实验常用试剂、缓冲液的配制方法
1、1M Tris-HCl□组份浓度1 M Tris-HCl
（pH7.4，7.6，8.0）□配制量1L
□配置方法1. 称量121.1gTris置于1L烧杯中。
2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。
pH值浓HCl
7.4 约70mL
7.6 约60mL
8.0 约42mL
4. 将溶解定容至1L。
5. 高温高压灭菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH 值随温度的变化差很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
2、1.5 M Tris-HCl□组份浓度1.5 M Tris-HCl
（pH8.8）□配制量1L
□配置方法1.称取181.7gTris置于1L烧杯中。
2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 用浓盐酸调pH值至8.8。
4. 将溶液定容至1L。
5. 高温高压灭菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
3、10×TE Buffer□组份浓度100 mM Tris-HCl，10 mM EDTA （pH 7.4，7.6，8.0）□配制量1L
□配置方法1. 量取下列溶液，置于1L烧杯中。
1 M Tris-HCl Buffer（pH7.4，7.6，8.0）100mL
500 mM EDTA（pH8.0）20mL
2. 向烧杯中加入约800mL的去离子水，均匀混合。
3. 将溶液定至1L后，高温高压灭菌。
4. 室温保存。
4、3 M 醋酸钠□组份浓度3 M 醋酸钠
（pH5.2）□配制量100mL
□配置方法1. 称取40.8gNaOAc?3H2O置于100～200mL烧杯中，加入约40mL的去离子水搅拌溶解。
2. 加入冰乙酸调节pH值至5.2。
3. 加入去离子水将溶液定容至100mL。
4. 高温高压灭菌后，室温保存。
5、PBS Buffer□组份浓度137 mM NaCl，2.7mM KCl，10 mM Na2HPO4，2 mM KH2PO4
□配制量1L
□配置方法1. 称量下列试剂，置于1L烧杯中。
NaCl 8 g
KCl 0.2g
Na2HPO4 1.42 g
KH2PO4 0.27g
2. 向烧杯中加入约800 mL的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 滴加HCl将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1L。
4. 高温高压灭菌后，室温保存。
注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。
6、10 M醋酸铵□组份浓度10 M醋酸铵
□配制量100mL
□配置方法1. 称量77.1g醋酸铵置于100～200 mL烧杯中，加入约30 mL的去离子水搅拌溶解。
2.加去离子水将溶液定容至100mL。
3.使用0.22μm滤膜过滤除菌。
4.密封瓶口于室温保存。
注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。
7、Tris- HCl平衡苯酚□配置方法
1. 使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。因此，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。
2. 操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。所有操作均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。
3. 苯酚平衡：因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下：
①液化苯酚应贮存于-20℃，此时的苯酚呈现结晶状态。从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温，然后在68℃水浴中使苯酚充分溶解。
②加入羟基喹啉（8-Quinolinol）至终浓度0.1％。该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄色。有助于方便识别有机相。
③加入等体积的1M Tris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。
④重复操作步骤③。
⑤加入等体积的0.1M Tris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。
⑥重复操作步骤⑤，稍微残留部分上层水相。
⑦使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。
⑧将苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。
8、苯酚/氯仿/异戊醇□配置方法
1. 说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯/酚/氯仿/异戊醇（25：24：1）。氯仿可使蛋白（25 ：24 ：1）质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。
2. 配置方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24：1）均匀混合后，移入棕色玻璃瓶中4℃保存。
9、10％（W/V）SDS□组份浓度10％（W/V）SDS
□配制量100mL
□配置方法1.称量10g高纯度的SDS置于100～200mL烧杯中，加入约80mL的去离子水，68℃加热溶解。
2. 滴加数滴浓盐酸调节pH值至7.2。
3. 将溶液定容至100mL后，室温保存。
10、2 N NaOH□组份浓度2N NaOH
□配制量100mL
□配置方法
1.量取80mL去离子水置于100～200mL塑料烧杯中（NaOH 溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂）。
2. 称取8g NaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。
3. 待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至100mL。
4. 将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。
11、2.5 N HCl□组份浓度2.5 N HCl
□配制量100mL
□配置方法1. 在78.4mL的去离子水中加入21.6mL的浓盐酸（11.6N），均匀混合。
2. 室温保存。
12、5 M NaCl □组份浓度5 M NaCl
□配制量1L
□配置方法1. 称取292.2g NaCl置于1L烧杯中，加入约800mL 的去离子水后搅拌溶解。
2. 加去离子水将溶液定容至1L后，适量分成小份。
3. 高温高压灭菌后，4℃保存。
13、20％（W/V）Glucose □组份浓度20％（W/V）Glucose
□配制量100mL
□配置方法1. 称取20g Glucose置于100～200mL烧杯中，加入约80mL的去离子水后，搅拌溶解。
2. 加去离子水将溶液定容至100mL。
3. 高温高压灭菌后，4℃保存。
14、Solution I □组份浓度25 mM Tris-HCl（pH8.0），10mM EDTA，50mM Glucose
（质粒提取用）□配制量1L
□配置方法1. 量取下列溶液，置于1L烧杯中。
1M Tris-HCl（pH8.0）25mL
0.5 M EDTA（pH8.0） 20mL
20％Glucose（1.11M） 45mL
dH2O 910mL
2. 高温高压灭菌后，4℃保存。
3. 使用前每50 mL的Soliution I中加入2mL的RNase A（20mg/mL）。
15、Solution II□组份浓度250mM NaOH，1％（W/V）SDS （质粒提取用）□配制量500mL
□配置方法1. 量取下列溶液置于500mL烧杯中。
10％SDS 50mL
2N NaOH 50mL
2. 加灭菌水定容至500mL，充分混匀。
3. 室温保存。此溶液保存时间最好不要超过一个月。
注意：SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌。16、Solution III□组份浓度3M KOAc，5M CH3COOH
（质粒提取用）□配制量500mL
□配置方法1. 量取下列溶液置于500mL烧杯中。
KOAc 147g
CH3COOH 57.5mL
2. 加入300mL去离子水后搅拌溶解。
3. 加去离子水将溶液定容至500mL。
4. 高温高压灭菌后，4℃保存。
17、0.5M EDTA□组份浓度0.5 M EDTA
(pH8.0) □配制量1L
□配置方法1. 称取186.1g Na2EDTA?2H2O，置于1L烧杯中。
2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌。
3. 用NaOH调节pH值值8.0（约20g NaOH）。
注意：pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。
4. 加去离子水将溶液定容至1L。
5. 适量分成小份后，高温高压灭菌。
6. 室温保存。
18、1 M DTT□组份浓度1 M DTT
□配制量20mL
□配置方法1. 称取3.09g DTT，加入到50mL塑料离心管内。
2. 加20mL的0.01 M 的NaOAc（pH5.2），溶解后使用0.22μm滤器过滤除菌。
3. 适量分成小份后，-20℃保存。
19、10mM ATP□组份浓度10mM ATP
□配制量20mL
□配置方法1. 称取121mg Na2ATP?3H2O，加入到50mL塑料离心管内。
2. 加20mL的25mM Tris-HCl（pH8.0），搅拌溶解。
3. 适量分成小份，-20℃保存。
分子生物学实验常用培养基的配制方法
1、Ampicillin□组份浓度100mg/ml Ampicillin
（100mg/ml）□配制量50mL
□配置方法1. 称量5g Ampicillin置于50mL离心管中。
2. 加入40mL灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。
3. 用0.22μm滤膜过滤除菌。
4. 小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。
2、IPTG □组份浓度24mg/mL IPTG
（24mg/mL）□配制量50mL
配置方法1. 称量1.2g IPTG置于50mL离心管中。
2. 加入40mL灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。
3. 用0.22μm滤膜过滤除菌。
4. 小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。
3、X- Gal□组份浓度20mg/mL X- Gal
（20mg/mL）□配制量50mL
□配置方法1. 称取1g X-Gal置于50mL离心管中。
2. 加入40mL DMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解后，定容至50mL。
3. 小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。
4、LB培养基□组份浓度1％（W/V）Tryptone，0.5％（W/V）
Yeast Extract，1％（W/V）NaCl
□配制量1L
□配置方法1. 称量下列试剂，置于1L烧杯中
Tryptone 10g
Yeast Extract 5g
NaCl 10g
2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 滴加5N NaOH（约0.2mL），调节pH值至7.0。
4. 高温高压灭菌后，4℃保存。
5、LB/Amp培养基□组份浓度 1％（W/V） Tryptone
0.5％（W/V）Yeast Extract
