下载文档原格式
大环内酯类和林可胺类药物残留测定方法——微生物法和气相色谱法6.1.4.2 测定办法 MALs种类较多，结构相像，对于该类药物的平安用法和残留检测向来是各国关注的焦点和讨论的重点。
而林可胺类药物经常与MALs同时用法，因此需要举行多残留同时分析。
目前，国内外关于MALs和林可胺类药物残留分析的文献较多，其检测办法主要包括微生物法、免疫分析法(IA)、薄层色谱法(TLC)、毛细管电泳法(CE)、气相色谱法(GC)、高效液相色谱法(HPLC)、气质联使用(GC-MS)和液质联使用(LC-MS)等。
总体说来，大多仪器分析技术基本都可用于两类药物的残留检测，以HPLC和LC-MS最为常见。
随着残留分析技术的进展，CE和TLC因为敏捷度达不到要求而逐渐被色质联使用所代替。
(1)微生物法(microbiologicalanalysis) 微生物法是经典的MALs含量测定办法。
王敏等利用微生物生长抑制的原理，对6种MALs残留举行了定性检测。
该办法通过MALs敏感菌Bacillusstearothermophilus细菌的生长与否，来推断MALs的存在。
该办法对多种基质的动物源食品检测限低，能够达到食品中MALs的MRL的1/2，操作容易且不需要复杂的仪器设备，可作为有效的筛选办法。
Nouws等建立了微生物法测定牛奶中MALs等多种类药物的残留量。
该办法以枯草杆菌、、、表皮葡萄球菌等作为实验用菌株，通过平板上抑制区域的大小来推断药物残留量的多少，除了少数几种药物，大多数待测抗生素的敏捷度都能满足欧盟所规定的牛奶中抗生素MRLs的要求，待测的48种抗生素均未超过欧盟所规定的MPLs。
在规定MRLs水平上，7种培养板的平均CV为4.5%～9.8%。
黄晓蓉等利用微生物抑制法检测了肉类、水产品及蛋中的MALs残留量，办法的LOD值为0.05mg/kg。
采纳ATCC9341、ATCC663、蕈状变种ATCCI1778为敏感菌，一次操作可同时检测肉类、水产品及蛋中的四大类抗生素残留。
几种常见抗生素的相关性质和检测方法抗生素是一类能够抑制或杀死细菌的药物，被广泛用于医疗和农业领域。
不同种类的抗生素具有不同的化学结构和作用机制，因此它们的相关性质和检测方法也会有所不同。
以下是几种常见抗生素的相关性质和常用的检测方法。
1.青霉素类抗生素：青霉素类抗生素是最早使用的抗生素之一，包括青霉素G、青霉素V 等。
它们的共同特点是含有β-内酰胺环结构，并且能够抑制细菌细胞壁合成。
这类抗生素通常以盐酸盐或钠盐的形式存在。
检测青霉素类抗生素的方法包括：高效液相色谱法、气相色谱法、液相色谱紫外检测法、质谱法和生物酶法等。
2.大环内酯类抗生素：大环内酯类抗生素包括红霉素、克拉霉素、阿奇霉素等。
它们的共同特点是含有大环内酯结构，并具有抑制蛋白质合成的作用。
这类抗生素通常以其活性成分的形式存在。
检测大环内酯类抗生素的方法包括：高效液相色谱法、气相色谱法、荧光免疫测定法和质谱法等。
3.氟喹诺酮类抗生素：氟喹诺酮类抗生素包括氧氟沙星、诺氟沙星等。
它们的共同特点是含有氟基和喹诺酮结构，并具有抑制细菌DNA合成的作用。
这类抗生素通常以草酸盐的形式存在。
检测氟喹诺酮类抗生素的方法包括：高效液相色谱法、荧光免疫测定法、质谱法和生物传感器等。
4.β-内酰胺类抗生素：β-内酰胺类抗生素包括头孢菌素、青霉烯类抗生素等。
它们的共同特点是含有β-内酰胺环结构，并具有抑制细菌细胞壁合成的作用。
这类抗生素通常以盐酸盐或钠盐的形式存在。
检测β-内酰胺类抗生素的方法包括：高效液相色谱法、气相色谱法、荧光免疫测定法和质谱法等。
此外，不同抗生素的检测方法还可以根据其特定的性质和化学结构进行定制。
例如，一些抗生素可以通过荧光染料或试剂与其特定的结构发生化学反应，从而实现检测。
另一些抗生素可以通过质谱法进行定性和定量分析。
总而言之，不同种类的抗生素具有不同的化学结构和作用机制，因此它们的相关性质和检测方法也有所差异。
通过了解和应用这些检测方法，可以确保抗生素的安全有效使用，以及对抗生素产生的细菌耐药性进行监测和控制。
动物源性食品中大环内酯类抗生素残留测定方法第1部分：放射受体分析法（二）4.4.2.1 肉类组织、水产品称取均质组织10.0g(精确到0.1g(于50 mL试管中，加入30 mL MSU萃取缓冲液[4.2.1c)]；混合振荡后将试管放置于80℃±2℃温浴45 min，然后冰水浴10 min；于3300r/min条件下离心10 min；取出上清液，注重除去浮在液体表层的脂肪颗粒；用M2缓冲液调整pH值至7.5左右。
