液相色谱柱保存及再生

液相色谱柱再生色谱柱使用久了，会出现分离度降低，理论塔板数降低等柱效降低的现象，适当处理能使柱效恢复。

但不是所有柱子都能倒冲的，最好问问生产商。

不了解的话，还是按下面的方法处理一下试试。

常规处理: 硅胶、氧化铝、极性键合相色谱柱每一次用完后用低流速长时间的二氯甲烷或正己烷等溶剂冲洗;键合相硅胶色谱柱、离子交换色谱柱和凝胶色谱柱先用蒸馏水冲洗, 再用甲醇冲洗,然后用甲醇与蒸馏水以一定比例混合的溶液冲洗后过夜。

对于已使用一段时间后柱效下降的色谱柱可按以下方法进行再生。

再生处理包括活化(右→左)和净化(左→右)两种。

硅胶、氧化铝、极性键合相色谱柱按下列顺序冲洗: 三甲基戊烷或己烷←→三氯乙烷←→乙酸乙脂←→丙酮←→乙醇←→水。

键合相硅胶柱:蒸馏水←→甲醇(冲洗过程中可加入少量二甲基甲酰胺)。

离子交换树脂柱: 高浓度的NaCl溶液(1-2molL的NaCl溶液)可使大部分树脂再生,油脂等少数与树脂紧密结合的物质可用低浓度碱溶液(如0.1molL的NaOH溶液)冲洗, 酸性有机物吸附在固定相的用低pH缓冲液冲洗, 碱性有机物用高pH缓冲液冲洗, 然后再用蒸馏水←→甲醇←→二氯甲烷←→甲醇←→蒸馏水冲洗。

凝胶色谱柱: 由于凝胶色谱柱是根据被分离物质的分子量大小而分离物质,通常用稀的氢氧化钠或非离子型去垢剂(0.2%-1%NP-40或Lubrol)冲洗可除去大部分的结合物质,如果一些污染物仍然不能清除时,用24%或30%乙腈冲洗过夜可除去疏水蛋白,用30%-50%乙酸可除去亲水蛋白, 用蛋白水解酶处理可分解凝胶中剩余的痕量胃蛋白酶,然后再用蒸馏水←→甲醇←→蒸馏水冲洗。

已污染的色谱柱的处理: 因保留强的物质污染,流动相或样品中不溶物沉积于柱头,可用下列方法洗涤: 去除脂类可用四氢呋喃、乙腈或甲醇洗涤;去除蛋白质可用乙腈、丙醇和1%三氯乙酸进行梯度洗脱;一些高疏水性化合物可用乙腈或甲醇洗脱,同时反复注入100-200ml 的四氢呋喃。

