细胞粘附实验

一、实验目的通过本实验，了解粘附功能检测的方法，掌握检测原理和实验操作步骤，并对实验结果进行分析和讨论。

二、实验原理粘附功能是指细胞与细胞、细胞与基质之间的相互结合能力。

本实验采用细胞粘附实验，通过检测细胞在特定条件下与基质之间的粘附能力，来评价细胞的粘附功能。

三、实验材料1. 细胞：人胚胎肾细胞（HEK293）2. 培养基：DMEM培养基3. 细胞培养板：96孔板4. 洗涤缓冲液：PBS缓冲液5. 透明胶：用于标记孔位6. 实验试剂：（1）细胞粘附试剂：10%胎牛血清（FBS）（2）细胞脱附试剂：0.25%胰蛋白酶（3）细胞计数试剂：CCK-8四、实验方法1. 细胞培养：将HEK293细胞接种于96孔板，每孔100μl，置于37℃、5%CO2培养箱中培养24小时。

2. 粘附实验：（1）将细胞培养板中的细胞用PBS缓冲液洗涤两次，去除未贴壁的细胞。

（2）向每孔加入10μl的10%FBS，使细胞与基质粘附。

（3）将细胞培养板置于37℃、5%CO2培养箱中培养24小时。

（4）用透明胶标记孔位，以便后续观察。

3. 细胞脱附实验：（1）将细胞培养板中的细胞用PBS缓冲液洗涤两次。

（2）向每孔加入100μl的0.25%胰蛋白酶，使细胞从基质上脱附。

（3）将细胞培养板置于37℃、5%CO2培养箱中培养1小时。

（4）用透明胶标记孔位。

4. CCK-8实验：（1）将细胞培养板中的细胞用PBS缓冲液洗涤两次。

（2）向每孔加入10μl的CCK-8试剂，使细胞在CCK-8试剂的作用下进行代谢反应。

（3）将细胞培养板置于37℃、5%CO2培养箱中培养2小时。

（4）用酶标仪检测各孔的吸光度（OD值）。

五、实验结果与分析1. 粘附实验结果：观察细胞培养板，发现细胞在10%FBS的作用下与基质粘附良好，细胞形态正常。

2. 细胞脱附实验结果：观察细胞培养板，发现细胞在0.25%胰蛋白酶的作用下从基质上脱附，细胞形态基本保持。

3. CCK-8实验结果：（1）绘制细胞粘附曲线：以CCK-8试剂的OD值为纵坐标，细胞培养时间为横坐标，绘制细胞粘附曲线。

内皮细胞粘附实验步骤
咱先准备好东西哈。

得有内皮细胞，这可是主角呢。

然后是要用到的培养板，各种培养液、缓冲液之类的也不能少。

把内皮细胞养起来呀，就像照顾小宝贝一样。

把它们种在培养板里，给它们合适的温度、湿度和二氧化碳浓度，让它们舒舒服服地生长，一般是37度，5%的二氧化碳浓度哈。

接着呢，要处理一下内皮细胞，让它们处于一个合适的状态来做这个粘附实验。

这就好比给它们化个妆，让它们准备好迎接接下来的“客人”。

然后把要检测的细胞或者分子啥的加进去。

这些就像是来拜访内皮细胞的小伙伴。

这时候就看它们之间的互动啦，也就是粘附情况。

在这个过程中呢，要注意观察。

可不能马虎哦，就像盯着锅里煮的美食一样，时不时瞅一眼。

做完实验之后呀，还得检测粘附的效果。

这时候就可以用一些特殊的染色方法或者仪器检测啦。

比如说用荧光染色，染完之后内皮细胞和那些粘附上去的东西就会发出漂亮的光，就像小星星一样，然后通过仪器看看光的强度啥的，就能知道粘附得好不好啦。

宝子，这个内皮细胞粘附实验虽然有点小复杂，但是只要细心做，就肯定没问题哒。

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Transwell 小室细胞粘附实验
1）提前接种细胞并对细胞做不同处理（如转染或加药）。

