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大肠埃希菌的鉴定流程及相应试验结果下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
文档下载后可定制修改，请根据实际需要进行调整和使用，谢谢！本店铺为大家提供各种类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，想了解不同资料格式和写法，敬请关注！Download tips: This document is carefully compiled by this editor. I hope that after you download it, it can help you solve practical problems. The document can be customized and modified after downloading, please adjust and use it according to actual needs, thank you! In addition, this shop provides you with various types of practical materials, such as educational essays, diary appreciation, sentence excerpts, ancient poems, classic articles, topic composition, work summary, word parsing, copy excerpts, other materials and so on, want to know different data formats and writing methods, please pay attention!一、引言随着生活水平的提高，食品安全问题备受关注。
大肠埃希氏菌O157H7方法学验证报告实验目的本实验的目的是验证大肠埃希氏菌O157：H7的存在与定量，并确定是否符合相关卫生标准。
实验设计本实验采用了标准菌落计数法和定量PCR法来定量大肠埃希氏菌O157：H7的数量。
实验组包括大肠埃希氏菌O157：H7菌液的不同浓度，作为对照组的菌液中没有大肠埃希氏菌O157：H7实验步骤1.培养基的准备：在制备LB固体培养基后，用无菌铁锹将培养基倒入无菌平板上，倒置放置，待凝固。
2.大肠埃希氏菌O157：H7菌液的准备：取一定量的大肠埃希氏菌O157：H7菌株液体培养物，接种入LB液体培养基中，放置在摇床上振荡培养。
3.菌液的稀释：将大肠埃希氏菌O157：H7菌液稀释成不同浓度，分别为10^-1、10^-2、10^-3、10^-44.菌液的接种：在已凝固的培养基表面均匀涂布不同浓度的大肠埃希氏菌O157：H7菌液，同时在一个区域以相同方式接种无菌菌液作为对照组。
5.培养：将接种好的培养基板置于恒温恒湿培养箱中，以37℃培养24小时。
6.菌落计数：观察培养基表面的菌落情况，使用菌落计数器进行菌落计数。
7.定量PCR：取培养基上菌落较多的区域，提取DNA，并进行PCR反应。
通过所得的PCR产物浓度，定量大肠埃希氏菌O157：H7的数量。
结果和讨论通过菌落计数法的结果，我们可以得到大肠埃希氏菌O157：H7在不同浓度时的菌落数。
根据定量PCR的结果，我们得到大肠埃希氏菌O157：H7的基因拷贝数，并与标准曲线进行比较。
根据对照组的结果，我们可以确定实验的准确性和可靠性。
本实验验证了大肠埃希氏菌O157：H7的存在与数量，并且发现大肠埃希氏菌O157：H7的菌落数与基因拷贝数具有相关性。
这些结果表明，我们可以通过菌落计数法和定量PCR法来定量大肠埃希氏菌O157：H7的数量，从而判断食品是否受到污染，是否符合相关卫生标准。
在实验过程中，我们还发现了一些问题和改进的方向。
文件编号：************
大肠埃希菌检查原始记录
1.培养基及菌种
胰酪大豆胨液体培养基配制批号： 麦康凯液体培养基配制批号： 麦康凯琼脂培养基配制批号： 菌种编号： 2.增菌预培养
取1： 供试液 ml(相当于1g 或1ml 供试品),接种至 ml （经方法适用性试验确认）的胰酪大豆胨液体培养基中，混匀，30-35℃培养18-24小时
3.选择和分离培养
①取上述培养物 ml 接种至
ml 麦康凯液体培养基中，42-44℃培养24-48小时
培养起止时间： ；培养箱编号： ；培养温度： ℃ 备注：“+”代表浑浊，“
-”代表未发生浑浊
②取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂平板上，30-35℃培养18-72小时 培养起止时间： ；培养箱编号： ；培养温度： ℃ 结果判定： □检出 □未检出
检查人/日期： 复核人/日期：。
大肠埃希菌的鉴定流程及相应试验结果下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor.I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic articles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!大肠埃希菌的鉴定流程与试验结果解析大肠埃希菌，通常简称为E.coli，是一种常见的肠道细菌，广泛存在于人体和动物的肠道中。