液相色谱柱的维护与保养
液相色谱柱的维护与保养非常重要，可以延长柱的使用寿命并保证分离效果的稳定性。

以下是液相色谱柱的维护与保养的一些建议：
1. 保持柱的洁净：在使用结束后，及时用纯水和有机溶剂洗净色谱柱。

可以采用逆向流动的方法，即用纯水从柱底往上流动直到洗净。

避免使用酸碱溶液以及有机溶剂中的含有杂质的溶液来清洗，避免杂质残留。

2. 避免干燥：柱在储存或者不使用时要避免干燥。

可以用保湿的方式，例如在储存时使用密封塑料袋或保湿剂。

避免长时间暴露在空气中，避免干燥引起的柱损坏。

3. 正确使用柱：避免使用超过柱最大压力或流速的方法进行色谱分离，这会导致柱壁破裂或分离效果恶化。

遵守柱的使用说明和规格。

4. 定期检查：定期检查柱的使用情况，例如检查是否有柱壁表面损坏或吸附物的形成。

如果发现有问题，应及时更换色谱柱。

5. 柱的再生：某些类型的液相色谱柱可以通过柱的再生来延长使用寿命。

具体的再生方法可以参考柱的使用说明书或与供应商咨询。

6. 注意避免柱受到冲击：在搬运和使用过程中要轻拿轻放，避免柱受到冲击造成损坏。

总之，正确的维护与保养可以延长液相色谱柱的使用寿命并保证其分离效果的稳定性。

根据柱的材质和类型，还可以采取适当的措施进行再生以延长柱的使用寿命。

高效液相柱是消耗品，会随使用时间或进样的次数增加，出现色谱峰高降低，峰宽加大或出现肩峰，柱效下降。

需要定期进行彻底清洗和再生。

1、反相柱
分别用甲醇：水＝90：10、纯甲醇、二氯甲烷等溶剂着流动相，依次冲洗，每种流动相流经色谱柱不少于20倍的色谱柱体积。

然后再以相反的次序冲洗。

2、正相柱
分别用正己烷、异丙醇、二氯甲烷、甲醇等溶剂做流动相，顺次冲洗，每种流动相流经色谱柱不少于20倍的柱体积（异丙醇粘度大，可降低流速，避免压力过高）。

注意使用溶剂的次序不要颠倒，用甲醇冲洗完后，再以相反的次序冲洗至正己烷。

所有的流动相必须严格脱水。

3、离子交换柱
长时间在缓冲溶液中使用和进样，将导致色谱柱离子交换能力下降，。

用稀酸缓冲溶液冲洗可以使阳离子柱再生，反之，用稀碱缓冲溶液冲洗可以使阴离子柱再生。

用户还可以选择能溶解柱内污染物的溶剂为流动相做正方向和反方向冲洗。

但再生后的色谱柱柱效是不可能恢复到新柱的水平的。

如果柱子装反了，可以调回来，但可能会造成柱内担体塌陷。

在不得已的情况下尽量不要反装色谱柱。

1.色谱柱的活化30个柱体积，然后用甲醇/乙腈：水（50:50）冲洗10个柱体积，然后再用流动相平衡30柱体积。

=9：1冲洗30倍柱体积，再流动相平衡30个柱体积。

100%甲醇或乙腈冲洗30个柱体积，然后转换到流动相平衡。

用于反相色谱时，先用异丙醇或乙醇冲洗色谱柱50-100个柱体积，然后用甲醇/乙腈：水（50:50）冲洗10个柱体积，然后再用流动相平衡30柱体积。

50倍柱体积50/50乙腈/水活化平衡，然后再用流动相平衡30柱体积。

2.色谱柱的清洗保存和再生清洗：如使用缓冲盐，先用高比例水相冲洗30个柱体积，然后再转换到80%有机相冲洗30个柱体积。

再生：用95%水，甲醇，异丙醇，甲醇，95%水分别冲洗30个柱体积，在第一次用95%水时，进样10次100 μL DMSO。

清洗：100%乙醇0.3ml/min 3h，再用正己烷：异丙醇=9：1冲洗30倍柱体积并保存。

再生：根据不同类型正相柱选择。

[常规正己烷/异丙醇的柱子，乙醇（0.1%三氟乙酸）0.3ml/min 3h，乙醇0.3ml/min 3h，乙醇（0.1%二乙胺）0.3ml/min 3h，乙醇0.3ml/min 3h，正己烷：异丙醇=9：1冲洗30倍柱体积]清洗：用100%水冲洗30个柱体积去除盐，然后用100%甲醇或乙腈冲洗30个柱体积后保存在50%甲醇或乙腈中。

再生：先用高浓度盐的缓冲液清洗（浓度可以是5-10倍，不超过1M），然后再用100%水洗，50%乙腈或甲醇保存。

清洗：反相使用时同反相C18色谱柱，如短期不用，可用95%甲醇或乙腈保存;长期不用时需用异丙醇置换，最后用正己烷保存。

再生: NH2柱用于反相条件时，NH2键会水解，先用含1.0%NH3的乙腈-水(50:50)溶液冲洗30个柱体积，乙腈-水(50:50)冲洗30个柱体积，95%水/5%乙腈冲洗30个柱体积，异丙醇冲洗30个柱体积，95%乙腈/5%水冲洗30个柱体积并保存。

