手把手教你做出仿制药四条溶出曲线

创新药溶出曲线方法开发案例共享一、背景介绍随着医疗技术的不断发展和创新药物的不断涌现，药物研发领域也愈发火热。

药物的质量控制是保证药品安全性和有效性的重要环节之一，而溶出曲线方法是评价药物释放行为的关键手段之一。

本文将共享一个创新药溶出曲线方法开发的案例，探讨在研发过程中的方法选择和优化，为读者提供经验共享和借鉴。

二、案例介绍本案例针对一种新型抗癌药物的溶出曲线方法开发展开。

在研发初期，针对该药物的性质特点和临床研究需求，需要建立一种准确、可靠的溶出曲线方法来评估药物在体外释放的行为。

三、方法选择1. 针对性选择溶出测试仪器在选择溶出测试仪器时，需考虑该药物的释放特性和适用范围。

根据药物的溶出速率和释放机制，选择了一款高灵敏度的自动溶出测试仪器，以确保溶出曲线的准确性和稳定性。

2. 确定溶出介质和试验条件针对该药物的特性，结合临床研究需求，通过一系列前期试验，确定了最适宜的溶出介质和最佳的试验条件，以保证溶出曲线的可重复性和准确性。

3. 方法优化与验证通过多次试验和方法优化，选定了最佳的溶出曲线方法。

并进行了多次验证，确保该方法能够稳定、准确地评估该新型抗癌药物的体外释放行为。

四、结果展示经过方法的选择和优化，最终成功建立了针对该新型抗癌药物的溶出曲线方法。

所得到的溶出曲线图示清晰、稳定，能够准确地反映药物在体外释放的行为，为药物的临床研究提供了重要的依据。

五、实际意义通过该案例的共享，不仅展示了在创新药物研发过程中，溶出曲线方法选择和优化的重要性，同时也为类似研发工作提供了宝贵的经验和参考。

在药物研发领域，创新药物溶出曲线方法的开发具有重要的意义，可以更好地评估药物的释放行为和药效特性，促进药物研发的进程。

六、结语在药物研发领域，创新药溶出曲线方法的开发是一个复杂而重要的技术工作。

通过本文所共享的案例，希望能够为相关领域的研究人员提供一些借鉴和启发，让创新药物研发更上一层楼。

也期待在未来的研发工作中，能够有更多的创新方法和技术得到发展和应用，为医药行业的进步做出更多的贡献。

应用四条溶出曲线筛选厄贝沙坦片处方工艺刘德智;李鹏【摘要】After compare the f2 factors of 4 dissolution profiles obtained from water , acetate buffer solu-tion, hydrochloric acid solution and phosphate buffer solution due to self-developed products and reference product, the final formulation is determined. By compare the different f2 factor due to homemade products with different excipients content (Formulation 1~5) and the reference product (Lot No.:3A292), we found that when the content of lactose, microcrystalline cellulose, croscarmellose sodium carboxymethyl cellulose, hydroxypropyl methyl cellulose, silica and magnesium stearate is 18.60%, 14.34%, 4.65%, 1.16%, 2.71%and 0.39% respectively, the f2 factor of homemade product is similar with the reference product. What’s more, t he process is stable and repeatable.%采用比较自研处方与参比制剂（亦称原研制剂）在水、醋酸盐缓冲液、盐酸、磷酸盐缓冲液中四条溶出曲线的f2因子，确定自研处方。

