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附录蜜蜂检疫规程实验室检测方法1.美洲蜜蜂幼虫腐臭病从蜂群中抽取部分封盖子脾,挑取其中的死幼虫5 10条,置研钵中,加2 3ml无菌水研碎后制成悬浮液㊁涂片,经革兰氏染色,在1000 1500倍的显微镜下进行检查,发现大量革兰氏阳性的游离状的杆菌芽孢,培养出的单菌落经PCR扩增后测序鉴定,判定为美洲幼虫腐臭病㊂实验室PCR鉴定方法:挑取培养的单菌落至20μL0．2M的NaOH,消化8min;取上述2μL消化液至98μL无菌水,制备PCR模板;扩增16S rRNA,PCR 扩增体系为:㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀DNA模板㊀㊀㊀4μL㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀27F2．5μL㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀1492R2．5μL㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀聚合酶Mix25μL㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀ddH2O16μL扩增条件为:94ħ,10min;30个循环(94ħ,30s;Tm-5ħ,30s; 72ħ,45s;);72ħ,10min㊂66引物序列:27F:AGAGTTTGATCCTGGCTCAG1492R:TACGGCTACCTTGTTACGACTT电泳:1%琼脂糖凝胶电泳,出现1．5kbp条带,则送测序公司测序,与幼虫芽孢杆菌的序列相似性大于97%,即可判断为幼虫芽孢杆菌㊂2.欧洲蜜蜂幼虫腐臭病从蜂群中抽取部分未封盖2 4日龄幼虫脾,挑取其中的死幼虫5 10条,置研钵中,加2 3ml无菌水研碎后制成悬浮液㊁涂片,经革兰氏染色后,在1000 1500倍的显微镜下进行检查,发现0．5ˑ1．0μm呈革兰氏阳性的单个㊁短链或呈簇状排列的披针形球菌,同时有许多杆菌和芽孢杆菌等多种微生物,培养出的单菌落经PCR扩增后测序鉴定,判定为欧洲幼虫腐臭病㊂实验室PCR鉴定方法同美洲幼虫腐臭病㊂3.蜜蜂孢子虫病在蜂箱门口与蜂箱上梁处避光收集8日龄以下的成年工蜂60只,取出30只(另30只备用)消化系统,置研钵中,加2 3ml无菌水研碎后制成悬浮液,置干净载玻片上,在400 600倍的显微镜下进行检查,若发现卵圆近米粒形,边缘灰暗,具有蓝色折光的孢子,判定为蜜蜂孢子虫病㊂76。
蜜蜂检疫技术在我们平时开展的动物检疫中，主要进行家畜家禽的检疫，蜜蜂的检疫国家没有一定的检疫规范，致使放蜂兄弟的经济利益受损 , 同时也降低了对各种农作物、果树孕蕊结果也起到很好的授粉作用。
现将蜜蜂检疫技术在临床上的应用予以推广。
1 蜜蜂的疫病根据《中华人民共和国农业部公告》第 96 号规定 , 蜜蜂二类病有 :美洲蚴虫腐臭病、欧洲蚴虫腐臭病、蜜蜂孢子虫病、蜜蜂螨病、大蜂螨病、白垩病。
2 蜜蜂检疫环节2.1 到达卸车检疫每年4月底5月初，蜂农由南向北来我区放蜂 , 卸车后我们立即到场(货场) 检疫。
首先查验有无放蜂许可证、运输检疫证和消毒证 ,并对所有蜂群进行全面检疫。
目的是及时发现在装车地和运输途中蜜蜂有无被染疫 ,便以就地控制 ,防止扩散 ,保证蜂群、蜜源不被污染。
2.2 放养期间监督观察蜂农选择好周围蜜源丰富的地方驻扎后 ,蜜蜂开始正常采集工作。
由于蜜蜂误采有毒、有害的寄生虫的花粉、花密 , 可导致疾病发生。
因此 , 检疫人员定期跟踪监督检查 , 有情况及时通报 , 发现病情立即指导救治 , 确保蜂势强劲和蜂蜜的质量。
2.3转运发送检疫在装车前对所有的蜜蜂开箱检疫 ,蜂箱外消毒 ,合格后装运。
主要是检出病蜂、控制病蜂外流、带入其他目的地。
3 蜂检疫方法3.1 向蜂农了解蜜蜂疫情在有关证件齐全时 , 为了掌握蜜蜂全面情况 , 向蜂农了解转来前的采集地、当地的气候、有无疫情、路途时间等 , 蜜蜂有无病史、采蜜量、防治用过何种药物、喂过何种蜂粮。
3.2 全群检查(1)根据蜜蜂生物学特性和生活习性，做到稳、准、细、快接触蜂群时，站在蜂箱侧面，视力集中。