色谱柱的再生色谱柱的再生，这大概是一种美好的愿望，但是对于我们这种经费少的单位，只能死马当活马医治，所以再生的手段是必不可少的。

再生要根据色谱柱的具体类型来选择再生方式，当然，前面也说过了，再生这个词用在这里是不太恰当的。

那么什么问题会导致我们要对色谱柱进行再生呢通常，样品中含有一些对分析者来说不感兴趣的东西。

盐、脂质、含脂物质、腐质酸、疏水蛋白质和其它一些生物物质是一些可能在使用时与HPLC柱发生相互作用的物质。

这些物质有比分析者的目标物或少或大的保留值。

那些保留值较小的物质如盐类一般来说在空体积时就被冲出色谱柱。

这些非目标产物的干扰能被检测器检测到而且能形成色谱峰，气泡，基线上移或者是负峰。

如果样品成分在柱子中有很强的保留而且流动相溶液成分不足以把这些物质洗脱下来，多次上样后，这些吸附在柱子表面的物质通常就会积累在柱头。

这些行为通常只有通过平行实验才能发现。

有着中等保留值的样品能被缓慢洗出而且表现为宽峰，基线扰动，或者基线漂移。

有时候这些被吸附的样品成分累积到一定程度足以使他们开始形成新的固定相。

分析物能与这些杂质作用形成一定的分离机理。

保留时间会波动，拖尾会出现。

如果足够的污染产生，柱子的反压能超过泵所能承受的最大压力，使柱子无法工作以及在堵塞处产生空体积。

这时，我们就要对色谱柱进行再生，有的时候是和清洗混到一起的。

再生反相色谱柱1、首先倒转柱子。

2、以大约最佳流速的40%的流速冲洗柱子大约45-60分钟，使用的溶剂的顺序要按照水—甲醇—异丙醇—二氯甲烷—异丙醇—甲醇—水进行。

3、柱子转回正常方向，使用分析所用洗脱液平衡。

注意：在使用另外的淋洗方法的时候，一定要先用水开始冲洗以去除缓冲液，保证其后的洗脱液可以混溶。

详细见梯度洗脱需要注意到问题我也会另辟文章详细写一下流动相的互溶问题。

再生硅胶柱1、首先倒转柱子。

2、以大约最佳流速的40%的流速冲洗柱子大约45-60分钟，使用的溶剂的顺序要按照异辛烷（或己烷）—乙酸乙酯—干燥的异辛烷（或己烷）进行。

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液相色谱柱的使用及再生一、液相色谱柱的使用方法1.准备工作：在使用液相色谱柱之前，需要先进行柱前洗涤。