手把手教你做出仿制药四条溶出曲线书立读完本文大约需要8分钟2016 年 3 月 5 日,国务院办公厅印发了关于开展仿制药质量和疗效一致性评价的意见,仿制药一致性评价工作正式展开;仿制药一致性评价工作中,首先需要评价的是仿制制剂与参比制剂在体外溶出曲线要一致;然而,将仿制制剂与参比制剂做到体外四条溶出曲线一致,并不是一件容易的工作;作者将平日的工作经验总结出来,欲与大家交流分享;开始前的准备将 BCS 再次分类生物药剂学分类系统BCS,biopharmaceutics classification system是 1995 年由Amidon 提出的基于药物溶解性质和渗透性差异的分类系统,分为四类;对于体外四条溶出曲线而言,溶解性性质比渗透性更实用,因此根据溶解性质的差异将BCS 再次分类,分为A 类Ⅰ 和Ⅲ和B 类Ⅱ 和Ⅳ;之所以这样二次分类,是因为Ⅰ 和Ⅲ、Ⅱ 和Ⅳ 分别在体外呈现出相同的溶解度性质;将化合物根据 pH-溶解度差异来分类仿制药质量一致性评价·口服固体制剂溶出曲线测定与比较指导原则中提出,在进行溶出度实验之前,建议绘制化合物 pH-溶解度图;那么根据 pH-溶解度的差异性,也可以将化合物分为两类：一类是溶解度不存在 pH 依赖性或差异性;暂且将饱和溶解度无 pH 依赖性的原料药分为a 类;另一类是溶解度存在 pH 依赖性或差异性,其饱和溶解度随 pH 值增加而增加,或随 pH 值增加而降低;将这类化合物分为 b 类,比如 NAISD 类的布洛芬、双氯芬酸钠等;这样分类如何应用呢举个例子;如表 1 所示,双氯芬酸钠在不同介质中的饱和溶解度差异性较大,再结合根据上述 BCS 的二次分类,那么可将双氯芬酸钠可定义为 Bb 类化合物;之所以这样区分,是为了建立自我工作模型,以后在工作遇到相同的化合物,直接进行套用,从而降低工作量;如何快速有效地做出四条溶出曲线根据化合物性质不同,其溶出曲线难易程度也是各有差别;－ Aa 类－首先,最简单的化合物模型属于 Aa 类,即高溶解性无 pH 依赖性药物;如果 Aa 类药物的参比制剂RLD呈现出四条溶出曲线如图 1,那么在处方筛选工作中可选择任意一种介质作为区分介质;当然,如果是速释制剂,建议选择低 pH 介质,如 pH1.0 或 pH1.2,因为其更好的能更好的模拟体内溶出环境;如果参比制剂的四条溶出曲线不一致,即呈现出 pH 依赖性如图 2,这说明参比制剂中存在一种或几种 pH 依赖性辅料,而自制处方和参比处方的辅料用量不一致;如图 2 和图 3 示例中,在 pH1.0 介质中,仿制制剂与参比制剂的 f2 值为 80；然而在pH6.8 和水中,f2 值为 35 和 23;之所以差异较大,原因在于参比制剂中 pH 依赖型辅料的用量,远大于参比制剂的用量;这种情况需要将这些辅料用量调至跟参比一致或接近;常见存在 pH 依赖性的辅料有海藻酸钠、卡波姆、尤特奇 EPO等等;－ Ab 类－对于 Ab 类化合物,其参比制剂的溶出或释放曲线呈现出 pH 依赖性一般是因为化合物的pH-溶解度性质;如果参比制剂的四条曲线呈现出一致,那可能是由于辅料抵消了原料药的 pH-溶解度性质;对于 A 类化合物,尤其是 BCS 3 类化合物,除了在较高转速下考察溶出度或释放度,建议也要对比不同转速的溶出度差异,因为原料药的高溶解度可能掩盖制剂工艺过程中参数的不一致或者崩解剂用量的差异;总体而言,A 类化合物相对比较容易调整至四条曲线与参比制剂一致;－ B 类－根据 BCS 定义,BCS Ⅱ 和Ⅳ 类原料药在 pH1.0~7.4 中,最高剂量不能溶于 250 ml 的介质中;由于溶解度较低这一特质,溶出度释放也会偏慢,会造成处方或制备工艺细节在溶出曲线中被放大,因而增加了体外四条溶出曲线一致性的难度;除了共性的问题,对于 B 类原料药,做溶出曲线时还可能存在个性问题：① 每一条溶出曲线都比 RLD 快通过处方筛选,优化崩解剂用量0%~常规用量、亲水性/疏水性辅料比例、原料药粒径增大粒径后,每一种介质中仿制制剂的溶出仍然比参比制剂快;这种现象说明影响参比制剂的溶出行为的关键因素不是处方因素,而是制备工艺参数;如果制粒时间过短,那么制得的颗粒就会比较疏松、孔隙率比较大;对于易溶解的 A 类化合物来说,溶解后可以形成新的孔道,有利于整体药物的溶出;但对于 B 类化合物来说,由于低溶解性,其对工艺参数会更为敏感;如果制粒时间过长,也会存在问题;我在之前工作中,就碰到过两个BCS Ⅱ 类化合物过度制粒的例子;一个例子是,先在处方筛选时采用手工制粒,此后在放大处方时采用 625 所的湿法制粒机进行制粒;结果是,小试处方跟参比制剂一致,但放大时仿制制剂在四种介质中均比参比制剂溶出度慢如图 4;另一个例子是这样的：处方筛选时,无论如何仿制制剂的溶出度均比参比制剂快,而采用湿法制粒机制粒后,只有在固定参数、固定时间15~25 min下,溶出曲线才一致如图 4;以上两个例子中的溶出曲线不一致,均是由于存在制粒参数引起的,也就是说,制粒是关键参数;遇到类似情况,建议采用 DOE 的实验方案,设计出合理的参数空间;但是,基于目前的审批现状,找出关键参数是不够的,还需要保障工艺是受控的;② 