PCR荧光检测试剂盒生产质控规程

PCR荧光检测试剂盒生产质量控制规程一. 微量加样器的使用规定1．微量加样器校正：: 使用微量加样器吸10μl 10次是否为100μl。

2．加样前吸头润湿：当吸头排空时，仍会有一些残留的液体以薄膜的形式吸附在吸头里面，所以，在加样时先吸打液体数次，充分润湿吸头管腔,以保证加样的一致性。

3．加样时吸头应靠试管壁：加样时吸头的液体顺着管壁流出，防止液滴的形成由于其表面张力的作用而阻止样本的释放。

4．吸头是否与加样器上吸头套筒密封：样器上吸头与套筒密封完好。

5．加样时注意第一停点和第二停点：吸液是应注意大拇指按下按钮至第一停点，缓慢慢慢吸入液体。

停留1s，然后将吸头提离液面。

用吸纸抹去吸嘴外面可能黏附的液滴。

放液时经过第一停点，停1-2s后，继续按压到第二停点，排出残余液体。

6．PCR反应原液由于有甘油在冷的状态较黏稠,易于1次吸取数人份，慢一些。

7．边加边看,直观估计,防止跳管。

8．低温冷藏批量DNA提取液、PCR反应液A和B取出时是否充分混匀后,分装使用，PCR反应液A和B是否避光低温冷藏和使用。

9．配PCR反应液应先加缓冲液再加PCR反应液充分混匀,必要时倒置混匀,再离心,或用灭菌吸头上下吸几次。

10．PCR反应液（包括样品）应充分混匀:保证PCR反应曲线呈S形，全阴性样品呈近似水平曲线。

二．PCR试验操作规程**血清稀释液：全阴性血清再加2倍HBV DNA提取液混匀, 5000rpm，离心1分钟，混匀血清98℃ 5分钟变性,12000rpm，离心10分钟,吸取上清液。

