胆固醇含量检测
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临床医学检验总胆固醇(TC)胆固醇是脂质成分之一,机体中胆固醇80%~90%由肝和肾上腺自身合成,而多种因素可影响体内TC的水平,包括:①年龄与性别,TC水平往往随年龄上升,但到70岁或80岁以后有所下降,中青年期女性低于男性,50岁以后女性高于男性;②长期的高胆固醇,高密度饱和脂肪和高热量包含可使TC增高;③遗传因素;④其他,如缺少运动、脑力劳动、精神紧张等可能使TC升高。
胆固醇的增高与多种疾病有关,所以胆固醇的检验是临床检验的主要项目之一。
(一)酶法1.原理血清中的胆固醇酯(CE)被胆固醇酯水解酶(CEH)水解成游离胆固醇(Cho1),后者被胆固醇氧化酶(CHOD)氧化成△4-胆甾烯酮并产生过氧化氢,再经过氧化物酶(POD)催化4-氨基安替比林与酚(三者合称PAP),生成红色醌亚胺色素(Trind er反应)。
醌亚胺的最大吸收在500 nm左右,吸光度与标本中TC含量成正比。
反应式如下:2.计算TC(mmol/L)=A测定/A标准×定标血清TC浓度(mmol/L)。
速率法测定根据仪器性能及所用试剂的反应速度设计操作程序,一般要求试剂中酶用量较高。
3.技术指标(1)精密度:终点法批内CV<1.5%,批间CV≤2.5%。
(2)准确性:以参考方法(ALBK法)定值的血清为标准液时,本法测定结果与ALBK法基本一致。
以Chol水溶液为标准时,结果往往比AL-BK法低,故不宜采用Chol水溶液。
(3)灵敏度:显色剂用酚时,TC 5.2 mmol/L(200 mg/d1)时的吸光度A500nm0.30-0.35,故A500nm=0.005时的TC浓度约0.08 mmol/L(3 mg/d1)。
(4)测定范围:血清与酶试剂用量之比为1:100时,测定上界为13 mmol/L(500 mg/d1)。
(5)特异性:血清中多种非胆固醇甾醇会不同程度地与本试剂显色。
正常人血清中非胆固醇甾醇约占TC的l%,故在常规测定时这种影响可以不计。
实验一:食品中胆固醇的测定实验一:食品中胆固醇的测定一、实验目的1. 通过本实验的学习,使学生了解测定食品中胆固醇的意义。
通过本实验的学习,使学生了解测定食品中胆固醇的意义。
2. 通过本实验的学习,使学生掌握紫外-可见分光光度检测方法。
二、实验内容1. 样品制备。
样品制备。
2. 分光光度法检测。
三、实验要求采用集中授课形式组织教学。
采用集中授课形式组织教学。
四、实验准备 1. 样品制备及操作。
样品制备及操作。
2. 紫外-可见分光光度仪的使用方法。
紫外-可见分光光度仪的使用方法。
五、实验原理、方法和手段1. 实验原理实验原理当固醇类化合物与酸作用时,当固醇类化合物与酸作用时,可脱水并发生聚合发应,可脱水并发生聚合发应,可脱水并发生聚合发应,产生有颜色的物质。
产生有颜色的物质。
产生有颜色的物质。
据据此可先对食品样品进行提取和皂化,而后用硫酸铁铵试剂作为显色剂,测定食品中胆固醇的含量。
胆固醇的含量。
2. 实验方法和手段实验方法和手段食品样品的制备,分光光度计的使用。
食品样品的制备,分光光度计的使用。
六、实验条件1. 主要仪器主要仪器 A . 电子天平(1/10000)B . 电热恒温水浴电热恒温水浴C . 电动振荡器电动振荡器D . 具塞比色管:10 mL 、25 mL E . 吸量管:2.0 mL2. 试剂试剂A. 石油醚石油醚B. 无水乙醇无水乙醇C. 浓硫酸浓硫酸D. 冰乙酸:优级纯冰乙酸:优级纯E. 磷酸磷酸F . 胆固醇标准物质胆固醇标准物质G . 胆固醇标准液。
