医学遗传学实验讲义浙江大学医学院医学遗传学课程组2012年9月3日实验一人类外周血染色体标本制备一、实验目的通过实验了解和掌握人类外周血染色体标本培养和制备的基本方法。
二、实验原理正常情况下，外周血中的小淋巴细胞，几乎都处在G1期或G0期，外周血细胞中是没有分裂相的。
1960年，Nowell和Morhead证实，外周血中的小淋巴细胞可以在植物血凝素（phytohemagglutinin, PHA）或其它有丝分裂刺激剂的影响下，在形态上转变为淋巴母细胞，在培养中进行有丝分裂。
这样经过短期培养（colchicine），秋水仙素的处理，低渗和固定，就可以迅速而又简便地获得体外生长的细胞群体和有丝分裂相。
本方法已为临床医学、病毒学、药理学、遗传毒理学等方面广泛应用。
三、实验准备实验材料人外周血（淋巴细胞）实验器具离心机、恒温培养箱、恒温水浴箱、培养瓶、刻度离心管、注射器和针头（6 1/2号）、吸管、量筒、火柴、酒精灯、pH计、研钵、饭盒、超净工作台、镊子、载玻片、玻片盒、烧杯、染缸、试管架、玻璃铅笔或记号笔、显微镜、擦镜纸、吸水纸等。
药品和试剂1．培养液的配制RPMI1640培养基(含L-谷氨酰胺和碳酸氢钠) 80%小牛血清(56℃水浴灭活30分钟，灭活可破坏补体及一些污染的病毒) 20%植物血凝素PHA (主要成分是粘多糖和蛋白质,可用培养基溶解) 4%青霉素终浓度100U/ml链霉素终浓度100U/ml用3.5%NaHCO3调pH7.0～7.2，用玻璃滤器，抽滤灭菌。
在超净工作台，分装到培养瓶中（每瓶含培养基5 ml）。
培养液置于-20℃冰箱保存。
使用前从冰箱中取出，温育至37℃。
2．肝素浓度为0.2%，作为抗凝剂使用。
200 mg肝素粉末溶于100 ml生理盐水中。
高压灭菌，-4℃冰箱保存备用。
3．KCl浓度为0.075 M，0.559 g氯化钾溶于100 ml双蒸水中。
氯化钾作为低渗液的优点是染色体轮廓清楚，可染性增强，时间缩短。
