核酸检测试剂生产及质量控制技术指导原则汇编

体外诊断试剂生产及质量控制—PCR诊断类报批稿核酸扩增检测技术泛指以扩增DNA或RNA为手段，从而检测特定核酸序列或筛查特定基因的检测技术，如聚合酶链反应(PCR）、连接酶链反应（LCR)、转录依赖的扩增反应（TMA）等。

核酸扩增法检测试剂是基于核酸扩增检测技术的体外诊断试剂，目前已经用于病原体检测、特定疾病的早期诊断和体内物质的型别鉴定等不同领域。

本指导原则仅适用于核酸扩增法检测试剂的生产及质量控制，其他类核酸检测试剂可参照相关内容。

国家药品监督管理部门依据科学技术发展的需要，适时组织修订.一、基本要求(一）核酸扩增类检测试剂的生产企业应获得《医疗器械生产许可证》。

研制、生产用的各种原料、辅料等应制定其相应的质量标准,并应符合有关法规的要求。

（二）试剂生产企业应具有与其技术要求相适应的人员、厂房、设施和仪器设备以及适宜的生产环境,配备满足核酸提取和扩增检测以及操作人员防护所需的设备.建立专用实验室，实验室应当严格分区,人员和物品应当单向流动，以最大限度地防止实验过程中样品之间的污染和避免扩增产物的污染。

生产用于病原微生物核酸检测的生产企业应建立符合生物安全要求的设施和措施。

(三）试剂生产企业应按照《体外诊断试剂生产实施细则（试行）》的要求，建立相应的质量管理体系，并应通过《体外诊断试剂生产企业质量管理体系考核评定标准（试行）》的考核.（四）核酸扩增类检测试剂的引物设计应当符合核酸检测设计的要求，扩增体系应设定合理的内标和外标,试剂需设置抗污染的特定措施，扩增产物须进行确证研究。

（五）企业使用新型原材料时，应提供与通行原材料比对研究结果及相关资料。

使用未列入上述标准的化学试剂，应不低于分析纯.二、原材料应提供主要原材料如引物、探针、企业参考品或标准品等的选择与来源、制备过程、质量分析和质量标准等的相关研究资料。

若主要原材料为企业自己生产，其生产工艺必须相对稳定；如主要原材料来自市场（从其他单位购买），应提供的资料包括：对物料供应商审核的相关资料、购买合同、供货方提供的质量标准、出厂检定报告，以及该原材料到货后的质量检验资料。

核酸检测试剂生产及质量控制技术指导原则（征求意见稿）核酸扩增检测技术泛指以扩增DNA或RNA为手段，从而筛查特定基因的检测技术，如聚合酶链反应（PCR）、连接酶链反应（LCR）、转录依赖的扩增反应（TMA）等。

核酸检测试剂是基于核酸扩增检测技术的体外诊断试剂，目前已经用于病原体检测、特定疾病的早期诊断和体内物质的型别鉴定等不同领域。

为规范核酸检测试剂的生产及质量控制，特制定本技术指导原则，并将根据核酸检测技术的发展状况适时进行修改。

一、基本要求1、核酸类检测试剂的生产企业应获得《医疗器械生产许可证》。

2、核酸类检测试剂的生产企业应具有与其技术要求相适应的人员、环境、设施和仪器设备等条件，建立专用实验室，配备满足核酸提取和扩增检测以及操作人员防护所需的设备。

实验室应当严格分区，人员和物品应当单向流动，以最大限度地防止实验过程中样品之间的污染和避免扩增产物的污染。

3、核酸类检测试剂的生产企业应按照《体外诊断试剂生产实施细则（试行）》的要求，建立相应的质量管理体系，并应通过《体外诊断试剂生产企业质量管理体系考核评定标准（试行）》的考核。