三条溶出曲线对上,一条快于或慢于 RLD这是制剂工作者最纠结的情况之一,常常出现在 Bb 类化合物上;例如,在 pH1.0、pH4.0、pH6.8 中 f2 值≥50 或者甚至是 80,但在 pH5.0 中的 f2 值惨得可怜;原因是：pH1.0 和 pH4.0 条件下,溶解度较低,累计溶出度会受到本身溶解度的影响pH6.8 中属于易溶,15 min＞85%pH5.0 条件刚好是最有区分的时候这种情况下,应该按仿制药质量一致性评价口服固体制剂溶出度曲线测定与比较指导原则的建议进行操作：「对于溶出度受 pH 值影响较大的药物,需要在多种 pH 介质中进行考察,必要时可细分至0.5;」如何选择表面活性剂的最佳用量对于 B 类化合物,pH 水平、胆盐或其他表面活性剂的共存等因素,都能很大程度上影响药物的溶解性,从而影响吸收的速度和程度;在体外实验中,常常需要添加一定量的表面活性剂来增加溶解度,以达到漏槽条件;但如何选择表面活性剂的最佳用量却是一个难题：如果用量太高,则溶出太快,不存在区分性；如果用量太低,则溶出太慢;中国、美国、日本的规定是这样的：CFDA发布的仿制药质量一致性评价口服固体制剂溶出度曲线测定与比较指导原则建议,表面活性剂的浓度在 0.01%~1.0w/v依次增加；FDA的1092溶出度试验的开发和验证中提到,表面活性剂的用量,首先应满足表面活性剂的CMC,其次是能够满足漏槽条件；日本规定的用量也是一个用量筛选过程,与 CFDA 一致;鉴于「仿制药一致性评价工作」的初衷是通过体外溶出实验减低体内生物等效的风险这一点,建议使用体内相关的生物介质来测定原料药的饱和溶解度,然后测定化合物在不同浓度表面活性剂中的饱和溶解度,选择两者相接近;生物相关介质如下：这里采用一个 FDA 的 QbD 案例作为说明;案例中,测定了原料药在生物相关介质和不同浓度 SLS 中的浓度,结果如表3：表 3.原料药在生物相关介质和不同浓度 SLS 中的浓度如表 3,化合物在 1.0% SLS 介质中与生物相关介质中的饱和溶解度比较接近,所以选取1.0% SLS 介质以及药典中的规定的 2.0% SLS 作为溶出介质;如图 5 所示,化合物在 2.0% SLS 中仿制制剂与参比制剂的溶出度一致,但是在体内并不等效;如图 6 所示,化合物在 1.0% 的介质中,能够检测到故意变更的工艺参数原料药粒径,并且得到的结果,能够判断是否生物等效;图 6. 不同粒径样品在1%中的溶出SDS体外一致,体内未必一致需观察现象结果有时候,体外四条曲线一致,但在体内却未必一致,可能是因为选择的溶出方法没有区分力,或者说溶出度的结果没有区分力;对于 A 类化合物来说,其体外溶出现象与参比制剂并不一致;可能存在这样的情况,虽然仿制制剂和参比制剂在四条溶出曲线一致,但属于两种不同的机理,参比制剂为崩解溶出,而仿制制剂为溶蚀溶出,这样可能会增加体内生物不等效的风险;由于不同的溶出机理,所以处方筛选时溶出后的可能现象结果比数据结果还要重要;例如：普通片崩解时,需要注意观察：RLD 崩解为颗粒还是粉末,是「崩解」还是「溶蚀」仿制制剂的崩解时间与参比制剂的崩解时间是否会有差异仿制制剂衣膜溶解的时间与参比制剂溶解的时间是否有差异肠溶微丸溶出时,需要观察：耐酸过程中 RLD 是否变色拉唑类耐酸过程中常常变色肠溶层是被溶解还是被撑破对于膜控系统的缓释微丸,需要观察：RLD 释放后微丸是否变大不溶物残留情况如何仿制药胶囊壳与参比制剂胶囊壳溶解的时间是否有差异……基于溶出过程中观察到的现象,有助于判断参比制剂与自制制粒释药机制是否一致,也有助于为处方调整提供方向;四条溶出曲线并不难四条溶出曲线并不难,通过理解原料药性质、pH-溶解度关系、辅料是否有依赖性,然后再通过 DOE 实验设计,细致的观察实验过程中的现象,对存在不符合逻辑的现象、结果进行探索和验证,你就可以轻松搞定仿制药一致性评价中的溶出曲线;你学会了吗参考文献1Gordon L. Amidon,, Vinod P. Shah, John R. Crison ；ATheoretical Basis for a Biopharmaceutic Drug Classification: The Correlation ofin Vitro Drug Product Dissolution and in Vivo Bioavailability,PharmRes,1995,123:413-420.2仿制药质量一致性评价·口服固体制剂溶出曲线测定与比较指导原则31092溶出度试验的开发和验证4Dressman,J.B,Amidon,G.L,Dissolution testing as a prognostic tool fororal drug absorption:immediate release dosage forms.Pharmaceutical Research151,11-225Quality by Design for ANDAs: An Example for Immediate-Release DosageForms。