养生坊大肠菌群检验原始记录表检样名称：样品编号：检验依据：大肠菌群（MPN/100ml）检验方法：每个样品，选择三个连续稀释度的样品稀释液。
1：10稀释度接种三管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管10ml；1：100和1：1000稀释度接种三管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管1ml。
将接种管置于36±1℃培养48±2h。
观察试管的产气情况：检查导管内是否有气泡产生，如所有LST肉汤管均未产气，则可报告为大肠菌群阴性。
稀释倍数第一稀释倍数1:10 第二稀释倍数1:100第三稀释倍数1:1000结果菌落数取样日期：检验时间：检验员：检样名称：样品编号：检验依据：大肠菌群（MPN/100ml）检验方法：每个样品，选择三个连续稀释度的样品稀释液。
1：10稀释度接种三管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管10ml；1：100和1：1000稀释度接种三管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管1ml。
将接种管置于36±1℃培养48±2h。
观察试管的产气情况：检查导管内是否有气泡产生，如所有LST肉汤管均未产气，则可报告为大肠菌群阴性。
稀释倍数第一稀释倍数1:10 第二稀释倍数1:100第三稀释倍数1:1000结果菌落数取样日期：检验时间：检验员：检样名称：样品编号：检验依据：大肠菌群（MPN/100ml）检验方法：每个样品，选择三个连续稀释度的样品稀释液。
1：10稀释度接种三管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管10ml；1：100和1：1000稀释度接种三管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管1ml。
将接种管置于36±1℃培养48±2h。
观察试管的产气情况：检查导管内是否有气泡产生，如所有LST肉汤管均未产气，则可报告为大肠菌群阴性。
稀释倍数第一稀释倍数1:10 第二稀释倍数1:100第三稀释倍数1:1000结果菌落数取样日期：检验时间：检验员：。
XX公司
食品微生物检验记录
检品编号：检品名称：
【大肠菌群】按GB 4789.3-2010第二法平板计数法进行检验
环境条件：温度：湿度：
仪器设备：超净工作台编号：；培养箱（36℃±1℃）编号：
电子天平编号：
培养基与试剂：（配制日期：年月日）
①结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）；②无菌生理盐水；③煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤
样品操作
取 5 份独立包装的样品，分别取（）、、、、做为测试样品，按如下述操作，测得结果；
每份测试样品加入225 mL无菌生理盐水，均质，制成1:10样品均液（调节pH值为6.5~7.5），吸取 1 mL（1:10）样品均液至9 mL灭菌生理盐水中做10倍递增稀释。
选、和稀释液检测，培养基为结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA），℃，培养h（从月日: 到月日: ）,
挑选10个不同类型典型和可疑菌落，接种煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤管，℃培养h（从月日: 到月日: ）。
标准规定：（标准号：）
n=5 c= m= CFU/g（mL）M= CFU/g（mL）结论：□符合规定□不符合规定
检验者：复核者：检验日期：。
食品中大肠埃希氏菌检验原始记录样品编号：检验开始时间：年月日样品名称：检验完成时间：年月日检测项目：大肠埃希氏菌检测依据：GB4789.38-2012一、MPN计数法（第一法）：1.样品稀释：无菌操作称（量）取样品25g加入盛有225ml的无菌磷酸盐缓冲液的无菌均质杯中，8000r/min~10000r/min均质2分钟，做成1∶10样品液；若样品为液态，吸取25ml 样品至盛有225ml无菌磷酸盐缓冲液的锥形瓶（预置适当数量的无菌玻璃珠）中，震荡混匀，作为1:10的样品匀液。
调样品匀液pH至6.5~7.5。
取1∶10样品匀液1ml加入到盛有9ml磷酸盐缓冲液稀释管中，混匀，做成1∶100样品均液。
根据对样品污染状况的估计，按上述操作，依次制成十倍递增系列稀释样品匀液。
每递增一次，换用1支1ml无菌吸头。
2.初发酵：每个样品，选取3个适宜的连续稀释度的样品匀液（液体样品可选择原液），每个稀释度接种3管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管接种1ml（接种量超过1ml，则用双料LST肉汤），36±1∶培养24±2h，观察倒管内是否有气泡产生，对于24±2h产气者进行复发酵。
对于未产气者，则继续培养48±2h，观察，产气者进行复发酵实验。