4、核酸类检测试剂的生产单位应当对试剂的使用范围作出明确规定，并经国家药品管理部门批准。

引物设计应当符合核酸检测设计的要求，扩增体系应设定合理的内标和外标，试剂须设置抗污染的特定措施，扩增产物须进行确证研究。

5、核酸类检测试剂的原材料应制订相关质量标准，应符合现行《中国药典》或《中国生物制品主要原辅料质控标准》的要求。

使用未列入上述标准的化学试剂，应不低于分析纯。

二、原材料应提供主要原材料如引物、探针、企业参考品或标准品等的选择与来源、制备过程、质量分析和质量标准等的相关研究资料。

如果主要原材料来自市场（从其他单位购买），应提供的资料包括：对物料供应商审核的相关资料、购买合同、供货方提供的质量标准、出厂检定报告，以及该原材料到货后的质量检验资料。

核酸类检测试剂的包装材料和耗材应无DNase和RNase污染。

核酸检测试剂生产及质量控制技术指导原则1.原材料的采购和质量控制：核酸检测试剂的质量受到原材料的影响，因此在采购原材料时要选择有良好生产记录和质量控制体系的供应商，确保原材料的质量和可靠性。

2.生产流程的规范和标准化：核酸检测试剂的生产过程需要进行规范和标准化，所有的操作步骤都应该按照标准操作规程进行，遵循GMP要求。

生产过程中要注意操作技术的标准化，确保每个步骤的准确性。

3.质量控制的设立和实施：在核酸检测试剂的生产中，需要建立完善的质量控制体系，包括质量控制标准、质量控制方法和质量控制记录等。

对于每个批次的产品，都要进行质量控制测试，确保产品的质量符合规定的标准。

4.设备和环境的控制：核酸检测试剂的生产需要使用各种设备，包括反应器、离心机、电泳仪等，需要对这些设备进行校验和保养，确保其工作状态正常。

同时，生产环境也要进行控制，包括温度、湿度和洁净度等。

5.人员培训和资质控制：对于核酸检测试剂的生产人员，需要进行相关的培训，确保其具备必要的技能和知识。

同时，建立一套资质控制的制度，对于核酸检测试剂的生产和质量控制人员进行评估和考核。

6.质量事故和不良事件的处理与受控：在核酸检测试剂的生产过程中，可能发生质量事故和不良事件，需要建立相应的处理与受控程序。

及时调查事故原因，采取相应的措施，确保不良事件的再次发生。

7.产品留样和追溯：核酸检测试剂的每个批次都应该留样，并建立相应的追溯制度，确保产品质量的可追溯性。

对于产品留样，需要保持一定数量的样品，以备可能的质量问题调查和需求。

总结起来，核酸检测试剂的生产及质量控制技术指导原则主要包括原材料的质量控制、生产流程的规范和标准化、质量控制的设立和实施、设备和环境的控制、人员培训和资质控制、质量事故和不良事件的处理与受控、产品留样和追溯等方面的要求。

通过严格遵循这些技术指导原则，可以确保核酸检测试剂的质量和可靠性，进一步提高核酸检测试剂在临床和科研中的应用价值。

第二代测序技术检测试剂质量评价通用技术指导原则一、前言本指导原则主要针对第二代测序（n ext gen eration seque ncing NGS）技术检测试剂（以下简称“ NGS检测试剂”产品质量提出指导性要求，涉及基本原则、主要原材料、检测流程及性能评价等方面。

本指导原则是对企业和检验人员的指导性文件，但不包括注册审批所涉及的行政事项，亦不作为法规强制执行，如果有能够满足相关法规要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供详细的研究资料和验证资料。

应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。

本指导原则是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下制订的，随着法规和标准的不断完善、科学技术的不断发展，其相关内容也将进行适时的调整。

二、适用范围本指导原则适用于基于NGS 技术的检测试剂的质量评价。

NGS 检测试剂的预期用途包括但不限于以下内容：肿瘤相关基因异常、遗传疾病相关基因异常、胚胎植入前染色体非整倍体、胎儿染色体非整倍体及病原微生物等临床检测应用。

此类检测试剂涉及的NGS 技术包括靶向性测序和非靶向性测序：靶向性测序法是指对样本中的基因组进行部分测序，如靶基因测序、外显子（组）测序等；非靶向性测序是指对样本中潜在生物体的基因组进行测序。