胆固醇标准储备液(1 mg/mL ):准确称取胆固醇100 mg ,溶于冰乙酸中,并定容至100 100 mLmL 。
此溶液至少在2个月内保持稳定。
胆固醇标准使用液(100 m g/mL ):吸取胆固醇标准储备液10 mL ,用冰乙酸定容至100 mL 。
此液用时临时配制。
液用时临时配制。
H. 铁矾显色剂。
铁矾储备液:溶解4.463 g 硫酸铁铵[FeNH 4(SO 4)2•H 2O]于100 mL 85%磷酸中,贮于干燥器内,此液在室温下稳定。
胆固醇检测
胆固醇(Cholesterol),又称为胆甾醇,普遍存在于动物体内,而植物中一般不含或只含微量。
胆固醇与植物甾醇在结构上十分相似,因此传统的比色法和酶催化法无法满足检测需求。
迪信泰检测平台采用高效液相色谱(HPLC)配备蒸发光散射检测器(ELSD)或二极管阵列检测器(DAD),可高效、精准地检测样品中胆固醇含量变化。
此外,我们还提供其他多种甾醇检测服务,以满足您的不同需求。
送样要求和检测周期
HPLC测定胆固醇样本要求:
1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL。
周期:2~3周
项目报告
项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告,报告包括:
1. 实验步骤(中英文)
2. 相关参数(中英文)
3. 质谱图片
4. 原始数据
5. 胆固醇含量信息
相关服务
甾醇检测
麦角甾醇检测
豆甾醇检测
β-谷甾醇检测。
一、实验目的1. 掌握血浆胆固醇测定的原理和方法。
2. 了解胆固醇在人体内的生理功能及其异常与疾病的关系。
3. 培养实验操作技能,提高对实验数据的分析和处理能力。
二、实验原理胆固醇是人体内一种重要的脂质物质,主要存在于细胞膜中,参与细胞膜的结构和功能。
血液中的胆固醇分为总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),其中LDL-C又被称为“坏胆固醇”,过高水平的LDL-C与心血管疾病的发生密切相关。
高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)则被称为“好胆固醇”,具有清除血管内胆固醇的作用。
本次实验采用酶法测定血浆总胆固醇含量。
三、实验材料1. 试剂:胆固醇氧化酶试剂盒、胆固醇酯水解酶试剂盒、过氧化氢溶液、显色剂等。
2. 仪器:自动生化分析仪、离心机、恒温水浴箱、移液器等。
3. 样品:健康志愿者血浆。
四、实验步骤1. 样本处理:将采集的血浆样品在室温下放置30分钟,使红细胞充分沉降,取上层血浆,离心分离血浆。
2. 试剂配制:按照试剂盒说明书配制胆固醇氧化酶、胆固醇酯水解酶等试剂。
3. 测定:将分离好的血浆样品按照试剂盒说明书进行测定,包括加样、孵育、显色、测定吸光度等步骤。
4. 数据处理:将测定的吸光度值输入自动生化分析仪,进行数据处理,得到血浆总胆固醇含量。
五、实验结果与分析1. 实验结果:本次实验共测定了10名健康志愿者的血浆总胆固醇含量,结果显示,男性志愿者血浆总胆固醇含量均值为(5.12±0.85)mmol/L,女性志愿者血浆总胆固醇含量均值为(4.98±0.76)mmol/L。
2. 结果分析:本次实验结果显示,男女志愿者的血浆总胆固醇含量差异不显著(P>0.05)。
这与相关文献报道一致,说明在正常人群中,男女志愿者的血浆总胆固醇含量没有显著差异。
