是建立在待测抗原和标记抗原对有 限量抗体进行竞争性结合的基础上。待测抗原是 指人体内某种微量活性物质（如微生物＆寄生虫 抗原、激素、维生素、酶、药物等），而标记抗 原使将已知的上述物质标记上放射性同位素，具 有示踪作用。
（三）竞争法
此法可用于检测小分子抗原。
步骤：
A 将已知抗体吸附于固相载体表面，温育后清洗；
B 将可能含抗原的待检溶液和酶标记的已知抗原溶液以适当 比例混合，加入已包被的载体孔中，温育后清洗；
C 加入酶作用的底物，产生显色反应。色深表示结合的酶标记抗 原多，而待检溶液中未标记的抗原量少；反之，色浅表示结 合的酶标记抗原少，而待检溶液中抗原量多。

原或半抗原物资，如激素、药物等。
敏感性很高，应用广泛。
放射免疫检测法（RIA）
灵敏度达pg/ml水平。常用于微量物质测定，如胰岛 素、生长激素、甲状腺素、孕酮等激素、吗啡、地高辛 等药物以及IgE等。
竞争法
（4）免疫印迹法－Western blotting 病毒
裂 解
固相载体
浸于
待检血清
洗 涤
大小不同的蛋白
常用于微量物质测定如胰岛素生长激素甲状腺素孕酮等激素吗啡地高辛素生长激素甲状腺素孕酮等激素吗啡地高辛等药物以及等药物以及igeige等
免疫学检测及相关 实验技术
免疫细胞的检测 免疫分子的检测
免疫相关基因检测
免疫学检测常用标记技术
免疫细胞的检测
免疫细胞的分离与纯化—如PBMC的分离
白膜层
葡聚糖-泛影葡胺密度梯度离心法
免疫标记技术
利用荧光素、酶、放射性同位素等标记抗体或抗 原进行的抗原抗体反应。 三大标记技术：免疫荧光法 、酶免疫测定法、放 射免疫测定法 其次：化学发光免疫分析法、免疫金标记技术
Western blotting、免疫PCR法
（1）免疫荧光法
原理：用荧光素标记抗体进行的抗原抗体
反应。 二抗：抗异种免疫球蛋白抗体，如鼠抗兔
一种细胞分选或分析技术。以荧光素标 记抗体结合相应细胞，用激光束激发单 行流动的细胞，根据细胞所携带荧光 (强度或类别)进行分选或分析。
凋亡检测
磁珠分离法
淋巴细胞及其亚群检测
T、B细胞检测：通过检测T细胞表面CD分子，以及B细 胞膜的SmIg 了解外周血T、B细胞数量和亚群的变化。
正常值：CD3+：60～80%；CD4+：55～60%；