首先，将色谱柱和相关装置安装到系统中，并连接好进样器。

然后，使用纯溶剂通过色谱柱，将柱内的固定相洗涤干净。

这可用于去除残留的杂质和吸附在固定相上的杂质。

2.样品进样：将待分析样品溶解在合适的溶剂中，通过自动进样器或手动进样器将样品进样到柱中。

在进样过程中，要保证样品与液相色谱柱内的固定相充分接触，以获取准确的分析结果。

3.溶剂梯度：对于复杂的样品混合物，通常需要使用溶剂梯度来实现目标物质的分离。

溶剂梯度可以通过改变溶剂的组成比例或流速来实现。

在液相色谱仪中，可以使用梯度装置来实现自动的溶剂梯度。

4.分析条件控制：在进行液相色谱分析时，需要根据目标物质的特性来选择合适的分析条件，如流速、温度、检测器类型等。

这些条件将直接影响分析结果的准确性和重复性。

5.数据分析和解释：分析结束后，可以通过数据处理软件对所得数据进行处理和解释。

常见的数据处理方法包括峰面积计算、质量浓度计算、波长选择等。

二、液相色谱柱的再生技术1.清洗：随着柱使用时间的增加，固定相表面可能会积累附着物质，影响分离效果。

这时可以使用一些溶剂来清洗柱。

选择的清洗溶剂应该与分析柱内的固定相相溶，但不会溶解固定相。

常用的清洗溶剂包括醇类、有机溶剂和酸碱溶液等。

清洗过程中要保持流速适中，以充分冲洗柱内的固定相。

2.修饰：一些情况下，固定相表面可能出现活性减弱的情况，导致分离能力下降。

这时可以使用修饰剂来修复柱的活性。

修饰剂通常是一种能与固定相反应的化学物质，可以局部刷新固定相表面，恢复柱的活性。

3.再生：当固定相活性无法恢复，或者由于固定相老化等原因，完全更换液相色谱柱是常见的再生方法。

再生过程包括柱前洗涤、柱后洗涤、柱填充等多个步骤，需要根据具体柱的特性和使用情况来进行。

总结：液相色谱柱的使用方法和再生技术对于液相色谱分析的准确性和重复性具有重要意义。

液相色谱柱再生的方法液相色谱柱再生是指将已经使用过的液相色谱柱恢复到初始状态，以便再次使用。

液相色谱柱再生的方法有很多种，下面将介绍几种常用的方法。

首先，最简单的液相色谱柱再生方法是通过改变流动相的组成来实现。

在某些情况下，柱子可能被污染或堵塞，导致分离效果下降。

这时可以尝试改变流动相的组成，例如调整溶剂比例、改变缓冲液pH值等，来清洗和恢复柱子的性能。

这种方法适用于一些简单的样品分离。

其次，可以使用有机溶剂进行柱子再生。

有机溶剂具有较强的溶解能力，可以有效地去除一些难以清洗的样品残留物。

常用的有机溶剂有甲醇、乙醇、丙酮等。

将有机溶剂以一定流速通过柱子，可以将残留物洗脱出来，从而恢复柱子的分离性能。

另外，还可以使用酸碱溶液进行柱子再生。

酸碱溶液可以中和或溶解一些与柱子表面发生反应的物质，从而去除污染物。

常用的酸碱溶液有盐酸、硫酸、氢氧化钠等。

将酸碱溶液以适当浓度通过柱子，可以清洗掉附着在柱子表面的污染物，使柱子恢复到初始状态。

此外，还可以使用一些特殊的再生剂进行柱子再生。

这些再生剂具有较强的清洗能力，可以去除一些难以清洗的污染物。

常用的再生剂有氨水、硝酸、过氧化氢等。

使用再生剂时需要注意安全操作，避免对人体和环境造成伤害。

最后，还可以使用高温或超声波进行柱子再生。

高温和超声波都具有较强的清洗能力，可以有效地去除附着在柱子表面的污染物。

将柱子置于高温环境中或使用超声波清洗仪器，可以使污染物迅速溶解和脱落，从而恢复柱子的性能。

需要注意的是，在进行液相色谱柱再生时，应根据具体情况选择合适的方法，并注意操作规范和安全措施。

另外，柱子再生后应进行性能测试，以确保其分离效果和分析性能达到要求。

总之，液相色谱柱再生是保证柱子长期稳定使用的重要步骤。

通过合适的再生方法，可以有效地清洗和恢复柱子的性能，延长其使用寿命，并提高分离效果和分析准确性。

色谱柱再生问题分析及操作规程色谱柱再生问题分析当色谱柱使用一段时间以后，柱内由于各种原因，滞留了一些高沸点组分或氧化物等，除柱效有所下降外，还可能显现基线波动或“鬼峰”。

为了去除污染物，使柱效和基线恢复到原来的状态，称为色谱柱的再生。

色谱柱的再生和柱老化有确定区分和不同，它是柱在使用一段时间柱性能下降，经处理后尽量恢复到原来性能的过程。

A、色谱柱在以下几种情况必需再生处理a.使一段时间，柱效明显下降；b.柱被污染，特别是在程序升温时，基线漂移和噪声超过容忍程度或显现“鬼峰”；c.柱头塌陷，柱床短路或断位（在玻璃柱中简单发觉），而显现尖峰或双重峰；d.峰形展宽，保留时间明显变化；e.待分别组分和固定相表面非特异性相互作用，引起保留时间较短的峰拖尾或显现双峰；B、毛细管柱再生的几种方法a.用载气将色谱柱污染物冲洗出来；b.将柱头截去100mm 或更长一些；c.若使用交联的色谱柱，可在仪器上反复注射溶剂进行冲洗。

常用的溶剂依次为丙酮、甲苯、乙醇、氯仿和二氯甲烷，每次可进样5～10μL；d.交联柱在仪器上冲洗无效时，可把柱拆下来用二氯甲烷或氯仿冲洗，溶剂用量视柱的污染程度而定，一般20mL 左右。

C、色谱柱再生前应注意的问题当分析显现问题时，不能只考虑是柱问题，而立刻进行再生。

除上述情况外，还应考虑样品处理、进样技术、操作有无失误、数据处理参数有无更改等可能带来的问题。

a.衬管、预柱和检测器被污染也会引起基线不稳定、显现“鬼峰”或裂解峰；b.新的注射垫也会引起基线漂移和显现“鬼峰”；c.衬管密封欠佳、柱安装死体积或检测器固有特性也会引起较早显现峰的拖尾；d.分析系统发生变化（如漏气严重）也可能使保留时间突变；e.峰变宽，除柱效下降外也可能由柱外效应引起；f.进样量太大也会引起峰变宽、拖尾或保留时间变短；g.色谱柱长时间样品过载，保留时间也会变小等。

D、色谱柱再生时应注意的几个问题1.如前所述和色谱柱老化一样，不是温度越高越好，时间越长越好；建议不要使用长时间烘烤的方法，来处理受到污染的色谱柱，由于烘烤时，温度会把污染的残留物变成不能溶解的物质，再用溶剂清洗也无济于事；2.仪器在高灵敏度操作时，如：量程在1×10—11A/mV以下，痕量分析程序升温过程中，温度升到大于180℃后，基线明显漂移是不可避开的；3.不同类型柱子，再生方法不同；4.样品种类、组分、进样量不同或操作时间长短不同，再生方法也不同；5.仪器本身条件如：气源种类、纯度、净化条件、进样口结构和操作检测器不同，再生柱方法也有区分；6.高分子量组分污染色谱柱后，高温再生时间长会导致固定相的老化；使用交联或键合柱可以用溶剂漂洗再生，漂洗溶剂流动方向确定要从柱出口注入。