六、实验讨论1. 实验原理:本次实验采用酶法测定血浆总胆固醇含量,该方法具有较高的准确性和重复性,是临床常用的检测方法。
2. 实验操作:实验操作过程中,严格按照试剂盒说明书进行操作,确保实验结果的准确性。
血清总胆固醇测定法1.实验原理胆固醇酯被胆固醇酯酶水解酶(CEH)水解成游离胆固醇,后者被胆固醇氧化酶(COD)氧化成胆甾烯酮并产生过氧化氢,再经过氧化物酶(POD)催化,使4-氨基安替比林与酚(三者合称PAP)反应,生成红色醌亚胺色素(Trinder反应)。
醌亚胺的最大吸光度在500nm左右,吸光度与标本中TC含量成正比。
反应式如下:CEH胆固醇酯+ H2O 胆固醇+脂肪酸COD胆固醇+O2Δ4-胆甾烯酮+H2O2POD2H2O2+ 4-AAP +酚苯醌亚胺(显色) + 4H2O 2. 标本:2.1 病人准备:12小时禁食。
2.2 类型:血清,肝素或EDTA抗凝血浆。
3. 标本存放:血清稳定性:20~25℃保存可稳定1周;4~8℃保存可稳定1周;-20℃保存可稳定3个月。
4. 标本运输:常温条件下保存运输。
5. 标本拒收标准:细菌污染的标本。
6. 实验材料6.1 试剂欧泰克总胆固醇试剂盒(货号:112 1307170 1 试剂8×70ml)6.1.1 试剂组成Tris缓冲液pH7.3 50mmol/L酚20mmol/L4-氨基安替比林 1.0mmol/L 胆固醇酯酶(CHE) ≥400U/L 胆固醇氧化酶(CHO) ≥200U/L 过氧化物酶(POD) ≥4000U/L 6.1.2 试剂准备试剂为即用式。
6.1.3 试剂稳定性与贮存:试剂保存于2~8℃,若无污染,可稳定至失效期。
试剂不可冰冻。
6.1.4 变质指示:当试剂有看得见的微生物生长,有浊度,或者未开盖的液体有沉淀时,表明试剂已变质,不能继续使用。
6.1.5 注意事项:试剂中含叠氮钠(0.95g/L)为防腐剂。
不可入口!避免接触皮肤及粘膜。
应采取必要的预防措施使用试剂6.2 校准品:使用罗氏复合校准品对自动分析仪进行校准,具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。
6.3 质控品:具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。
血清总胆固醇的测定实验报告一、实验目的。
本实验旨在通过测定血清中的总胆固醇水平,了解被检测者的心血管健康状况,为预防和治疗心血管疾病提供参考依据。
二、实验原理。
血清总胆固醇是指血液中所有脂蛋白和游离胆固醇的总和,通常以毫摩尔/升(mmol/L)为单位进行测定。
在实验室中,我们采用酶法测定血清总胆固醇,即通过酶的催化作用将胆固醇氧化成酮醇,然后通过比色法测定产生的色素来确定总胆固醇的浓度。
三、实验步骤。
1. 采集被检测者的静脉血样本,放置于离心管中,离心10分钟后取上清液。
2. 将上清液放入试剂盒中,按照说明书的操作步骤进行样本处理和试剂添加。
3. 使用分光光度计测定样本吸光度,根据标准曲线计算出血清总胆固醇的浓度。
四、实验结果。
根据实验测定,被检测者的血清总胆固醇水平为X mmol/L。
五、实验分析。
根据血清总胆固醇的测定结果,结合被检测者的年龄、性别、生活方式等因素,可以初步判断其心血管健康状况。
若总胆固醇水平偏高,可能存在心血管疾病的风险,需要进一步进行相关检查和干预措施。
若总胆固醇水平正常,被检测者的心血管健康状况良好。
六、实验注意事项。
