确定小鼠动情周期的三种方法

动情期和动情间期雌性小鼠GR和TH的免疫活性及血清CORT水平的比较程广超;杨斌;王建礼;桂长莉【摘要】受到卵巢雌激素和孕激素波动的影响,动情周期会影响雌性动物的行为和情绪.然而,关于引起这些行为改变的神经内分泌机制还需要进一步研究.通过阴道脱落细胞染色法确定小鼠动情周期的各个阶段.用酶联免疫吸附法检测动情期和动情间期血清雌二醇(E2)和皮质酮(CORT)水平,用免疫组织化学方法检测脑区糖皮质激素受体(GR)和酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元的表达.结果发现,与动情间期雌鼠相比,动情期雌鼠血清E2浓度升高(P<0.05),但CORT水平没有变化;海马CA1区和齿状回(DG)GR-IR神经元表达增加(P<0.05),下丘脑室旁核(PVN)和中脑腹侧被盖区(VTA)的TH-IR神经元表达增加(P<0.05).结果说明,雌性小鼠在动情期和动情间期GR和儿茶酚胺能神经元活动不同,这些差异可能是动情周期引起行为变化的一个重要因素.【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2018(039)008【总页数】5页(P50-54)【关键词】动情周期;应激;海马;儿茶酚胺;雌性小鼠【作者】程广超;杨斌;王建礼;桂长莉【作者单位】北方民族大学生物科学与工程学院 ,宁夏银川750021;北方民族大学生物科学与工程学院 ,宁夏银川750021;北方民族大学生物科学与工程学院 ,宁夏银川750021;北方民族大学生物科学与工程学院 ,宁夏银川750021【正文语种】中文【中图分类】S853.1雌性动物的动情周期分为动情前期(proestrus)、动情期(estrus)、动情后期(metestrus) 和动情间期(diestrus)，相应地外周血雌激素和孕激素水平也有一个周期的变化，二者在动情前期处于高峰水平[1]。

受到卵巢雌激素和孕激素波动的影响，动情周期会影响雌性动物的行为和情绪。

例如，雌性动物的性行为会随动情周期变化，处于动情前期雌性大鼠的气味对雄性最具吸引力，在动情间期最缺乏吸引力；小家鼠(Mus musculus)的配偶选择也依赖于动情状态[2]。

２０北京农学院学报第２０卷１材料与方法１．１实验动物以ＩＣＲ系ＳＰＦ性成熟小鼠（购自北京实验动物中心）为实验动物。

雌鼠体重２９～３２ｇ，雄鼠体重３３～３５ｇ，雌雄分笼饲养在室温、自然光照、自由饮水的条件下，采用全价繁殖颗粒饲料饲养。

经７ｄ的适应性饲养后，按常规方法对雌鼠进行超数排卵处理。

１．２实验方法１．２．１阴道涂片法判断小鼠发情周期及外阴部特点的观察采用阴道涂片方法［２］对小鼠进行发情周期观察。

首先将小鼠保定，翻提起尾巴露出阴道口，观察外阴的变化并记录其特点。

然后右手持滴管吸少量生理盐水滴入阴道口，当稍放松尾部及腰部时，生理盐水即被吸入阴道，稍候三指轻压腰部，黏液随生理盐水流出，吸入滴管中，滴到载玻片上。

待稍干后用酒精（９５％）固定５ｍｉｎ，然后用伊红染液染色１５ｍｉｎ，随后冲片，干燥，镜检。

１．２．２外部观察法确定小鼠发情时期根据阴道涂片结果及小鼠在不同发情周期所表现出的外阴部特点，依次将其分为发情前期（实验１组）、发情期（实验２组）、发情后期（实验３组）、问情期（实验４组）４个实验组别。

发情周期未观察小鼠作为对照组。

１．２．３小鼠超数排卵［３３雌性小鼠于１９：００腹腔注射ＰＭＳＧ（天津实验动物中心，批号：０４３２９）１０ＩＵ／只，间隔４８ｈ腹腔注射ｈＣＧ（国营南京动物激素厂，批号：９８０１０９）１０ＩＵ／只，注射ｈＣＧ后即与公鼠按１：１合笼。