原则上不建议企业应用全基因组测序进行检测，如果企业应用全基因组测序技术，应进行充分的技术适用性验证并提交报告。

待测样本可以是人源样本（如体液、组织、排泄物等）或病原微生物分离培养物（如血培养物、痰培养物等），检测对象可以是脱氧核糖核酸（DNA ）、核糖核酸（RNA ）或两者的混合物。

本指导原则尽可能覆盖所有的NGS 技术原理和测序平台，所讨论和描述的内容不限于某个特定的NGS检测试剂。

但鉴于NGS技术一直在不断升级和更新，可能会有本指导原则未能涉及的新技术。

三、基本要求（一）基本原则1.NGS 检测试剂的生产企业应获得《医疗器械生产许可证》。

研制、生产用的各种原料、辅料等应制定其相应的质量标准，并应符合有关法规的要求。

体外诊断试剂生产及质量控制技术指导原则一、试剂生产试剂生产的工艺技术对试剂的质量、效果和应用范围有着重要的影响。

以下是一些关键的生产技术指导原则：1.原料采购与贮存原料是试剂生产的基础，采购时应选择合格的供应商，确保原料质量稳定可靠。

在原料的选择和贮存中，要遵守相关的法规和规范，严格控制原料质量。

2.工艺研发与流程优化研发阶段要注重试剂的性能和稳定性，通过改良工艺和优化流程来提高试剂的稳定性和可靠性，并确保生产工艺具有可复制性和稳定性。

3.生产设备和环境控制生产设备要保持清洁，并根据要求进行定期维护和保养，确保其正常运行。

生产环境要符合相应的规范和标准，保持适宜的温湿度和洁净度，减少可能的污染因素。

4.生产管理与人员培训建立科学合理的生产管理体系，包括流程记录、验收标准、样品保存等措施，确保产品质量的可追溯性。

针对生产操作人员，要进行充分的培训和技能考核，提高操作人员的技术水平和质量意识。

二、质量控制质量控制是确保试剂质量稳定和可靠的关键步骤。

以下是一些关键的质量控制技术指导原则：1.原材料检验与控制对每批原材料进行必要的检验，包括外观检查、纯度检测、活性检测等，并建立相应的控制标准。

原材料的使用要按照相关的标准和规范执行，同时建立供应商评价和管理机制，确保原料质量的稳定性。

2.试剂稳定性测试定期进行试剂的稳定性测试，包括物理性质、化学性质、活性等指标的测试。

根据测试结果，及时调整生产工艺和改进产品包装，确保试剂的长期稳定性。

3.检验方法和标准的制定制定标准的检验方法，包括试剂溶液的配制、样品处理、仪器操作、结果解读等。

并确保操作人员严格按照标准操作，降低人为误差对结果的影响。

4.质量管控与改进建立质量管理体系，实施全面的质量管控，包括记录管理、异常处理、风险评估等。

根据质量管控过程中的问题和异常情况，进行及时的评估和改进措施，以提高试剂的质量和性能。

总结：体外诊断试剂生产和质量控制是保障试剂质量的关键环节。

附件3:体外诊断试剂生产及质量限制技术指导原那么--核酸检测试剂生产及质量限制技术指导原那么核酸扩增检测技术泛指以扩增DNA或RNA为手段,从而筛查特定基因的检测技术,如聚合酶链反响〔PCR、连接酶链反响〔LCR、转录依赖的扩增反响〔TMA〕等.核酸检测试剂是基于核酸扩增检测技术的体外诊断试剂,目前已经用于病原体检测、特定疾病的早期诊断和体内物质的型别鉴定等不同领域.为标准核酸检测试剂的生产及质量限制,特制定本技术指导原那么.国家药品监督治理部门将依据科学技术开展的需要,适时组织修订.一、根本要求〔一〕核酸类检测试剂生产用的各种原料、辅料等应制定其相应的质量标准,并应符合有关法规的要求.〔二〕核酸类检测试剂的生产企业应具备相应的专业技术人员、仪器设备以及适宜的生产环境〔实验室应当严格分区,人员和物品应当单向流动,以最大限度地预防实验过程中样品之间的污染和预防扩增产物的污染〕,获得?医疗器械生产许可证?；同时,应根据?体外诊断试剂生产实施细那么〔试行〕?的要求建立相应的质量治理体系, 形成文件和记录,加以实施并保持有效运行；还应通过?体外诊断试剂生产企业质量治理体系考核评定标准〔试行〕?的考核.企业应对试剂的使用范围作出明确规定,并经国家药品治理部门批准.〔三〕核酸类检测试剂在研制时,应当遵循科学、标准的原那么, 引物设计应当符合核酸检测设计的要求,扩增体系应设定合理的内标和外标,试剂须设置抗污染的特定举措,扩增产物须进行确证研究.〔四〕核酸类检测试剂生产过程中所用的各种材料及工艺,应充分考虑可能涉及的平安性方面的事宜.