1. 在采集血样和进行实验操作时,要严格遵守无菌操作规范,确保实验结果的准确性和可靠性。
2. 实验过程中要注意化学试剂的使用安全,避免接触皮肤和吸入气体,必要时戴上防护手套和口罩。
3. 实验设备的使用和维护要符合相关规定,保证设备的正常运转和数据的准确性。
七、实验结论。
通过本次实验测定,我们成功得出了被检测者的血清总胆固醇水平,并对其心血管健康状况进行了初步分析。
实验结果对于预防和治疗心血管疾病具有一定的参考价值。
八、实验展望。
在今后的实验中,我们将进一步完善实验方法,提高测定精度和准确性,为更多人群的心血管健康提供更多的数据支持和科学依据。
以上就是本次血清总胆固醇的测定实验报告,希望对大家有所帮助。
总胆固醇测量方法《总胆固醇测量方法》一、前言总胆固醇是一种有机化合物,是一种重要的体内血脂代谢物质。
总胆固醇的水平测量可以推测血液中胆固醇含量,是检测脂质代谢紊乱的重要指标。
二、测量原理总胆固醇测量一般采用酶联免疫酶法,电化学发光法,比色法等测量方法进行测试,其原理是利用抗原特异性抗体与特异抗原结合,催化特异性酶而诱导发光或比色反应,以此测定血清中总胆固醇的含量。
三、实验材料及仪器1. 操作材料:血清/血浆样本,质控品,抗原及抗体,洗涤液,酶标板,酶,3,3',5,5'-四甲基联苯胺棕榈酸根(TMB)试剂级及稀释剂,发光消除液。
2. 仪器:酶标仪、微量滴定管、离心机、分光光度计、体外诊断试剂诊断仪、热微波消解仪等。
3. 试剂:总胆固醇质控品及标准品,TMB和助剂试剂。
四、步骤1. 酶标仪的设置:在酶标仪中进行试剂和质控程序的设置,确定比色曲线,并计算相应的曲线斜率,计算相关性系数的可信度水平。
2. 加样:按试剂的操作规程,向各个试管中加入合适的血清样本、抗体和抗原。
3. 免疫反应:将各个试管放置在摇床中,摇晃3—5分钟,以使其充分混合,催化特异性酶而诱导发光或比色反应。
4. 测量:将试管放入离心机进行离心,将各个试管的比色结果通过分光光度计或其他胆固醇测量仪法进行测量。
5. 校正:将质控试管的测定结果与标准值进行比较,根据结果,调节测量结果的可信度水平。
6. 报告:根据测量结果,报告总胆固醇的测定结果及可信度水平。
五、注意事项1. 在质控品、样本标记及加样时要注意完整性及准确性,以防止交叉污染等偏差。
2. 加样时,要注意充分混合,以保证实验的准确性。
3. 测量结果要经过校正后,才能确定总胆固醇的测定结果及可信度水平。
六、总结总胆固醇是检测脂质代谢紊乱的重要指标,常用的总胆固醇测量方法有酶联免疫酶法,电化学发光法,比色法等,其原理是利用抗原特异性抗体与特异抗原结合,催化特异性酶而诱导发光或比色反应,以此测定血清中总胆固醇的含量。
1. 了解血清胆固醇测定的原理和方法。
2. 掌握氧化酶法测定血清胆固醇含量的操作步骤。
3. 通过实验,提高分析化学实验技能。
二、实验原理血清胆固醇主要由游离胆固醇和胆固醇酯组成,其中游离胆固醇占30%,胆固醇酯占70%。
氧化酶法测定血清胆固醇含量的原理是:在酶的催化作用下,胆固醇与氧化剂反应生成胆汁酸,同时氧化剂被还原成还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)。
NADH在特定波长下具有特征吸收峰,通过测定该吸收峰的吸光度,可以计算出血清胆固醇的含量。
三、实验仪器与试剂1. 仪器:分光光度计、离心机、移液器、恒温水浴锅、试管等。
2. 试剂:血清胆固醇氧化酶试剂盒、NADH工作液、血清样本、蒸馏水等。
四、实验步骤1. 准备工作:将试剂盒中的试剂按照说明书进行配制,混合均匀。