对可疑病蜂仔细检查，找出典型症状进行辨别分析，量后确诊2)检查病蜂：病蜂一般被健康驱赶到果门口或者附近地面上，所以检疫时把准巢门附近的蜂多查细看，病蜂一般出现抖、跳跃，行动失调等现象，也有的胸、部绒毛脱躯体颜色异常，翅的形状不完整或者发育不完全。
(3)检查死蜂：死蜂大都集中在蜂箱周围，应仔细观察死蜂的日始、数量、姿态、颜色，的完整性及是否伸出等。
如何进行蜜蜂的原生动物病害病原的鉴定
初步检查
可取病蜂30～50只，先取出蜜蜂的消化道，置研钵内研碎后，再加少量无菌水制成悬浮液进行涂片检查。
若系干枯的标本，则可取病蜂的整个腹部研碎，制成悬浮液进行检查。
染色检查
先配制染色液。
A液：称取沙黄5g，溶于100毫升蒸馏水中，在36～37℃下，放置1昼夜。
含不同浓度菌液及在培养皿内菌落的分布情况
B液：取孔雀绿5g，溶于100毫升蒸馏水中，在36～37℃下放置5昼夜。
操作方法，
取病蜂50只，研碎后，加生理盐水25毫升，制成悬浮液，然后取悬浮液进行涂片、风干、固定；滴加A液l～2滴于已固定的玻片标本上，加热至气腾，冷后水洗，滤纸吸干，再滴加B液复染25-30s，倾去染液，水洗、吸干、镜检。
结果：孢子虫被染呈红色、蜜蜂体内的杂物被染呈绿色。
对阿米巴病的检查
39蜂疗网提醒您除了可按上述检查孢子虫病方法进行检查外，还可取出蜜蜂马氏管部分，放在载玻片上，再滴一滴无菌水，置低倍镜下进行观察，如果是阿米巴病，即可见珍珠般的孢囊从马氏管里溢向水里。
农业部关于印发蜜蜂检疫规程的通知
佚名
【期刊名称】《中华人民共和国农业部公报》
【年(卷),期】2010(000)011
【摘要】农医发[2010]41号各省、自治区、直辖市畜牧兽医(农牧、农业、农村
经济)厅(局、委、办):为规范蜜蜂的检疫工作,按照《中华人民共和国动物防疫法》、《动物检疫管理办法》等有关规定,我部制定了《蜜蜂检疫规程》,现印发给你们,请遵照执行。
【总页数】4页(P34-37)
【正文语种】中文
【中图分类】S851.347.32
【相关文献】
1.农业部关于印发《鱼类产地检疫规程(试行)》等3个规程的通知 [J], ;
2.农业部关于印发《犬产地检疫规程》等3个动物产地检疫规程的通知 [J], ;
3.农业部关于印发《生猪产地检疫规程》等4个规程的通知 [J], ;
4.农业农村部关于印发《生猪产地检疫规程》《生猪屠宰检疫规程》和《跨省调运乳用种用动物产地检疫规程》的通知 [J],
5.农业农村部关于印发《生猪产地检疫规程》《生猪屠宰检疫规程》和《跨省调运乳用种用动物产地检疫规程》的通知 [J], 农业农村部
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进出境蜜蜂现场检疫监管规程1 范围本标准规定了进出境蜜蜂现场检疫监管的内容和措施。
本标准适用于进出境蜜蜂（包括整群蜜蜂、蜂王）的现场检疫和监督管理。
2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T18088 出入境动物检疫采样GB/T19168 蜜蜂病虫害综合防治规范SN/T2123 出入境动物检疫实验样品采集、运输和保存规范NY5027 无公害食品畜禽饮用水水质国家质检总局令第25号进境动植物检疫审批管理办法国家质检总局令第122号进境动物隔离检疫场使用监督管理办法3 术语和定义下列术语和定义适用于本标准。
3.1蜜蜂honeybee蜜蜂总科，蜜蜂科中能筑造带六菱柱柱形巢房的巢脾并在其中育子、贮存蜂蜜和蜂花粉的一个属，是呈群体性生活的社会性昆虫，包括很多种、亚种、小种及亚小种，能适应不同环境。
3.2蜂群honeybee colony蜜蜂的社会性群体，是蜜蜂自然生存和蜂场饲养管理的基本单位。
3.3全面检查overall inspection对蜂巢内巢脾及蜂箱四壁、巢框、箱底等逐一检查，全面了解蜂群内的蜂王、幼虫发育、蜜粉储存和病虫害等情况。
3.4巢脾comb由蜜蜂筑造，双面布满巢房的脾状腊质结构，是蜂巢的组成部分。
3.5核群nucleus colony指一般由1只蜂王、不多于5张巢脾和约1000只工蜂组成的小蜂群。
4 进境检疫4.1 风险分析首次从某个国家或地区进境蜜蜂，或首次引进某个蜜蜂蜂种时，要组织专家进行风险分析，评估应涵盖蜜蜂疾病、拟引进蜜蜂对本地蜂群的影响以及可能因花粉传入植物病害和转基因等风险因子，根据风险评估结果采取相应的检疫管理措施。