〔五〕生产和质量限制的总体目标：保证试剂使用平安、质量稳定、工艺可控、检测有效.二、原材料应提供主要原材料如引物、探针、企业参考品或标准品等的选择与来源、制备过程、质量分析和质量标准等的相关研究资料.如果主要原材料来自市场〔从其他单位购置〕,应提供的资料包括：对物料供应商审核的相关资料、购置合同、供货方提供的质量标准、出厂检验报告,以及该原材料到货后的质量检验资料.如果主要原材料〔包括工艺〕或其供应商有变更,应依据国家相关法规的要求进行变更申请.核酸类检测试剂的包装材料和耗材应无DNase和RNase污染.1.dNTPs脱氧三磷酸核甘,核酸的组成成分,包括：dATR dUTR dGTR dCT可口dTTR 应为HPLCM、PC颜,无DNase和RNasW亏染.-20 C 保存.2.引物由一定数量的核甘酸构成的特定序列,通常采用DNA合成仪人工合成,合成后经聚丙烯酰胺凝胶电泳或其他适宜方法纯化冻干粉,合成量不低于试剂盒总测试样品所需量.序列正确.纯度应到达电泳级〔PAGE或HPLCS,不含杂带.应提供合成机构出具的合成产物的质检证实,如PAG曲泳结果或HPLC分析图谱.应作HPLC分析和紫外光吸收分析.以紫外分光光度计测定OD260nm/OD280nm的比值在1.6 2.0之间,可视为合格引物.-20 C 保存.3.探针是指特定的带有示踪物〔标记物〕的核酸片段〔寡聚核甘酸片段〕,能与互补核酸序列退火杂交,用于特定核酸序列的探测.通常采用DNA合成仪人工合成,合成后经聚丙烯酰胺凝胶电泳或其他适宜方法纯化,在5'-端标记荧光素报告基团或其他发光标记物,在3'-端标记荧光素淬灭基团,并经HPLCK其他适宜方法纯化.冻干粉,90D以上.纯度应到达HPLC纯,不含杂带.应提供合成机构出具的合成产物的质检证实,如HPLC分析图谱；应对探针的核酸序列及标记的荧光素或化学发光物进行核实,并作HPLC分析.应以可见一紫外分光光度计进行200 800nm扫描,在260nm处应有吸收峰.另外,根据标记的荧光素的不同,还应该在荧光素的激发波长处有吸收峰,如FAM荧光素在494nm、TET荧光素在521nm、TAMRA 荧光素在560nm 处有特异的吸收峰,杂交探针在493nm、625nm、685nm处有特异的吸收峰,检验合格后入库.避光、-20C保存.4.Taq DN课合酶具有DNA聚合酶活性,无核酸内切酶活性；具热稳定性,94C保温1小时后仍保持50%活性.-20 C保存.5.UNG 〔尿喀咤糖基化酶〕具有尿喀咤糖基化酶活性,无核酸外切酶及核酸内切酶活性,IU UNG在37c处理3分钟后,103拷贝以下含U模版应完全降解,不能产生扩增产物.-20 C保存.6.RT-PCfB 〔反转录扩增酶〕具逆转录酶活性和DNA聚合酶活性,无核酸内切酶活性；具热稳定性,94 C 1小时后仍保持50%舌性,-20C保存.三、生产工艺核酸类检测试剂的根本生产工艺通常包括：配制工作液、半成品检验、分装和包装.配制工作液的各种原材料及其配比应符合要求, 原材料应混合均匀,配制过程应对pH、电导率等关键参数进行有效限制.工艺研究的资料应能对反响体系涉及到的根本内容如样本类型、样本用量、试剂用量、反响条件、校准方法、质控方法、临界值确实定、稳定性和有效期,提供确切的依据.四、质量限制〔一〕半成品质量限制1.按批号抽取规定数量的半成品.2.以参考品/对照品进行半成品质量限制.如果产品具有国家标准品或参考品,应以其进行检验.如果产品不具有国家标准品或参考品,应根据规定制备相应的企业参考品进行半成品检验,企业参考品的质量标准不能低于国家药品监督治理部门已经批准的同类试剂的质量标准.3.半成品检验内容包括：参考品符合率、灵敏度、特异性、精密度.结果应符合质量标准的要求.4.半成品检验合格后,按试剂盒组成及时进行分装和包装.〔二〕成品质量限制1.每一批核酸类检测试剂报批批量至少为5000人份.2.产品完成包装后,应根据生产量进行抽样和生产记录审核.3.以参考品/对照品或参考品进行成品质量检验.结果应符合要求.4.成品检验的内容应包括：参考品符合率、灵敏度、特异性、精密度、线性和稳定性.5.稳定性试验每批试剂批放行前,必须完成稳定性试验,并到达相应的质量标准.稳定性试验可在在特定温度或特定条件下完成.。