解析通用型反相液相色谱柱的再生液相色谱如何操作关于通用型反相液相色谱柱的再生：色谱柱污染后把筛板卸下来超声清洗对于色谱柱的污染，首当其冲的就是筛板，因此常用的做法就是把柱头卸下来，把筛板拿去超声清洗。

但是我们在拆卸过程中对色谱柱前端填料的损害远宏大于污染照成的损害，由于我们不是专业的。

因此建议这一步能不做就不做。

本身填装色谱柱和第6条相同，这一步做法几乎可以把此色谱柱判死刑了，我们的填装工具有什么呢？就是手工的，其填装压力远远小于原始的填装压力。

那么我们填装的结果会是个什么样也就很明显了。

在我看来，本身填装也就是练练手，谙习一下这个过程，要把色谱柱维护和修理好的可能性几乎为零。

用异丙醇冲洗再生后，柱子效果更差了这种情况我本身就碰到过，还好那根柱子原来就计划报废了，因此也没有照成多少损失。

但是这是什么原因呢？其实很简单，就是在我反向冲洗前没有把管路中的污染物冲洗干净就直接接了柱子。

所以说，方法是没有错的，色谱柱受污染时，我们应当先想到仪器也污染了。

液相色谱柱的结构及紧要功能液相色谱仪由高压液体泵分别系统、检测器及液相色谱柱（含柱温掌控系统）等三部分构成。

其中液相色谱柱的正确使用，是液相色谱工作的关键，也是接受液相色谱方法获得准的确验数据的必由之路。

一套无论多么完美的液相色谱仪，假如得不到优质的色谱柱支持，也只能成为一台液体输送泵而已，毫无价值可言。

反之，一根无论多么好的色谱柱，假如得不到完美的液相色谱仪的掌控，其作用与价值也会大打折扣。

所以，液相色谱仪的性能决议了液相色谱的技术掌控性能和数据采集与处理性能；液相色谱柱的性能直接关系到分别分析的精准性与适用性，必需达到很高的性能才能为科学试验供应强有力的数据支持。

二者必定相互影响相互促进。

液相色谱柱的结构及紧要功能:液相色谱柱由柱管、压帽、卡套（密封环）、筛板（滤片）、接头、螺丝（封头）与柱填料等构成。

柱管：多用不锈钢制成，若果使用时柱压不高于70kg/cm2时，也可接受厚壁玻璃或石英管，管内壁要求有很高的干净度。

高效液相色谱(HPLC)使用中常见故障及解决方法（一）峰型异常问题峰型问题是液相的主要问题，在做液相过程中，我们就是要变换不同的条件来改善不好的峰型，对于各种各样的异常峰，要区别对待，从主要问题出发，一个一个加以解决。

1、色谱图中未出峰。

解决方法：系统未进样或样品分解；泵未输液或流动相使用不正确；检测器设置不正确；针对以上情况成因作相应调整即可。

2、一个峰或几个峰是负峰。

解决方法：流动相吸收本底高；进样过程中进入空气；样品组分的吸收低于流动相。

3、所有峰均为负峰。

解决方法：信号电缆接反或检测器输出极性设置颠倒；光学装置尚未达到平衡。

4、所有峰均为宽峰。

解决方法：系统未达到平衡；溶解样品的溶剂极性比流动相差很多；色谱柱尺寸及类型选择不正确；色谱柱或保护柱被污染或柱效降低；温度变化造成的影响。

、5、所出峰比预想的小。

解决方法：样品黏度过大；进样品故障或进样体积误差；检测器设置不正确．定量环体积不正确；检测池污染；检测器灯出现问题。

6、出现双峰或肩峰。

解决方法：进样量过大；样品浓度过高；保护柱或色谱柱柱头堵塞；保护拄或色谱柱污染或失效；柱塌陷或形成短通道。

7、前伸峰。

解决方法：进样量或样品浓度高；溶解样品的溶剂较流动相极性强；保护柱或色谱柱污染或失效。

8、。

解决方法：柱超载，降低样品量；增加柱直径采用较高容量的固定相；峰干扰，对样品进行清洁过滤；调整流动相；硅羟基作用，加入三乙胺，用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相pH值；柱内烧结不锈钢失效，更换烧结不锈钢；加在线过滤器，对样品进行过滤；死体积或柱外体积过大，将连接点降至最低；尽可能使用内径较细的连接管；柱效下降，更换柱子；采用保护柱，对柱子进行再生。

