乙型肝炎病毒抗体诊断胶体金法SOP标准操作程序

SOP_13-5 金标项目标准操作程序一、目的：统一项目操作规程，严格检验质量标准，为临床提供及时、可靠的结果报告。

二、适用范围：免疫学检验项目。

三、操作人员：检验科授权工作人员四、项目内容：丙型肝炎病毒抗体Anti—HCV检测爱滋病抗体Anti—HIV检测肌钙蛋白CTNI检测衣原体CT检测乙肝表面抗原(血清/血浆)检测胶体金法丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒（胶体金法）产品名称通用名：丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒（胶体金法）英文名：Diagnostic Kit for Antibody To Hepatitis C Virus(Colloidal Gold)包装规格：条型/卡型：40人份/盒、50人份/盒、100人份/盒预期用途丙型肝炎病毒可通过输血、血制品不洁注射、母婴和密切接触而传播，主要通过输血而引起，丙型肝炎约占输血后肝炎70%以上。

由于病毒的高变异型，目前还没有有效的丙肝疫苗面世，因此预防和控制丙型肝炎的感染和扩散变得尤为重要，而丙型肝炎的诊断是其中最关键的环节。

丙型肝炎病毒抗体作为一种重要的丙肝标志物，对其进行检测一直以来为临检所重视，是目前最主要的丙型肝炎辅助诊断手段之一。

本检测试剂盒用于定性检测人血清或血浆样本中的丙型肝炎病毒（HCV）抗体。

检验原理本品采用胶体金免疫层析技术，用用间接法原理定性检测人血清（浆）中HCV抗体。

在玻璃纤维素膜上预包被金标小鼠抗人(lgG Ab),在硝酸纤维素膜上检测线和对照线处分别包被重组丙肝混合抗原（Core、NS3、NS4、NS5，源自大肠杆菌）和人lgG抗体（丙种球蛋白）。

检测阳性样本时，血清样本中HCV-Ab与胶体金标记小鼠抗人lgG抗体结合形成复合物，由于层析作用复合物沿纸条向前移动，经过检测限时与预包被的抗原结合形成“Au-anti+lgG Ab –HCV Ab–HCV Ab”夹心物而凝聚显色，游离金标小鼠抗人lgG抗体则在对照线处与人lgG 抗体结合而富集显色。

区人民医院乙肝病毒表面抗原（HBsAg）操作规程1方法胶体金法2原理本品采用胶体金免疫层析专业技术，在玻璃纤维素膜上预包被HBsAg,在硝酸纤维素膜上检测线和对照线处分别包被HBsAg单抗（sAb2）和羊抗鼠IgG.检测阳性血清或血浆样本时，样本中HBsAg与胶体金标记抗体结合形成复合物，由于层析作用复合物沿纸条向前移动，经过检测线时与预包被的抗体结合形成夹心物而凝聚显色，游离金标抗体则在对照线处与羊抗鼠IgG结合而富集显色。

阴性标本则尽在对照线处显色。

3 试剂英科新创（厦门）科技有限公司4 试剂组成4.1试纸条25条4.2说明书1份5 仪器目测6 操作步骤6.1将试纸条取出，水平放置并做好标记。

6.2用加样器或毛细吸管吸取60ul新鲜全血（或血清、血浆）缓慢滴加与试剂条箭头下方的垫片上6.3为防止弱阳性标本的漏检，请于加样后10分钟观察并记录试验结果。

7 结果判断阴性：出现一条红线。

阳性：出现二条红线。

无效：不出现红线。

8 正常参考值阴性9 临床意义同ELISA法测定。

10 标本采集10.1 可采用全血、血清、血浆进行检测，血浆标本对抗凝剂无要求。

10.2 采集静脉血的血清血浆应在无菌条件下，避免样品溶血。

10.3 血清、血浆在7天内检测，样品须放在2-8℃保存，大于7天则冷冻保存。

11 注意事项11.1实验室环境应保持一定湿度、避风。

避免在过高温度下进行。

11.2试纸可在室温下保存，谨防受潮。

低温保存下的应平衡室温方可使用。

11.3试剂从包装中取出后，应尽快进行实验，避免放置于空气中时间过长，导致受潮。

11.4实验应在加样10分钟内判读结果，只需在检测线出现紫红线，即可判断阳性结果。

考核时间：考核人：考核监督人：
考核结果：分值
扣分
得分
551010
51010
请判断出阳性、阴性及无效结果
20
结果判读
1、阴性结果，直接出报告
2、两次复查结果均为阳性，则填写传染病登记本，并打电话告知临床。

检验科负责人：
2、将另一种试剂的胶体金测试卡从包装盒中取出，打开铝箔包装袋，平置于台面上。

编号（与样品相对应）
1、核对待测样本与检测试剂卡编号是否一致。

阳性结果处理方式
考核内容（满分100分）：
1、将待测标本从储存条件下取出，平衡至室温（18－25℃）并编号。

2、将胶体金测试卡从包装盒中取出，打开铝箔包装袋，平置于台面上。

编号（与样品相对应）
3、用塑料滴管在试卡的五个加样孔中分别加入60ul血清（血浆），或用所配滴管在每个加样孔中滴加三滴（英科新创）
3、吸取血清/血浆样本，垂直加入3-4滴（约80ul）于每个加样孔中；若为全血标本，垂直加入1-2滴（约50ul）于每个加样空中；同时滴加1-2滴稀释液。

