包被细胞培养板的相关问题---精品资料

细胞培养中常见的问题2006-11-23 15:53细胞中的颗粒到底是怎么回事？我的细胞总有颗粒，开始是细胞中有，后来细胞之间也好像有许多颗粒。

好像是细胞碎片一样。

是什么东西啊？是支原体污染吗？这可是我刚买回来的细胞啊!我们实验室也有这种情况，是不是黑的小碎片，有人说是细胞代谢产物，后来拿到高倍镜下看还会动，就怀疑是污染了，也想问问大家到底是什么是黑色的小碎片。

我没注意到它会动，只是觉得不像是活的微生物。

我觉得是由于某种污染或外界因素导致的细胞状态变差，裂解出的东西。

但是，是什么东西不清楚。

的确很常见在以前帖子见到说是“黑焦虫”。

长时间培养的很容易出现，我根据自己的经验估计是一种污染，因为随着黑点增多，本来生长旺盛的细胞逐渐停滞甚至死亡。

而且我后来原代培养的几批细胞并没有发现，我怀疑有好多细胞系本身就是污染的。

不过增加换液次数的情况下，好象一般不太娇气的细胞生长不是很受影响。

以前听很有经验的老师说黑焦虫是国产血清的问题，可以有条件换进口血清试试，或者离心一下也可能能解决问题。

那么所谓的“黑焦虫”到底是什么东西啊？有谁知道？我培养的细胞也出现过此中问题，放到高倍镜下看时有东西在动，但培养液不混浊，估计不是细菌污染，可能是血清问题，是支原体污染。

我培养的细胞也出现过这样的问题，我个人认为是一种支原体污染。

国产血清是罪魁祸首，因为只要将细胞饥饿一下，不超过24小时，这种东西就会疯长我培养的细胞也有出现这中情况。

但是并不影响细胞生长。

应该不是支原体污染最近，我复苏细胞细胞的时候也发现过这样的东西，尽管我用的是GIBCO的FBS，后来，每天换液之前洗几遍后，就慢慢变少，现在没了细胞培养的细菌污染我们新建的细胞室。

每周都会做清洁，用0。

2%新洁尔灭消毒，照紫外。

实验前也会照至少30分钟。

培养基中加青霉素，链霉素。

可是培养细胞时还是常有细菌污染，有时甚至分析不出原因。

用培养瓶还好一点，用多孔板或平皿就更凄惨。

因为自己做PC12细胞培养，想在接种前将培育皿用多聚赖氨酸包被，到园子里搜索了下，关于多聚赖氨酸的帖子不少，看了一些帖子，将大部分收集在此。

个人觉得关于多聚赖氨酸的配置、保存、使用各方面问题，这些帖子里面都解释了。

注：我只是摘了一个帖子里某段或某句话。

一般一段话来自某一位战友。

一、常用的多聚赖氨酸包被可以用三蒸水，或者PBS，浓度一般为用0.1 mg/ml进行包被。

二、其他常用包被方法比较(以各种免疫分析为例)：49456826.snap三、我配成1mg/ml的储存液，用Mini-Q(超纯水)配制，放在－20℃储存，使用时稀释10倍（也用超纯水），即终浓度100ug/ ml，过滤后使用。

工作液过滤使用，如一次用不完，放在4℃储存。

多聚赖氨酸在水溶液中易分解，所以一次不要配太多工作液。

四、我现在要配多聚赖氨酸,书上写的用PBS配,但没写PH,浓度，向各位请教。

答：PH应该在7.0~7.4，PBS：取氯化钠7.650 g，无水磷酸氢二钠0.724 g，磷酸二氢钾0.210g 溶于蒸馏水1000 mL 中，以1N 氢氧化钠溶液调pH 值为7.0~7.4，经121℃灭菌15 分钟五、我准备用多聚赖氨酸涂片培养细胞,不知道多聚赖氨酸涂过的玻片如何灭菌？能否干烤灭菌？答：Sigma的产品说明书上写的很明白的。

另外，有本书上是这么写的，供参考：Poly-ly sine-coated tissue culture surf acesTo coat cov erslips: Prepare a stock solution by dissolv ing 25 mg/ml poly ly sine in 4.73 ml water (both poly-L-lysine an d poly-D-lysine are used to coat tissue culture surf aces; check specif ic protocol f or choice of isomer) and f ilter sterilize throu gh a 0.22-μm f ilter. Store in 100-μl aliquots at ?20°C. When ready to use, dilute one aliquot in 40 ml water to prepare 13 μg/ml working solution. Sterilize cov erslips by autoclav ing prior to coating. Dip cov erslips in the working solution, then inc ubate 15 min to sev eral hours in a humidif ied 37°C, 5% CO2 incubator. Allow surf ace to dry.To coat culture dishes or 8-well chamber slides: Prepare a stock solution by dissolv ing 100 mg poly-lysine in 100 ml water (both poly-L-lysine and poly-D-lysine are used to coat tissue culture surf aces; check specif ic protocol f or choice of isom er) and f ilter sterilize through a 0.22-μm f ilter. Store in 5-ml aliquots at ?20°C. When ready to use, dilute 1 part stock solutio n with 9 parts water to prepare 100 μg/ml working solution. Fill tissue culture dishes or slide wells with the working soluti on and incubate 1 hr in a humidif ied 37°C, 5% CO2 incubator, then remov e solution by v acuum aspiration and allow surf ace to dry.Store coated tissue culture ware up to 3 months at 4°C. Use diluted solutions only once, but unused diluted aliquots can be stored up to 3 months at 4°C.你可以配置好PLL后单独将其过滤除菌，分装，待用。