4.4.2.2 肝、肾样品称取2.0g样品(精确到0.1g)于50 mL试管中，加入2 mL缓冲液1(4.2.6)，混合后加入3 mL和15 mL水，混合振荡10 min, 6000r/min离心10 min，取上清液至SCX柱(4.2.9)(5mL甲醇、5 mL水、5 mL的磷酸盐缓冲液2预活化)，待溶液彻低流出后，依次以4 mL水、2 mL缓冲液3(4.2.8)、0.1 mL 30％甲醇洗柱，最后负压抽干柱子，以2 mL甲醇洗脱，收集洗脱液于缓和氮气流下吹干，以6 mL MSU缓冲液溶解吹干物，并加入2 mL 组织阴性对比液，用M2缓冲液调整pH值至7.5左右。
4.4.3 测定4.4.3.1 取出检测试剂片，用压杆将白色受体药片[4.2.ld)]推出到空的试管中，用移液器取300 uL水至试管中，用涡旋振荡器混合10 s 将药片打碎。
4.4.3.2 加4 mL样品萃取液或阴性对比液(4.4.1.1)或阳性对比液(4.4.1.2)，用涡旋振荡器混合10 s。
4.4.3.3 将试管置于55℃±1℃的孵育器保温2 min。
4.4.3.4 取出试管，将绿色红霉素氖标志药片[4.2.le)]推至试管中，用涡旋振荡器混合10 s。
4.4.3.5 将试管置于55℃±1℃的孵育器保温2 min。
4.4.3.6 取出试管，在3300r/min的离心力下离心3 min，立刻弃去上清液，用吸水物将测试管边缘的水渍吸干。
动物性食品中大环内酯类抗生素的HPLC分析High performance liquid chromatography analysis ofmacrolide antibiotic residues in animal derived food钮伟民1刘晔2戴军3张敬平1王洪新2 NIU Wei-min1LIU Ye2DAI Jun3ZHANG Jing-ping1WANG Hong-xin2（1.无锡市疾病预防控制中心,江苏无锡214002；2.江南大学食品学院，江苏无锡214122；3.江南大学食品科学与技术国家重点实验室，江苏无锡214122）(1.Wuxi Municipal Center for Control and Prevention of Diseases, Wuxi,Jiangsu214002,China；2.College of Food Science,Jiangnan University,Wuxi,Jiangsu214122,China；3.State Key Laboratory of Food Science and Technology,Jiangnan University,Wuxi,Jiangsu214122,China)摘要：根据近几年国内外的发展趋势，综述动物性食品中大环内酯类抗生素的提取、净化等样品前处理方法和高效液相色谱分离及检测大环内酯类抗生素残留的条件，并比较和讨论各种方法的特点和适用性。
关键词：大环内酯抗生素；动物性食品；高效液相色谱；残留分析Abstrct:The methods and recent development for high performance liquid chromatography(HPLC)analysis of macrolide antibiotic residues in animal derived food have been reviewed.The characteristic and applicability of experiment conditions of extraction,clean up,separation and detection of macrolide antibiotics from animal derived food were summarized,and compared and discussed.Keywords:Macrolide antibiotic；Animal derived food；High performance liquid chromatography；Residues analysis——————————基金项目:2006年卫生部科研项目(项目编号：WKF2006-2-10)作者简介：钮伟民（1954-），男，无锡市疾病预防控制中心主任技师。
浅谈动物源食品中大环内酯类抗生素的检测方法20世纪50年代末，作为青霉素类化合物的代替品，红霉素就已经开始应用于兽医临床。
到现在已经有相当多品种的大环内酯类抗生素能够同时作为人用和兽医用药，还有一些品种的大环内酯类抗生素已作为禽畜专用的抗生素品种生产。