1％（W/V）NaCl
0.1mg/mL Ampicillin
□配制量1L
□配置方法1. 称量下列试剂，置于1L烧杯中
Tryptone 10g
Yeast Extract 5g
NaCl 10g
2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 滴加5N NaOH（约0.2mL），调节pH值至7.0。
4. 加去离子水将培养基定容至1L。
5. 高温高压灭菌后，冷却至室温。
6. 加入1mL Ampicillin（100mg/mL）后均匀混合。
7. 4℃保存。
6、TB培养基□组份浓度 1.2％（W/V）Tryptone
2.4％（W/V）Yeast Extract
0.4％（V/V） Glycerol
17mM KH2PO4
72mM K2HPO4
□配制量1L
□配置方法1. 配制磷酸盐缓冲液（0.17M KH2PO4，0.72M
K2HPO4）100mL。
2.称取下列试剂，置于1L烧杯中。
Tryptone 12g
Yeast Extract 24g
Glycerol 4mL
3. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
4. 加去离子水将培养基定容至1L后，高温高压灭菌。
5. 待溶液冷却至60℃以下时，加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液。
6. 4℃保存。
7、TB/Apm培养基□组份浓度1.2％（W/V） Tryptone
2.4％（W/V）Yeast Extract
0.4％（V/V） Glycerol
17mM KH2PO4
72mM K2HPO4
0.1mg/mL Ampicillin
□配制量1L
□配置方法1. 配制磷酸盐缓冲液（0.17M KH2PO4，0.72M K2HPO4）100mL。溶解2.31g KH2PO4和2.54g K2HPO4于90mL的去离子水中，搅拌溶解后，加去离子水定容至100mL，高温高压灭菌。
2. 称取下列试剂，置于1L烧杯中。
Tryptone 12g
Yeast Extract 24g
Glycerol 4mL
3. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
4. 加去离子水将培养基定容至1L后，高温高压灭菌。
5. 待溶液冷却至60℃以下时，加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液和1mL Ampicillin（100mg/mL）。
6. 均匀混合后4℃保存。
8、SOB培养基□组份浓度2％（W/V）Tryptone
0.5％（W/V） Yeast Extract
0.05％（W /V）NaCl
2.5mM KCl
10mM MgCl2
□配制量1L
□配置方法
1. 配制250mM KCl溶液。在90mL的去离子水中溶解1.86g KCl 后，定容至100mL。
2. 配制2M MgCl2溶液。在90mL的去离子水中溶解19g MgCl2后，定容至100mL，高温高压灭菌。
3. 称取下列试剂，置于1L烧杯中。
Tryptone 20g
Yeast Extract 5g
NaCl 0.5g
4. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
5 量取10mL 250 mM KCl溶液，加入到烧杯中。
6. 滴加5N NaOH溶液（约0.2mL），调节pH值至
7.0。
7. 加入去离子水将培养基定容至1L。
8. 高温高压灭菌后，4℃保存。
9. 使用前加入5mL灭菌的2M MgCl2溶液。
9、SOC培养基□组份浓度 2％（W/V） Tryptone
0.5％（W/V） Yeast Extract
0.05％（W /V） NaCl
2.5mM KCl
10mM MgCl2
20mM 葡萄糖
□配制量100mL
□配置方法
1. 配制1M葡萄糖溶液。将18g葡萄糖溶于90mL去离子水中，充分溶解后定容至100mL，用0.22μm滤膜过滤除菌。
2. 向100mL SOB培养基中加入除菌的1M葡萄糖溶液2mL，均匀混合。
3. 4℃保存。
10、2×YT培养基□组份浓度1.6％（W/V）Tryptone，1％（W/V）Yeast Extract，0.5％（W/V）NaCl
□配制量1L
□配置方法1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。
Tryptone 16g
Yeast Extract 10g
NaCl 5g
2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 滴加1N KOH，调节pH值至7.0。
4. .加水离子水将培养基定容至1L。
5. 高温高压后，4℃保存。
11、Φb×broth培养基□组份浓度2％（W/V）Tryptone，0.5％（W/V）Yeast Extract，0.5％（W/V）MgSO4?7H2O
□配制量1L
□配置方法1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。
Tryptone 20g
Yeast Extract 5g
MgSO4?7H2O 5g
2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 滴加1N KOH，调节pH值至7.5。
4. .加水离子水将培养基定容至1L。
5. 高温高压后，4℃保存。
12、NZCYM培养基□组份浓度0.5％（W/V）Yeast Extract
0.1％（W/V） Casamino Acid
1％（W /V）NZ胺
0.5％（W /V）NaCl
0.2％（W /V）MgSO4?7H2O
□配制量1L
□配置方法1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。
Yeast Extract 5g
Casamino Acid 1g
NZ胺10g
NaCl 5g
MgSO4?7H2O 2g
2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 滴加5N NaOH溶液（约0.2mL），调节pH值至7.0。
4. .加水离子水将培养基定容至1L。
5. 高温高压后，4℃保存。
13、NZYM培养基□组份浓度0.5％（W/V）Yeast Extract
1％（W /V）NZ胺
0.5％（W /V） NaCl
0.2％（W /V）MgSO4?7H2O □配置方法NZYM培养基除不含Casamino Acid（酪蛋白氨基酸）外，其他成份与NZCYM培养基相同。
14、NZM培养基□组份浓度1％（W /V） NZ胺
0.5％（W /V） NaCl
0.2％（W /V）MgSO4?7H2O □配置方法NZM培养基除不含Yeast Extract（酵母提取物）外，其他成份与NZYM培养基相同。
15、一般固体培养基的□配置方法1. 按照液体培养基配方准备好液体培养基，在高温高压灭菌前，加入下列试剂中的一种。
配制 Agar（琼脂：铺制平板用） 15g/L
Agar（琼脂：配制顶层琼脂用） 7g/L
Agarose（琼脂糖：铺制平板用） 15 g/L Agarose（琼脂糖：配制顶层琼脂用）7g/L
2. 高温高压灭菌后，带上手套取出培养基，摇动容器使琼脂或琼脂糖充分混匀（此时培养基温度很高，小心烫伤）。
3. 待培养基冷却至50～60℃时，加入热不稳定物质（如抗生素），摇动容器充分混匀。
4. .铺制平板（30～35mL培养基/90mm培养皿）。
16、LB/Amp/X-Gal/IPTG□组份浓度 1％（W
/V）Tryptone
平板培养基 0.5％（W/V）Yeast Extract
1％（W/V）NaCl
0.1mg/mL Ampicillin
0.5％（W /V） IPTG
0.04mg/mL X-Gal
1.5％（W /V） Agar
□配制量1L
□配置方法1. 称取下列试剂，置于1L烧杯中。
Tryptone 10g
Yeast Extract 5g
NaCl 10g
2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 滴加5N NaOH溶液（约0.2mL），调节pH值至7.0。
4. 加水离子水将培养基定容至1L后，加入15gAgar。
5. 高温高压灭菌后，冷却至60℃左右。
6. 加入1mL Ampicillin（100mg/mL）、1mL IPTG
（24mg/mL）、2mL X-Gal（20mg/mL）后均匀混合。
7. 铺制平板（30～35mL培养基/90mm培养基）。
8. 4℃保存平板。
17、TB/Amp/X-Gal/IPTG□组份浓度
1.2％（W /V） Tryptone
平板培养基 2.4％（W/V）Yeast Extract
0.4％（W/V）Glycerol
17mM KH2PO4
72mM K2HPO4
0.1mg/mL Ampicillin
0.024mg/mL IPTG
0.04mg/mL X-Gal
1.5％（W /V） Agar
□配制量1L
□配置方法1.配制磷酸盐缓冲液（0.17M KH2PO4，0.72M
K2HPO4）100mL。
2. 称取下列试剂，置于1L烧杯中。
Tryptone 12g
Yeast Extract 24g
Glycerol 4mL
3. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
4. 加水离子水将培养基定容至1L后，加入15gAgar。
5. 高温高压灭菌后，冷却至60℃左右。
6. 加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液、1mL Ampicillin（100mg/mL）、1mL IPTG（24mg/mL）、2mL X-Gal （20mg/mL）后均匀混合。
7. 铺制平板（30～35mL培养基/90mm培养基）。
8. 4℃保存平板。
生物化学实验常用试剂的配制方法
1、0.5mol/L氢氧化钠溶液□组份浓度0.5mol/L
□配制量2L
□配置方法1.准确称取氢氧化钠40g。
2.用去离子水溶解并稀释至2L。
2、0.5mol/L盐酸溶液□组份浓度0.5mol/L
□配制量2L
□配置方法1.准确量取盐酸83.4mL。
2.用去离子水稀释至2L。
4、0.2％葡萄糖标准溶液□组份浓度0.2％
□配制量1L
□配置方法1.称取葡萄糖2.5g置于称量瓶中，在70℃干燥2小时。
2.干燥器中冷却至室温，重复干燥，冷却至恒重。
3.准确称取葡萄糖2.000g。
4.用去离子水溶解并定容至1L
5.于4℃保存。
5、250μg/mL牛血清□组份浓度250μg/mL
白蛋白标准液□配制量2L
□配置方法1.准确称取250mg标准牛血清白蛋白。
2.用0.03mol/LpH7.8的磷酸缓冲液溶解并定容至1L。
3.4℃保存。
6、Folin试剂甲
□配置方法1.称取10g氢氧化钠溶于400mL去离子水中，
加入50g无水碳酸钠，溶解，待用。
2.称取0.5g酒石酸钾钠，溶于80mL去离子水中，
加入0.25g硫酸铜?5水，溶解。
3.将1：2：去离子水按20：4：1的比例混合即可。
4. 4℃保存，可用一周。
7、Folin试剂乙
□配置方法
1.在500mL的磨口回流装置内加入钨酸钠?2水25.0359g，
钼酸钠?2水6.2526g，去离子水175mL，85％磷酸12.5mL，
浓盐酸25mL，充分混合。
2.回流10小时，再加硫酸锂37.5g，去离子水12.5mL及数滴溴。
3.然后开口沸腾15min，以驱除过量的溴，冷却后定容到250mL。
4.于棕色瓶中保存，可使用多年
注意：上述制备地Folin试剂乙地贮备液浓度一般在2mol/L左右，几种操作方案都是把Folin试剂乙稀释至1mol/L的浓度作为应用液，我们这时是把贮备液于使用前稀释18 倍，使之浓度为0.1mol/L 略高。这种稀释18倍后的Folin 试剂乙就是上文称之为的“应用液”。Folin试剂乙贮备液浓度的标定，一般是以酚酞为指示剂。用Folin试剂乙去滴定1mol/L左右的标准氢氧化钠溶液，当溶液颜色由红变为紫灰，再突然变成墨绿即为终点，如果用氢氧化钠去滴定Folin试剂乙，终点不太好掌握，溶液地颜色是由浅黄变为浅绿，再变为灰紫色为终点。
8、DNS试剂
□配置方法1.取3，5-二硝基水杨酸10g,加入2mol/L氢氧化钠溶液200mL。（3，5-二硝基水杨酸试剂）2.将3，5-二硝基水杨酸溶解，然后加入酒石酸钾钠300g。