三.超净工作台的使用、维护保养与清洁标准操作规程1.目的建立一个超净工作台的使用、维护保养与清洁标准操作程序，使操作过程标准化。

2.职责质量部QC负责本文件的起草，质量部及QC检验人员负责本标准的实施。

3.范围本标准适用于超净工作台的使用、维护和保养与清洁。

4.内容4.1超净工作台的主要组成部分：高效过滤器、中效过滤器、通风机、电气控制及排气管道部分。

PCR实验室试剂的质检标准操作程序1.目的：保证每批用于临床实验的试剂的质量良好，符合要求。

2.适用范围：各种用于临床实验的核酸扩增荧光检测试剂（HBV、HCV、HPV、CT）。

3.负责人：操作人：4.程序：4. 1收到试剂后，目测试剂是否处在冻存状态。

4. 2核对试剂品种和数量并检查包装：外包装（厂名厂址、、批准文号、批号和有效期等）;内包装（试剂瓶完整性、试剂配备品种完整性、使用说明书有否等）。

4. 3及时将试剂转入-20.。

冰箱保存。

将上述检测核对情况在记录本上登记。

4. 4最迟在前批次试剂存量尚可维持常规实验一周时，按如下要求对新批号试剂进行效验实验。

4. 5效验实验：4. 5. 1要求设置：空白对照、阴性对照、阳性对照、室内质控各一，阳性标准品梯度（104、105、106、108）。

4. 5. 2出现如下情况中任何一种的，判断为试剂不合格，不能用于临床检测：a）空白对照出现扩增。

如扩增曲线CT值大于25，需重复实验确证试剂污染。

b）阳性对照和阳性标准品均未检出，或阳性对照未检出而阳性标准品检出率大幅下降，表示试剂失效或检测灵敏度大幅下降。

4. 5. 3阳性对照未检出，阳性标准品检测正常，提示样品提取液可能存在问题。

重复新旧提取液阳性对照实验，确定提取液失效问题。

更换提取液后该批试剂方可使用。

4. 5. 4空白对照无扩增，阴性对照有扩增，排除其他污染可能性后，提取液存在污染可能。

单独用提取液点样上机，出现扩增，需更换提取液后方可使用该批试剂。

4. 5. 5阳性对照检出，阳性标准品未检出或扩增曲线明显系统性CT值偏大5个循环以上。

提示阳性标准品存在问题。

更换阳性标准品后该批试剂方可投入使用。

4. 5. 6空白对照、阴性对照无扩增，阳性对照正常检出，阳性标准品导出的标准曲线之斜率（-2.9〜-3.9）、截距（26〜34）、相关性（-0.99）均在使用范围内，表明该批试剂良好，可以投入临床使用。