此处选取1640培养基，具体情况视细胞种类不同而定。

2）实验前一天，准备铺胶，以每96孔板50μL量计算所需胶体积。

将matrigel 与1640培养基等体积混匀铺于96孔板，于超净台吹干过夜。

实验当天加100μL PBS/孔，1 h后用移液枪吸弃，洗去残胶。

3）将细胞用胰酶消化，血细胞板计数细胞密度，调整成50,000个细胞/mL，加到铺好胶的96孔板，每孔加100 μL，每种处理重复3个孔。

4）于细胞培养箱培养1 h后吸弃培养基，PBS洗两遍以去除未粘附细胞。

5）用100μL每孔甲醇固定细胞15分钟，吸出甲醇后PBS洗两遍。

6）用100μL每孔DAPI染色细胞15分钟，吸出染料后PBS洗两遍。

7）荧光倒置显微镜下计数不同处理下粘附的细胞。

实验名称：细胞粘附实验实验目的：1. 了解细胞粘附的基本原理和过程。

2. 掌握细胞粘附实验的操作方法。

3. 分析细胞粘附的影响因素。

实验材料：1. 细胞：人肺上皮细胞（A549细胞）2. 培养基：DMEM培养基3. 试剂：0.25%胰蛋白酶、胎牛血清、青霉素、链霉素、透明质酸酶、细胞粘附抑制剂（如RGD肽）4. 仪器：细胞培养箱、显微镜、离心机、吸管、培养皿、移液器等实验方法：1. 细胞培养：将A549细胞接种于培养皿中，置于细胞培养箱中培养，待细胞生长至80%左右时进行实验。

2. 细胞分离：使用0.25%胰蛋白酶将细胞从培养皿中分离，离心收集细胞沉淀。

3. 细胞浓度测定：将细胞沉淀重悬于DMEM培养基中，使用细胞计数仪测定细胞浓度。

4. 细胞粘附实验：a. 将细胞浓度调整为1×10^5个/mL。

b. 将培养皿分为实验组和对照组，实验组加入一定浓度的细胞粘附抑制剂，对照组不加。

c. 将细胞悬液加入培养皿中，置于细胞培养箱中培养。

d. 在不同时间点取出培养皿，观察细胞粘附情况，并拍照记录。

e. 使用显微镜观察细胞粘附情况，统计细胞粘附率。

实验结果：1. 实验组与对照组细胞粘附率比较：a. 在0小时时，实验组细胞粘附率为（±X）%，对照组细胞粘附率为（±Y）%。

b. 在1小时时，实验组细胞粘附率为（±X）%，对照组细胞粘附率为（±Y）%。

c. 在2小时时，实验组细胞粘附率为（±X）%，对照组细胞粘附率为（±Y）%。

2. 细胞粘附抑制剂对细胞粘附的影响：a. 在0小时时，加入RGD肽的实验组细胞粘附率为（±X）%，未加入RGD肽的对照组细胞粘附率为（±Y）%。

b. 在1小时时，加入RGD肽的实验组细胞粘附率为（±X）%，未加入RGD肽的对照组细胞粘附率为（±Y）%。

c. 在2小时时，加入RGD肽的实验组细胞粘附率为（±X）%，未加入RGD肽的对照组细胞粘附率为（±Y）%。

细胞粘附检测丨Cell Biolabs细胞粘附分析试剂盒解决方案细胞粘附即细胞与细胞外机制分子之间的相关作用，其在肿瘤细胞转移、浸润、胚胎发生等过程中起着重要的作用，例如，我们知道肿瘤细胞的一大特点是易转移，这主要就是因为肿瘤细胞比正常组织细胞粘附力低的原因，目前，细胞粘附机制也已成为癌细胞侵袭和转移研究的热点之一。

细胞粘附实验通常分为两类，即细胞-细胞粘附(cell-cell adhesion)和细胞-基质（cell-ECM adhesion）粘附。

其中细胞外基质（extracellular matrix,ECM）由细胞分泌到细胞外间质中的大分子物质，在细胞之间或细胞表面组装成网络状的高度水合的凝胶结构，ECM按照组成可分为三大类：1.结构蛋白：胶原（Collagen）和弹性蛋白（Elastin），其中，胶原是ECM中最主要的水不溶性纤维蛋白，目前已发现的胶原类型有20多种，I~Ⅲ型胶原含量最丰富。

2.粘着蛋白：包括：纤粘连蛋白（Fibronectin,FN）、层粘连蛋白（Laminin,LN），FN是一种大型的糖蛋白，可将细胞连接到细胞外基质上，LN也是一种大型的糖蛋白，是基膜的重要成分，是胚胎发育中出现最早的细胞外基质成分。

3.氨基聚糖（Glycosaminoglycan,GAG）与蛋白聚糖（Proteoglycan）：它们能够形成水性的胶状物，在这种胶状物中包埋有许多其它的基质成分。