2. 样本处理:取血清样本1ml,加入试剂1ml,混匀后室温放置10分钟。
3. 检测:将混合液转移到分光光度计的比色皿中,在特定波长下测定吸光度。
4. 结果计算:根据标准曲线,计算出血清胆固醇的含量。
五、实验结果与分析1. 实验结果:通过测定,得到实验组血清胆固醇含量为X mg/dl,对照组血清胆固醇含量为Y mg/dl。
2. 结果分析:(1)实验组血清胆固醇含量与正常参考范围相比较,判断是否异常。
(2)分析实验误差,包括仪器误差、试剂误差、操作误差等。
(3)讨论影响血清胆固醇含量的因素,如饮食、生活习惯、遗传等。
通过本次实验,掌握了氧化酶法测定血清胆固醇含量的原理和方法。
实验结果表明,血清胆固醇含量与正常参考范围相比较,存在一定的差异,可能受到饮食、生活习惯、遗传等因素的影响。
在今后的实验中,应加强实验技能的培养,提高实验结果的准确性。
七、实验讨论1. 实验过程中,应严格按照操作步骤进行,避免人为误差。
2. 试剂的配制和混合应均匀,确保实验结果的准确性。
3. 仪器校准和保养对实验结果有重要影响,应定期进行校准和保养。
4. 实验结果分析时,应结合实际情况,全面考虑影响因素。
胆固醇检测指标参考值
一般来说,成年人的胆固醇参考值如下:
总胆固醇(TC),理想水平小于200毫克/分升(mg/dL)。
低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),理想水平小于100毫克/分升(mg/dL)。
高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C),理想水平大于60毫克/分升(mg/dL)。
当这些指标超出参考值范围时,可能会增加患心血管疾病的风险。
高总胆固醇和高LDL-C水平可能导致动脉粥样硬化和心脏病发作的风险增加。
而高HDL-C水平则通常被认为是有益的,因为它可以帮助减少动脉粥样硬化的风险。
因此,定期检查胆固醇水平并将其保持在理想范围内对于心血管健康至关重要。
这可以通过饮食控制、适量运动和必要时药物治疗来实现。
如果您担心自己的胆固醇水平,请务必向医生咨询,以获取个性化的建议和治疗方案。
血清总胆固醇测定实验报告一、实验目的。
本实验旨在通过测定血清中的总胆固醇含量,了解被测者的血脂代谢情况,为临床诊断和治疗提供参考依据。
二、实验原理。
总胆固醇是人体内的一种脂质物质,主要存在于血浆中。
在正常情况下,总胆固醇主要由低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和极低密度脂蛋白胆固醇(VLDL-C)三部分组成。
总胆固醇的测定是通过酶法或化学法测定血清中总胆固醇的含量,以反映被测者的血脂代谢情况。
三、实验步骤。
1. 采集被测者静脉血标本,禁食12小时以上。
2. 将采集的血清标本离心,取上清液用于测定。
3. 使用生化分析仪器,按照厂家提供的试剂盒说明书进行总胆固醇的测定。
4. 记录测定结果,并进行数据分析。
四、实验结果。
经测定,被测者血清中总胆固醇含量为XXX mmol/L(参考范围,2.85-5.69 mmol/L),属于正常范围。
五、实验分析。
根据实验结果,被测者的总胆固醇含量处于正常范围内,说明其血脂代谢情况良好。
但在临床实际操作中,还需结合被测者的其他临床指标进行综合分析,以全面了解其健康状况。
六、实验注意事项。
1. 采集血样时需遵守无菌操作规范,避免污染。
2. 实验过程中需严格按照试剂盒说明书进行操作,避免误差。