检测中心荧光定量PCR检测试剂盒验收细则一、引言荧光定量聚合酶链反应（PCR）是一种常用的分子生物学技术，广泛应用于医学、生物学和农业等领域。

在检测中心中，正确使用和验收PCR试剂盒对确保检测结果的准确性和可靠性至关重要。

本细则旨在规范检测中心对PCR试剂盒的验收工作。

二、验收前的准备工作1.阅读试剂盒说明书，了解试剂盒的基本信息、存储条件和使用方法。

2.确保试剂盒未过期，检查试剂盒上的生产日期和有效期限。

三、试剂盒物品清点1.打开试剂盒包装，对照说明书上的清单，确认试剂盒所含物品是否齐全。

2.检查试剂盒内的试剂、标准品和控制品的外观是否正常，如颜色、透明度、凝聚物等。

3.检查试剂盒内的试剂、标准品和控制品的容量是否符合标注要求，比较标贴上的容量和体积。

四、试剂盒存储条件和有效期检查1.检查试剂盒包装上的存储条件是否符合实验室的存储环境。

2.检查试剂盒上的有效期是否仍在有效期范围内，避免使用过期试剂进行实验。

五、试剂试验1.使用空白样品（无样本）进行试剂试验，检查试剂盒的表现如何。

2.检查试剂盒的放大效果，使用适当的阳性对照进行检测，并与实验室标准结果进行比对。

六、数据分析1.将试剂盒试验结果录入实验数据管理系统，并与试剂盒说明书和实验室标准结果进行比对。

2.检查试剂盒试验结果的准确性和可靠性，评估试剂盒在实验室中的适应性和性能。

七、实验记录1.记录试剂盒的验收日期、试验结果和验收结论。

2.如有问题或异常情况，记录并及时向上级主管报告。

八、试剂盒处置1.将已经使用完毕的试剂盒及时处理，按照实验室的废弃物管理规定进行处置。

2.未使用的试剂盒按照包装说明妥善保存，避免存放环境受潮、暴露于阳光直射等不良条件。

九、验收报告1.编写试剂盒验收报告，包括试剂盒信息、试验结果和验收结论等内容。

2.将验收报告归档并交由实验室主管保存。

总结：以上是对检测中心荧光定量PCR检测试剂盒的验收细则进行规范的一份详细说明。

PCR质量控制2023.3引言PCR（聚合酶链反应）是一种广泛应用于分子生物学研究的技术，它能够在体外扩增目标DNA片段，具有高度特异性和灵敏度。

PCR反应的质量控制对于确保实验结果的准确性和可重复性至关重要。

本文将介绍PCR质量控制的方法和注意事项，以帮助研究人员有效地进行PCR实验并获得可靠的结果。

质量控制方法1. 使用质量良好的试剂和材料，确保所使用的PCR试剂和材料的质量良好。

选择来自可靠供应商的高质量试剂，如聚合酶、引物和缓冲液等。

使用新鲜的试剂，并储存于适当的条件下，避免冻融循环和长期存储。

2. 设计合适的引物和探针引物和探针的设计是PCR实验成功的重要因素之一。

确保引物和探针的序列与目标DNA片段完全匹配，并具有合适的Tm值，以确保高度特异性的扩增。

避免引物和探针之间的互相结合和二聚体形成。

3. 进行质控反应在进行实际PCR反应之前，建议进行质控反应以验证试剂和仪器的性能。

质控反应通常包括PCR阴性对照、阳性对照和样品重复，以确保实验的可靠性和一致性。

通过检测阴性对照是否无扩增产物以及阳性对照是否有预期的扩增产物，可以评估试剂和仪器的质量。

4. 优化PCR参数选择合适的PCR条件对于实现高效扩增至关重要。

优化PCR参数包括反应体系的浓度和比例、引物和探针的浓度、PCR循环程序和温度梯度等。

通过调整这些参数，可以获得较高的扩增效率和特异性。

5. 检测PCR产物，对PCR产物进行检测和验证。

常用的PCR产物检测方法包括凝胶电泳、聚合酶链反应的实时荧光定量PCR（qPCR）和基因测序等。

通过这些方法，可以评估PCR扩增的效果，并确认目标DNA片段的存在与否。

注意事项除了上述质量控制方法之外，还有一些重要的注意事项需要注意：1. 保持实验室的清洁和无菌。

PCR反应对外源性污染非常敏感，应该在无菌条件下进行实验，并且使用无菌的试剂和材料。

2. 严格遵循PCR反应的操作规程。

避免交叉污染，使用新鲜的各种试剂，并按照正确的顺序和步骤进行实验操作。

医院PCR实验室室内质控标准操作程序医院PCR实验室室内质控标准操作程序1 ⽬的随时了解并控制实验室检测的精密度变化。

2 适⽤范围核酸扩增荧光定量检测实验室，其中包括使⽤Roche LightCycler定量PCR仪的实验室。

3 操作⼈XXX4 操作步骤4.1 ⾃制⾎清质量控制品a）⾃制的质量控制⾎清来⾃临床收集的已知HBV阳性⾎清，每收集到⼀份冻存于－20℃。

b）预定室内质控品靶值为1×106copies/ml,总量20ml，计算各份⾎清的混合量。

c）室温下复融质控⾎清，按⽐例混合⾎清，充分混匀。

d）⽤0.5ml离⼼管盛装质控⾎清，每管100µl，分装100管，剩余⾎清根据废弃物处理及⽣物防护操作程序处理。

e）每10管质控品装⼀⼩袋，可分成10⼩袋。

1⼩袋置于－20℃冰箱，其余9⼩袋置于－80℃超低温冰箱，⽤完1⼩袋，就从－80℃转移1⼩袋质控品到－20℃冰箱备⽤。

4.2 测定及计算RCV取准备⽤于下⼀阶段室内常规室内质量控制的⾎清，每天随病⼈标本测定⼀管，20天后计算各项⽬的测定结果的 X、s和CV。

此处的CV即RCV。

RCV的计算公式如下：其中X为RCV测定中所得20份结果的均值。

∑表⽰总和。

n表⽰结果的份数（或天数）。

其中各符号所代表的含义与X计算公式相同。

n-1为⾃由度。

S计算也可以使⽤下⾯的公式其中∑X2为各检测结果平⽅值之总和。

(∑X)2为各检测结果之和的平⽅。

4.3 绘制RCV图a）计算X+2s、X－2s、X+3s、X－3s并在纵坐标上标出的X、X+2s、X－2s、X+3s、X－3s的位置，并将其具体数值标在左侧标尺上。