3. 待其完全溶解，用去离子水稀释至2000mL，棕色瓶保存。
9、5％蔗糖溶液□组份浓度5％
□配制量1L
□配置方法称取蔗糖50g，用去离子水溶解定容至1L。10、0.1mol/L蔗糖溶液□组份浓度0.1mol/L
□配制量1L
□配置方法称取蔗糖34.230g，用去离子水溶解并定容至1L。
11、20％乙酸溶液□组份浓度20％
□配制量1.2L
□配置方法量取冰乙酸300mL，用去离子水稀释至1200mL。
12、30％（W/V）Acrylamide
□组份浓度30％（W/V）Acrylamide 0.05％
□配制量1L
□配置方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中
Acrylamide 290g
BIS 10g
2.向烧杯中加入约600mL的去离子水，充分搅拌溶解
3.加入去离子水将溶液定容至1L，用0.45μm滤膜滤去杂质。
4.于棕色瓶中4℃保存。
注意：丙稀铣胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收，其作用有积累性，配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无
毒，但也应谨慎操作，因为有可能含有少量的未聚合成份。
13、40％（W/V）Acrylamide
□组份浓度40％（W/V）Acrylamide 0.05％
□配制量1L
□配置方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中
Acrylamide 380g
BIS 20g
2.向烧杯中加入约600mL的去离子水，充分搅拌溶解
3.加入去离子水将溶液定容至1L，用0.45μm滤膜滤去杂质。
4.于棕色瓶中4℃保存。
注意：丙稀铣胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收，其作用有积累性，配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为有可能含有少量的未聚合成份。
14、10％（W/V）过硫酸铵
□组份浓度10％（W/V）过硫酸铵
□配制量10mL
□配置方法1.称取1g过硫酸铵。
2.加入10mL的去离子水后搅拌溶解。
3.贮存于4℃。
注意：10％过硫酸胺溶液在4℃保存时间可使用2周左右，超过期限会失去催化作用。
15、考马斯亮蓝R-250染色液
□组份浓度0.1％（W/V）考马斯亮蓝R-250，25%（V/V）异丙醇，
10％（V/V）冰醋酸
□配制量 1L
□配置方法1.称取1g考马斯亮蓝R-250,置于1L烧杯中。
2.量取250mL的异丙醇加入上述烧杯中，搅拌溶解。
3.加入100mL的冰乙醋酸，均匀搅拌。
4.加入650mL的去离子水，均匀搅拌。
5.用滤纸出去颗粒物质后，室温保存。
16、考马斯亮蓝染色脱色液
□组份浓度10％（V/V）醋酸，5％（V/V）乙醇
□配制量1L
□配置方法1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。
醋酸100mL
乙醇50mL
dH2O 850mL
2.充分混合后使用。
17、凝胶固定液
□组份浓度50％（V/V）甲醇，10％（V/V）醋酸
(SDS-PAGE银氨染色用) □配制量100L
□配置方法1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。
甲醇500mL
醋酸100mL
dH2O 400mL
2.均匀混合后室温保存。
18、凝胶处理液
□组份浓度50％（V/V）甲醇，10％（V/V）戊二醛
(SDS-PAGE银氨染色用) □配制量1L
□配置方法1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。
甲醇50mL
戊二醛10mL
dH2O 40mL
2. 均匀混合后室温保存。
19、凝胶染色液
□组份浓度0.4％（W/V）硝酸银，1％（V/V）浓氨水，(SDS-PAGE银氨染色用) 0.04％（W/V）氢氧化钠
□配制量100L
□配置方法1.量取下列试剂，加入100～200mL试剂瓶中。
20％硝酸银2mL
浓氨水1mL
4％氢氧化钠1mL
dH2O 96mL
2.均匀混合。该溶液应为无色透明状。如氨水浓度过低时溶液
会呈现混浊状，此时应补加浓氨水，直至透明。
3.本染色液应现用现配，不宜保存。
20、显影液
□组份浓度0.005％（V/V）柠檬酸，0.02％（V/V）甲醛
(SDS-PAGE银氨染色用) □配制量1L
□配置方法1.称取下列试剂，置于1L试剂瓶中。
柠檬酸50mg
甲醛0.2mL
2.加入1L去离子水后，摇动混合后溶解。
3.室温保存。
21、45％乙醇溶液□组份浓度45％
□配制量1L
□配置方法量取无水乙醇450mL，加入去离子水550mL，混匀。
22、5％的十二烷基硫酸钠溶液□组份浓度5％
（W/V）□配制量0.1L
配置方法:称取5.0g十二烷基硫酸钠,溶于100mL4％的乙醇溶液中。
23、三氯甲烷-异戊醇混合试剂
配置方法取500mL三氯甲烷试剂，加入21mL异戊醇试剂，混匀。
24、1.6％乙醛溶液□组份浓度1.6％
□配制量0.1L
□配置方法取47％乙醛3.4mL，用去离子水定容至100mL。25、二苯胺试剂
□配置方法1.称取二苯胺试剂0.8g，溶解于180mL冰乙酸中，
2.再加入8mL高氯酸混匀。
3. 临用前加入0.8mL 1.6％乙醛溶液。
注意：配制完成后试剂应为无色。
26、15％三氯乙酸溶液□组份浓度15％
□配制量2L
□配置方法称取三氯乙酸300g，用去离子水溶解定容至2000mL。
27、1％谷氨酸溶液□组份浓度1％
□配制量 0.5L
□配置方法1.称取5g谷氨酸，先用适量得用去离子水溶解。
2. 再用氢氧化钾溶液中和至中性。
3. 最后用去离子水定容至0.5L。
28、1％丙酮酸溶液□组份浓度1％
□配制量0.5L
□配置方法1.称取5g丙氨酸，先用适量得用去离子水溶解。
2. 再用氢氧化钾溶液中和至中性。
3. 最后用去离子水定容至0.5L。
29、0.1％的碳酸氢钾溶液□组份浓度0.1％
□配制量0.5L
□配置方法称取碳酸氢钾0.5g，用去离子水溶解定容至0.5L。
30、0.05％的碘乙酸溶液□组份浓度0.05％
□配制量0.25L
□配置方法称取0.125g碘乙酸，用去离子水溶解定容至0.25L。
31、Locke氏溶液□配制量2L
配置方法称取18g氯化钠,0.84g氯化钾, 48g氯化钙,0.3g碳酸氢钠，2g葡萄糖，用去离子水溶解定容至2000mL。32、0.2mol/L的丁酸溶液□组份浓度0.2mol/L
□配制量1L
□配置方法1.量取18mL正丁酸试剂。
2.用1mol/L的氢氧化钠中和。
3.再用去离子水定容至1L。
33、0.1mol/L的硫代硫酸钠溶液□组份浓度0.1mol/L
□配制量10L
□配置方法称248.17g硫代硫酸钠，用去离子水溶解并定至10L。
34、0.1mol/L的碘溶液□组份浓度0.1mol/L
□配制量1L
□配置方法1.称取碘12.7g和碘化钾25g。
2.用去离子水溶解并定容至1L。
3.用0.1mol/L的硫代硫酸钠标定。
35、10％氢氧化钠溶液□组份浓度10％
□配制量2L
□配置方法称取200g氢氧化钠，用去离子水溶解并定容至2L。
36、10％盐酸溶液□组份浓度10％
□配制量0.2L
□配置方法量取浓盐酸49.3mL，用去离子水定至0.2mL。37、0.1％标准丙氨酸溶液□组份浓度0.1％
□配制量0.5L
□配置方法称取丙氨酸0.5g，用去离子水溶解并定容至0.5mL。
38、0.1％标准谷氨酸溶液□组份浓度0.1％
□配制量0.5L
□配置方法称取谷氨酸0.5g，用去离子水溶解并定容至500mL。
39、0.1％水合茚三酮乙醇溶液□组份浓度0.1％
□配制量 1L
□配置方法称取1g水合茚三酮试剂，溶于1000mL无水乙醇中。
40、酚溶液
□配置方法在大烧杯中加入80mL去离子水，再加入300g 苯酚，在水浴中加热搅拌、混合至苯酚完全溶解。将该溶液倒入盛有200mL去离子水的1000mL分液漏斗内，轻轻振荡混合，使其成为乳状液。静止7～10小时，乳状液变成两层透明溶液，下层为被水饱和的酚溶液，放出下层，贮存于棕色瓶中备用。
41、0.5％淀粉溶液□组份浓度0.5％
□配制量 0.1L
□配置方法称取淀粉0.5g，用去离子水溶解定容至0.1L。42、对羟基联苯试剂
配置方法称取对羟基联苯1.5g，溶于100mL0.5％氢氧化钠溶液中，配制成1.5％的溶液。若对羟基联苯颜色较深，应用丙酮
或无水乙醇重结晶，放置时间较长后，会出项针状结晶，
应摇匀后使用。
生物化学实验常用缓冲液的配制方法
1、0.2 mol/L 磷酸缓冲液□组份浓度0.2mol/L
（pH 6.0）□配制量1L
□配置方法1. 称取磷酸氢二钠?12水8.82 g。
2. 称取磷酸二氢钠?2水27.34g。
3. 用去离子水溶解并定容至1L。室温保存。
注意：此为母液，使用时稀释40倍使用。
2、洗脱液□组份浓度0.15mol/L
（含0.15mol/L氯□配制量10L
化钠的0.005mol/L□配置方法1.称取氯化钠87.66g。
pH 6.0的磷酸缓冲液） 2. 用0.2mol/L pH6.0的
磷酸缓冲液250mL溶解。
3. 用去离子水稀释至10 L。室温保存。
3、0.3mol/L磷酸缓冲液□组份浓度0.3mol/L
（pH7.8）□配制量0.5L
□配置方法1.准确称取磷酸氢二钠?12水49.150g。
2.磷酸二氢钠?2水2.000g。
3. 用去离子水溶解并定容至0.5L。室温保存。
注意：此为母液，使用时稀释10倍使用。
4、0.2mol/L乙酸缓冲液□组份浓度0.2mol/L
（pH4.6）□配制量 2L
□配置方法1.准确称取乙酸钠?3水54.44g。
2. 加入23mL冰乙酸，溶解。
3. 用去离子水溶解并定容至2L。4℃保存。
5、0.2mol/L磷酸-柠檬酸□组份浓度0.2mol/L
缓冲液□配制量各1L
（pH 2.6、4.6、6.6）
□配置方法 1. 母液A（0.2mol/L的Na2HPO4溶液）：称取
Na2HPO4?12水143.256g，用去离子水定容至2L。
2. 母液B（0.1mol/L的柠檬酸溶液）：称取柠檬酸?1水42.028g 用去离子水溶解定容至2L。
3. pH2.6、
4.6、6.6的三种缓冲液如下表配制：
pH值A（mL）B（mL）
2.6 109.0 891.0
4.6 467.5 532.5
6.6 72
7.5 272.5
4. 按上表混匀后，4℃保存。
6、20×SSC 缓冲液□配制量 1L
（pH7.0）□配置方法1.准确称取175.2g氯化钠。
2.准确称取88.2g柠檬酸钠?2水。
3.溶解于800mL去离子水中。
4.加入数滴10mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至7.0。
5.加去离子水定容至1L。
注意：按实验需要可分装后高压灭菌。
10×SSC、5×SSC、1×SSC可由20×SSC做相应稀释得到。
7、0.15mol/L氯化钠-□组份浓度0.15mol/L
乙二胺四乙酸二钠□配制量1L
缓冲液□配置方法 1.准确称取氯化钠8.77g。
（pH8.0） 2. 称取乙二胺四乙酸二钠37.2g。
3. 溶于800mL去离子水中。
4.用固体的氢氧化钠调pH值为8.0。
5.加去离子水定容至1L。
8、1/15mol/L的磷酸盐□组份浓度0.15mol/L
缓冲液□配制量1L
（pH7.6）
□配置方法
1.溶液甲（1/15mol/L的KH2PO4溶液）：称取KH2PO4 9.078g，用去离子水溶解定容至1L。
2. 溶液乙(1/15mol/L的Na2HPO4溶液):称取Na2HPO4? 2水11.876g （或磷酸氢二钠?12水2
3.894g）用去离子水溶解定容至1L。
3.pH7.6磷酸盐缓冲液：将①和②按1.4：8.6比例混合即可。
9、5×Tris-GlycineBuffer□组份浓度0.125M Tris，1.25M Glycine，0.5％（w/v）SDS
（SDS-PAGE电泳缓冲液）□配制量 1L
□配置方法1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。
Tris 15.1g
Glycine 94g
SDS 5.0g
2.加入约800mL的去离子水，搅拌溶解。
3.加去离子水将溶液定容至1L后，室温保存。
10、5×SDS-PAGE□组份浓度250mM Tris-HCl（pH6.8）