【附件一】如何测得原研品多条特征溶出曲线指导原则——针对参与试验的药品检验所或生产企业一、原研制剂的数量至少3~5批，其中1批至少200片，其他批可为100片。

每批含量均应在97.0%~103.0%。

二、查询既有质量标准检索该产品所有药典的质量标准、进口质量标准和相关文献（如美国FDA溶出曲线数据库：/scripts/cder/dissolution/index.cfm和《日本橙皮书——多条溶出曲线数据库》：国家新药审评中心网站/ →主页右侧“日本药品体外溶出试验信息库”）。

三、溶出介质的配制由于原研品在研发检测时，均是按照该国药典溶出介质配制法，故建议根据原研品国别，选用相应溶出介质，而不采用中国药典配制法。

如既有质量标准或文献有更为针对性的介质配制法，也可参照遵循。

各国药典缓冲液配制法具体如下：1. 欧洲药典配制法(1) pH1.0~2.2 盐酸溶液pH值1.0：精密量取盐酸溶液9.0ml，加水稀释至1000ml，摇匀，即得。

其他pH值溶液：量取一定体积的0.2mol/L盐酸液（量取盐酸18.0ml，加水稀释至1000ml，摇匀，即得），加水稀释至200ml，摇匀，即得。

pH 1.2 1.3 1.4 1.5 1.6 1.7 1.8 1.9 2.0 2.1 2.20.2mol/L盐酸液(ml)85.067.253.241.432.426.020.416.213.010.27.8(2) pH3.8~5.8 醋酸盐缓冲液2mol/L醋酸溶液：取120.0g冰醋酸（经查，冰醋酸密度为1.049g/ml，故体积约为114ml），加水稀释至1000ml，摇匀，即得。