细胞实验中常见问题
一、细胞培养问题
1.1 细胞生长缓慢或停止生长：可能原因是营养物质不足、血清质量不佳、培养箱温度不稳定或CO2浓度不正确等。

1.2 细胞形态异常：可能是由于培养基问题、营养不足、感染或污染等原因。

1.3 细胞结块：可能是由于细胞密度过大或血清用量过多等原因。

二、细胞活性检测问题
2.1 实验结果不一致或不准确：可能是由于试剂问题、操作误差或实验条件不稳定等原因。

2.2 假阳性或假阴性结果：可能是由于抗体交叉反应、实验操作不当或细胞状态不佳等原因。

三、细胞转染问题
3.1 转染效率低：可能是由于转染方法不正确、转染试剂选择不当或细胞状态不佳等原因。

3.2 细胞毒性：可能是由于转染试剂用量过多或转染条件不适应等原因。

四、细胞计数与消化问题
4.1 细胞黏附性强，不易消化：可能是由于细胞类型或状态不适应于消化方法等原因
4.2 细胞碎片多，影响计数：可能是由于消化过度或消化不充分等原因。

五、细胞标记与染色问题
5.1 染色不均匀或不显色：可能是由于染色时间过短或过长、抗体浓度不当或细胞状态不佳等原因。

5.2 非特异性染色问题：可能是由于抗体交叉反应或抗体纯度不佳等原因。

六、细胞分型与鉴定问题
6.1 分型结果不准确：可能是由于抗体选择不当、操作误差或细胞状态不稳定等原因。

6.2 鉴别困难：可能是由于细胞分化程度高、抗原表达量低或鉴别方法不敏感等原因。

七、细胞感染与病毒问题
7.1 细菌污染：可能是由于培养基或细胞株本身带菌等原因。

7.2 支原体污染：可能是由于培养环境不洁净、操作过程中污染等原因。

表：细胞培养失败常见原因及对策
出现问题可能原因解决办法
培养基中pH 错误的CO2浓度调节C02浓度
快速改变[NaHC02]2-3.7g/L,[C02]5-10%
培养瓶盖子过紧稍放松盖子
缓冲液量不足加HEPES至最终浓度为10-20mM
细菌、酵母和丢弃培养物、避免污染
真菌污染
细胞不贴壁过量的胰酶消化减少胰酶浓度或消化时间
培养基中无粘附因子加大血清浓度或增加粘附因子
细菌、霉菌、支原体污染检查并去除污染或丢弃
物理、化学污染去除相关污染
细胞生长速度降低改变培养基或血清比较培养基中成分,新旧血清比较
缺乏促进生长成分传代培养,加新鲜培养基和
如谷氨酰胺或生长因子生长促进成分
培养基储存不当保存在2-8℃，
血清培养基应尽量避光
初次细胞接种量少增加细胞接种数量
细胞衰老取得新细胞株
低度细菌和真菌污染无抗生素的培养基,如被污染，
则丢弃
支原体污染隔离培养,如污染,丢弃
细胞死亡无C02 检测C02
温度波动检验温度
抗生素浓度超量有毒性少量使用抗生素
细胞复苏受损重新复苏
渗透压错误检测培养基渗透压
产生毒性代谢物去除并更换培养基
细胞成团悬浮Ca，Mg离子存在用无Ca2+，Mg2离子的平衡
盐溶液清洗细胞
支原体污染隔离培养,检验支原体污染,
如已经污染,则丢弃
胰酶过量,细胞DNA释放用DNase处理细胞
细胞形态、生长
状况改变细胞间污染更换细胞。

细胞培养中的常见问题及解决方法细胞培养是现代生命科学研究中常用的实验技术之一，可以用于细胞增殖、分化、转染等研究。

然而，细胞培养过程中常常会出现一些问题，如细胞污染、细胞凋亡和细胞失活等。

本文将讨论细胞培养中的这些常见问题，并提出相应的解决方法。

1. 细胞污染细胞污染是细胞培养中的一大难题。

它可以由细菌、真菌或其他细胞类型的污染引起。

细胞污染会影响实验结果的准确性，并可能导致细胞系的丢失。

为了解决这个问题，我们可以采取以下措施：（1）经常检查细胞培养器具和培养基，确保其无菌；（2）使用抗生素或抗黴剂对培养基进行预处理，以减少污染的风险；（3）定期进行污染检测，例如细胞培养液和工作区的表面。

2. 细胞凋亡细胞凋亡是正常细胞生命周期的一部分，但在细胞培养中，过多的细胞凋亡会导致实验结果的误差。

为了减少细胞凋亡的发生，我们可以考虑以下措施：（1）优化培养条件，包括温度、CO2浓度和培养基配方等；（2）定期检查细胞形态和健康状况，及时处理出现凋亡现象的细胞；（3）使用细胞凋亡检测工具，如Annexin V-FITC/PI染色法，来评估细胞凋亡水平。

3. 细胞失活细胞失活现象在细胞培养中常常发生，可能是由于细胞老化、无营养补充或培养条件不佳等原因引起。

为了避免细胞失活的发生，我们可以尝试以下方法：（1）及时更换培养基，确保细胞获得充足的营养物质；（2）避免过度培养，及时传代细胞；（3）定期鉴定细胞的纯度和活力，并确保培养条件适当；（4）尝试使用细胞增殖激素或生长因子来促进细胞的增殖和存活。

细胞培养中的常见问题并不局限于上述三个，还有其他一些问题，例如细胞出现突变、细胞凝固等。

针对这些问题，我们可以进一步深入研究并寻找解决方法。

同时，注意维持实验室的清洁和规范操作也是解决这些问题的关键。

细胞培养在生命科学研究中发挥着重要作用。

了解并解决细胞培养中的常见问题，有助于提高实验结果的准确性和可重复性。

通过合理的实验设计、严谨的操作和科学的方法选择，我们可以克服这些问题，为细胞培养研究的进展做出贡献。

细胞板方法和注意事项
以下是 6 条关于细胞板方法和注意事项的内容：
1. 细胞板的使用呀，就像搭积木一样，得有耐心和技巧呢！比如说在进行细胞培养时，放置细胞板可不能随随便便，得轻轻的、稳稳的，就像呵护小宝宝一样。