Loading Buffer 10％（W/V）SDS
0.5％（W/V）BPB
50％（V/V）甘油
5％（W/V）β-巯基乙醇
□配制量5mL
□配置方法1.量取下列试剂，置于10mL塑料离心管中。
1M Tris-HCl 1.25mL
SDS 0.5g
BPB 25mg
甘油2.5mL
2.加入去离子水溶解后定容至5mL。
3.小份（500μl/份）分装后，于室温保存。
4.使用前将25μl的2-ME加到每小份中。
5.加入2-ME的Loading Buffer可在室温下保存一个月左右
生物化学实验常用柱料数据及性质
1、DEAE阴离子交换纤维素
（1）纤维素的处理
取纤维素干品用蒸馏水浸泡，充分溶涨并搅拌均匀，过夜。次日再搅匀，静止30min留下沉集部分（重复3次），
用真空泵抽干。然后用适量的0.5mol/L的氢氧化钠溶液浸
泡30min，抽干，蒸馏水洗至中性；再用适量的0.5mol/L
的盐酸溶液浸泡30min，抽干，蒸馏水洗至中性；重复用
0.5mol/L的氢氧化钠溶液浸泡30min，抽干，蒸馏水洗至
中性。最后用0.005mol/L pH6.0的磷酸缓冲液浸泡待用。
（2）纤维素的重生
回收的纤维素先用0.5mol/L氯化钠-0.5mol/L氢氧化钠溶液浸泡，再按上述（1）操作处理，即可再次投入使用。
（3）纤维素的保存
回收后，用0.5mol/L氢氧化钠溶液浸泡30min后，蒸馏水洗至中性，抽干，于鼓风干燥箱中60℃烘干后，保存。
2、SephadexG型葡聚糖凝胶
（1）凝胶的特性要点
葡聚糖G后面的数字代表不同的交联度，数值越大交联度越小，吸水量越大。其数值大致为吸水量X的10倍。Sephadex对
碱和弱酸稳定（在0.1mol/L盐酸中可以浸泡1～2小时）。
在中性时可以高压灭菌。不同型号中又有颗粒粗细之分。
颗粒粗的分离效果差，流速快。颗粒越细分离效果越好，
但流速也越慢。交联葡聚糖工作时的pH稳定在2～11的范
围内。葡聚糖G型凝胶分离的分子量分级范围为700～8×
105。SephadexG型葡聚糖凝胶的数据见下表
。
*本表数值取自Pharmacia Biotech Biodirectory 1996。**为2.6×30cm层析柱在25℃用蒸馏水测定之值。
D＝Darcy’s law
(2)凝胶的溶胀*
G系交联葡聚糖凝胶亲水性强，只能在水中溶胀（仅有少量的有机溶剂也可以使之溶胀），有机溶剂或含有有机溶剂较多的水溶液会改变其孔隙，使之收缩失去或降低凝胶的分离能力。在水中溶胀时如在室温则需要较长时间，才能达到充分溶胀的程度，但可煮沸到100℃，以缩短其溶胀时间。见下表
Sephadex G型葡聚糖凝胶溶胀所需时间
*溶胀时要将凝胶浸泡在过量的水或缓冲液中。在整个溶胀
过程中应避免剧烈地搅拌，尤其不能使用电磁搅拌，以免
破坏了它的颗粒结构，以及产生许多碎末而影响洗脱时的
流速。
（3）凝胶的回收与保存
凝胶的再生最好不要在柱上进行（有些凝胶可以在位清洗），可将凝胶在0.5mol/L氯化钠及0.5mol/L氢氧化
钠的混合溶液中浸泡；一般约需30分钟以上。然后用蒸馏
水洗至中性，最后用缓冲液平衡即可恢复使用。
经常使用的凝胶，一般加入一些抗菌剂放在普通冰箱中，即可保存较长的时间。如确切在相当长的时间里不准备使用时，则以保存干凝胶为好。处理时可先用较浓的氯化钠浸泡（如0.5mol/L）,在用0.5mol/L的氢氧化钠处理并用蒸馏水洗至中性，然后用递增百分比浓度的乙醇分多次作脱水处理。一般可从30％的乙醇开始；每次均应让凝胶在乙醇中多浸泡一些时间。在无水乙醇处理后，最后再用乙醚处理一次以加速乙醇的挥发。处理后的凝胶宜在80℃以下的温度烘干。在进行凝胶的回收时，如在每一步操作时，均使用布氏漏斗抽滤可大大地加快整个回收过程。
【注意】
a．凝胶在氢氧化钠溶液中浸泡的时间不要太长。
b．不要图快过早地使用百分浓度太大地乙醇，以免凝胶颗粒收缩太快，破坏了它地结构，因而影响了它地分离能力。
c．在乙醚未充分挥发完以前，切不可将含有多量乙醚地凝胶放入烘箱，以免发生危险。
d．溶胀了地凝胶不可放入低温冰箱中冻结，以免其球形结构被破坏。
微生物学实验常用培养基的配制
1、牛肉膏蛋白胨培养基（培养细菌用）
牛肉膏3g
蛋白胨5g
氯化钠 10g
琼脂15~20g
pH 7.0~7.2
水1000mL
121℃灭菌20min。
2、高氏（Gause）1号培养基（培养放线菌用）
可溶性淀粉20g
硝酸钾1g
氯化钠 0.5g
磷酸氢二钾0.5g
硫酸镁0.5g
硫酸亚铁 0.01g
琼脂20g
水1000mL
pH 7.2～7.4
配制时，先用少量冷水将淀粉调成糊状，倒入煮沸的水中，在火上加热，边搅拌边加入其他成分，溶化后，补足水分至1000mL。121℃灭菌20min。
3、查氏（Czapek）培养基（培养霉菌用）
硝酸钠2g
磷酸氢二钾1g
氯化钾0.5g
硫酸镁0.5g
硫酸亚铁0.01g
蔗糖30g
琼脂15~20g
水1000mL
pH 自然
121℃灭菌20min。
4、马丁氏（Martin）琼脂培养基（分离真菌用）
葡萄糖10g
蛋白胨5g
磷酸二氢钾1g
七水合硫酸镁0.5g
1/3000孟加拉红（rose
bengal，玫瑰红水溶液）
100mL
琼脂15—20g
pH 自然
蒸馏水800mL
112℃灭菌30min。
临用前加入0.03%链霉素稀释液100mL，使每毫升培养基中含链霉素30μg。
5、马铃薯培养基（简称PDA）（培养真菌用）
马铃薯200g
蔗糖（或葡萄糖）20g
琼脂15—20g
pH 自然
培养基的配制：马铃薯去皮，切成块煮沸30min，然后用纱布过滤，再加糖及琼脂，熔化后补足水至1000mL。121℃灭菌30min。
6、麦芽汁琼脂培养基
培养基的配制：
(1)、取大麦或小麦若干，用水洗净，浸水6—12小时，至15℃阴暗处发芽，上面盖纱布一块，每日早、中、晚淋水一次，麦根伸长至麦粒的两倍时，即停止发芽，摊开晒干或烘干，贮存备用。
(2)、将干麦芽磨碎，一份麦芽加四份水，在65℃水浴中糖化3—4小时，糖化程度可用碘滴定之。加水约20mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。
(3)、将糖化液用4—6层纱布过滤，滤液如混浊不清，可用鸡蛋白澄清，方法是将一个鸡蛋白加水约20mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。
(4)、将滤液稀释到5—6波美度，pH约6.4，加入2%琼脂即成。121℃灭菌30min。
7、无氮培养基（自生固氮菌、钾细菌）
甘露醇（或葡萄糖）10g
磷酸二氢钾0.2g
七水合硫酸镁0.2g
氯化钠0.2g
二水合硫酸钙0.2g
碳酸钙5g
蒸馏水1000mL
pH 7.0—7.2
113℃灭菌30min。
8、半固体肉膏蛋白胨培养基
肉膏蛋白胨液体培养基100mL
琼脂0.35—0.4g
pH 7.6
121℃灭菌20min。
9、合成培养基
偏磷酸铵1g
氯化钾0.2g
七水合硫酸镁0.2g
豆芽汁10mL
琼脂20g
蒸馏水1000mL
pH 7.0
加12 mL0.04%的溴钾酚紫（pH5.2—6.8，颜色由黄变紫，作指示剂）。121℃灭菌20min。
10、豆芽汁蔗糖（或葡萄糖）培养基
黄豆芽100g
蔗糖（或葡萄糖）50g
水1000mL
pH 自然
培养基的配制：称新鲜豆芽100g，放入烧杯中，加入水1000mL，煮沸约30min，用纱布过滤。用水补足原量，再加入蔗糖（或葡萄糖）50g，煮沸熔化。121℃灭菌20min 。
11、油脂培养基
蛋白胨10g
牛肉膏5g
氯化钠5g
香油或花生油10g
1.6%中性红水溶液1mL
琼脂15—20g
蒸馏水1000mL
pH 7.2
121℃灭菌20min
注：(1)、不能使用变质油。
(2)、油和琼脂及水先加热。
(3)、调好pH值后，再加入中性红。
(4)、分装时，需不断搅拌，使油均匀分布于培养基中。12、淀粉培养基
蛋白胨10g
牛肉膏5g
氯化钠5g
可溶性淀粉2g
蒸馏水1000mL
琼脂15—20g
121℃灭菌20min
13、明胶培养基
牛肉膏蛋白胨液100mL
明胶12—18g
pH 7.6
在水浴锅中将上述成分溶化，不断搅拌。溶化后调pH7.2—7.4。
121℃灭菌30min。
14、蛋白胨水培养基
蛋白胨10g
氯化钠5g
蒸馏水1000mL
pH 7.6
121℃灭菌20min。
15、糖发酵培养基
蛋白胨水培养基1000mL
1.6%溴钾酚紫乙醇溶液1—2mL
pH 7.6
另配制20%糖溶液（葡萄糖、乳糖、蔗糖等）各10mL。
培养基的配制：
(1)、将上述含指示剂的蛋白胨水培养基（pH7.6）分装于试管中，在每管内放一倒置的小玻璃管（Durham tube），使之充满培养液。
(2)、将已分装好的蛋白胨水和20%的各种糖溶液分别灭菌，蛋白胨水121℃灭菌20min；糖溶液112℃灭菌30min。
(3)、灭菌后，每管以无菌操作分别加入20%无菌糖溶液0.5 mL （按每10mL培养基中加入20%的糖液0.5mL，则成1%的浓度）。配制用的试管必须洗干净，避免结果混乱。
16、葡萄糖蛋白胨水培养基
蛋白胨5g
葡糖糖5g
磷酸氢二钾2g
蒸馏水1000mL
将上述各成分溶于1000mL水中，调pH7.0—7.2，过滤。分装试管，每管10mL，112℃灭菌30min。
17、麦氏（Meclary）琼脂（酵母菌）
葡萄糖1g
氯化钾 1.8g
酵母浸膏 2.5g
醋酸钠8.2g
琼脂15—20g
蒸馏水1000mL
113℃灭菌20min。
18、柠檬酸盐培养基
磷酸二氢铵1g
磷酸氢二钾1g
氯化钠5g
硫酸镁0.2g
柠檬酸钠2g
琼脂15—20g
蒸馏水1000 mL
1%溴麝香草酚蓝乙醇液10 mL
培养基的配制：将上述各成分加热溶解后，调pH6.8，然后加入指示剂，摇匀，用脱脂棉过滤。制成后为黄绿色，分装试管，121℃灭菌20min后制成斜面，注意配制时控制好pH，不要过碱，以黄绿色为准。
19、醋酸铅培养基
pH7.4的牛肉膏蛋白胨琼脂100 mL
硫代硫酸钠0.25g
10%醋酸铅水溶液 1 mL
培养基的配制：将牛肉膏蛋白胨琼脂100 mL加热溶解，待冷却至60℃时加入硫代硫酸钠0.25g，调至pH7.2，分装于三角瓶中，115℃灭菌15min。取出后待冷却至55—60℃，加入10%醋酸铅水溶液（无菌的）1mL，混匀后倒入灭菌试管或平板中。
20、血琼脂培养基
pH7.6的牛肉膏蛋白胨琼脂100 mL
脱纤维羊血（或兔血）10 mL
培养基的配制：将牛肉膏蛋白胨琼脂加热熔化，待冷却至50℃时，加入无菌脱纤维羊血（或兔血）摇匀后倒平板或制成斜面。37℃过夜检查无菌生长即可使用。
21、玉米粉蔗糖培养基
玉米粉60g
磷酸二氢钾3g
维生素B1100mg
蔗糖10g
七水合硫酸镁 1.5g
水1000 mL
121℃灭菌30min，维生素B1单独灭菌15min后另加。
22、酵母膏麦芽汁琼脂
麦芽粉3g
酵母浸膏0.1g
水1000 mL
121℃灭菌30min。
24、棉籽壳培养基培养基的配制：棉籽壳50%，石灰粉1%，过磷酸钙1%，水65%—70%，按比例称好料，充分搅拌均匀后装瓶，较薄地平摊盘上。
25、复红亚硫酸钠培养基（远藤氏培养基）
蛋白胨10g
乳糖10g
磷酸氢二钾 3.5g
琼脂20—30g
蒸馏水1000 mL
5%碱性复红乙醇溶液20 mL
培养基的配制：先将琼脂加入900 mL蒸馏水中，加热溶解，再加入磷酸氢二钾及蛋白胨，使溶解，补足蒸馏水至1000 mL，调pH至7.2—7.4。加入乳糖，混匀溶解后，115℃灭菌20min。称取亚硫酸钠置一无菌空试管中，加入无菌水少许使溶解，再在水浴中煮沸10min后。立刻滴加于20 mL 5%碱性复红乙醇溶液中，直至深红色褪成淡粉红色为止。将此亚硫酸钠与碱性复红的混合液全部加至上述已灭菌的并仍保持熔化状态的培养基中，充分混匀，倒平板，放冰箱中备用，贮存时间不宜超过2周。
26、伊红美蓝培养基（EMB培养基）
蛋白胨水培养基100 mL
20%乳糖溶液 2 mL
2%伊红水溶液 2 mL
0.5%美蓝水溶液 1 mL
培养基的配制：将已灭菌的蛋白胨水培养基（pH7.6）加热熔化，冷却至60℃左右时，再把已灭菌的乳糖溶液，伊红水溶液及美蓝水溶液按上述量以无菌操作加入。摇匀后，立即倒平板。乳糖在高温灭菌易被破坏必须严格控制灭菌温度，115℃灭菌20min。
27、乳糖蛋白胨培养液（“水的细菌学检查”用）
蛋白胨10g
牛肉膏3g
乳糖5g
氯化钠5g
1.6%溴甲酚紫乙醇溶液 1 mL
蒸馏水1000 mL
培养基的配制：将蛋白胨、牛肉膏、乳糖及氯化钠加热溶解于1000 mL蒸馏水中，调pH至7.2—7.4。加入1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1 mL，充分混匀，分装于有小倒管的试管中。115℃灭菌20min。