Cell BioLabs针对于细胞粘附，提供全套细胞分析检测方案，除了细胞与ECM大分子粘附分析方案外，还有针对白细胞与内皮细胞之间（还有白细胞与上皮细胞之间、肿瘤细胞与内皮细胞之间）的粘附分析试剂盒提供。

如CytoSelect 48孔板细胞粘附分析试剂盒（纤连蛋白，比色法）#CBA-050——定量评估细胞粘附。

48孔板预先涂有纤连蛋白。

细胞与ECM大分子粘附分析结果图：将来自三种不同细胞系的血清细胞以100,000个细胞/孔的速度附着到包被有ECM分子的板上1小时，结果如上图白细胞与内皮细胞之间的粘附分析流程图：文章来源：艾美捷科技。

一、实验目的1. 了解细胞粘附的基本原理和过程。

2. 掌握蛋白粘附细胞实验的方法和步骤。

3. 分析蛋白粘附细胞实验结果，探讨蛋白粘附在细胞生物学研究中的应用。

二、实验原理细胞粘附是指细胞通过表面生化分子相互作用附着到邻近细胞或细胞外基质上的过程。

蛋白粘附是细胞粘附的重要形式之一，主要依赖于细胞表面特定蛋白与细胞外基质蛋白之间的相互作用。

本实验通过构建蛋白粘附模型，研究蛋白粘附在细胞生物学研究中的应用。

三、实验材料1. 细胞：小鼠成纤维细胞（3T3）2. 试剂：DMEM培养基、胎牛血清、胰蛋白酶、蛋白粘附实验试剂盒（包括细胞外基质蛋白、抗体、荧光标记抗体等）3. 仪器：细胞培养箱、倒置显微镜、激光共聚焦显微镜、酶标仪等四、实验方法1. 细胞培养：将小鼠成纤维细胞接种于6孔板，培养至对数生长期。

2. 细胞处理：按照蛋白粘附实验试剂盒说明书，将细胞外基质蛋白、抗体等试剂分别加入细胞培养液中，处理一定时间。

3. 细胞洗涤：用PBS缓冲液洗涤细胞3次，去除未结合的试剂。

4. 荧光标记：将荧光标记抗体加入细胞培养液中，处理一定时间，使细胞表面特定蛋白与荧光标记抗体结合。

5. 细胞观察：用倒置显微镜观察细胞形态，用激光共聚焦显微镜观察细胞表面蛋白的荧光标记情况。

6. 数据分析：对实验结果进行统计分析，探讨蛋白粘附在细胞生物学研究中的应用。

五、实验结果1. 细胞形态：实验组细胞形态与对照组相比，无明显差异。

2. 荧光标记：实验组细胞表面特定蛋白与荧光标记抗体结合，荧光强度明显增强。

六、实验讨论1. 本实验成功构建了蛋白粘附细胞模型，为研究蛋白粘附在细胞生物学研究中的应用提供了实验基础。

2. 实验结果表明，蛋白粘附在细胞表面特定蛋白与细胞外基质蛋白之间的相互作用中起着重要作用。

3. 蛋白粘附实验在细胞生物学研究中具有广泛的应用，如细胞信号转导、细胞迁移、细胞凋亡等。

七、实验结论本实验通过蛋白粘附细胞实验，成功构建了蛋白粘附模型，探讨了蛋白粘附在细胞生物学研究中的应用。

材料上的细胞SEM观察
SEM（细胞粘附）实验方法：
1．细胞接种到材料上；
2．5-7天取样或观察到细胞长势最好时取样；
3．吸弃原有培养基；
4．加入1mLPBS培养基吹洗材料* 3次
5．吸弃PBS加入2.5-3.0% 戊二醛（固定2.5－3h）；
6．吸弃戊二醛,30%,50%,70%,80%, 90%, 95%,各浸泡10-15分钟、100%浸泡10-15分钟三次；
7．准备好一个带盖子玻璃容器（如用过的青霉素瓶），加入一定量乙酸异戊酯（要能泡住材料），从无水乙醇中取出你的材料后放进去，盖好盖子，替换30min后进行临界点干燥；（如没有临界点干燥仪，也可置于真空冷冻干燥仪里面进行干燥50min-1h）；
8．临界点干燥后将样品固定在样品台上，进行喷金；
9. SEM观察。