大环内酯类化合物在畜牧和食品行业中广泛地使用，也衍生出一些消极的后果，其中最为受人关注的是动物源病原菌抗药性的获得给动物、人类健康和环境带来了危害。
在对大环内酯类抗生素作为饲料添加剂的风险防范上，欧盟走在了最前列。
1997年欧盟对食品和动物饲料中的螺旋霉素和泰勒霉素颁发了禁令，1999年5月，欧盟采纳了SCAN（动物营养学科学委员会）的观点，同意应该尽可能减少，并且逐渐过渡到禁用可以同时作为医药和兽药用途的抗生素类饲料添加剂。
到2006年1月，欧盟彻底禁用所有抗生素类的生长促进剂。
由此，对畜产品中大环内酯类抗生素的残留分析就成为备受关注的一个环节。
近年以来，应用于食品样品中各种类大环内酯药物残留分析的方法，基本上都基于液相色谱方法及相关联用技术。
目前，食品中MALs残留的分析方法主要有筛选法：放射受体分析法（Charm II法），该方法样品前处理简单、快速，具有良好的特异性和灵敏度。
定性、定量方法：高效液相色谱法（HPLC）、液/质联用(LC/MS)等方法。
近年来LC-MS/MS在残留分析中的应用进展很快，采用电喷雾电离，正离子方式作测定蜂蜜、牛肉和猪肉中四五种大环内酯类抗生素和泰乐菌素。
本试验用乙腈提取样品中的大环内酯，正己烷去除样品中的脂肪，C18小柱净化样品溶液，LC-MS/MS多反应监测七种大环内酯抗生素。
因为大环内酯化合物本身不具有荧光活性，对这类药物的荧光光谱分析只能通过衍生化或者间接方法测定，复杂基体中的杂质干扰使这样的方法很难不基于分离而独立应用，方法还只用于对原料药分析的尝试。
如2002年Khashaba建立了通过间接方式对红霉素、克拉霉素和阿奇霉素定量的荧光光谱法；利用在0.25mol/L的稀硫酸中Ce(IV)和药物发生氧化还原反应，并定量地生成Ce(Ⅲ)的特性；通过对吸引275nm波长紫外并发射430nm荧光的Ce(Ⅲ)进行检测，对目标物质定量。
简述抗生素含量测定的生物学方法和理化法的特点。
抗生素是一类特殊的生物活性物质，具有抑菌、抗真菌、抗病毒等功能，在抗菌药中具有重要地位。
抗生素含量测定是评价抗生素质量的重要手段之一，它涉及到抗生素的生物学和理化测定。
本文主要讨论抗生素含量测定的生物学方法和理化法的特点。
1、抗生素含量测定的生物学方法抗生素含量测定的生物学方法主要包括抗生素敏感性测定法、抗生素活力测定法、抗生素抑制菌法和抗生素促成剂活性测定法等。
（1）抗生素敏感性测定法抗生素敏感性测定法是将被测样品中的抗菌药物溶液与细菌混合接触，如果在有抗药物溶液的情况下细菌活性减弱，说明被测样品中抗生素具有抑制细菌生长的能力，从而判断被测样品中抗生素的有效性。
（2）抗生素活力测定法抗生素活力测定法是将抗菌药物溶液和活菌混合，然后观察活菌是否有减少，可以证明被测样品中抗生素的活力，也可以评估被测样品中抗生素的有效性。
（3）抗生素抑制菌法抗生素抑制菌法即将被测样品中抗生素溶液和细菌混合，然后放入特定培养基中，观察被测抗生素溶液是否能够抑制细菌的生长和繁殖，从而判断被测样品中抗生素的有效性。
（4）抗生素促成剂活性测定法抗生素促成剂活性测定法是一种抗菌药物定量测定方法，通过抗生素促成剂的吸附抗生素的能力来评价抗生素的活性，从而测定抗生素的含量。
2、抗生素含量测定的理化方法抗生素含量测定的理化方法主要有抗生素专用试剂法、薄层析法、分光光度法、高效液相色谱法、电感耦合等离子热法等，它们各自具有不同的优缺点，在抗生素测定中有着不同的应用场景。
（1）抗生素专用试剂法抗生素专用试剂法根据抗生素与其专用试剂发生配体络合反应得到相应单位，从而测定抗生素含量。
（2）薄层析法薄层析法是将抗生素溶液滴入带有限制层的析板上，然后在保持绝对湿度的情况下，在一定的时间内，把抗生素溶液在限制层内滴落，把抗生素单位转化成半径，然后用横截面测量抗生素滴落圆形面积，从而测定抗生素含量。
（3）分光光度法分光光度法由透射式分光光度计和抗生素试剂以及抗生素标准样品组成，通过测量抗生素的发射率和吸收率，从而推断样品中抗生素的含量。
水质大环内酯类和林可酰胺类抗生素的测定液相色谱—串联质谱法1范围本文件规定了液相色谱-串联质谱法对水中7种大环内酯类和2种林可酰胺类抗生素进行测定的方法。
本文件适用于地表水、地下水和废水中林可霉素、螺旋霉素、克林霉素、竹桃三乙酸、琥乙红霉素、麦迪菌素、交沙霉素、克拉霉素、罗红霉素等9种抗生素的测定。
若通过验证，本文件也可适用于其他大环内酯类或林可酰胺类抗生素的测定。
2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。