28、石蕊牛奶培养基
牛奶粉100g
石蕊0.075g
水1000 mL
pH 6.8
121℃灭菌15min。
29、LB（Luria-Bertani）培养基
蛋白胨10g
酵母膏5g
氯化钠10g
蒸馏水1000 mL
pH 7.0
121℃灭菌20min。
30、基本培养基
磷酸氢二钾10.5g
磷酸二氢钾 4.5
硫酸铵1g
二水合柠檬酸钠0.5g
蒸馏水1000 mL
121℃灭菌20min。
需要时灭菌后加入：
糖（20%）10 mL
维生素B1（硫胺素）（1%）0.5 mL
七水合硫酸镁（20%） 1 mL
链霉素（50mg/ mL）4 mL，终浓度200μg/ mL
氨基酸（10mg/ mL）4 mL，终浓度40μg/ mL
pH 自然（—7.0）
31、庖肉培养基
培养基的配制：
(1)、取已去肌膜、脂肪之牛肉500g，切成小方块，置1000 mL 蒸馏水中，以弱火煮1小时，用纱布过滤，挤干肉汁，将肉汁保留备用。将肉渣用绞肉机绞碎，或用刀切成细粒。
(2)、将保留的肉汁加蒸馏水，使总体积为2000 mL，加入蛋白胨20g，葡萄糖2g，氯化钠5g，及绞碎的肉渣，置烧瓶摇匀，加热使蛋白胨溶化。
(3)、取上层溶液测量pH，并调整其达到8.0，在烧瓶壁上用记号笔标示瓶内液体高度，121℃灭菌15min后补足蒸发的水分，重新调整pH值8.0，再煮沸10—20min，补足水量后调整pH7.4。
(4)、将烧瓶内容物摇匀，将溶液和肉渣分装于试管中，肉渣约占培养基的1/4左右。经121℃灭菌15min后备用，如当日不用，应以无菌操作加入已灭菌的石蜡凡士林，以隔绝氧气。
32、乳糖牛肉膏蛋白胨培养基
乳糖5g
牛肉膏5g
酵母膏5g
蛋白胨10g
葡萄糖10g
氯化钠5g
琼脂粉15g
pH 6.8
水1000mL
33、马铃薯牛乳培养基
培养基的配制：200g马铃薯（去皮）煮出汁，脱脂鲜乳100mL，酵母膏5g，琼脂粉15g，加水1000mLpH7.0。制平板培养基时，牛乳与其他成分分开灭菌，倒平板前再混合。
34、尿素琼脂培养基
尿素20g
琼脂15g
氯化钠5g
磷酸二氢钾2g
蛋白胨1g
酚红0.012g
蒸馏水1000mL
pH 6.8±0.2
培养基的配制：在蒸馏水或去离子水100mL中，加入上述所有成分（除琼脂外）。混合均匀。过滤灭菌。将琼脂加入900mL蒸馏水或去离子水中，加热煮沸腾。在15磅121℃灭菌15min。冷却至50℃，加入灭菌好的基本培养基，混匀后，分装于灭菌的试管中，放在倾斜位置上使其凝固。
微生物学实验常用试剂的配制
1、3%酸性乙醇溶液
浓盐酸 3mL
95％乙醇97mL
2、中性红指示剂
中性红0.04g
95％乙醇28mL
蒸馏水72mL
中性pH6.8～8颜色由红变黄，常用浓度为0.04％。3、淀粉水解试验用碘液（卢戈氏碘液）
碘片1g
碘化钾2g
蒸馏水300mL
先将碘化钾溶解在少量水中，再将碘片溶解在碘化钾溶液中，待碘全溶后，加足水分即可。
4、溴甲酚紫指示剂
溴甲酚紫0.04g
0.01mol/LNaOH 7.4g
蒸馏水 92.6mL
溴甲酚紫pH5.2～5.6，颜色由黄变紫，常用浓度为0.04％。
5、溴麝香草酚蓝指示剂
溴麝香草酚蓝0.04g
0.01mol/LNaOH 6.4mL
蒸馏水 93.6mL
溴麝香草酚蓝pH6.0～7.6，颜色由黄变蓝，常用浓度为0.04％。
6、甲基红试剂
甲基红（Methyl red）0.04g
95％乙醇 60mL
蒸馏水40mL
先将甲基红溶于95％乙醇中，然后加入蒸馏水即可。
7、V﹒P﹒Y试剂
(1)．5％α－萘酚无水乙醇溶液
α－萘酚 5g
无水乙醇100mL
(2)．40％KOH溶液
KOH 40g用蒸馏水定容至100mL即可。
8、吲哚试剂
对二甲基氨基苯甲醛 2g
95％乙醇 190mL
浓盐酸 40mL
实验室常用溶液及试剂配制 一、实验室常用溶液、试剂的配制-------------------------------------------------------1 表一普通酸碱溶液的配制 表二常用酸碱指示剂配制 表三混合酸碱指示剂配制 表四容量分析基准物质的干燥 表五缓冲溶液的配制 1、氯化钾-盐酸缓冲溶液 2、邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钾缓冲溶液 3、邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钾缓冲溶液 4、乙酸-乙酸钠缓冲溶液 5、磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲溶液 6、硼砂-氢氧化钠缓冲溶液 7、氨水-氯化铵缓冲溶液 8、常用缓冲溶液的配制 二、实验室常用标准溶液的配制及其标定-----------------------------------------------4 1、硝酸银（C AgNO3=0.1mol/L）标准溶液的配制 2、碘（C I2=0.1mol/L）标准溶液的配制 3、硫代硫酸钠（C Na2S2O3=0.1mol/L）标准溶液的配制 4、高氯酸（C HClO4=0.1mol/L）标准溶液的配制 5、盐酸（C HCl=0.1mol/L）标准溶液的配制 6、乙二胺四乙酸二钠（C EDTA =0.1mol/L）标准溶液的配制 7、高锰酸钾（C K2MnO4=0.1mol/L）标准溶液的配制 8、氢氧化钠（C NaOH=1mol/L）标准溶液的配制 三、常见物质的实验室试验方法 ----------------------------------------------------------6 1、柠檬酸（C6H8O7·H2O） 2、钙含量测定（磷酸氢钙CaHPO4、磷酸二氢钙Ca（H2PO4）2·H2O、钙粉等） 3、氟（Fˉ）含量的测定 4、磷（P）的测定 5、硫酸铜（CuSO4·5H2O） 6、硫酸锌（ZnSO4·H2O） 7、硫酸亚铁（FeSO4·H2O） 8、砷 9、硫酸镁（MgSO4） 四、维生素检测--------------------------------------------------------------------------------8 1、甜菜碱盐酸盐 2、氯化胆碱
53种常见缓冲液配制方法 乙醇－醋酸铵缓冲液(pH3.7)取5 mol/L醋酸溶液15.0 ml，加乙醇60 ml和水20 ml，用10 mol/L氢氧化铵溶液调节pH值至3.7，用水稀释至1000 ml，即得。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH8.0)取三羟甲基氨基甲烷12.14 g，加水800 ml，搅拌溶解，并稀释至1000 ml，用6 mol/L盐酸溶液调节pH值至8.0，即得。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH8.1)取氯化钙0.294 g，加0.2 mol/L三羟甲基氨基甲烷溶液40 ml使溶解，用1 mol/L盐酸溶液调节pH值至8.1，加水稀释至100 ml，即得。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH9.0)取三羟甲基氨基甲烷6.06 g，加盐酸赖氨酸3.65 g、氯化钠5.8 g、乙二胺四醋酸二钠0.37 g，再加水溶解使成1000 ml，调节pH值至9.0，即得。 乌洛托品缓冲液取乌洛托品75 g，加水溶解后，加浓氨溶液4.2 ml，再用水稀释至250 ml，即得。 巴比妥缓冲液(pH7.4)取巴比妥钠4.42 g，加水使溶解并稀释至400 ml，用2 mol/L盐酸溶液调节pH值至7.4，滤过，即得。 巴比妥缓冲液(pH8.6)取巴比妥5.52 g与巴比妥钠30.9 g，加水使溶解成2000 ml，即得。 巴比妥－氯化钠缓冲液(pH7.8)取巴比妥钠5.05 g，加氯化钠3.7 g及水适量使溶解，另取明胶0.5 g加水适量，加热溶解后并入上述溶液中。然后用0.2 mol/L盐酸溶液调节pH 值至7.8，再用水稀释至500 ml，即得。 甲酸钠缓冲液(pH3.3)取2 mol/L甲酸溶液25 ml，加酚酞指示液1滴，用2 mol/L氢氧化钠溶液中和，再加入2 mol/L甲酸溶液75 ml，用水稀释至200 ml，调节pH值至3.25～3.30，即得。 邻苯二甲酸盐缓冲液(pH5.6)取邻苯二甲酸氢钾10 g，加水900 ml，搅拌使溶解，用氢氧化钠试液(必要时用稀盐酸)调节pH值至5.6，加水稀释至1000 ml，混匀，即得。 枸橼酸盐缓冲液取枸橼酸4.2 g，加1 mol/L的20％乙醇制氢氧化钠溶液40 ml使溶解，再用20％乙醇稀释至100 ml，即得。 枸橼酸盐缓冲液(pH6.2)取2.1％枸橼酸水溶液，用50％氢氧化钠溶液调节pH值至6.2，即得。
1、2，4－二硝基苯肼溶液 I．在15mL浓硫酸中，溶解3克2，4－二硝基苯肼。另在70mL95％乙醇里加20mL 水，然后把硫酸苯肼倒入稀乙醇溶液中，搅动混合均匀即成橙红色溶液（若有沉淀应过滤）。 Ⅱ．将1.2克2，4一二硝基苯肼溶于50mL30％高氯酸中，配好后储于棕色瓶中，不易变质。 I法配制的试剂，2，4－二硝基苯肼浓度较大，反应时沉淀多便于观察。Ⅱ法配制的试剂由于高氯酸盐在水中溶解度很大，因此便于检验水中醛且较稳定，长期贮存不易变质。2、卢卡斯（Lucas）试剂 将34克无水氯化锌在蒸发皿中强热熔融，稍冷后放在干燥器中冷至室温。取出捣碎，溶于23mL浓盐酸中（比重1.187）。配制时须加以搅动，并把容器放在冰水浴中冷却，以防氯化氢逸出。此试剂—般是临用时配制。 3、托伦（Tollens）试剂 I．取0.5mL10％硝酸银溶液于试管里，滴加氨水，开始出现黑色沉淀，再继续滴加氨水，边滴边摇动试管，滴到沉淀刚好溶解为止，得澄清的硝酸银氨水溶液，即托伦试剂。 Ⅱ．取一支干净试管．加入1mL5％硝酸银，滴加5％氢氧化钠2滴，产生沉淀，然后滴加5％氨水，边摇边滴加，直到沉淀消失为止，此为托伦试剂。 无论I法或Ⅱ法，氨的量不宜多，否则合影响试剂的灵敏度。I法配制的Tollens试剂较Ⅱ法的碱性弱，在进行糖类实验时，用I法配制的试剂较好。 4、谢里瓦诺夫（Seliwanoff）试剂 将0.05g间苯二酚溶于50mL浓盐酸中，再用蒸馏水稀释至100mL。 5、希夫（Schiff）试剂 在100mL热水中溶解0.2g品红盐酸盐，放置冷却后，加入2g亚硫酸氢钠和2mL浓盐酸，再用蒸馏水稀释至200mL。 或先配制l0mL二氧化硫的饱和水溶液，冷却后加入0.2g品红盐酸盐，溶解后放置数小时使溶液变成无色或淡黄色，用蒸馏水稀释至200mL。 此外，也可将0.5g品红盐酸盐溶于l00mL热水中，冷却后用二氧化硫气体饱和至粉红色消失，加入0.5g活性炭，振荡过滤，再用蒸馏水稀释至500mL。 本试剂所用的品红是假洋红（Para-rosaniline或Para-Fuchsin），此物与洋红（Rosaniline或Fuchsin）不同。希夫试剂应密封贮存在暗冷处，倘若受热或见光，或露置空气中过久，试剂中的二氧化硫易失，结果又显桃红包。遇此情况，应再通入二氧化硫，使颜色消失后使用。但应指出，试剂中过量的二氧化硫愈少，反应就愈灵敏。 6、0.1％茚三酮溶液 将0.1g茚三酮溶于124.9mL95％乙醇中，用时新配。 7、饱和亚硫酸氢钠 先配制40％亚硫酸氢钠水溶液，然后在每100mL的40％亚硫酸氢钠水溶溶液中，加不含醛的无水乙醇25mL，溶液呈透明清亮状。 由于亚硫酸氢钠久置后易失去二氧化硫而变质，所以上述溶液也可按下法配制：将研细的碳酸钠晶体（Na2CO3?10H2O）与水混合，水的用量使粉末上只覆盖一薄层水为宜，然后在混合物中通入二氧化硫气体，至碳酸钠近乎完全溶解，或将二氧化硫通入1份碳酸钠与3份水的混合物中，至碳酸钠全部溶解力止，配制好后密封放置，但不可放置太久，最好是用时新配。 8、饱和溴水 溶解15克溴化钾于100mL水中，加入10g溴，振荡即成。 9．莫利许（Molish）试剂