b）⽤红笔画出X±2s线，⽤蓝笔画出X±3s线，即成为⼀张“空图”。

其中每⼀⼩格代表实际检测数值的1/10。

还应填齐图纸上⽅的各项，如：试验项⽬，质控⾎清来源及批号，起⽌⽇期，主要仪器等。

还应填上RCV中测定中所得的X、s、CV。

检测中心荧光定量PCR检测试剂盒验收细则
一、科学选材
1.测序级合成核苷酸：合成产品应经全长光谱比色检测，确认无肽键
断和错义残基；
2.反应相关试剂：应经分子生物学检测，确认无污染情况；
3.其他活性物质：无反应性活性物质，可保证活性物质以及荧光活性
物质的稳定性；
4.荧光活性物质：其荧光活性物质的滴度必须稳定，没有偏离正常谱
线的情况；
5.合成核苷酸扩增片段：应确保试剂盒所使用的合成核苷酸扩增片段
的序列准确性及效率；
6.唯一性：检测试剂中所用活性物质的唯一性，比如它的荧光量子产
量在一些符合的范围内，可保证检测试剂的性能稳定，可以准确检测出检
测物质；
二、检测实验
1.合成核苷酸的检测：应在实验所用的检测试剂中检测它的质量，通
过GC/MS、全长光谱比色法，检测出来的结果要符合产品质量要求；
2.反应相关试剂的检测：通过分子生物学检测，检测每种试剂的活性，并定量测定；
3.荧光活性物质的检测：确保各种荧光活性物质的谱线分布正常，以
及它们的滴度稳定，没有异常偏移的情况；
4.核苷酸扩增片段的检测：通过质控检测，确保序列的准确性和扩增片段的效率；。

pcr实验室质量控制流程英文回答：Quality control is an essential part of any PCR laboratory workflow. It ensures that the results obtained from PCR experiments are accurate, reliable, and reproducible. In this article, we will discuss the quality control process in a PCR laboratory.1. Equipment and reagent verification:Before starting any PCR experiment, it is crucial to verify the performance of the equipment and reagents used. This includes checking the functionality of the thermal cycler, ensuring the accuracy of pipettes, and confirming the integrity and quality of the PCR reagents.中文回答：质量控制是PCR实验室工作流程中至关重要的一部分。

它确保从PCR实验中获得的结果准确、可靠且可重复。

在本文中，我们将讨论PCR实验室中的质量控制流程。

1. 设备和试剂验证：在开始任何PCR实验之前，验证所使用的设备和试剂的性能非常重要。

这包括检查热循环仪的功能，确保移液器的准确性，并确认PCR试剂的完整性和质量。

英文回答：2. Positive and negative controls:One of the key steps in PCR quality control is the inclusion of positive and negative controls. Positive controls contain the target DNA sequence, and their amplification serves as a validation of the PCR reaction. Negative controls, on the other hand, do not contain the target DNA sequence and should not produce any amplification. These controls help identify contaminationor other issues that may affect the accuracy of the results.中文回答：2. 阳性和阴性对照：PCR质量控制的关键步骤之一是包含阳性和阴性对照。

检测中心荧光定量PCR检测试剂盒验收细则
一、准备条件
1.实验室应符合GCP（Good Clinical Practice）要求，实验室环境温度控制在20-25摄氏度，相对湿度≤70%；
2.建立操作程序；
3.使用正确的安全防护用品；
4.设备要经过校准；
二、验收要求
1.操作说明书应符合安全操作规程，内容全面，清晰明了；
2.试剂盒包装完好，各组份无损坏，组件完整；
3.所有产品的生产日期、批号、有效期及安全防护标识应清晰可辨，有效期内；
4.无污染，当打开产品封装外包装时，应当充分按照说明书搭配照片及步骤操作进行；
5.组件的配比正确，组分单元完好；
6.试剂的功能、质量、保存条件符合使用要求；
7.试剂的灵敏度及特异性符合检测要求，可用于检测；
8.测试反应条件满足操作规程要求；
9.试剂的稳定性符合安全要求，具备一定的保质期；
10.检测结果可信，准确可靠；
三、检测原理。

附件3：体外诊断试剂生产及质量控制技术指导原则——核酸检测试剂生产及质量控制技术指导原则核酸扩增检测技术泛指以扩增DNA或RNA为手段，从而筛查特定基因的检测技术，如聚合酶链反应（PCR）、连接酶链反应（LCR）、转录依赖的扩增反应（TMA）等。