你可别用力过猛把它给弄碎了呀！不然一切都前功尽弃啦！
2. 嘿，细胞板方法里面学问可大了去啦！就拿细胞接种来说，那得均匀地把细胞铺在板上，这可不是随便撒撒就行的哦。

你想想看，要是这边一堆那边没有，那不是乱套了嘛！所以一定要仔细认真呀，可别犯糊涂哟！
3. 细胞板的注意事项可不能小瞧呀！好比说保持细胞板的清洁，这就像是给家里做大扫除一样重要。

要是脏兮兮的，细胞能生长好才怪呢！你说对吧？千万不能偷懒不做好清洁这一步呀！
4. 哇塞，细胞板方法如果没掌握好，那可不得了呀！就像做饭时调料放错了，味道全变了。

像细胞培养的条件，温度呀、湿度呀，都得严格把控，不能有一点差错呢，你难道不想把细胞养得健健康康的嘛？
5. 哎呀呀，细胞板的这些注意事项你可得牢记在心呀！比如不要让细胞板受到污染，这就好像保护自己的宝贝不让别人碰到一样。

稍有不慎，整个实验可能就毁了呢！你可别不当回事呀！
6. 细胞板呀，要小心对待它哟！像操作的时候动作得轻柔，不能毛毛躁躁的。

这就跟对待一件珍贵的瓷器一样，稍微粗鲁点就可能损坏啦。

你说是不是得
格外小心呢？总之，一定要重视细胞板的方法和注意事项，这样才能让实验顺顺利利的呀！。

临床免疫学检验技术考试题库及答案A.431.关于凝集反应, 下列叙述错误的是（）B.参与反应的抗原可以是红细胞、细菌或致敏颗粒C.溶液中负离子强度愈大, 抗原颗粒表面Z电位愈大D.降低溶液的粘滞度可促使凝集现象出现E.增加电解质可促使凝集现象出现F.IgM类抗体出现的凝集比IgG类抗体强答案: C432.Ig恒定区的特点是（）A.机体内Ig恒定区的氨基酸种类与排列顺序是相同的B.同一种属动物中, 同一类别Ig分子其C区氨基酸组成及排列顺序比较恒定C.同一种属动物的H链氨基酸种类及排列顺序比较恒定D.同一种属动物的L链氨基酸种类及排列顺序比较恒定E.以上都不是433.答案: BA.对于血清中数种蛋白质抗原成分的分析, 常可采用（）B.单向扩散试验8.双向扩散试验C.免疫电泳法D.对流免疫电泳E.火箭免疫电泳434.答案: C435.巨噬细胞溶酶体酶的测定采用的方法是（）A.硝酸铅法B.偶氮法C.溶菌酶测定D.溶菌法E.NBT还原法436.答案: C437.要使半抗原与载体结合具有免疫原性、半抗原分子的数目数至少要达到（）A.10个以上B.15个以上C.20个以上D.50个以上E.1个以上438.答案: CA.在RIA检测中, 结合率用B/B+F表示, 其意义是（）B.结合态的标记抗原与总的标记抗原之比C.结合态的标记抗原与游离的标记抗原之比D.总标记抗原与抗原抗体复合物之比E.结合态的抗原与总的抗体之比F.结合态的抗原与总的抗原之比439.答案: A440.制备单克隆细胞最理想的方法是（）A.在一个孔里多个细胞融合再克隆B.在一个孔里多个细胞融合, 筛选再克隆C.机体内免疫, 筛选再克隆D.在一个孔一个瘤细胞和一个目的细胞融合, 筛选再克隆在一个孔里一个瘤细胞加一个正常B细胞融合, 再用目的抗原致敏, 筛选克隆441.答案: B442.ABC法中的桥是指（）A.生物素B.亲和素C.生物素化的抗体D.与生物素结合的酶E.三抗443.答案: BA.T细胞杂交瘤, 可提高融合率的是（）B.激活的T细胞中含有少量中性粒细胞C.激活的T细胞中含有少量B淋巴细胞D.激活的T细胞中含有少量单核细胞E.激活的T细胞中含有少量嗜酸性粒细胞F.激活的T细胞中含有少量嗜碱性粒细胞444.答案: C445.正常人巨噬细胞吞噬百分率为（）A.15%左右B.45%左右C.63%左右D.80%左右E.85%左右446.答案: C447.被称为“生物导弹”的是（）A.人源化抗体B.Fab 段C.嵌合受体D.ScFv与某些毒素的融合蛋白E.双特异性抗体448.答案: DA.间接凝集试验, 关于红细胞载体叙述错误的是（）B.新鲜红细胞能吸多糖类抗原, 吸附蛋白质能力差C.经醛化的红细胞易溶血, 不可反复冻融D.红细胞醛化后吸附蛋白质能力增强E.醛化红细胞-20C可保存1年以上F.将蛋白质偶联在红细胞上常用的偶联剂有戊二醛Sg职隅氮联苯胺449.答案: BA.马血清抗毒素经胃蛋白酶水解后, 其免疫原性降低是因为（）B.F（ab）2段具有双价抗体活性C.pFc段不能激活补体D.pFc段无任何生物学活性E.pFC不能结合FcRF.pFC不能通过胎盘450.答案: CA.在细胞表面粘附分子测定中, 酶免疫显色测定与酶免疫化学发光测定不同的是（）B.原理不同C.测定模式不同D.测定步骤不同E.酶作用的底物不同F.上述二者均不相同451.答案: DA.正常情况下, 细胞因子在血液中的含量（）B.极低C.中等浓度D.较高E.有时高有时低F.很高452.答案: AA.不受位阻效应影响, 更易发挥生物素活性作用的是（）B.BCNHSC.BCHZD.BHZE.光生物素F.生物素脱氧核苷三磷酸453.答案: A454.亲和素-生物素化碱性磷酸酶复合物的制备是将亲和素溶液与生物素化AP 按多少浓度比反应后制得（）A.1: 1B.2: 1C.3: 1D.4: 1E.5: 1455.答案: D456.与免疫固定电泳最类似的沉淀试验是（）A.对流电泳B.火箭电泳C.免疫电泳D.交叉免疫电泳E.放射免疫自显影技术457.答案: C458.下列哪个不是小分子抗体（）A.FabB.FvC.ScFvD.CHE.VH459.答案: D460.E花环分离法是用于分离（）A.单核细胞和淋巴细胞B.T细胞和B细胞C.单个核细胞D.红细胞E.白细胞461.答案: B462.下列哪项不是细胞因子的共同特点（）A.分子量大多为10〜60kDB.多数以双体形式存在C.具有多源性D.化学本质一般是多肽或糖蛋白E.具有高效性、多效性463.答案: B464.