取下表中规定物质各量，加水溶解并稀释至1000ml，摇匀，即得。

pH 3.8 4.1 4.3 4.5 4.7 4.9 5.1 5.2 5.3 5.4 5.5 5.8三水醋酸钠(g)0.67 1.5 1.99 2.99 3.59 4.34 5.08 5.23 5.61 5.76 5.98 6.23 2mol/L醋酸液(ml)22.619.517.714.011.89.1 6.3 5.8 4.4 3.8 3.0 2.1(3) pH4.5~8.0 磷酸盐缓冲液取6.80g磷酸二氢钾，加一定体积0.2mol/L氢氧化钠液（取8.0g氢氧化钠，加水溶解并稀释至1000ml，即得）和适量水溶解后，再加水稀释至1000ml，摇匀，即得。

仿制药质量一致性评价—普通口服固体制剂溶出曲线测定与比较指导原则（草案）1 概述根据国食药监注[2013]34 号文《国家食品药品监督管理局关于开展仿制药质量一致性评价工作的通知》要求，特制订了本指导原则。

本原则适用于仿制药质量一致性评价中普通口服固体制剂溶出曲线测定方法的建立和溶出曲线相似性的比较。

2 背景固体制剂口服给药后，药物的吸收取决于药物从制剂中的溶出或释放、药物在生理条件下的溶解以及在胃肠道的渗透，因此，药物的体内溶出和溶解对吸收具有重要影响。

体外溶出度试验常用于指导药物制剂的研发，评价制剂批间、批内质量的一致性，以及评价药品处方工艺变更前后质量和疗效的一致性等。

通常采用多条溶出曲线测定药物的溶出行为，相对体内试验具有更高的灵敏度和更强的区分能力，可更好地反映制剂质量的特点。

本次普通口服固体制剂仿制药质量一致性评价主要采用比较体外多条溶出曲线相似性这一技术手段进行。

尽管仿制制剂和参比制剂的溶出曲线相似并不意味着两者一定具有生物等效，但该法可降低两者出现临床差异的风险。

3 溶出试验方法的建立比较仿制制剂与参比制剂溶出曲线时，应建立能客观反映制剂特点、具有适度的灵敏度和区分力的方法。

可参考有关文献，并充分考虑药物的pH-溶解度曲线及pKa 等理化特性，考察溶出装置、溶出介质、搅拌速率和取样间隔期等溶出试验条件，确定适宜的试验条件。

3.1 溶出仪溶出度试验推荐使用篮法、桨法，必要时可对其进行适当改装。

一般篮法选择50～100 转/分钟，桨法选择50～75 转/分钟。

在溶出度试验方法建立的过程中，转速的选择应由低到高。

若转速超出上述规定应提供充分说明。

所使用仪器需经过校准，改装后仪器需充分评价其必要性和可行性。

3.2 溶出介质溶出度试验应尽可能根据药物的性质，并充分考虑胃肠环境的特性，采用能更好地反映药物体内溶出环境的多种溶出介质进行研究，必要时可考虑加入适量表面活性剂、、酶等添加物。

3.2.1 溶出介质的选择应考察药物在不同pH 值溶出介质中的溶解度，一般应绘制1.0～7.5 范围内的pH 值-溶解度曲线（例如：在37±0.5℃条件下，药物pKa 在3～5 范围内，选取pH 值 1.0、pKa、pKa±1.0、7.5 等多个点测定溶解度）。

【枸橼酸他莫昔芬】
日文名：クエン酸タモキシフェン英文名：Tamoxifen Citrate
结构式：
解离常数：pKa = 8.27〒0.30
在各溶出介质中的溶解度：pH1.2：0.004mg/ml pH3.0（磷酸盐缓冲液）：0.035mg/ml
pH4.0：0.033mg/ml pH6.8：0.000mg/ml
水：0.030mg/ml
在各溶出介质中的稳定性：
水：未测定。

在各pH值溶出介质中：未测定。

光：未测定。

《四条标准溶出曲线》
溶出度试验条件：桨板法/50转、溶出介质中不添加表面活性剂。

< 10mg规格片剂
>
< 20mg规格片剂>
《质量标准》
取本品，照溶出度测定法（桨板法），以磷酸氢二钠-枸橼酸缓冲液(pH3.0) 900ml为溶剂，转速为每分钟50转，依法操作，经90分钟时，取溶液适量滤过，弃去至少10ml初滤液，取续滤液作为供试品溶液。