9、出现平头峰。

解决方法：检测器设置不正确；进样体积太大或样品浓度太高。

10、出现鬼峰。

解决方法：进样阀残余峰，在每次进完样后用充足的时间来平衡和清洗系统；样品中存在未知物，改进样品的预处理；流动相污染，更换新流动相，尽可能现配现用，隔夜的流动相再次使用时要过滤；尽可能使用HPLC级试剂；流路中有小的气泡，打开Purge阀，加大流速排除。

液相色谱柱的使用注意事项及再生1、色谱柱的使用说明：（1）、色谱柱使用前注意事项：色谱柱的储存液无特殊说明，均为评价报告所示的流动相。

在使用前，一定要注意色谱柱的储存液与要分析样品的流动相是否互溶。

在反相色谱中，如用高浓度的盐或缓冲液作洗脱剂，应先用10％左右的低浓度的有机相洗脱剂过渡一下，否则缓冲液中的盐在高浓度的有机相中很容易析出，堵塞色谱柱。

（2）、流动相：流动相中所使用的各种有机溶剂要尽可能使用色谱纯，配流动相的水最好是超纯水或全玻璃器皿的双蒸水。

如果将所配得流动相再经过0.45μm的滤膜过滤一次则更好，尤其是含盐的流动相。

另外，装流动相的容器和色谱系统中的在线过滤器等装置应该定期清洗或更换。

以常规硅胶为基质的键合相填料通常的PH值适用范围是2.0-8.0，BDS C18适合于碱性化合物，PH值适用范围为2.0-10.0。

当必须要在PH值适用范围的边界条件下使用色谱柱时，每次使用结束后立即用适合于色谱柱储存并与所使用的流动相互溶的溶剂清洗，并完全置换掉原来所使用的流动相。

（3）、样品：样品也要尽可能清洁，可选用样品过滤器或样品预处理柱（SPE）对样品进行预处理；若样品不便处理，要使用保护柱。

在用正相色谱法分析样品时，所有的溶剂和样品应严格脱水。

2、色谱柱的保存（1）、反相色谱柱每天实验后的保养：使用缓冲液或含盐的流动相，实验完成后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟，洗掉色谱柱中的盐，再用甲醇冲洗30分钟。

注意：不能用纯水冲洗柱子，应该在水中加入10%的甲醇，防止将填料冲塌陷。

（2）、长期保存色谱柱：如色谱柱要长时间保存，必须存于合适的溶剂下。

对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中，正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中，离子交换柱可以储存于水（含防腐剂叠氮化钠或柳硫汞）中，并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。

储存的温度最好是室温。

3、色谱柱的再生因为色谱柱是消耗品，随着使用时间或进样次数的增加，会出现色谱峰高降低，峰宽加大或出现肩峰的现象，一般来说可能是柱效下降。

液相色谱柱的再生液相色谱是如何工作的液相色谱柱的再生高效液相色谱法中反相柱的清洁和再生反相色谱是迄今在高效液相色谱中应用广泛的技术，紧要是由于它适用于分析极大多数的非极性物质和很多的可离子化的及离子化合物。