下列哪种物质表达过量与肿瘤的发展和扩散有关（）A.CD4分子B.CD8分子C.CD4分子变异体D.CD8分子变异体E.CD44分子变异体465.答案: E466.外周成熟的休止B细胞分为几个亚群（）A.CD4阴性细胞B.CD4阳性细胞C.B1细胞和B2细胞D.CD8阴性细胞E.B0细胞467.答案: CA.与放射免疫分析相比, 免疫放射分析最显著特点是（）B.使用单克隆抗体C.采用固相分离法D.反应属于非竞争性结合E.可以测定大分子和小分子抗原F.灵敏度较高468.答案: CA.下列有关放射免疫分析的叙述中, 错误的是（）B.以放射性核素作为标记物C.是一种定量检测技术D.主要用于检测抗原E.最后形成的免疫复合物中的放射性强度与标本中的待测抗原量呈正比F.定量分析时需同时作标准管469.答案: D470.免疫电泳不能用于（）A.抗原或抗体的成分分析B.无丙种球蛋白血症患者体液中蛋白质分析C.多发性骨髓瘤患者体液中蛋白质分析D.抗原蛋白定量E.多发性骨髓瘤血清M蛋白检测和鉴定答案: DA.457 .关于载体的选择, 正确的是（）B.醋酸纤维膜吸附蛋白的能力强于塑料板, 但对微量样品的吸附不完全C.高分子微颗粒载体含有的基团易与抗体蛋白形成化学偶联, 且结合容量大D.塑料制品吸附蛋白分子的稳定性和均一性好E.固相微颗粒因体积小, 不易与磁性材料组合使用F.膜载体吸附抗体蛋白一般是采用化学偶联法458.答案: B459.细胞粘附分子基因的多态性测定的验证方法是（）A.PCR-SSCPB.PCR-RFLPC.实时荧光PCR方法D.PCR-直接测序法E.时间分辨荧光免疫测定法460.答案: D461.与放射免疫分析的灵敏度成正比的是（）A.标记抗原浓度B.未标记抗原浓度C.标记抗原的比放射性D.标记抗体的浓度E.放射性核素的半衰期462.答案: C463.测定细胞内细胞因子的方法是（）A.ELISAB.ELISPOTC.免疫荧光法D.Northern 印迹法E.Southern 印迹法464.答案: BA.双特异性抗体的特点, 说法错误的是（）B.只能同时结合两个同种抗原C.是通过化学交联在体外构建的双价抗体分子D.是通过对小分子抗体基因的改造修饰, 使细胞直接表达的双抗体分子E.与抗原结合敏感性高, 亲和力大F.能同时结合两种不同的抗原465.答案: A466.Y&+T细胞的特点是（）A.占T细胞的大部分B.全部位于表皮及粘膜下C.执行特异性免疫功能D.可直接识别抗原分子E.以上都不正确467.答案: D468.标记蛋白质醛基的活化生物素是（）A.BHZB.MPBC.BNHSD.生物素脱氧核苷三磷酸E.光生物素469.答案: A470.化学发光测定法检测中性粒细胞杀菌功能的原理是（）A.中性粒细胞在吞噬经调理的金黄色葡萄球菌过程中, 出现呼吸爆发, 产生大量活性氧自由基, 同时产生微弱的发光现象B.中性粒细胞在吞噬经调理的抗体物质过程中, 出现呼吸爆发, 产生大量活性氧自由基, 同时产生微弱的发光现象C.中性粒细胞在吞噬经调理的补体物质过程中, 出现呼吸爆发, 产生大量活性氧自由基, 同时产生微弱的发光现象D.巨噬细胞在吞噬经调理的金黄色葡萄球菌过程中, 出现呼吸爆发, 产生大量活性氧自由基, 同时产生微弱的发光现象巨噬细胞在吞噬经调理的补体物质过程中, 出现呼吸爆发, 产生大量活性氧自由基, 同时产生微弱的发光现象471.答案: AA.亲和板结合分离法中, 间接法包被于塑料平皿或细胞培养板的抗体是（）B.CD20mAbC.CD2mAbD.兔抗人Ig抗体E.CD19mAbF.兔抗鼠IgG抗体472.答案: E473.能得到最纯免疫原的纯化方法是（）A.亲合层析法B.凝胶过滤法C.离子交换层析D.盐析沉淀法E.超速离心法474.答案: AA.T细胞杂交瘤, 融合率最高的是（）B.T细胞被激活6〜12小时C.T细胞被激活12〜24小时D.T细胞被激活24〜48小时E.T细胞被激活48〜72小时F.T细胞被激活72〜96小时475.答案: DA.在RIA这一反应系统中, 参与反应的有标记抗原, 已知抗体和待测抗原, 对这三种成分的要求是（）B.只需固定标记抗原量C.待测抗原的量要先标定D.标记抗原和已知抗体的量都是固定的E.只需固定已知抗体的量F.标记抗原、已知抗体、待测抗原的量均需固定476.答案: C477.下列说法正确的是（）A.异嗜性抗原就是类属抗原B.TI抗原只含B细胞表位C.隐蔽抗原就是自身抗原D.异嗜性抗原可理解为异种抗原E.佐剂就是弗氏佐剂478.答案: B479.下列哪项是细胞表面粘附分子的测定方法（）A.ELISAB.RIAC.流式细胞仪D.PCRE.RT-PCR480.答案: C481.不与SPA结合的成分是（）A.IgGlB.IgG2C.IgG3D.IgG4E.HRP答案: CA.472 .制备免疫球蛋白片段时, 不属二硫键的解离方法的是（）B.氧化法C.还原法D.改变PHE.酶裂解法F.澳化氯裂解法473.答案: C474.调节内皮细胞-结肠癌细胞间相互作用的粘附分子（）A.整合素B.选择素C.VCAM-1D.CD19E.CD45475.答案: BA.在对流免疫电泳中, 向阴极移动的IgG亚类是（）B.IgG1 和 IgG2C.IgG2 和 IgG3D.IgG3 和 IgG4E.IgG1 和 IgG4F.IgG1 和 IgG3476.答案: AA.可刺激T细胞生长, 被称为T细胞生长因子的是（）B.IL-1C.IL-2D.IL-3E.IL-4F.IL-6477.答案: B粘附去除法去除PBMC中单核细胞和粒细胞后, 淋巴细胞的纯度与活性能分别达到（）A.85%, 95%B.95%, 85%C.90%, 90%D.95%, 大于 95%1%, 1%478.答案: DA.