1DEPC水(1‰) 1000ml 水 1ml DEPC 根据需要确定要配的体积，泡实验器具的DEPC水静止4小时后备用，泡24小时。配液体的DEPC水37℃过夜，送至高压，然后配相关溶液。 20.1M tris(ph 7.5) 12.114g tris 1000ml DEPC水 用HCL调ph至7.5，高压备用。 3 4%PFA的配制(ph 7.0)40g PFA 1000ml 0.1m tris(DEPC水配制高压) 将溶液持续加热至60℃左右，搅拌之至完全溶解，注意温度不要超过65℃，否则PFA降解失效。 30.2% 甘油/0.1M tris 20ml 甘油 980ml 0.1Mtris 4 20XSSC Nacl 175.3g （ph 7.0）柠檬酸钠88.2g DEPC水1000ml 分别稀释至2XSSC和0.2XSSC备用 5 HEPES 溶液HEPES 23.8g (ph6.8-8.0)DEPC H2O 100ml 6 50X Denhaldt′s 液 聚蔗糖（Ficoll 400）0.2g 聚乙烯吡咯烷酮(polyvinypyrrolidone) 0.2g 牛血清蛋白（BSA）0.2g DEPC 水20ml 7 预杂交buffer Deinoized formanmid 5ml 20X SSC 1.5ml 1M HEPES 0.5ml 50X Denhanldt′s液1ml 龟精DNA 0.6ml(4ug/ul) DEPC水 1.4ml 龟精DNA 要先95℃10-15min加热变性，随即冰浴。杂交buffer分装后-20℃保存。 8Washing buffer (ph7.5) maleic acid 5.8g NACL 4.4g Tween（吐温） 1.5ml 定容至500ml溶质浓度最后分别为0.1M maleic acid 0.15M nacl 0.3% Tween 9Maleic acid buffer (ph7.5) Maleic acid 5.8g Nacl 4.4g 定容至500ml 溶质的浓度最后分别为0.1M maleic acid 0.15M nacl 10Detection buffer
1．甘氨酸–盐酸缓冲液（0.05mol/L） 2．邻苯二甲酸–盐酸缓冲液（0.05 mol/L） 24 Na2HPO4-2H2O分子量= 178.05，0.2 mol/L溶液含35.01克/升。C4H2O7·H2O分子量= 210.14，0.1 mol/L溶液为21.01克/升。
①使用时可以每升中加入1克克酚，若最后pH值有变化，再用少量50%氢氧化钠溶液或浓盐酸调节，冰箱保存。 ② 687·H2 柠檬酸钠Na3 C6H5O7·2H2O：分子量294.12 ，0.1 mol/L溶液为29.41克/毫升。 7．磷酸盐缓冲液
2 4·2H 2Na 2HPO 4·2H 2O 分子量 = 358.22，0.2 mol/L 溶液为71.64克/升。 Na 2HPO 4·2H 2O 分子量 = 156.03，0.2 mol/L 溶液为31.21克/升。 24·2H 2KH 2PO 4分子量 = 136.09，1/15M 溶液为9.078克/升。 8．磷酸二氢钾–氢氧化钠缓冲液（0.05M ）
10．Tris –盐酸缓冲液（0.05M ，25℃） C HOCH2 NH2 分子量=121.14; 0. 1M 溶液为12.114克/升。Tris 溶液可从空气中吸收二氧化碳，使用时注意将瓶盖严。 247·H 2硼酸H 2BO 3,分子量=61.84,0.2M 溶液为12.37克/升。 硼砂易失去结晶水，必须在带塞的瓶中保存。
247·10H 2硼酸H 2BO 3，分子量=61.84, 0.2M 溶液为12.37克/升。 硼砂 易失去结晶水，必须在带塞的瓶中保存。 12．甘氨酸–氢氧化钠缓冲液（ 0.05M ） 13．硼砂-氢氧化钠缓冲液（0.05M 硼酸根） 2 47·10H 2 14．碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液（0.1M ） 2+2+22·10H 2
常用试剂的配制 1．无Ca2+、Mg2+Hanks液 NaCl 4.5g KCl 0.2g NaHCO 3 0.175g Na 2HPO 4 ·12H 2 O 0.076g KH 2PO 4 0.03g 葡萄糖 0.5g 0.4%酚红 2.5ml 将上述成分依次溶解或加入到双蒸水中, 最后补加双蒸水至500ml, 以5.6%NaHCO 3调整 pH 值至7.4，4℃冰箱保存备用。 2．甲基红试剂 （1）成份 甲基红 0.1g 蒸馏水 200ml 95％乙醇 300ml （2）用途：测定甲基红反应。 3．Hanks液（原液） 原液甲： NaCl 160g KCl 8g MgSO 4·7H 2 O 2g MgCl 2·6H 2 O 2g 上述试剂加入800ml双蒸水。溶解。 CaCl 2 2.8g溶于100ml双蒸水 上述二液混合，加双蒸水至1000ml，再加2ml氯仿防腐，4℃保存。 原液乙： Na 2NPO 4 ·12H 2 O 3.04g KH 2PO 4 1.2g 葡萄糖 20g 加入800ml双蒸水，溶解。 0.4%酚红溶液100ml 上述二液混合，加双蒸水至1000ml，再加2ml氯仿防腐，4℃保存。 使用时甲,乙原液按下列比例配成Hanks 液使用液：原液甲1份、原液乙1份、双蒸水18份滤过，8磅20min灭菌，放4℃冰箱保存，使用前用NaHCO 3 调整PH值。 4．0.4%酚红溶液 称取0.4g酚红置研钵中研碎，逐渐加入0.lmol/LNaOH并不断研磨，直到所有的颗粒
几乎完全解，加入0.lmol/LNaOHl0ml，然后倒入容量瓶中，并加蒸馏水至l00ml,棕色瓶保存备用。 5．pH7.2 Tris-NH 4 CI溶液(红细胞崩解液） Tris (三羟甲基氨基甲烷) 1.03g NH 4 Cl（氯化氨) 3.735g 加双蒸水至500ml，用浓HCl调pH=7.2，10磅15min灭菌后放4℃保存。 6．0.05moI/L pH8.6 巴比妥缓冲液 巴比妥 1.84g 加蒸馏水 200ml 加热溶解 巴比妥纳 10.3g 叠氮纳 0.2g 加蒸馏水溶解 , 并补加到 1000ml 。 7．磷酸盐缓冲液(PB) A 液：为 0.2mol/L 磷酸二氢钠水溶液 ,NaH 2PO 4 ·H 2 O 27.6g, 溶于蒸馏水中, 最 后补加蒸馏水至 1000ml 。 B 液：为 0.2mol/L 磷酸氢二钠水溶液 ,Na 2HPO 4 .7H 2 O 3.6g（或 Na 2 HPO 4 ·12H 2 O 71.6g, 或Na 2HPO 4 · 2H 2 O 35.6g ）, 加蒸馏水溶解，最后加水至 1000ml。若再加 蒸馏水至200ml则成为0.1mol/LPB。 8．0.1mol/LPH8.4 硼酸缓冲液（BBS） 硼酸钠（Na 2B 4 O 7 .10H 2 O） 0.46g 硼酸（H 2BO 3 ） 0.51g 加蒸馏水至100ml 溶解。9．PH7.4 0.01mol/L 磷酸盐缓冲液（PBS）配制方法一： 0.2mol/L Na 2HPO 4 （ Na 2 HPO 4 ·12H 2 O 71.6g加蒸馏水至1000ml） 0.2mol/L NaH 2PO 4 （NaH 2 PO 4 ·2H 2 O 35.6g加蒸馏水至1000ml） 取0.2mol/L Na 2HPO 4 81.0ml 加0.2mol/L NaH 2 PO 4 19ml,再加1900mlH 2 O和 17gNaCl即为PH7.4 0.01mol/L PBS。 PH7.4 0.01mol/L PBS再加入0.05%Tween-20即为ELISA试验的洗涤液。 配制方法二： 甲液（0.1mol/LKH 2PO 4 溶液）：KH 2 PO 4 13.608g，加蒸馏水至1000ml。 乙液（0.1mol/L Na 2HPO 4 溶液）：Na 2 HPO 4 35.814g，加蒸馏水至1000ml。 取甲液19ml，乙液81ml NaCl8.5g、Tween-20 0.5ml混合后加蒸馏水至1000ml即可。
各种缓冲液的配制方法
1．甘氨酸–盐酸缓冲液（0.05mol/L） X毫升0.2 mol/L甘氨酸+Y毫升0.2 mol/L HCI，再加水稀释至200毫升 pH X Y pH X Y 2.0 2.4 2.6 2.8 50 50 50 50 44.0 32.4 24.2 16.8 3.0 3.2 3.4 3.6 50 50 50 50 11.4 8.2 6.4 5.0 甘氨酸分子量 = 75.07，0.2 mol/L甘氨酸溶液含15.01克/升。 2．邻苯二甲酸–盐酸缓冲液（0.05 mol/L） X毫升0.2 mol/L邻苯二甲酸氢钾 + 0.2 mol/L HCl，再加水稀释到20毫升 pH(20℃)X Y pH(20℃)X Y 2.2 2.4 2.6 2.8 3.0 5 5 5 5 5 4.070 3.960 3.295 2.642 2.022 3.2 3.4 3.6 3.8 5 5 5 5 1.470 0.990 0.597 0.263 邻苯二甲酸氢钾分子量 = 204.23，0.2 mol/L邻苯二甲酸氢溶液含40.85克/升3．磷酸氢二钠–柠檬酸缓冲液 pH 0.2mol/L Na2HPO4 （毫升）0.1mol/L 柠檬酸 （毫升） pH 0.2mol/L Na2HPO4 （毫升） 0.1mol/L 柠檬酸 （毫升） 2.2 2.4 2.6 2.8 3.0 3.2 3.4 3.6 3.8 4.0 4.2 4.4 4.6 4.8 5.0 0.40 1.24 2.18 3.17 4.11 4.94 5.70 6.44 7.10 7.71 8.28 8.82 9.35 9.86 10.30 10.60 18.76 17.82 16.83 15.89 15.06 14.30 13.56 12.90 12.29 11.72 11.18 10.65 10.14 9.70 5.2 5.4 5.6 5.8 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0 10.72 11.15 11.60 12.09 12.63 13.22 13.85 14.55 15.45 16.47 17.39 18.17 18.73 19.15 19.45 9.28 8.85 8.40 7.91 7.37 6.78 6.15 5.45 4.55 3.53 2.61 1.83 1.27 0.85 0.55 Na2HPO4分子量 = 14.98，0.2 mol/L溶液为28.40克/升。 Na2HPO4-2H2O分子量 = 178.05，0.2 mol/L溶液含35.01克/升。C4H2O7·H2O分子量 = 210.14，0.1 mol/L溶液为21.01克/升。
不同缓冲液的缓冲范围 pH缓冲液 六十一秒的常用缓冲溶液的配制&缓冲溶液原理（2007年6月16日更新）（一）甘氨酸-盐酸缓冲液（0.05 mol/L） 甘氨酸分子量＝75.07。 0.2 mol/L甘氨酸溶液含15.01 g/L。 （二）邻苯二甲酸-盐酸缓冲液（0.05 mol/L） 邻苯二甲酸氢钾分子量＝204.23。0.2 mol/L邻苯二甲酸氢钾溶液含40.85 g/L。（三）磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液 Na2HPO4分子量＝141.98；0.2 mol/L溶液为28.40 g/L。 Na2HPO4·2H2O分子量＝178.05；0.2 mol/L溶液为35.61 g/L。 Na2HPO4·12H2O分子量＝358.22；0.2 mol/L溶液为71.64 g/L。
C6H8O7·H2O分子量＝210.14；0.1 mol/L溶液为21.01 g/L。 ①使用时可以每升中加入1克酚，若最后pH值有变化，再用少量50％氢氧化钠溶液或浓盐酸调节，冰箱保存。 柠檬酸钠：Na3C6H5O7·2H2O分子量＝294.12 ；0.1 mol/L溶液为29.41 g/L。 （六）醋酸-醋酸钠缓冲液（0.2 mol/L） NaAc·3H2O分子量＝136.09；0.2 mol/L溶液为27.22 g/L。冰乙酸11.8 mL稀释至1 L（需标定）。 （七）磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液（0.05 mol/L） X 毫升0.2 mol/L KH2PO4+Y毫升0.2 mol/L NaOH 加水稀释至20毫升。
（八）磷酸盐缓冲液磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液（0.2 mol/L） Na2HPO4·2H2O分子量＝178.05；0.2 mol/L溶液为35.61 g/L。 Na2HPO4·12H2O分子量＝358.22；0.2 mol/L溶液为71.64 g/L。 NaH2PO4·H2O分子量＝138.01；0.2 mol/L溶液为27.6 g/L。 NaH2PO4·2H2O分子量＝156.03；0.2 mol/L溶液为31.21 g/L。 （九）巴比妥纳-盐酸缓冲液 巴比妥钠分子量＝206.18；0.04 mol/L溶液为8.25 g/L。 （十）Tris-HCl缓冲液（0.05 mol/L） 50毫升0.1mol/L三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶液与X毫升0.1mol/L盐酸混匀并稀释至100