大多数用于反相色谱的固定相都是天然的疏水物质，因此，分析物是依照它们与固定相的疏水相互作用的大小来分别的，含有疏水的机制也能以同样的保留方式分别。

固定相上还有少数物质，如混合相（例如苯基－己基）、末端封闭和非末端封闭种类和极性嵌入相－也存在于这些键合硅胶上。

还有很多填料用于反相色谱，包括聚合物，聚合物表面涂上硅胶和氧化铝，无机－有机混合物，涂层氧化锆，和石墨化碳。

不同种类的固定相有他们本身的优点和缺点。

反相色谱柱利用各种流动相和添加物可以有很多的应用。

一些技术利用添加物可以更改或修饰填料的表面。

有时候这些添加物有可能会污染键合相表面。

硅胶表面由于有着疏水键合相而有一些别的化学性质。

残留的硅烷醇存在于全部的硅胶键合填料中。

这些硅烷醇具有弱酸性，因此能与某些待分析物合基质成分，特别是碱性成分。

由于硅烷醇的pKa值大约是4.5，离子化能在中性pH条件下发生因此与阳离子产生静电相互作用就有可能发生。

较老的A型硅胶能容纳高浓度金属离子（有时候100ppm或更多），而这能使硅胶表面的酸性更大甚至能发生金属鳌合现象或清除一些化合物。

残留硅烷醇在非末端封闭的硅胶合短链键合相如 C2或C4上更让人苦恼。

使用者必需清楚他们所用的固定相表面特别性质和可能的分析物－固定相表面的相互作用，这样当他们使用反相方法时才能考虑到可能的基质相互作用。

例如，特别疏水的样品基质如玉米油，高芳香物质，和蜡能粘住固定相装填表面并且更改他们的性质。

含有蛋白质物质的生物流体也能吸附在装填表面。

尽管分析者想尽最大努力来保护HPLC柱子，某些分析物－基质污染能使固定相受到有害的影响。

当柱子被污染，它的色谱行为和没被污染的柱子会有些不同。

被污染的柱子能产生反压问题。

液相色谱柱的使用注意事项及再生注意事项：1.柱子的贮存：液相色谱柱在非使用状态下应尽量避免暴露在空气中，空气中的灰尘和湿气会影响柱子的性能和寿命。

因此，柱子应存放在其原始包装中，并防止受潮。

2.近似与探头：在使用之前，必须对柱子和探头进行连接和融合。

在操作中，要确保柱子和探头之间无泄漏，否则会影响分析的准确性。

3.流速控制：流速是液相色谱分析中很关键的一点。

流速过高会导致柱子产生过高的压力，甚至超过其承载能力，从而导致柱子破裂。

因此，在进行液相色谱分析时必须要控制好流速。

4.保持温度稳定：液相色谱柱对温度敏感，温度的变化会影响分离效果。

因此，在液相色谱分析中必须保持柱子的温度稳定。

5.避免样品堵塞：柱子中的微孔会很容易受到样品的堵塞，导致柱子无法正常使用。

因此，必须确保样品中无固体杂质，并且在注射之前先过滤样品，以避免样品堵塞柱子。

柱子再生方法：1.水洗法：将柱子安装在逆相液相色谱系统中，用纯水进行洗脱，如果必要可以加入少量的乙酸、甲酸或其他有机溶剂进行洗脱。

该方法适用于非极性化合物的柱子。

2.有机溶剂洗脱法：将柱子连同柱底栓安装在逆相液相色谱系统中，用纯有机溶剂或者含有有机溶剂的溶液进行洗脱。

该方法适用于极性化合物的柱子。

3.极性液洗法：将柱子置于极性液相溶剂中，如醇类、酸类或含有酸性成分的有机溶剂中进行洗脱。

该方法适用于阴离子柱等需要去除离子物质的柱子。

4.特殊洗脱法：对于一些具有独特功能的柱子，如固体相萃取柱、色譜柱等，可以根据其特殊性质采用相应的洗脱方法。

除了以上的再生方法，还有一些更加复杂的再生方法，如使用酸碱溶液、有机溶剂进行再生等。

用户在使用液相色谱柱时，应根据柱子的具体情况及实际分析样品的特性选择合适的再生方法。

总之，液相色谱柱的正确使用和再生对于高效可靠地进行液相色谱分析具有重要影响。

使用者应严格按照操作规范进行操作，并根据不同柱子的特性进行合适的柱子再生方法，以延长柱子的使用寿命和保证分析的准确性。

液相色谱柱选择方法及保存液相色谱常见问题解决方法液相色谱柱选择方法及保存一、液相色谱柱选择方法液相色谱柱选择的简单思路1.确定分别目的确定你的应用是否要求高分别度、短分析时间、高灵敏度、长柱寿命，低的操纵本钱等等。

2.评估分析物的化学性质评估分析物的化学性质.诸如化学结构、溶解性、稳定性等等。

3.选择合适的色谱柱了解色谱填料的物理和化学性质。

液相色谱柱的保存1.反相色谱柱每天试验后的保养：使用缓冲液或含盐的流动相，试验完成后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟，洗掉色谱柱中的盐，再用甲醇冲洗30分钟。

注意：不能用纯水冲洗柱子，应当在水中加入10%的甲醇，防止将填料冲塌陷。

2.长期保存色谱柱：如色谱柱要长时间保存，必需存于合适的溶剂下。

对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中，正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中，离子交换柱可以储存于水中，并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。

储存的温度*好是室温。

一）压力异常操作压力的变化往往是故障的征兆。

A、没有压力显示，没有流动相流动：原因解决方法1、电源问题接通电源，开机2、保险丝被烧坏更换保险丝3、掌控器设定不正确或设定失败实行恰当的设定、修理或更换掌控器4、柱塞杆折断更换柱塞杆5、泵头内有空气溶剂脱气、启动泵抽出空气6、流动相不足补充流动相、更换入口滤头7、单向阀损坏更换单向阀8、漏液拧紧或更换手紧接头B、流动相流动正常，但没有压力显示：原因解决方法1、仪表损坏更换仪表2、压力传感器损坏更换压力传感器C、压力持续偏高原因解决方法1、流速设定过高调整流速设定2、柱前筛板堵塞反冲色谱柱、更换筛板、更换色谱柱3、流动相使用不当或缓冲盐的结晶沉淀使用恰当的流动相、冲洗柱塞杆。