关于超抗原, 下列说法错误的是（）B.只需极低浓度即可激活T细胞克隆, 产生极强免疫应答C.超抗原无MHC限制性D.超抗原的作用有严格的抗原特异性E.超抗原可参与机体的多种生理和病理效应F.超抗原的过强刺激可导致机体继发免疫抑制状态479.答案: CA.体内试验法测定中性粒细胞趋化运动, 下列说法错误的是（）B.健康人白细胞在皮肤窗处2〜3h开始聚集C.在皮肤窗处6小时细胞数可达10以上D.初期以中性粒细胞为主, 以后单核细胞逐渐增多E.初期以单核细胞为主, 以后中性粒细胞逐渐增多F.中性粒细胞的定向运动表现为趋化运动480.答案: DA.与配体结合后, 对T细胞活化有负调节作用的CD分子是（）B.CD2C.CD4D.CD8E.CD28F.CD152481.答案: E482.标记蛋白质氨基的活化生物素是（）A.BHZB.MPBC.BNHSD.生物素脱氧核苷三磷酸E.光生物素483.答案: CA.下列关于抗原抗体反应的特点表述, 正确的是（）B.抗原抗体反应有交叉反应, 故抗原抗体反应的特异性不强C.抗原抗体反应必须在抗体量略大于抗原量时, 形成的复合物最大D.抗原抗体复合物解离为游离的抗原与抗体后其生物学活性将发生改变E.抗原抗体反应形成的复合物又可解离为游离的抗原与抗体抗原抗体反应分为两个阶段, 两个阶段之间有明显的界限484.答案: DA.以下关于中枢免疫器官功能的描述, 错误的是（）B.是免疫细胞发生分化成熟的场所C.人类中枢免疫器官包括胸腺、骨髓D.骨髓是B细胞分化成熟的场所E.胸腺是T细胞分化成熟的场所F.中枢免疫器官是发生免疫应答的场所485.答案: EA.下列有关沉淀反应第二阶段的说法, 错误的是（）B.抗原抗体的特异性结合C.出现肉眼可见的沉淀线或沉淀环D.可用散射比浊测定反应结果E.几秒钟至几分钟内即完成F.可用透射比浊测定反应结果486.答案: DA.在用生物素标记酶时, 酶活性会降低的是（）B.HRPC.p-GalD.APE.LDHF.葡萄糖氧化酶487.答案: C488.时间分辨荧光免疫测定的特点不包括（）A.标记物荧光衰变时间长B.测定范围较窄C.标记物为镧系元素D.能排除非特异性荧光的干扰荧光强, 灵敏度高答案: B486 .抗体融合蛋白主要用来（）A.特异性治疗B.特异性诊断C.定位作用D.不受MHC限制E.以上都是487.答案: E488.均相酶免疫测定的优点不包括（）A.多用于小分子激素和半抗原的测定B.勿需分离游离的酶标抗原C.易于自动化分析D.不易受样品中非特异的内源酶的干扰E.灵敏度可达10〜9mol/L489.答案: D490.细胞增殖法适用于下列哪类细胞因子的检测（）A.促进细胞增殖的细胞因子B.TNFC.IFND.具有趋化活性的细胞因子E.细胞因子基因491.答案: AA.在T细胞的活化中, 最重要的协同刺激信号是通过下列哪一组粘附分子的相互作用所提供（）B.CD28/CD80 或 CD86C.CD8/MHC I 类分子D.CD4/MHC II 类分子E.CD2/CD58F.LFA-1/ICAM-1492.答案: A493.Ficoll分层液法分离的PBMC理想时层位于（）A.管底B.稀释的血浆与分层液交界处C.局限在稀释的血浆层D.分层液中部E.稀释的血浆层顶部494.答案: B495.用于血清或其他体液中可溶性粘附因子的ELISA方法（）A.一般采用双抗体夹心测定模式B.基本原理和操作步骤与其他蛋白类抗原的ELISA方法有较大差异C.一般采用双抗原夹心测定模式D.是一种均相免疫测定方法E.一般采用竞争法测定模式496.答案: AA.小分子抗体的优点, 说法错误的是（）B.可在大肠杆菌表达C.易于穿透血管或组织到达靶细胞D.生产成本低E.不含Fc段, 副作用小F.半衰期长497.答案: E498.血液中哪种可溶性粘附因子水平的测定可作为疾病严重程度及预后的辅助诊断指标（）A.P-选择素B.E-选择素C.L-选择素D.整合素E.粘蛋白样家族499.答案: B500.T细胞与SRBC形成E花环主要是因为其表面有（）A.CD4B.CD3C.CD28D.CD2E.CD8501.答案: D502.人IgG各亚类活化补体的能力依次是（）A.IgG1〉IgG2〉IgG3B.IgG2〉IgG3〉IgG1C.IgG3〉IgG1〉IgG2D.IgG3〉IgG2〉IgG1E.IgG2〉IgG1〉IgG3503.答案: C504.细胞病变抑制法适用于下列哪类细胞因子的检测（）A.促进细胞增殖的细胞因子B.TNFC.IFND.具有趋化活性的细胞因子E.各种细胞因子答案: C497 .血液循环中的淋巴细胞进入淋巴组织和器官的途径是（）A.通过胸导管B.通过上腔静脉C.通过毛细血管的后微静脉D.通过毛细血管的后微动脉E.以上都不正确答案: C498.11型干扰素的主要活性是（）A.抗病毒B.免疫调节C.抗肿瘤D.免疫排斥E.抗感染499.答案: BA.采用放射性核素法检测T淋巴细胞转化功能时, 3H-TdR加入至培养基的时间是（）B.G1 期C.G0 期D.M期E.G2 期F.S期500.答案: E501.对于X-性联高IgM综合征发生机制表达正确的是（）A.继发B细胞表达CD40L缺陷B.继发T细胞表达CD40L缺陷C.X染色体CD40L基因正常表达D.B细胞活化缺乏APC的辅助E.为X性联显性遗传502.答案: BA.CDC试验作HLA血清学分型的方法学评价, 下列说法不正确的是（）B.操作简便易行C.结果可靠, 重复性好D.需花大量时间去筛选抗血清E.HLA-DQ、-DR抗原分型所用的抗血清须经血小板吸收以除去针对II类抗原的抗体F.待检细胞应为纯化的B细胞503.答案: DA.对SLE的诊断价值极大, 且提示病情活动的ANA荧光图形是（）B.