核酸检测技术及质量控制在当今的医疗卫生领域，核酸检测技术已经成为了一项至关重要的工具。

它在疾病的诊断、疫情的防控、遗传疾病的筛查等方面发挥着举足轻重的作用。

然而，要确保核酸检测结果的准确性和可靠性，质量控制是关键。

核酸检测技术的基本原理是通过检测样本中特定核酸序列的存在与否来判断是否存在相应的病原体或基因变异。

这一过程涉及到一系列复杂的步骤，包括样本采集、核酸提取、扩增和检测。

样本采集是核酸检测的第一步，也是至关重要的一步。

常见的样本类型包括鼻咽拭子、口咽拭子、血液、痰液等。

采集过程需要严格遵循操作规范，以确保采集到足够的、有代表性的样本，同时避免样本受到污染。

比如，在采集鼻咽拭子时，操作人员需要将拭子准确地插入鼻腔深处，并旋转数次，以采集到足够的细胞。

核酸提取是将样本中的核酸从其他成分中分离出来的过程。

这一步通常使用化学试剂和特定的仪器设备来实现。

提取的核酸质量直接影响后续检测的结果，因此需要严格控制提取过程中的温度、时间、试剂浓度等参数。

扩增是核酸检测中的关键步骤，其目的是将微量的核酸片段大量复制，以便于检测。

常用的扩增技术包括聚合酶链式反应（PCR）和逆转录聚合酶链式反应（RTPCR）。

在扩增过程中，需要精确控制反应条件，如温度循环、引物浓度、酶的活性等，以确保扩增的特异性和效率。

检测则是通过各种方法来确定扩增产物的存在和数量。

常见的检测方法包括荧光定量 PCR、基因测序等。

荧光定量 PCR 能够实时监测扩增过程中荧光信号的变化，从而定量分析样本中的核酸含量；基因测序则可以更精确地确定核酸的序列信息。

然而，即使核酸检测技术本身具有高度的特异性和敏感性，在实际应用中，如果质量控制不到位，仍然可能导致检测结果的不准确。

质量控制首先要从人员培训开始。

参与核酸检测的工作人员需要具备扎实的专业知识和熟练的操作技能。

他们需要了解检测的原理、方法、流程，熟悉仪器设备的使用和维护，并且能够严格遵守操作规程。

核酸诊断试剂的质控和评价核酸诊断试剂是一种重要的分子生物学试剂，常用于检测和诊断病原体，包括病毒、细菌和寄生虫等。

为了确保核酸诊断试剂的准确性和可靠性，质控和评价是非常关键的。

本文将讨论核酸诊断试剂的质控和评价方法，并介绍一些常用的质控指标和评价方法。

一、质控方法1.内部质控：内部质控是通过设置阳性对照和阴性对照样本来监测试剂的准确性和稳定性。

阳性对照样本可以是已知含有目标基因或基因序列的标准样本，而阴性对照样本则不含有目标基因或基因序列。

内部质控可以在每次实验中进行，以确保试剂的性能符合预期。

2.外部质控：外部质控是将试剂样本发送给独立的实验室进行验证的质控方法。

常见的外部质控计划包括国家或地区的质量控制组织提供的质控样本。

通过参与外部质控计划，可以评估试剂的性能是否符合预期，并与其他实验室的结果进行比较。

二、质控指标1.灵敏度：灵敏度是指试剂检测目标基因的能力。

通常使用已知浓度的阳性对照样本来评估试剂的灵敏度。