如所有LST肉汤管均未产气，即可报告大肠埃希氏菌结果。
3.复发酵：用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种于提前预温至45∶EC 肉汤管中，放入带盖的44.5±0.2∶水浴箱中。
水浴的水面应高于肉汤培养基页面，培养24±2h，检查小导管是否有气泡产生，如未有气泡产生则继续培养至48±2h。
记录24h和48h内产气的EC肉汤产气管数，如所有EC肉汤管均为产气，即可报告大肠埃希氏菌MPN结果；如有产气，则进行EMB平板分离。
4.EMB平板分离：用接种环取培养物分别划线接种于EMB平板，36±1∶培养18~24h，观察平板上有无具有黑色中心光泽或无光泽的典型菌落。
表：2.1-024微生物限度检查记录（通用）1. 常规法：取供试品10為1,用胰酪大豆胨液体培养基稀释至 100ml ，用匀浆仪等适宜的方法混匀，制成1:10供试液。
2. 薄膜过滤法：取供试品10mi ,用胰酪大豆胨液体培养基稀释至 100ml ，用匀浆仪等适宜的方法混匀，制成1:10供试液。
吸取1:10的供试液10ml ,过滤，加0.1%无菌蛋白胨水溶液 300ml 分 三次冲洗，每次100ml ;冲洗后，将滤膜正贴于胰酪大豆胨固体培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基 上，每种培养基平行制备 2个平皿。
按平皿法测定其菌数。
胰酪大豆胨液体培养基（配制批号:）、麦康凯液体培养基（配制批）麦康凯琼脂培养基（配制批号: ）供试液制备微生物限度检查记录、需氧菌总数检查30〜353〜5）、霉菌、酵母菌总数检查20C〜25C,5〜7天）三糖铁琼脂斜面穿刺接种 （18〜24h ）三、控制菌检查 （30-35 C ）检验者:表：2.1-024号:结论本品经按《中国药典》2015年版“非无菌产品微生物限度检查法”进行检验，结果审核者:微生物限度检查记录（丸剂）供试液制备供试液。
胰酪大豆胨增菌 （18〜24h ）RV 沙门选择培养木糖赖氨酸脱氧胆酸分离培养（18〜48h ）胰酪大豆胨液体培养基（配制批号:）麦康凯琼脂培养基（配制批号:）四、沙门菌检查 （30 °C 〜35C ） 胰酪大豆胨液体培养基（配制批号： ）、RV 沙门增菌液体培养基（配制批号： ）,木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基（配制批号:）、三糖铁琼脂（配制批号：五、耐胆盐革兰阴性菌检杳胰酪大豆胨液体培养基（配制批号：）、肠道菌增菌液体培养基（配制批号：）,紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基（配制批号：审核者：检验者: 表：2.1-024阴性对照阳性对照三、大肠埃希菌检查）、麦康凯液体培养基（配制批结果□检出大肠埃希菌□未检出大肠埃希菌（规定：不得检出/g）四、沙门菌检查（30°C〜35C）胰酪大豆东液体培养基（配制批号：）、肠道菌增菌液体培养基（配制批号：）,紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基（配制批号：、表: 2.1-024 微生物限度检查记录（蛇胆川贝液）三、大肠埃希菌检查胰酪大豆胨液体培养基（配制批号：）、麦康凯液体培养基（配制批号：）麦康凯琼脂培养基（配制批号：）胰酪大豆胨液体培养基（配制批号：）、RV沙门增菌液体培养基（配制批号：）,木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基（配制批号：）、三糖铁琼脂（配制批号：）审核者：检验者:表：2.1-024 微生物限度检查记录（30〜353〜5天）、霉菌、酵母菌总数检查20C〜25C, 5〜7天）1、 口服液体药用聚酯瓶：取数个试瓶，加入1/2标示容量的氯化钠注射液，将盖旋紧，振摇1分钟，即得供试液。
品名: 批号: 检验日期:
二、大肠埃希菌检查按ZLSOP 微生物限度检查操作规程检查
供试液制备和增菌培养
取本品加无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液(配制批号: )至100 ml，
用匀浆仪混匀，即得1:10供试液；取相当于1g或1ml供试品的供试液接种至
ml的胰酪大豆胨液体培养基(配制批号: )中，混匀，培养温度℃，
培养24小时，培养箱型号: 培养箱编号wxzl 。
选择和分离培养
取上述培养物1ml接种至100 ml麦康凯液体培养基(配制批号: )中，
培养温度℃，培养小时，培养箱型号: 培养箱编号
wxzl ；取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂培养基(配制批
号: )平板上，培养温度℃，培养72小时，培养箱编号wxzl 。
阳性对照试验
同供试品的大肠埃希菌检查，对照菌的加量不大于100cfu，（大肠埃希菌菌
种来源：，大肠埃希菌菌种编号：）
阴性对照试验
以pH 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液代替供试液按大肠埃希菌检查法检查，结
果见下表：
注: ＋代表麦康凯琼脂平板上有菌落生长，—代表麦康凯琼脂平板
上无菌落生长。
结论 :
检验人: 日期: 复核人: 日期:。