红细胞粘附功能测定实验报告一、引言红细胞粘附功能是指红细胞在血液循环中黏附于血管内壁的能力。

红细胞粘附功能的异常与许多疾病的发生和发展密切相关，如血栓性疾病、心脑血管病变等。

因此，粘附功能的测定对于疾病的预防、诊断和治疗具有重要意义。

二、实验目的本实验旨在通过测定红细胞粘附功能，了解红细胞与血管内壁之间的相互作用，为相关疾病的研究提供实验依据。

三、实验原理红细胞粘附功能主要是通过红细胞表面的特定受体与血管内壁的黏附分子发生相互作用而实现的。

红细胞表面的受体主要是通过膜蛋白来实现的，而血管内壁的黏附分子主要包括选择素和整合素等。

实验中常用的红细胞粘附功能测定方法有流变学测定法、细胞粘附分析法和光学显微镜观察法等。

四、实验材料和方法1. 实验材料：- 血液样本：采集新鲜全血样本。

- 红细胞培养液：含有适宜浓度的离子、葡萄糖和血浆蛋白的缓冲液。

- 黏附分子抗体：选择与红细胞表面受体相对应的抗体。

2. 实验方法：- 步骤一：采集新鲜全血样本，并将其离心分离得到红细胞悬液。

- 步骤二：将红细胞悬液与黏附分子抗体共孵育一段时间，促使红细胞受体与抗体结合。

- 步骤三：通过离心分离红细胞，去除未结合的抗体。

- 步骤四：将处理后的红细胞悬液加入红细胞培养液中，使红细胞保持活性。

- 步骤五：利用流变学测定法、细胞粘附分析法或光学显微镜观察法，测定红细胞在不同条件下与血管内壁的粘附情况。

五、实验结果与分析根据实验所得数据，可以得出红细胞粘附功能的测定结果。

通过对红细胞在不同条件下与血管内壁的粘附情况的观察和分析，可以研究红细胞粘附功能的变化规律，为相关疾病的诊断和治疗提供依据。

六、实验结论通过红细胞粘附功能测定实验，我们可以了解红细胞与血管内壁之间的相互作用，探究红细胞粘附功能的变化规律。

这对于疾病的预防、诊断和治疗具有重要意义。

未来的研究可以进一步深入红细胞粘附功能的机制和调控方式，为相关疾病的治疗提供更加有效的手段。

细胞增殖的检测方法:四甲基偶氮唑盐法(MTT)MTT 商品名为噻唑蓝, 就是一种黄色的染料。

1983 年Mosmann 建立MTT比色法,用于检测细胞存活与增殖。

其原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT 还原为不溶于水的蓝紫色结晶-甲瓒(formazan)并沉积在细胞中,而死亡的细胞无此功能。

二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒,用酶联免疫分析仪测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。

在一定细胞数量范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。

此方法已广泛用于各种细胞增殖的检测、肿瘤细胞的生长、生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定[4-8]等。

此方法简便、灵敏且无放射性。

MTT 溶液需要放置在4℃避光保存,最好就是现用现配。

由于MTT 经还原所产生的产物甲瓒不溶于水,无法直接测定吸光度,需要被溶解之后才能检测。

这不仅使工作量增加,而且MTT 溶液具有致癌性。

需要注意的就是,MTT 法只能用来检测细胞相对数与相对活力, 但不能测定细胞的绝对数。

另外, 有研究发现过氧化物会降低MTT 测定的准确度,抑制将近95%的MTT 与O2－的反应,MTT 溶解产物甲瓒会吸附在纳米纤维上, 而致使检测的结果呈现假阴性。

内盐法(MTS)MTS 就是一种新型的MTT 类似物。

MTS 在偶联剂PMS 存在的条件下, 可被活细胞线粒体中的多种脱氢酶还原成水溶性的有色甲瓒产物, 其颜色深浅与活细胞数量在一定范围内呈高度相关,可用酶标仪检测。

它的优点在于无放射性、快速、安全、方便、灵活及特异性强,同时又克服了MTT、XTT 的缺点。

此方法已应用于细胞增殖的检测、药物敏感性试验、细胞毒性的检测等,且比MTT 法更加准确。

此方法在一定程度上也存在缺陷。

最新研究表明在96 孔板试验中, 靠外的孔液体易蒸发,对检测结果有一定影响[24],且不适合于猪淋巴细胞促有丝分裂反应的检测、细胞粘附能力测定:蛋白染料染色法测细胞粘附本法就是以蛋白染色剂如氨基黑10B来问接测定96孔板中的细胞数目,该法迅速可靠,还可用怍细胞形态学观察与染色细胞的照像。