灵敏度可以通过限定检测的最低浓度来表示，也可以使用阳性对照样本的最低检测浓度来表示。

2.特异性：特异性是指试剂只检测目标基因，不干扰其他基因的能力。

特异性可以通过使用阴性对照样本来评估，确保试剂不出现假阳性结果。

3.重复性：重复性是指在同一实验条件下，重复测量具有相同浓度的阳性对照样本时，试剂得到的结果是否一致。

重复性可以通过计算测量结果的方差或标准偏差来评估。

4.稳定性：稳定性是指试剂在存储和运输过程中性能的保持程度。

稳定性可以通过在不同时间点对试剂进行测试来评估，以及在不同温度和湿度条件下存储试剂来评估。

三、评价方法1.数据分析：对于质控数据，可以使用统计学方法进行数据分析。

常用的统计学方法包括均值、标准差、方差、相关系数等。

通过对数据进行统计分析，可以评估试剂的质控指标是否符合要求。

2.敏感性和特异性分析：对于核酸诊断试剂，可以使用敏感性和特异性来评价试剂的性能。

敏感性可以通过计算真阳性率（TPR）来评估，特异性可以通过计算真阴性率（TNR）来评估。

核酸检测试剂生产及质量控制技术指导原则首先，核酸检测试剂的生产需要满足以下几个原则：1.质量控制：核酸检测试剂的生产必须建立质量控制体系，确保产品质量的稳定性和可靠性。

包括严格的原料采购和检验、生产过程的严格控制、产品的稳定性测试等环节。

2.环境控制：生产核酸检测试剂需要在洁净、无菌的环境下进行，确保产品不受到污染。

同时，要定期对生产环境进行监测和清洁，确保环境的洁净度。

3.设备和仪器管理：生产核酸检测试剂需要使用合适的设备和仪器，并定期维护和校准，确保其正常运行。

同时，要对设备和仪器进行严格的管理，确保其不受到污染。

4.生产工艺和工序控制：核酸检测试剂的生产需要制定合理的生产工艺和工序，确保产品的质量和稳定性。

包括原料配制、反应体系的调整、加工工艺的优化等环节。

其次，核酸检测试剂的质量控制需要注意以下几点：1.原料的质量控制：核酸检测试剂的原料包括核酸提取试剂、试剂盒配套试剂、质控品等。

需要严格对原料进行采购和检验，确保其质量符合要求。

2.检验方法的验证和标准化：核酸检测试剂的生产需要建立合适的检验方法，并进行验证和标准化。

确保产品的测定结果准确可靠，并能和其他实验室的结果相比较。

3.生产过程的质量控制：包括生产的各个环节，如原料配制、反应体系的调整、加工工艺的优化等，需要制定相应的质量控制标准和流程，确保产品质量的稳定性和可靠性。

4.产品稳定性的测试：核酸检测试剂的稳定性是能否长期保存和使用的关键，需要对产品进行稳定性测试，包括温度、光照、湿度等条件下的稳定性研究。

5.质量问题的处理和纠正措施：当产品质量出现问题时，需要及时进行处理和纠正措施，并建立相应的改进措施，避免类似问题的再次发生。

最后，需要指出的是，核酸检测试剂的生产和质量控制是一个系统工程，需要全面考虑各个环节的影响因素，并建立相应的质量控制体系。

同时，随着科技的不断进步和应用的需要，核酸检测试剂的生产和质量控制技术也在不断发展和完善，需要及时关注和应用最新的技术和方法。