均质型C.斑点型D.核膜型E.核仁型F.胞浆型504.答案: CA.有关NK细胞杀瘤的叙述, 以下错误的是（）B.释放穿孔素和颗粒酶引起肿瘤细胞坏死或凋亡C.无需预先活化, 即可直接杀瘤D.可依赖抗体通过ADCC方式杀瘤E.通过Fas/FasL途径诱导肿瘤细胞调亡F.受MHC限制性505.答案: E506.系统性血管炎的血清标志性抗体是（）A.ANAB.ENAC.APLAD.ANCAE.ASMA507.答案: D508.可用于检测不同Ig类型的RF的方法（）A.胶乳颗粒凝集实验B.速率散射比浊法C.ELISAD.免疫比浊法E.定时散射比浊法509.答案: CA.抗原抗体反应中, 前带现象是指（）B.抗原过剩C.抗体过剩D.pH的变化而引起E.温度的变化而引起F.离子强度的变化而引起510.答案: B511.下列哪型超敏反应与细胞免疫过程相似（）A.I型超敏反应B.II型超敏反应C.III型超敏反应D.IV型超敏反应E.无512.答案: D513.下列属于隐蔽抗原的物质是（）A.AFPB.ABO血型物质C.甲状腺球蛋白D.受药物影响的细胞E.免疫球蛋白514.答案: C515.抗胰岛细胞抗体（APICA）的靶抗原是（）A.T细胞B.B细胞C.0细胞D.C3补体E.肾皮质上皮间质细胞516.答案: C517.当前较公认的诊断系统性红斑狼疮特异性最高的自身抗体是（）A.抗SSA/SSB抗体B.抗dsDNA抗体C.抗RNP抗体»抗核小体抗体E.抗Sm抗体答案: DA.512 .化学致癌物诱发的肿瘤, 其肿瘤抗原的显著特征是（）B.个体特异性C.种类多D.数量多E.不稳定F.特异性不强513.答案: A514.关于驰的特性’正确的是］A.具有同种异体特异性B.具有种属特异性C.CD4结合点D.CD8结合点E.是HLA复合体表达的产物515.答案: BA.下列关于IgE的特性描述, 错误的是（）B.是血清中含量最低的IgC.IgE的合成受遗传因素的调节D.为亲细胞抗体E.参与抗寄生虫感染F.引起II型超敏反应516.答案: EA.通常质控符号以AL表示, 其中A表示（）B.质控测定次数C.控制限D.控制限的测定值E.超出质量控制限的测定值的个数F.误差517.答案: D有关IV型超敏反应的组织损伤机制, 应除外（）C.A.CD『ML弁导的细胞毒作用D.皿、1细胞融趋化因子发挥致炎作用E.TNF对靶细胞的直接细胞毒作用F.巨噬细胞活化和释放溶酶体酶G.补体的激活产生补体裂解产物的过敏毒素作用518.答案: E519.介导I型超敏反应晚期相的最主要介质是（）A.组胺B.白三烯C.肝素D.腺苷酸环化酶E.血小板活化因子520.答案: B521.小鼠的主要组织相容性抗原为（）A.HLAC.H-2D.AgBH-1E.RLA522.答案: CA.在形成的连串均匀液滴中, 大量液滴是（）B.含有细胞C.含有淋巴细胞D.含被荧光染色的淋巴细胞E.不含细胞的空白液滴F.以上都不是523.答案: D524.免疫检测自动化的首要目的是（）A.提高工作效率和检测的精密度B.减低操作者劳动强度C.减少操作程序D.自动检测及校对E.提高检测的可靠性525.答案: A526.白细胞粘附缺陷病的发病机制是（）A.整合素嶷链印陷B.Btk缺陷C.IL受体突变D.DAF和CD59缺陷E.造血干细胞成熟障碍527.答案: AA.免疫测定中准确度与精密度的描述, 正确的是（）B.准确度反映的是测定值与其真值之间的关系C.准确度好, 精密度就好D.精密度反映的是测定值之间的关系E.精密度好的结果, 准确度一定好F.准确度与精密度是平行关系528.答案: A529.半抗原的特性是（）A.既有免疫原性, 又有免疫反应性B.只有免疫原性, 而无免疫反应性C.只有免疫反应性, 而无免疫原性D.只有与蛋白质载体结合才能与抗体结合E.只有与蛋白质结合才具有免疫反应性530.答案: C531.目前免疫比浊法中最常用的方法是（）A.散射比浊法B.速率透射比浊法C.分光光度计比色法D.免疫透射比浊法E.肉眼比浊法532.答案: AA.抗原抗体反应需要合适的温度才有利于二者结合, 其范围一般为（）B.4°C〜10°CC.11°C〜15CD.16C〜20CE.15C〜40CF.41C〜50C526答案: D527.重症联合免疫缺陷病有（）A.DiGeorge 综合征B.XSCIDC.WASD.Bruton综合征E.ATS528答案: B529.免疫自稳功能异常可发生（）A.病毒持续感染B.肿瘤C.超敏反应D.自身免疫病E.免疫缺陷病528.答案: D529.下列ANA中以第一位检出该抗体的患者命名的有（）A.抗dsDNA抗体B.抗SSA抗体C.抗RNP抗体D.抗DNP抗体E.抗Sm抗体530.答案: EA.流式细胞仪进行细胞分选时采用高压静电场, 则（）B.分选细胞充电, 未被分选的其他细胞和空白液滴不充电C.分选细胞不充电, 未被分选的其他细胞和空白液滴充电D.分选细胞和空白液滴充电, 未被分选的其他细胞不充电E.分选细胞和未被分选的其他细胞充电, 空白液滴不充电F.分选细胞、未被分选的其他细胞及空白液滴均充电531.答案: A532.新生儿从母乳中获得的Ig是（）A.IgA类抗体B.IgM类抗体C.IgG类抗体D.IgD类抗体E.IgE类抗体533.答案: A534.目前临床治疗药物监测最常采用的方法是（）A.FPIAB.荧光酶免疫分析C.TRFIAD.ELISAE.免疫比浊分析535.答案: A536.最早用人痘苗预防天花的国家是（）A.美国B.英国C.中国D.日本E.俄国537.答案: C538.花生四烯酸可通过脂氧合酶途径合成下列哪一种物质（）A.LTsB.或』C.PAFD.DAGE.%539.答案: A540.流式细胞仪光学系统的组成为（）A.