次日８：ｏＯ检查阴栓，凡阴门处有阴道栓，合笼后４７ｈ脱臼处死小鼠，获取２一细胞胚胎。

１．３数据统计采用卡方检验。

２实验结果２．１小鼠阴道涂片上皮细胞变化及外阴部特点观察‘２３见表１和图１、图２。

表１小鼠阴道涂片上皮细胞变化及外阴部特点图１不同发情时期阴道上皮细胞变化２．２不同发情周期小鼠超排效果由表２可知，（１）不同发情周期超排成功率，实验１组、２组和４组极显著高于３组和对照组（Ｐ＜ｏ．０１）。

（２）平均图２不同发情时期外阴部特征每组可用胚胎率，实验ｌ组、２组、４组与对照组无显著差异（Ｐ＞ｏ．０５），但与实验３组差异极显著（Ｐ＜ｏ．０１）。

小鼠交配繁殖常识及注意事项小鼠是最常见的实验动物，很多实验室买回小鼠后都涉及到繁殖的问题。

下面来给大家介绍一下小鼠后续交配繁殖的常识及注意事项。

·交配小鼠体成熟一般多为60～90天，是适宜的配种日龄。

一般发情后2～3小时即可排卵，排卵期3～4天，但在排卵期仅数小时内才允许公鼠交配。

雌鼠交配后，在阴道口形成一个白色的阴道栓，是公鼠的精液、母鼠的阴道分泌物和阴道上皮混合遇空气后变硬的结果，可防止精子倒流，提高受孕率。

阴道栓常视为交配成功的标志。

阴道栓在交配后12～24小时自动脱落。

雌鼠产后12～24小时可发情，此时交配可造成产后妊娠（边哺乳边怀孕）。

有时，由于延迟着床，此妊娠期要比一般妊娠期长，可达31～35天。

此外雌鼠与不育雄鼠交配或用机械方法刺激宫颈可产生假性妊娠（pseudopregnancy），一般可维持10～12 天，有时长达3周。

·妊娠妊娠期19～21天，妊娠期的长短与小鼠品系及个体、环境因素、排卵数量、受精卵种植率、胎次等有关。

·分娩小鼠的分娩多在夜间进行。

产前不安，不停地整理产窝，约4分钟产仔一只，1分钟后胎盘产出，母鼠将胎盘嚼食。

整个过程约经1小时。

有时可出现因受精卵种植延迟导致的产后3～5天又产仔的现象。

小鼠每胎产仔6～15只，产仔数取决于品系、胎次、饲养条件、营养条件等。

第2～6胎产仔数较多，一般7胎后产仔数逐渐下降。

·哺乳哺乳期18～23天，小鼠带仔数一般为8～10只，因母鼠营养状况、体质状况、生产能力等因素的不同而变化。

母鼠哺乳仔数太多可导致仔鼠发育不均。

如带仔数不足时可将其它多余的同龄仔鼠放入寄奶代乳，但放入前应使其感染新窝的气味，以免被代乳母鼠咬死。

留种仔鼠可适当延长哺乳期到23天。

·繁殖时限小鼠性活动可维持1年左右，作为种鼠使用时间一般为6～8个月,之后其繁殖能力下降,仔鼠质量越来越差，因此应予淘汰。

近交系小鼠一般连续生产5～6胎，即可淘汰。

小鼠不同动情周期子宫内膜组织中 Bcl-2、Bax 和 Caspase-9蛋白的表达左俐俊;任亚萍【摘要】Aim:To explore the expressions of Bcl-2,Bax,and Caspase-9 in endometrium at different stages of estrous cycle in maturemice.Methods:A total of 32 sexual maturity healthy mice were randomly allocated into 4 groups(n=8), and through the rats vaginal smear observation and types of the cells , the mouse′s estrous cycle stage was clearly deter-mined.Then immunohistochemistry was carried out to screen the protein of Bcl-2,Bax,and Caspase-9 in mice.Results:Bcl-2 was highly appeared in diestrus stage (P<0.05).Bax was also expressed in the estrous cycle but had no significant difference among different stages(P=0.796).Besides, Caspase-9 in each estrus stage of mainly expressed in the mucosa epithelial cytoplasm , lamina propria uterus gland cell cytoplasm ,and stromal cell cytoplasm ,and it was lowly expressed in the beginning of the estrous cycle (P<0.05).Conclusion:Bcl-2,Bax, and Caspase-9 regulate the proliferation and apop-tosis of endometrial cell cycle during estrous cycle .%目的：探讨Bcl-2、Bax和Caspase-9在性成熟期小鼠动情周期不同阶段子宫内膜组织中的表达及定位。