3. 实验结束后,及时清洗和消毒实验用具,保持实验环境整洁。
七、实验总结。
本次实验通过测定血清总胆固醇含量,了解了被测者的血脂代谢情况。
实验结果显示,被测者的总胆固醇含量处于正常范围内,说明其血脂代谢情况良好。
实验过程中,我们严格遵守了操作规范,保证了实验结果的准确性和可靠性。
实验结果为临床诊断和治疗提供了重要参考依据。
八、参考文献。
[1] XXX. 血脂代谢异常与心血管疾病的关系[J]. 中国循证心血管医学杂志, 2018, 20(3): 365-368.[2] XXX. 血清总胆固醇测定技术规范与质量控制[J]. 中国检验医学, 2019, 42(5): 689-692.以上为本次血清总胆固醇测定实验的报告内容,如有不足之处,欢迎批评指正。
胆固醇的检测方法
胆固醇的常见检测方法有以下几种:
1. 血液检测:通过采集静脉血或者指尖血样进行检测。
常见的检测指标包括总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)以及甘油三酯(TG)等。
2. 快速检测仪器:市场上也有一些家用的快速检测仪器,可以通过指尖血样快速测量血液中的胆固醇水平。
3. 脂膜电泳:脂膜电泳是一种检测血液中胆固醇浓度的电化学技术。
该方法基于不同电荷的胆固醇衍生物在电场中的迁移速度不同,从而实现对胆固醇的检测。
4. 超声波测量:超声波测量可以通过仪器发出超声波并测量其反射回来的信号来间接测量动脉壁中的胆固醇沉积物和斑块。
总的来说,血液检测是目前最常用的方法,可以全面了解血液中的胆固醇水平,而其他方法则主要用于特殊情况下的检测或研究。
为了准确判断胆固醇水平,建议在医疗机构进行检测。
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胆固醇质量标准
一、含量
胆固醇的含量应不低于98%。
其中,游离胆固醇应不低于95%。
二、纯度
胆固醇的纯度应达到99%以上,其中杂质含量不得超过1%。
三、颗粒度
胆固醇颗粒应均匀,肉眼观察无杂质。
颗粒度应符合一定的标准,以保证在使用时能达到最佳的分散效果。
四、稳定性
胆固醇应具有一定的稳定性,在室温下不应在短期内出现结晶或沉淀。
在长时间储存时,其物理性质和化学性质不应发生明显变化。
五、生物学安全性
胆固醇应无生物毒性,不应含有对人体健康造成危害的物质。
在用于人体时应经过严格的生物学安全性检测。
六、杂质含量
胆固醇中的杂质含量应尽可能低,以保证其安全性和有效性。
主要的杂质包括游离脂肪酸、一氧化碳、水分、重金属等。
七、生产工艺控制
胆固醇的生产工艺应保证其质量和安全性。
生产过程中的温度、压力、流量等参数应严格控制,以保证产品的稳定性和一致性。
同时,生产工艺应具有可重复性,以确保批量产品的质量一致。
八、检测方法
胆固醇的质量检测应采用准确、可靠的检测方法。
常用的检测方法包括高效液相色谱法、气相色谱法、质谱法等。
在检测过程中,应注意控制实验条件和操作方法,以保证检测结果的准确性和可靠性。
总胆固醇测定SOP_CHOL临床意义_检验科生化项目SOP 总胆固醇测定是一种常见的临床生化项目,主要用于评估患者血液中总胆固醇的水平。
总胆固醇是一种脂质物质,它在体内广泛存在于细胞膜中,并且是人体生理功能的重要组成部分。
总胆固醇的测定对于评估人体脂质代谢状态、监测心血管健康以及预测患病风险都具有重要的临床意义。
首先,总胆固醇测定是评估人体脂类代谢状态的重要指标。
脂类代谢紊乱是导致许多慢性疾病的重要原因之一,如冠心病、高血压、高血脂等。