激光系统B.激光光源与分光镜C.激光光源、分光镜与光束成形器D.激光光源、分光镜、光束成形器和透镜组激光光源、分光镜、光束成形器、透镜组、滤片和光电倍增管答案: E 535.OCV需连续测定同一浓度同一批号质控物（）A.30批次以上B.25批次以上C.20批次以上D.20批次以下E.15批次以下536.答案: C537.下列哪项是花生四烯酸经环氧合酶作用的产物（）AV%B.5-羟色胺C.组胺D.PAFE.LTs538.答案: A539.不属于I型超敏反应预合成介质的是（）A.组胺B.蛋白水解酶C.NCFD.ECF-AE.PAF540.答案: E541.抗原的基本性质是（）A.异物性和特异性B.免疫原性与免疫反应性C.抗原性与异物性D.理化复杂性与特异性E.异物性和免疫反应性542.答案: B543.与骨髓瘤患者基因相关位点主要存在于（）A.3号、13号和16号染色体B.2号、12号和15号染色体C.1号、11号和14号染色体D.4号、6号和17号染色体E.5号、15号和18号染色体544.答案: C545.青霉素可能导致（）A.I、II型超敏反应B.I、II、III型超敏反应C.II、IV型超敏反应D.I、II、IV型超敏反应E.I、II、III、IV型超敏反应546.答案: E547.下列可能影响神经元特异性烯醇化酶检测结果（）A.溶血B.碱性磷酸酶C.高血脂D.高血糖E.肌酸肌酶548.答案: A549.通常用ELISA测定的OCV应（）A.<5%B.<10%C.>10%D.<15%E.>15%550.答案: D551.抗骨骼肌抗体（AMSA）最常见于（）A.成年型重症肌无力B.SLEC.DMZD.自身免疫性肝炎E.系统性血管炎答案: A544 .再次免疫应答的主要抗体是（）A.IgAB.IgDC.IgMD.IgEE.IgG545.答案: E546.高滴度的均质型主要见于下列哪种疾病（）A.RAB.SLEC.慢性肝脏疾病D.传染性单核细胞增多症E.药物性狼疮547.答案: BA.下列关于自身抗体特性的描述, 错误的是（）B.自身抗体是自身免疫性疾病的重要标志C.病人血液中存在低效价自身抗体是免疫病特点之一D.某些自身抗体对疾病判断有高度特异性E.有些自身抗体与疾病活动性有关F.少数自身抗体被证实参与了免疫病理性损伤548.答案: B549.下列哪一类疾病是由于CIITA或RFX-5基因突变引起的（）A.MHCI类分子缺陷病B.MHC II类分子缺陷病C.ADA缺陷病D.WASE.AT答案: B548 .目前临床诊断淀粉样变性的“金标准”应当是（）A.尿蛋白检查B.血清蛋白免疫电泳分析检查C.血液中某些前体蛋白的检查D.利用组织学或免疫组化技术做组织学检查E.血液常规分析检查549.答案: DA.流式细胞仪的全程质控, 选择的质控品是（）B.FlowcountC.Immuno-TrolCellsD.Flow-SetFluoropheresE.Flow-checkFluoropheresF.以上均不对550.答案: B551.人类IgA的开始合成时期是（）A.胚胎15周时期B.胚胎30周时期C.新生儿期D.出生后3个月E.出生后4〜6个月552.答案: EA.肾移植时, HLA配型最为重要的是（）B.HLA-DP、HLA-CC.HLA-B.CD.HLA-DQ、HLA-CE.HLA-A.B.CHLA-DR、HLA-A.B553.答案: E554.外分泌液中含量最高的Ig是（）A.IgMB.IgGC.IgAD.IgEE.IgD555.答案: CA.人类血液中, 免疫球蛋白占血浆蛋白总量的（）B.5%C.10%D.15%E.20%F.30%556.答案: D557.一台好的流式细胞仪每秒钟可测定荧光染料粒子（）A.50 个B.40 个C.30 个D.20 个E.10 个558.答案: E559.能直接杀伤肿瘤细胞的细胞因子是（）A.EPOB.GM-CSFC.TGF- 0D.IL-2E.TNF- a答案: E556 .微量淋巴细胞毒试验又称为（）A.沉淀反应B.凝集反应C.补体结合实验D.标志的抗原抗体反应E.补体依赖的微量细胞毒试验557.答案: E558.具有J链的院是（）A.IgGlB.EC.sIgAD.IgEE.IgD559.答案: CA.流式细胞仪的绝对计数的校准, 选择的质控品是（）B.FlowcountC.Immuno-TrolCellsD.Flow-SetFluoropheresE.Flow-checkFluoropheresF.以上均不对答案: A559 .非抗原特异性循环免疫复合物的检测技术有（）A.理化检测技术B.补体参与技术C.抗球蛋白检测技术D.细胞技术E.以上均是560.答案: E561.诊断特异性是指下列哪项的百分率（）A.阳性B.阴性C.真阳性D.真阴性E.假阳性562.答案: D563.携带HLA-DR2基因的个体与下列哪种自身免疫性疾病密切相关（）A.类风湿关节炎B.寻常性天疱疮C.多发性硬化症D.桥本甲状腺炎E.胰岛素依赖型糖尿病答案: CA.562 .病毒性肝炎酶免疫检验中, 下列质控物最重要的是（）B.高值C.中值C.低值D.阴性值E.空白值563.答案: CA.幽裂原激活蛋白激酶活化, 后者与言十协同作用可以活化（）B.磷脂酶加C.Syk蛋白酪氨酸激酶D.Fyn蛋白酪氨酸激酶E.磷酸酯酶DF.组胺酶564.答案: AA.免疫防御功能低下时, 容易发生（）B.移植排斥反应C.自身免疫病D.超敏反应E.感染F.肿瘤566.答案: DA.阳性分型法进行HLA-D、DP分型时, 其反应细胞是（）B.预致敏淋巴细胞C.待测细胞D.纯合子分型细胞E.具有SD抗原的细胞F.淋巴细胞567.答案: A568.MHC- I类分子的结构域分为（）。