输出国家或地区发生蜜蜂疫情时，应组织专家重新进行风险评估并调整检疫监管措施。
4.2 隔离场使用批准在蜜蜂进境前，货主或其代理人应准备好隔离场，隔离场建设应符合附录A《进出境蜜蜂隔离检疫场动物卫生条件》要求，隔离场使用批准按照《进境动物隔离检疫场使用监督管理办法》及相关配套文件的要求办理。
蜜蜂检疫是指国家有关部门为防止蜜蜂某些危险性疾病传入或传出而采取的一系列防御措施。
通常分对内检疫和对外检疫两种。
对内检疫主要包括三个方面。
第一，根据各省、市、自治区所规定的检疫对象，禁止其传入或传出。
第二，对在局部地区已发生的某种危险性疾病划出疫区和保护区，控制其传播蔓延（“疫区”是指某种传染病正在流行的地区；“保护区”是指未发生某种传染病的一定区域）。
第三，一旦发现新的危险性疾病，立即封锁疫区，控制病害。
对内检疫对象，由各省、市、自治区根据本地区蜂群已发现和尚未发现的某些危险性疾病的种类确定。
对外检疫主要包括两个方面的工作。
第一，根据本国所规定的检疫对象，禁止其从其他国家传入。
第二，根据其他国家的要求和规定，禁止本国的某些检疫对象传出。
根据国际上蜜蜂疾病发生的种类和我国尚未发现的疾病种类，检疫部门规定美洲幼虫腐臭病、孢子虫病、武氏蜂盾螨（气管壁虱）、蜂虱及白垩病作为对外检疫对象。
国家法定的行政机构按法定程序行使检疫权，养蜂者应主动申请报告，并配合检疫部门做好工作，主管部门按照有关规定做出相应处理。
1986年原农牧渔业部颁发了《养蜂管理暂行规定》，规定中第七条对蜜蜂检疫做了明确规定。
规定指出：“对出省放蜂的蜂群，在出省前要检疫。
蜜蜂检疫由县级以上主管部门或由其委托单位负责进行，并将检疫情况如实填写在养蜂证的…检疫记事‟栏内，检疫有效期为3个月。
凡在省内放养的蜂群一般不检疫。
检出患有检疫对象疾病的蜂群，就地治愈后方可出境。
检疫对象为欧洲幼虫腐臭病、美洲幼虫腐臭病、中蜂囊状幼虫病、麻痹病、蜂螨等。
实行现场检疫办法，可按蜂场的实际蜂群数量核收检疫费。
”防止传染病传播的紧急措施隔离与封锁隔离病群和可疑感染的蜂群是控制传染病传播的重要措施之一。
为此，在传染病流行时，应首先查明蜂群的感染程度，然后将蜂群分为健康群、病群和疑似病群。
病群应集中隔离于蜂场2000米之外，进行消毒和治疗。
养蜂员要减少在蜂场与隔离区两地来回活动的次数，隔离区内的蜂具与杂物，未经彻底消毒处理，不可带回蜂场；未发现任何症状，但与病群曾有过密切接触的蜂群，属于疑似病群。
海关总署关于进口斯洛伐克熊蜂检疫和卫生要求的公告文章属性•【制定机关】中华人民共和国海关总署•【公布日期】2024.11.15•【文号】海关总署公告2024年第162号•【施行日期】2024.11.15•【效力等级】部门规范性文件•【时效性】现行有效•【主题分类】卫生检疫正文海关总署公告2024年第162号关于进口斯洛伐克熊蜂检疫和卫生要求的公告根据我国相关法律法规和中华人民共和国海关总署（以下称中方）与斯洛伐克共和国国家兽医和食品管理局（以下称斯方）关于斯洛伐克熊蜂输华检疫和卫生要求的规定，即日起，允许符合相关要求的斯洛伐克熊蜂进口：一、检验检疫依据（一）《中华人民共和国海关法》；（二）《中华人民共和国生物安全法》；（三）《中华人民共和国进出境动植物检疫法》及其实施条例；（四）《中华人民共和国海关总署与斯洛伐克共和国国家兽医和食品管理局关于斯洛伐克输华熊蜂检疫要求议定书》。
二、允许进口商品名称熊蜂，仅限于红光熊蜂（Bombus ignitus）。
三、检疫证书要求斯方负责对输华熊蜂进行检验检疫，按照双方确认的证书样本签发检疫证书。
（一）检疫证书必须包含以下信息：1．出口商和进口商的名称和地址。
2．熊蜂的数量和品种。
3．熊蜂包装或者装载容器的数量、封识或者标识号。
4．输华熊蜂的养殖和中转包装场所的名称、地址和官方批准编号。
（二）检疫证书须用斯洛伐克文、中文和英文打印，手写（官方兽医官签名除外）或涂改无效；检疫证书正本随熊蜂同时运抵中国，并附有相关的实验室检测报告。
四、检疫审批要求斯方凭中方签发的《中华人民共和国进境动植物检疫许可证》（以下简称《进境动植物检疫许可证》）对输华熊蜂实施检疫。
五、生产企业要求向中国输出的熊蜂来自以下养殖或者中转包装场所：（一）经斯方批准，并经中方现场考核并注册。
（二）输出前2年内，场所周围半径100公里范围内没有官方报告发生蜂巢小甲虫（Aethina tumida）。
（三）场所是完全封闭的，与外界环境完全隔离。