（广州万孚）
4、15分钟左右观察显示的结果，30分钟后显示的结果无临床意义（广州万孚）5
乙型肝炎病毒标准操作考核（胶体金法）
4、加样20分钟后最终观察并判断结果，30分钟后试验结果无效。

（英科新创)。

乙型肝炎病毒抗体诊断（胶体金法SOP）测定标准操作程序编写者：宿金涛日期：2012年3月1日一.原理：乙型肝炎病毒表面抗原、表面抗体、e抗原、e抗体、核心抗体检测试剂盒（胶体金法）采用胶体金免疫层析分析技术、将五个诊断意义相关的试剂通过一个包装组合在一起，同时进行乙型肝炎病毒五项标志物的检测，在不影响各自性能的情况下，便于客户的储存和使用。

HBsAg检测试剂采用双抗体夹心法，试剂含有被事先固定于膜上测试区（T）的抗体。

测试时，标本滴入试剂加样处，标本与预包被的胶体金颗粒结合的抗HBsAg抗体反应。

然后，混合物随之在毛细效应下向上层析。

如是阳性，胶体金抗体在层析过程中先于标本中的HBsAg结合，随后家何物会被固定在膜上的抗HBsAg抗体结合，在测试区内（T）会出现一条紫红色带。

这条带是HBsAg抗体-HBsAg-HBsAg抗体金标粒子的复合物在膜上结合形成的。

如是阴性，则测试区内（T ）将没有紫红色带。

无论HBsAg是否存在于标本中，一条紫红色带都会出现在指控内（C）。

质控区内（C）所显现的紫红色条带是判定是否有足够标本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。

HBsAb检测试剂双抗原夹心法，试剂含有被事先固定于膜上测试区（T）的乙肝表面抗体。

测试时，标本滴入试剂加样处，标本与预包被的胶体金颗粒结合的HBsAg反应。

然后，混合物随之在毛细效应下向上层析。

如是阳性，胶体金抗体在层析过程中先于标本中的HBsAg结合，随后结合物会被固定在膜上的HBsAg抗体结合，在测试区内（T）会出现一条紫红色条带。

这条带是HBsAg-HBsAb-HBsAg金标粒子的复合物在膜上结合形成的。

如果阴性，则测试区内（T）将没有紫红色条带。

无论HBsAg是否存在于标本中，一条紫红色条带都会出现在质控区内（C）。

质控区内（C）所显现的紫红色条带是判定是否有足够标本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。

HBeAg检测试剂采用双抗体夹心法，试剂含有被事先固定于膜上测试区（T）的乙肝e抗体。

传染病四项通常指的是乙型肝炎病毒（HBV）、丙型肝炎病毒（HCV）、人类免疫缺陷病毒（HIV）和梅毒螺旋体（Syphilis）的检测。

胶体金法是一种快速、简便的免疫层析检测方法，常用于临床实验室进行这些传染病的初筛检测。

以下是检验科进行传染病四项胶体金法标准操作程序的大致步骤：1. 准备阶段：确认胶体金试剂盒的有效期、批号，并按照说明书储存条件保存。

准备必要的器材，如移液器、测试板、计时器、记录表格等。

确保操作环境符合生物安全要求。

2. 样本采集：遵循相关的生物安全规程，采集患者的血液样本，通常为指尖血或静脉血。

确保采血器具的清洁和无菌。

3. 样本处理：根据胶体金试剂盒的说明书，将血液样本加入特定的试剂中，并按照规定的程序进行混合。

等待试剂反应规定的时长，通常为1520分钟。

4. 结果判读：在胶体金测试板上，根据对照线和测试线的出现情况判断结果。

通常，如果对照线和测试线同时出现，判定为阳性；只有对照线出现，判定为阴性；对照线不出，测试线出现，判定为无效，需要重新检测。

5. 结果记录和报告：记录检测结果，并填写检测报告。

如果检测结果为阳性，需要按照实验室规定进行复检，并采取相应的生物安全措施。

6. 废弃物处理：按照规定处理使用后的试剂、样本和废弃物，确保符合环保和生物安全要求。

7. 质量控制：定期进行质量控制检查，包括使用已知阴性和阳性的质控样本进行检测，确保检测系统的准确性。

请注意，以上步骤仅供参考，具体的操作程序应遵循实验室的标准操作规程和胶体金试剂盒的说明书。

操作过程中应严格遵守实验室安全规范，确保检测结果的准确性和安全性。

乙型肝炎病毒抗体诊断（胶体金法SOP）测定标准操作程序编写者：宿金涛日期：2012年3月1日一. 原理：乙型肝炎病毒表面抗原、表面抗体、e抗原、e抗体、核心抗体检测试剂盒（胶体金法）采用胶体金免疫层析分析技术、将五个诊断意义相关的试剂通过一个包装组合在一起，同时进行乙型肝炎病毒五项标志物的检测，在不影响各自性能的情况下，便于客户的储存和使用。