常见缓冲溶液配制方法 乙醇－醋酸铵缓冲液：取5mol/L醋酸溶液，加乙醇60ml和水20ml，用10mol/L氢氧化铵溶液调节pH值至，用水稀释至1000ml。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液：取三羟甲基氨基甲烷12.14g，加水800ml，搅拌溶解，并稀释至1000ml，用6mol/L盐酸溶液调节pH值至。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液：取氯化钙0.294g，加L三羟甲基氨基甲烷溶液40ml使溶解，用1mol/L 盐酸溶液调节pH值至，加水稀释至100ml。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液：取三羟甲基氨基甲烷6.06g，加盐酸赖氨酸3.65g，氯化钠5.8g，乙二胺四醋酸二钠0.37g，再加水溶解使成1000ml，调节pH值至。 乌洛托品缓冲液：取乌洛托品75g，加水溶解后，加浓氨溶液，再用水稀释至250ml。 巴比妥缓冲液：取巴比妥钠4.42g，加水使溶解并稀释至400ml，用2mol/L盐酸溶液调节pH值至，滤过。 巴比妥缓冲液：取巴比妥5.52g与巴比妥钠30.9g，加水使溶解成2000ml。 巴比妥－氯化钠缓冲液：取巴比妥钠5.05g，加氯化钠3.7g及水适量使溶解，另取明胶0.5g加水适量，加热溶解后并入上述溶液中。然后用L盐酸溶液调节pH值至，再用水稀释至500ml。 甲酸钠缓冲液：取2mol/L甲酸溶液25ml，加酚酞指示液1滴，用2mol/L氢氧化钠溶液中和，再加入2mol/L甲酸溶液75ml,用水稀释至200ml,调节pH值至～。 邻苯二甲酸盐缓冲液：取邻苯二甲酸氢钾10g，加水900ml,搅拌使溶解，用氢氧化钠试液(必要时用稀盐酸)调节pH值至，加水稀释至1000ml，混匀。 枸橼酸盐缓冲液：取枸橼酸4.2g,加1mol/L的20％乙醇制氢氧化钠溶液40ml使溶解,再用20％乙醇稀释至100ml。 枸橼酸盐缓冲液：取％枸橼酸水溶液，用50％氢氧化钠溶液调节pH值至。 枸橼酸－磷酸氢二钠缓冲液：甲液：取枸橼酸21g或无水枸橼酸19.2g,加水使溶解成1000ml，置冰箱内保存。乙液：取磷酸氢二钠71.63g，加水使溶解成1000ml。取上述甲液与乙液混合，摇匀。 氨－氯化铵缓冲液：取氯化铵1.07g，加水使溶解成100ml，再加稀氨溶液(1→30)调节pH值至。 氨－氯化铵缓冲液：取氯化铵5.4g，加水20ml溶解后，加浓氯溶液35ml，再加水稀释至100ml。 硼砂－氯化钙缓冲液：取硼砂0.572g与氯化钙2.94g，加水约800ml溶解后,用1mol/L盐酸溶液约调节pH值至，加水稀释至1000ml。 硼砂－碳酸钠缓冲液～：取无水碳酸钠5.30g,加水使溶解成1000ml；另取硼砂1.91g，加水使溶解成100ml。临用前取碳酸钠溶液973ml与硼砂溶液27ml，混匀。 硼酸－氯化钾缓冲液：取硼酸3.09g,加L氯化钾溶液500ml使溶解，再加L氢氧化钠溶液210ml。 醋酸盐缓冲液：取醋酸铵25g，加水25ml溶解后，加7mol/L盐酸溶液38ml，用2mol/L盐酸溶液或5mol/L氨溶液准确调节pH值至(电位法指示)，用水稀释至100ml，即得。 醋酸－锂盐缓冲液：取冰醋酸50ml，加水800ml混合后，用氢氧化锂调节pH值至，再加水稀释至1000ml。 醋酸－醋酸钠缓冲液：取醋酸钠5.1g，加冰醋酸20ml，再加水稀释至250ml。 醋酸－醋酸钠缓冲液：取无水醋酸钠20g，加水300ml溶解后，加溴酚蓝指示液1ml及冰醋酸60～80ml，至溶液从蓝色转变为纯绿色，再加水稀释至1000ml。 醋酸－醋酸钠缓冲液：取2mol/L醋酸钠溶液13ml与2mol/L醋酸溶液87ml，加每1ml含铜1mg的硫酸铜溶液，再加水稀释至1000ml。 醋酸－醋酸钠缓冲液：取醋酸钠18g，加冰醋酸，再加水稀释至1000ml。 醋酸－醋酸钠缓冲液：取醋酸钠5.4g，加水50ml使溶解，用冰醋酸调节pH值至，再加水稀释至100ml。 醋酸－醋酸钠缓冲液：取醋酸钠54.6g，加1mol/L醋酸溶液20ml溶解后，加水稀释至500ml。 醋酸－醋酸钾缓冲液：取醋酸钾14g，加冰醋酸，再加水稀释至1000ml。 醋酸－醋酸铵缓冲液：取醋酸铵7.7g，加水50ml溶解后，加冰醋酸6ml与适量的水使成100ml。
实验常用试剂、缓冲液的配制方法 1、1M Tris-HCl□组份浓度1 M Tris-HCl （pH7.4，7.6，8.0）□配制量1L □配置方法1. 称量121.1gTris置于1L烧杯中。 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。 pH值浓HCl 7.4 约70mL 7.6 约60mL 8.0 约42mL 4. 将溶解定容至1L。 5. 高温高压灭菌后，室温保存。 注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH 值随温度的变化差很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。 2、1.5 M Tris-HCl□组份浓度1.5 M Tris-HCl （pH8.8）□配制量1L □配置方法1.称取181.7gTris置于1L烧杯中。 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 用浓盐酸调pH值至8.8。 4. 将溶液定容至1L。 5. 高温高压灭菌后，室温保存。 注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。 3、10×TE Buffer□组份浓度100 mM Tris-HCl，10 mM EDTA （pH 7.4，7.6，8.0）□配制量1L □配置方法1. 量取下列溶液，置于1L烧杯中。 1 M Tris-HCl Buffer（pH7.4，7.6，8.0）100mL 500 mM EDTA（pH8.0）20mL 2. 向烧杯中加入约800mL的去离子水，均匀混合。 3. 将溶液定至1L后，高温高压灭菌。 4. 室温保存。 4、3 M 醋酸钠□组份浓度3 M 醋酸钠 （pH5.2）□配制量100mL □配置方法1. 称取40.8gNaOAc?3H2O置于100～200mL烧杯中，加入约40mL的去离子水搅拌溶解。 2. 加入冰乙酸调节pH值至5.2。 3. 加入去离子水将溶液定容至100mL。 4. 高温高压灭菌后，室温保存。 5、PBS Buffer□组份浓度137 mM NaCl，2.7mM KCl，10 mM Na2HPO4，2 mM KH2PO4 □配制量1L □配置方法1. 称量下列试剂，置于1L烧杯中。 NaCl 8 g KCl 0.2g Na2HPO4 1.42 g KH2PO4 0.27g 2. 向烧杯中加入约800 mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加HCl将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1L。 4. 高温高压灭菌后，室温保存。 注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。 6、10 M醋酸铵□组份浓度10 M醋酸铵 □配制量100mL □配置方法1. 称量77.1g醋酸铵置于100～200 mL烧杯中，加入约30 mL的去离子水搅拌溶解。 2.加去离子水将溶液定容至100mL。 3.使用0.22μm滤膜过滤除菌。 4.密封瓶口于室温保存。 注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。 7、Tris- HCl平衡苯酚□配置方法 1. 使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。因此，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。 2. 操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。所有操作均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。 3. 苯酚平衡：因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下： ①液化苯酚应贮存于-20℃，此时的苯酚呈现结晶状态。从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温，然后在68℃水浴中使苯酚充分溶解。 ②加入羟基喹啉（8-Quinolinol）至终浓度0.1％。该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄色。有助于方便识别有机相。 ③加入等体积的1M Tris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。 ④重复操作步骤③。 ⑤加入等体积的0.1M Tris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。 ⑥重复操作步骤⑤，稍微残留部分上层水相。 ⑦使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。 ⑧将苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。 8、苯酚/氯仿/异戊醇□配置方法 1. 说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯/酚/氯仿/异戊醇（25：24：1）。氯仿可使蛋白（25 ：24 ：1）质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。 2. 配置方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24：1）均匀混合后，移入棕色玻璃瓶中4℃保存。
常用缓冲溶液的配制方法 磷酸氢二钠–柠檬酸缓冲液 24Na 2HPO 4·2H 2O 分子量 = 178.05，0.2 mol/L 溶液含35.01克/ 升。 C 4H 2O 7·H 2O 分子量 = 210.14，0.1 mol/L 溶液为21.01克/升。 pH 4.0 20mL ：Na2HPO4 0.219g + C4H2O7·H2O 0.258g 柠檬酸–柠檬酸钠缓冲液（0.1 mol/L ） 6872柠檬酸钠Na 3 C 6H 5O 7·2H 2O ：分子量294.12，0.1 mol/L 溶液为29.41克/毫升。 pH 4.0 20mL ： C4H2O7·H2O 0.275g + Na3 C6H5O7·2H2O 0.203g
乙酸–乙酸钠缓冲液（0.2 mol/L ） Na 2Ac·3H 2O 分子量 = 136.09，0.2 mol/L 溶液为27.22克/升。 pH 4.0 20mL ：NaAc 0.098g + HAc 0.282mL 甘氨酸–氢氧化钠缓冲液（0.05M ） 甘氨酸分子量=75.07; 0.2M 溶液含15.01克/升。 pH 10.0 20mL ：甘氨酸0.075g + NaOH 0.013g 碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液（0.1M ） 2+2+ 无水Na 2CO 2分子量=105.99;0.1M 溶液为10.60克/升。 Na 2CO 2·10H 2O 分子量=286.2;0.1M 溶液为28.62克/升。 Na 2HCO 3分子量=84.0;0.1M 溶液为8.40克/升。 pH 10.0 20mL ：无水碳酸钠 0.127g +碳酸氢钠0.067g
常规试剂配制和测定方法 一、溶液的配制 1. Mandels营养盐溶液（1000 mL） 名称重量（g） 硫酸铵（(NH4)2SO4）14 磷酸二氢钾（KH2PO4）20 尿素（H2NCONH2） 3 硫酸镁（MgSO4·7H2O） 3 氯化钙（CaCl2·2H2O） 4 注：用煮沸10 min后的蒸馏水配制。 2. Mandels微量元素溶液（1000 mL） 名称重量（g） 氯化钴（CoCl2·6H2O） 硫酸锌（ZnSO4·7H2O） 硫酸锰（MnSO4·H2O） 硫酸亚铁（FeSO4·7H2O） 注：用煮沸10 min后的蒸馏水配制。 3. DNS试剂的配制（1000 mL） （1）取：3,5-二硝基水杨酸（C7H4N2O7）7.5 g 氢氧化钠（NaOH ）14.0 g 充分溶解于1000 mL 水中（水预先煮沸10 min） （2）加入：酒石酸钾钠（C4H4O6KNa·4H2O）216.0 g 苯酚（在50 ℃水浴中融化）mL 偏重亚硫酸钠（Na2S2O5） 6.0 g