另精密称取预经105℃干燥3小时的枸橼酸他莫昔芬对照品30mg，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置200ml 量瓶（10mg规格）或100ml量瓶（20mg规格）中，加溶出介质稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

取上述两种溶液照紫外-可见分光光度法，分别在275nm和350nm波长处测定吸光度，采用差值计算溶出量，限度为标示量的75%（10mg规格）或70%（20mg 规格），应符合规定。

磷酸氢二钠-枸橼酸缓冲液(pH3.0) 取0.53%枸橼酸水溶液1000ml，用0.71%磷酸氢二钠溶液调pH值至4.0，即得。

指导仿制药品质评价的溶出度实验摘要溶出度试验在评价仿制药和原研药生物等效性方面发挥着重要作用，试验参数的制定是合理评价的关键因素。

关键词溶出度试验溶出曲线1溶出度试验药物在被人体吸收至血液循环发挥药效之前，特别是对于口服固体片剂、胶囊，需要先经过药物的崩解和溶出，可见药物的溶出是药物发挥疗效的前提。

溶出度试验就是在有限模拟人体消化道环境的情况下来评价药物溶出的速度和程度[1]。

国内药典规定的溶出条件中，溶出试液模拟的是消化液，转桨或转篮带动的机械搅拌模拟的是消化道内的机械搅拌，最终得到的药物浓度-时间曲线代表了药物在一定溶出环境下的溶出度。

不同制剂的不同的释放行为能够带来一定的临床治疗效果，溶出度试验对于人体内药物释放行为的预估有着十分重要的作用，所以药物的开发及其品质的评价常常离不开溶出度试验。

2溶出度试验参数溶出度试验中，溶出介质的温度37℃模拟的是人的体温。

不同转速体现的是不同年龄段人群的胃肠蠕动功能差异，如50rpm可以理解为老年人的胃肠蠕动力，100rpm为青壮年人的胃肠蠕动力。

不同pH值的溶出介质代表的是不同段消化道的pH值，如pH1.2代表的是胃内环境、pH6.8为肠道环境。

900ml-1000ml 体积的溶出介质模拟的则是人体消化道内体液的体积[2]。

在具体的溶出度试验中，需根据具体考察对象选择具体试验参数。

3仿制药疗效评价仿制药追求的是临床疗效和原研药临床疗效的无限趋近，而体内生物利用度是评价临床疗效的一个重要指标。

在仿制药前期开发过程中，每一个处方下的药物不可能随即做一次生物利用度试验以比对原研制剂，生物利用度试验的费用往往很高，并且国内目前的受试者大多数为青壮年，而用药患者大部分为中老年患者，所以说其局限性比较大。

而溶出度试验可以用一定方式模拟不同身体素质的用药患者，可以对后期生物利用度试验起到一定的预估作用。

也就是说仿制药和原研药的体外溶出释放行为一致，则该仿制药的体内生物利用度和原研药的体内生物利用度一致的可能性很高，但并不意味着两者的体外溶出释放行为不一致，其生物利用度就不一致，这种情况很少。

创新药溶出曲线的建立案例
建立创新药溶出曲线的过程可以分为以下几个步骤：
1. 确定溶出条件：根据药物的性质和溶解度，选择适当的溶出介质，如水、缓冲液等，并确定溶出温度、搅拌速度等条件。

2. 准备样品：按照药品注册标准或相关规定，制备不同批次的药物制剂，以考察批次间的溶出曲线的一致性。

3. 测定溶出量：在设定的时间点，从溶出介质中取样，测定药物在水中的溶出量。

常用的测定方法有高效液相色谱法、紫外可见分光光度法等。

4. 绘制溶出曲线：将测得的药物溶出量与时间绘制成曲线图，可以直观地了解药物的溶出动力学过程。

5. 分析溶出曲线：比较不同批次药物制剂的溶出曲线，评估其一致性和可预测性。

如果各批次药物的溶出曲线基本一致，说明药物制剂的质量稳定可控。

6. 优化处方工艺：根据溶出曲线的分析结果，进一步优化药物制剂的处方和生产工艺，以提高药物的溶出度和生物利用度。

总之，建立创新药的溶出曲线是评估药物制剂质量的重要手段之一，有助于确保药物的安全有效性，促进药物的研发和上市。