聚赖氨酸包被载玻片改良法时间:2011-09-01 17:34来源:生物吧作者:刘浩点击:324 次原位杂交和免疫组织化学是当前生物化学和分子技术进行基因及产物研究的常用方法,可确定各个细胞中mRNA和蛋白质在何时何处表达。

这两项细胞技术的成功与否,关键在于载玻片的正确原位杂交和免疫组织化学是当前生物化学和分子技术进行基因及产物研究的常用方法,可确定各个细胞中mRNA和蛋白质在何时何处表达。

这两项细胞技术的成功与否,关键在于载玻片的正确处理。

经典的载玻片处理技术用加有洗涤剂的水清洗载玻片数分钟后,再于水中浸泡30 min。

配制足量的500μg/ ml 多聚-L-赖氨酸水溶液,逐一浸载玻片。

经空气干燥后,贮于4℃, 1 周内使用。

在实践中我们发现,该方法操作不当,易导致试验脱片现象。

为确保各项重大试验质量,我们对经典方法进行改良,并取得很好的效果。

1. 清洗载玻片:(1) 用加有玻璃清洁剂的水,浸泡新的载玻片24 h。

(2) 清水冲洗载玻片后,用清水浸泡载玻片24 h。

(3) 用蒸馏水浸洗5 次,再用蒸馏水浸泡载玻片过夜。

(4) 次日用蒸馏水冲洗载玻片,晾干,装盒备用。

2. 包被载玻片:(1) 根据切片组织大小,决定包被载玻片的位置及面积大小。

(2) 用移液器吸取0. 1 % 多聚-L-赖氨酸作者单位:200092 上海第二医科大学新华医院上海儿科研究所10μl 置于载玻片预定位置,用枪头涂匀预定面积。

对多张载玻片逐一进行涂片。

(3) 肉眼观察载玻片预定面积内多聚-L-赖氨酸分布是否均匀,有皱缩的玻片予以剔除。

(4) 将载玻片平放,自然干燥,逐一做好标记。

(5) 将包被载玻片置标本盒内,贮于4 ℃备用。

(6) 根据切片数量多少,当天制备包被载玻片,当天使用。

改良后的载玻片处理技术,不仅可在包被前提供清洁好的载玻片,有利于一次包被成功,而且载玻片在包被前经过预定位置逐一精细涂片,并用肉眼观察和剔除皱缩玻片,从而确保了载玻片包被的质量。