核酸检测试剂是基于核酸扩增检测技术的体外诊断试剂，目前已经用于病原体检测、特定疾病的早期诊断和体内物质的型别鉴定等不同领域。

为规范核酸检测试剂的生产及质量控制，特制定本技术指导原则。

国家药品监督管理部门将依据科学技术发展的需要，适时组织修订。

一、基本要求（一）核酸类检测试剂生产用的各种原料、辅料等应制定其相应的质量标准，并应符合有关法规的要求。

（二）核酸类检测试剂的生产企业应具备相应的专业技术人员、仪器设备以及适宜的生产环境（实验室应当严格分区，人员和物品应当单向流动，以最大限度地防止实验过程中样品之间的污染和避免扩增产物的污染），获得《医疗器械生产许可证》；同时，应按照《体外诊断试剂生产实施细则（试行）》的要求建立相应的质量管理体系，形成文件和记录，加以实施并保持有效运行；还应通过《体外诊断试剂生产企业质量管理体系考核评定标准（试行）》的考核。

企业应对试剂的使用范围作出明确规定，并经国家药品管理部门批准。

（三）核酸类检测试剂在研制时，应当遵循科学、规范的原则，引物设计应当符合核酸检测设计的要求，扩增体系应设定合理的内标和外标，试剂须设置抗污染的特定措施，扩增产物须进行确证研究。

（四）核酸类检测试剂生产过程中所用的各种材料及工艺，应充分考虑可能涉及的安全性方面的事宜。

（五）生产和质量控制的总体目标：保证试剂使用安全、质量稳定、工艺可控、检测有效。

二、原材料应提供主要原材料如引物、探针、企业参考品或标准品等的选择与来源、制备过程、质量分析和质量标准等的相关研究资料。

如果主要原材料来自市场（从其他单位购买），应提供的资料包括：对物料供应商审核的相关资料、购买合同、供货方提供的质量标准、出厂检验报告，以及该原材料到货后的质量检验资料。

荧光pcr管理制度一、前言荧光PCR技术是PCR技术的一种，主要应用在生物医学领域。

荧光PCR技术通过引入荧光标记物来检测目标DNA序列的增殖过程，具有灵敏度高、准确性高等优点。

然而，荧光PCR技术在实验过程中需要严格的管理制度来保证实验的准确性和可靠性。

本文将从设备管理、实验材料管理、实验操作管理等方面建立一套严格的荧光PCR管理制度，旨在规范荧光PCR实验的操作流程，最大程度地避免操作失误和实验结果的误差，保证实验数据的可靠性。

二、设备管理1. 设备购置（1）购置前需明确实验需求，选购合适的荧光PCR设备，应具备稳定性高、准确性高的特点。

（2）设备应购置于正规的生物医学设备公司，保证设备性能和售后服务。

2. 设备安装与维护（1）设备安装应由专业技术人员进行，确保设备的正常运行。

（2）设备定期进行维护保养，及时清理设备表面和内部灰尘，保持设备的干净卫生。

（3）设备定期进行性能检测，确保设备性能的稳定性和准确性。

3. 设备使用（1）严格按照使用说明进行操作，切勿使用不明确的操作方法。

（2）设备使用完毕后，及时清理设备表面和内部，保证下次使用时的整洁。

（3）使用过程中如发现设备异常，应及时停止使用并向设备管理人员汇报。

三、实验材料管理1. 试剂购置（1）购置试剂前需明确实验需求，选购正规生产商生产的荧光PCR试剂。

（2）试剂应符合国家标准，购置时需查看试剂生产商提供的产品合格证明书。

2. 试剂存储（1）试剂应按照要求进行存储，保持在指定的温度和湿度下，避免因不当存储而导致试剂失效。

（2）试剂存储位置应明显标示试剂的名称、保质期和存储条件，以免混淆。

3. 试剂使用（1）试剂使用前应核对试剂名称、生产日期、保质期等信息，确保试剂的合法性和可靠性。

（2）使用完毕后的荧光PCR试剂应按照规定处理，避免对环境造成污染。

四、实验操作管理1. 实验前准备（1）实验前需查验荧光PCR试剂及设备的状态，确保试剂和设备的正常使用。