（3）充分溶解后盛于棕色瓶中，放置5天后便可使用，平时盛一小瓶(250 mL)使用，要放在冰箱中冷藏。此溶液每月配制一次。 注意：倒入瓶中时要尽量装满！！ 4. 考马斯亮蓝G-250的配制（1000 mL） 称考马斯亮蓝G-250 100 mg即0.1g溶于50mL 95%乙醇中，加入100 mL 85 %磷酸，用蒸馏水稀释至1000 mL ，滤纸过滤。最终试剂中含%（w/v）考马斯亮蓝 G-250，%（w/v）乙醇，%（w/v）磷酸。 5. 1.0 M柠檬酸缓冲溶液的配制（1000 mL） 名称分子量Mn 重量(g) 柠檬酸（C6H8O7·H2O）210 210 NaOH 40 准确称取柠檬酸210 g，溶于约750 mL煮沸（10 min）蒸馏水中，待柠檬酸充分溶解后加入氢氧化钠74.5 g，完全溶解后将上述溶液转移到1000 mL容量瓶中，冷却后将容量瓶定容到1000 mL（原始）。（检验方法：取1.0 M柠檬酸缓冲溶液稀释20倍，测定稀释液的pH值，pH值应为） 6. 标准糖溶液的配制和标准方程的测定 （1）标准糖溶液的配制 准确称取2.000 g葡萄糖/木糖（葡萄糖/木糖需105 ℃烘干3 h），蒸馏水溶解，全部转移至1 L容量瓶内，摇匀，配制成2 g/L葡萄糖/木糖溶液。 取9个100 mL容量瓶、1支20 mL刻度吸管，分别吸取2 g/L葡萄糖/木糖溶液10 mL、20 mL、30 mL、40 mL、50 mL、60 mL、70 mL、80 mL、90 mL依次加入容量瓶，蒸馏水定容，摇匀。即为0.2 g/L、0.4 g/L、0.6 g/L、0.8 g/L、1.0 g/L、1.2 g/L、1.4 g/L、1.6 g/L、1.8 g/L、2.0 g/L葡萄糖/木糖标准溶液。 取6个30 mL容量瓶、1支20 mL刻度吸管，分别吸取2 g/L葡萄糖溶液10 mL、12 mL、14 mL、16 mL、18 mL、20 mL依次加入容量瓶，每瓶再加入mL柠檬酸缓冲液，蒸馏水定容，摇匀。即为1.0 g、1.2 g、1.4 g、1.6 g、1.8 g、2.0 g酶解葡萄糖。（2）标准方程的测定： ①葡萄糖/木糖标准方程的测定
常用缓冲液的配制（TBS，PBS） 科研探索2007-04-23 13:25:54 阅读728 评论0 字号：大中小订阅 这是各种缓冲液的配制方法 1. 0.01MPBS(PH7.2)液 NaCl 8g Na2HPO4 1.15g KH2PO4 0.2g （NaH2PO4） 加双蒸水至1000ml 2. 0.05MTBS(PH7.4)液 Tris(三羟甲基胺基甲烷) 12.1g Nacl 17.5g 加双蒸水至1500ml 在搅拌下加浓HCL至PH7.4，再加双蒸水至2000ml。 3. 0.02MTBS（PH8.2）液 Tris 4.84g Nacl 17.5g BSA 2.0g NaN3 1.0g 加双蒸水至1500ml 在搅拌下加浓HCL至PH8.2，再加双蒸水至2000ml。 （BSA—牛血清白蛋白；NaN3—叠氮钠，为防腐剂）。 4. 0.05MTB液（PH7.6） 先配制0.05MTB液： Tris 60.75g 1N HCL 约420ml 双蒸水至1000ml 配制方法：先以少量双蒸水（300ml）溶解Tris，加入HCL后，再用1N HCL 或1N NaOH将PH值调至7.6，再加双蒸水至1000ml。 用时将0.5MTB稀释10倍，即为0.05MTB液（PH7.6）液 磷酸缓冲液(Gomori缓冲液)
最通用的磷酸盐缓冲液是以其发明者Gomori命名的。该缓冲液是由单价磷酸二氢盐和双价磷酸一氢盐的混合物组成的。通过变化每种盐的量，就可配制出pH 5.8至pH8.0之间缓冲液(见表A1-3A和A1-3。磷酸盐有很高的缓冲能力，在水中高度可溶。但是，它们也有不少潜在的缺点： ?磷酸盐缓冲液抑制许多酶促反应和步骤，而这些酶促反应和步骤恰恰是分子克隆的基础，其中包括许多限制酶对DNA的切割，DNA的连接和细菌转化等。 ?因为磷酸盐在乙醇中沉淀，不能用于沉淀DNA和RNA。 ?磷酸盐螯合像Ca2+和Mg2+这样的阳离子。 表A1-3A 25℃下0.1mol/L磷酸钾缓冲液的配制 pH 1 mol/L K2HP04的体积/mL 1 mol/L KH2PO4的体积/mL 5.8 8.5 91.5 6.0 13.2 86.8 6.2 19.2 80.8 6.4 2 7.8 72.2 6.6 38.1 61.9 6.8 49.7 50.3 7.0 61.5 38.5 7.2 71.7 28.3 7.4 80.2 19.8 7.6 86.6 13.4 7.8 90.8 9.2 8.0 94.0 6.0 注：根据Green(1933)的资料汇编。 用蒸馏水将混合的两种1mol/L的贮存液稀释至1000mL。根据Henderson-Hasselbaleh方程计算其pH值： pH=pK'+Log ，在此，pK'=6.86(25℃) 表A1-3B 25℃下0.1mol/L磷酸钠缓冲液的配制 pH 1mol/L Na2HPO4的体积/mL 1mol/L NaH2P04体积/mL 5.8 7.9 92.1 6.0 12.0 88.0 6.2 1 7.8 82.2 6.4 25.5 74.5 6.6 35.2 64.8 6.8 46.3 53.7
一.常用贮液与溶液 1mol/L亚精胺（Spermidine）: 溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。 1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。 10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。 10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5ml水中（为减少变性， 须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。 1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20℃。或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。 8mol/L乙酸钾（potassium acetate）：溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。 1mol/L氯化钾（KCl）：溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。3mol/L乙酸钠（sodium acetate）：溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。 0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA?2H2O和20g的NaOH，
实验常用试剂、缓冲液的配制方法 Ampicillin（氨卡青霉素）100mg/ml □组份浓度100mg/ml Ampicillin □配制量50mL □配置方法 1.称量5g Ampicillin置于50mL离心管中。 2.加入40mL灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。 3.用0.22μm滤膜过滤除菌。 4.小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。 Kan（卡那霉素）50mg/ml □组分浓度50mg/ml卡那霉素 □配制量50mL □配制方法 1.称取2.5g卡那霉素置于50ml塑料离心管中。 2.加入40ml灭菌水，充分混合溶解之后定容至50mL。 3.用0.22μm 滤膜过滤除菌。 4.小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。 IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷) 24 mg/ml □组份浓度24mg/L IPTG □配制量50mL □配置方法 1.称量1.2gIPTG置于50mL离心管中。
2.加入40mL 灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。 3.用0.22μm 滤膜过滤除菌。 4.小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。 X- Gal 20mg/m □组份浓度20mg/L X-Gal □配制量50mL □配置方法 1.称取1gX-Gal置于50mL离心管中。 2.加入40mL DMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解， 定容至50mL。 3.小份分装（1mL/份）后，-20℃避光保存。 LB培养基 □组份浓度1％（W/V）Tryptone，0.5％（W/V）Yeast Extract，1％（W/V）NaCl □配制量1L □配置方法 1.称量下列试剂，置于1L烧杯中 Tryptone（胰化蛋白胨）10g Yeast Extract（酵母提取物）5g NaCl（氯化钠）10g 2.加入约800mL 的去离子水，充分搅拌溶解。 3.滴加5N NaOH（约0.2mL），调节pH值至7.2-7.3。
常用缓冲溶液的配制方法 1．甘氨酸–盐酸缓冲液（L） X毫升 mol/L甘氨酸+Y毫升 mol/L HCI，再加水稀释至200毫升 ) 甘氨酸分子量 = ， mol/L甘氨酸溶液含15.01克/升。 2．邻苯二甲酸–盐酸缓冲液（ mol/L） 邻苯二甲酸氢钾分子量 = ， mol/L邻苯二甲酸氢溶液含40.85克/升3．磷酸氢二钠–柠檬酸缓冲液
Na 2HPO 4分子量 = ， mol/L 溶液为28.40克/升。 - Na 2HPO 4·2H 2O 分子量 = ， mol/L 溶液含35.01克/升。 C 4H 2O 7·H 2O 分子量 = ， mol/L 溶液为21.01克/升。 4．柠檬酸–氢氧化钠-盐酸缓冲液 ① 使用时可以每升中加入 1克克酚，若最后pH 值有变化，再用少量50% 氢氧化 钠溶液或浓盐酸调节，冰箱保存。 5．柠檬酸–柠檬酸钠缓冲液（ mol/L ） 6872柠檬酸钠Na 3 C 6H 5O 7·2H 2O ：分子量， mol/L 溶液为29.41克/毫升。 ;
22 # 7．磷酸盐缓冲液 242 Na2HPO4·12H2O分子量 = ， mol/L溶液为克/升。 NaH2PO4·2H2O分子量 = ， mol/L溶液为克/升。 磷酸盐是生物化学研究中使用最广泛的一种缓冲剂，由于它们是二级解离，有二个pKa 值，所以用它们配制的缓冲液，pH 范围最宽：NaH2PO4： pKa1＝，pKa2＝；Na2HPO4：pKa1＝，pKa2＝ 配酸性缓冲液：用NaH2PO4，pH＝1～4，
配中性缓冲液：用混合的两种磷酸盐，pH＝6～8， 配碱性缓冲液：用Na2HPO4，pH＝10～12。 《 用钾盐比钠盐好，因为低温时钠盐难溶，钾盐易溶，但若配制SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的缓冲液时，只能用磷酸钠而不能用磷酸钾，因为SDS(十二烷基硫酸钠)会与钾盐生成难溶的十二烷基硫酸钾。 磷酸盐缓冲液的优点为：①容易配制成各种浓度的缓冲液；②适用的pH 范围宽；③pH 受温度的影响小；④缓冲液稀释后pH 变化小，如稀释10倍后pH 的变化小于。 其缺点为：①易与常见的钙Ca2+离子、镁Mg2+离子以及重金属离子缔合生成沉淀；②会抑制某些生物化学过程，如对某些酶的催化作用会产生某种程度的抑制作用。 1M溶液为12.114克/升。Tris溶液可从空气中吸收二氧化碳，使用时注意将瓶盖严。 > 硼砂Na2B4O7·10H2O,分子量=;溶液（=0.2M硼酸根）含19.07克/升。 硼酸H3BO3,分子量=,溶液为12.37克/升。 ) 硼砂易失去结晶水，必须在带塞的瓶中保存。 12．甘氨酸–氢氧化钠缓冲液（0.05M）