总胆固醇作为脂类的代表物质,其水平的升高与这些疾病的发生密切相关。
通过测定患者血中总胆固醇的水平,可以及早发现脂类代谢紊乱,从而采取相应的措施进行治疗和干预。
其次,总胆固醇测定对于预测心血管疾病风险具有重要的意义。
大量的研究表明,总胆固醇水平与冠心病之间存在着正相关关系。
高总胆固醇水平是冠心病的独立危险因素之一、通过测定总胆固醇水平,可以对患者的心血管风险进行评估,为患者制定相应的预防措施和治疗方案提供依据。
此外,总胆固醇测定还可以用于监测治疗效果。
在心血管疾病患者中,降低总胆固醇水平是预防并治疗心血管疾病的重要措施之一、通过监测患者血液中总胆固醇的改变,可以及时评价治疗效果,指导临床医生对治疗方案进行调整,提高治愈率和降低死亡风险。
综上所述,总胆固醇测定作为一种常见的临床生化项目,具有重要的临床意义。
它可以用于评估脂类代谢状态、预测心血管疾病风险以及监测治疗效果。
临床医生可以通过总胆固醇测定结果,制定个体化的治疗方案,提高患者的康复率和生活质量。
因此,在临床实践中合理应用总胆固醇测定SOP,对于患者的健康具有重要的帮助和意义。
法测定鸡蛋中胆固醇含量
一、原理
当固醇类化合物与酸作用时,可脱水并发生聚合反应,产生颜色物质。
因此可先对食品样品进行皂化和提取,用硫磷铁试剂作为显色剂,测定食品中胆固醇的含量。
在样品的冰乙酸提取液中加磷硫铁试剂,胆固醇与试剂反应产生紫红色化合物,颜色的深浅与胆固醇的量成正比,可用分光光度计在波长560nm•处测定。
二、实验仪器及试材
1.仪器:分光光度计、水浴锅
2.试剂:本实验用水均需用蒸馏水或去离子水。
试剂纯度均为分析纯。
(1)石油醚(沸点30-60℃)、无水乙醇、冰乙酸。
(2)50%氢氧化钾溶液:称取50g氢氧化钾,用蒸馏水溶解,并稀释至100mL。
(3)25%氯化钠溶液:称取25g氯化钠,用蒸馏水溶解,并稀释至100mL。
(4)10% 三氯化铁溶液:将10g FeCl3·6 H2O溶于磷酸中,定容至100 mL,储于棕色瓶中,冷藏保存。
(5)磷硫铁试剂:取10% 三氯化铁溶液1.5mL于100mL棕色容量瓶内,加浓硫酸定容至刻度。
(6)胆固醇标准储液:准确称取胆固醇100mg,溶于冰乙酸中,定容至100mL。
(7)胆固醇标准溶液:临用前将储液用冰乙酸稀释10倍。
三、实验方法与步骤
1.样品胆固醇提取
准确称取充分混匀的鸡蛋约0.20g于25mL具塞比色管中,加入0.5mL50%氢氧化钾溶液和4.5mL无水乙醇,振荡混匀,在80℃恒温水浴中皂化20min。
皂化时每隔5min振摇一次使皂化完全。
皂化完毕,取出比色管,冷却。
加入
3mL 25%氯化钠溶液后再加入10mL石油醚,盖紧玻璃塞,振摇1min,静置分层。
取上层石油醚液1mL,置于25mL具塞比色管内,在65℃水浴中让石油醚自然挥发干,加入4mL冰乙酸,轻摇使胆固醇溶解,待测。
2.样品和标准胆固醇含量测定
另取两支25mL具塞比色管,一支(空白管)加入4mL冰乙酸,一支(标准管)加入1mL胆固醇标准溶液(0.1mg/mL)和3mL冰乙酸。
包括样品管,各
管分别加入2mL磷硫铁试剂,混匀,25℃放置20min后在560nm波长下比色。
以空白管调零,测得吸光度。
四、计算
鸡蛋胆固醇(mg/100g)= A
样/A
标╳
0.025mg/mL╳4mL╳10mL/1mL╳100/M
样
g
= A样/A标╳100/M样(mg/100g)五、实验注意事项
浓硫酸、强碱溶液具有腐蚀性,小心操作。
六、思考题:
1.举例说明胆固醇测定的其它方法。
2.实验中样品皂化的作用是什么?。