4、色谱柱选择不当选择恰当的色谱柱5、进样阀损坏清洗或更换进样阀6、柱温过低提高温度7、掌控器失常修理或更换掌控器8、保护柱堵塞清洗或更换保护柱9、在线过滤器堵塞清洗或更换在线过滤器D、压力持续偏低：原因解决方法1、流速设定过低调整流速2、系统漏液确定漏液位置并维护和修理3、色谱柱选择不当选择恰当的色谱柱4、柱温过高降低温度5、掌控器失常维护和修理或更换掌控器E、压力波动：原因解决方法1、泵中有气体溶剂脱气、从泵中除去气体2、单向阀损坏更换单向阀3、泵密封损坏更换泵密封4、脱气不充分重新过滤一遍、溶剂脱气5、系统漏液确定漏液位置并维护和修理6、使用梯度洗脱由于流动相粘度的变化引起的压力波动二）漏液通常可以通过拧紧或更换管路接头来解决漏液的问题。

实验室的工作人员如果有长时间不在实验室的行程，那么他们是需要把色谱柱保存起来的，那该用什么办法能比较好的保存色谱柱呢？今天小编就带大家一起来了解一下，涨涨知识吧！一、气相毛细管柱保存方法:气相色谱柱的保存相对比较简单，具体步骤可以参考如下：1、将毛细管柱从气相色谱仪上取下来；2、将毛细管柱的柱两端分别用废旧的隔垫进行密封；3、将两端封好后的色谱柱放置于原包装盒内，气相色谱柱的保存就完成了。

二、液相色谱柱的保存方法液相色谱柱的保存不像气相柱那么简单，它往往需要保存在特定的溶剂中，正确的保存溶剂可以有效的提高柱子的寿命。

保存时间的长短和色谱柱基质的类型都会影响到保存溶剂的正确选择。

（一）保存时间色谱柱根据保存时间的长短可分为短期保存和长期保存。

①短期保存：一般不超过72小时即可视为短期保存，此时色谱柱可以直接保存在方法流动相中，但含有缓冲盐流动相的要保存在不含缓冲盐的过渡流动相中，如流动相是乙酸铵-甲醇（95-5），保存溶剂是水-甲醇（95-5）。

②长期保存：如色谱柱暂时不用，需要长时间保存，必须经清洗后存于合适的溶剂下。

长期保存条件下，合适溶剂的选择就需要依据色谱柱的基质类型来确定了。

下面就从不同的基质类型角度谈一谈色谱柱的正确保存。

（二）基质类型按照基质类型，色谱柱可以分为硅胶基质和聚合物基质，这两种基质溶剂的选择是不一样的。

无论哪种基质类型，色谱柱的清洗是色谱柱保存关键的第一步，要旨就是将色谱柱的溶剂逐步替换成保存溶剂。

三、硅胶基质色谱柱保存方法常见硅胶基质色谱柱的保存溶剂：备注：氨基柱、氰基柱可以反相使用，也可以正相使用，保存方法参考其使用方式，正相方法使用就参考正相柱保存方法，反相方法使用就参考反相柱方法保存。

1、清洗保存步骤反相：乙腈-水（95-5）10倍冲洗柱体积，梯度过渡到纯乙腈10倍柱体积。

如果没有梯度程序，可中间增加水-乙腈（50-50）过渡。

正相：用20-30 倍柱体积的异丙醇清洗，因异丙醇粘度较大可适当放低流速，再用正己烷冲洗10倍柱体积保存。

液相色谱柱保存方法
液相色谱柱是分离纯化分子化合物的重要仪器，在实验室中使用广泛。

为了保证其长期有效的使用，需要注意柱的保存方法。

首先，应该在柱使用完毕后及时进行保养和清洗。

在柱未使用时，应将其保持在适宜的温度和相对湿度下，避免受到过高或过低的温度、湿度影响，导致柱内填料老化、变性等不良变化。

其次，液相色谱柱在保存时一定要注意不要受到轻微或严重的外力振动，避免对柱内填料产生不良影响，同时也要避免柱内液相受到振动而失去平衡。

最后，柱的保存位置应该在干燥、通风良好的地方，并且在柱保存期间应该避免阳光直射或受到强烈的紫外线照射，避免柱内填料老化或变性。

综上所述，液相色谱柱的保存方法非常重要，只有在正确的保存方法下，才能保持柱的稳定性和使用寿命，确保实验结果的准确性和可靠性。

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