HBsAg检测试剂采用双抗体夹心法，试剂含有被事先固定于膜上测试区(T)的抗体。

测试时，标本滴入试剂加样处，标本与预包被的胶体金颗粒结合的抗HBsAg抗体反应。

然后，混合物随之在毛细效应下向上层析。

如是阳性，胶体金抗体在层析过程中先于标本中的HBsAg结合，随后家何物会被固定在膜上的抗HBsAg抗体结合，在测试区内（T）会出现一条紫红色带。

这条带是HBsAg抗体-HBsAg-HBsAg抗体金标粒子的复合物在膜上结合形成的。

如是阴性，则测试区内（T）将没有紫红色带。

无论HBsAg是否存在于标本中，一条紫红色带都会出现在指控内（C）。

质控区内（C）所显现的紫红色条带是判定是否有足够标本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。

HBsAb检测试剂双抗原夹心法，试剂含有被事先固定于膜上测试区（T）的乙肝表面抗体。

测试时，标本滴入试剂加样处，标本与预包被的胶体金颗粒结合的HBsAg反应。

然后，混合物随之在毛细效应下向上层析。

如是阳性，胶体金抗体在层析过程中先于标本中的HBsAg结合，随后结合物会被固定在膜上的HBsAg抗体结合，在测试区内(T)会出现一条紫红色条带。

这条带是HBsAg-HBsAb-HBsAg金标粒子的复合物在膜上结合形成的。

如果阴性，则测试区内(T)将没有紫红色条带。

无论HBsAg是否存在于标本中，一条紫红色条带都会出现在质控区内(C)。

质控区内(C)所显现的紫红色条带是判定是否有足够标本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。

HBeAg检测试剂采用双抗体夹心法，试剂含有被事先固定于膜上测试区（T）的乙肝e抗体。

乙肝病毒前SI抗检测操作规程1、检验目的乙型肝炎病毒前S1抗原是乙型肝炎病毒感染和复前的重要血清标志。

因此在急性乙型肝炎病毒感染的早期检测PRE-SI抗原可作为早期诊断HBV感染的依据，并可弥补某些HBeAg呈阴性急性感染的不足，在慢性HBV感染中PRE-SI抗原持续阳性提示病情进展和恶化，从而为临床提供HBV感染的辅助诊断。

2、检测原理乙型肝炎病毒前SI抗原检测试剂盒（酶联免疫法）采用夹心法原理，在微孔板预包被抗-HBV PRESI羊抗隆抗体，与血清中乙型肝炎病毒前SI抗原反应，再加入辣根过氧化物酶标记的乙型肝炎病毒表面抗原（抗-H B S-HRP）形成免疫复合物，加入TMB等显色底物呈显色反应。

3、标本要求采用血清或血浆，细菌片集、严重溶血或脂血标本不能作测定。

临床上一般和乙肝二对半同做，合称“乙肝三对”。

标本7天内检测，可放2—8℃保存。

4、试剂4.1试剂名称：乙型肝炎毒前SI抗原检测试剂盒4.2生产厂家：厦门英科新创科技有限公司4.3包装规格：48T/盒，96T/盒4.4试剂盒组成：PRE-SI微孔板（48T/96T）、酶标记抗体、阳性对照、阴性对照、浓缩洗涤液、底物A、底物B、终止液。

4.5储有条件及有效期：2—8℃保存，有效期12个月5、仪器设备——酶标仪、——洗板机、37℃水浴箱、振荡器、离心机、连续加样枪。

6、操作步骤6.1取出试剂盒，在室温下权置30分钟使之平衡至室温6.2浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1:19稀释后使用，浓缩洗涤液配置充分摇匀。

6.3编号：取所需数量微孔条固定于支架，按序编号，每板应度阴、阳性对照各2孔和空白对照1孔（空白对照不加样本及酶标物，其余各步相同）。

6.4加样：分别用加样器加入阴、阳对照血清各50于相应孔中。

6.5加酶：分别在每孔中加入酶标记抗体50 ，轻拍混匀。

6.6温育：置37℃温育60分钟6.7洗涤：用洗涤液充分涤涤5次，洗涤完后拍干6.8显色：每孔加入底物A、B各50，轻拍混匀，37℃暗量，15分钟6.9测定：用酶标仪单波长450或双波长450/630nm测定多孔OD值（用单波长测定时，需设空白对照孔校零）6.11结果判断6.11.1 临界值（C.O）的计算临界值（C.O）=阴性对照孔OD值N×4（阴性对照孔OD均值＜0.05以0.05计）6.11.2判断样品OD值S/C.O≥1者为乙型肝炎病毒SI抗原阳性样品OD值S/C.O＜1者为乙型肝炎病毒SI抗原阴性阳性对照OD值≤0.4时，实验无效，应重新试验乙型肝炎病毒表面抗原（胶体金法）检测操作规程1、检验目的以定性的方法快速检测全血（或血清/血浆）中乙肝表面抗原（HB S Ag），临床常用于无偿献血员现场初筛及临床急症手术前检测HB S Ag。