其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件，不注目期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
HJ91.1污水监测技术规范HJ91.2地表水环境质量监测技术规范HJ164地下水环境监测技术规范3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。
4方法原理水中的目标化合物经固相萃取柱富集，用液相色谱-串联质谱分离检测。
根据保留时间和特征离子峰定性，内标法定量。
5干扰与消除金属离子与目标化合物能形成络合物，使固相萃取效率降低，可向水样中加入乙二胺四乙酸二钠抑制络合物的形成。
6试剂和材料警告——本标准所使用的有机溶剂对人体健康有害，试剂配制和样品前处理过程应在通风橱内进行，操作时应按规定要求佩带防护器具，避免接触皮肤和衣服。
6.1除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂，实验用水为新制备的超纯水。
6.2氢氧化钠（NaOH）：分析纯。
6.3盐酸（HCl）：1mol/L，分析纯。
6.4甲醇（CH 3OH）：农残级或等同规格。
6.5甲酸（HCOOH）：色谱纯。
6.6甲酸溶液（0.05%）：取50μl 甲酸（6.5）溶于100ml 实验用水中。
6.7甲酸/甲醇溶液：取90ml 甲酸溶液（6.5）和10ml 甲醇（6.4）混合，摇匀。
6.8乙二胺四乙酸二钠（Na 2EDTA）：分析纯。
6.9标准贮备液：ρ=1.00g/L可直接购买有证标准溶液，也可用标准物质配制，标准物质纯度大于99.0%。
大环内酯类抗生素理化检测方法
大环内酯类抗生素(macrolide antibiotics，MALs)是由放线杆菌或小单孢菌产生的一类抗生素。
近年来，该类药物被广泛应用于畜禽、水产养殖业中。
已成为全世界需求量和销售速度增长最快的抗生素之一。
大环内酯类抗生素在结构上都具有大环内酯环，如红霉素、麦迪霉素、乙酰螺霉素、阿奇霉素等。
由于MALs 具有广谱抗菌作用，可抵抗革兰氏阳性菌、支原体菌属和部分革兰氏阴性菌，因此被广泛应用于治疗猪、牛、羊、虾及家禽的呼吸性和肠道传染性疾病，或作为饲料添加剂促进动物生长发育。
本文主要对MALs残留分析中理化检测方法进行了综述。
一、光度法
现行的“卫生部药品标准”与地方标准和常用对于大环内酯类抗生素所采用的鉴别反应一般都是硫酸显色分光光度法和紫外分光光度法。
1、薄层-紫外分光光度法
该法以正己烷-丙酮(V(正己烷)/V(丙酮)=7/3)作展开剂，在HF254 硅胶板上点样展层后，刮取有效斑点，用甲醇溶出，测定的244nm 处吸光度，与标准曲线对照求出其含量，工作曲线在10～60μg 范围内线性良好，相关系数r = 0.9996，平均回收率在99.8%，变异系数小于0.6%。
该方法操作较简便，快速、准确。
2、荧光光度测定法
在硫酸存在下，四价铈的氧化物与MALs类抗生素发生反应，还原成三价铈，分别在255nm 和348nm 处测三价铈的荧光，在42.6～1200ng/mL 浓度范围内成线性关系，标准加入法测得抗生素的回收率为97.7%～100.9%。
3、电荷转移分光光度法
本方法主要针对罗红霉素的测定。
罗红霉素与紫色素在乙醇介质中发生电荷转移反应，电荷转移络合物在544 nm 处有最大吸收；该络合物的组成为1/1，稳定常数是3×104。
药物浓度在0～120mg/L 范围内服从朗伯比尔定律，
ε=6.56×103L·mol-1·cm-1。
4、差示分光光度法
本方法主要针对红霉素的测定。
此方法利用红霉素在碱性条件下反应产物的紫外吸收特征，波长为235nm，结果红霉素在8～80mg/L 浓度范围内与吸收度呈良好
的线性关系。
此法快速、简便、准确，适用于医院制剂分析。
二、化学方法
1、薄层色谱法（TLC）
TLC是20世纪50年代发展起来的一种色谱技术，具有操作简单、应用性广、灵敏度高、快速和检验成本低的特点，特别适用于无紫外吸收的杂质的检测。
现经过改进的TLC采用有利于推广的以甲苯-无水甲醇-吡啶(V(甲苯)/V(甲醇)/V(吡
啶)=14/2/1)为展开剂、硅胶H-CMC-Na 薄层板、碘熏回视显色的方法进行测定。
2、毛细管电泳法（CE）
CE是20世纪80年代中后期迅速发展起来的一类以毛细管为分离通道，以高压直流电场为驱动力的新型液相分离分析技术，具有高效、样品及耗溶剂少、成本低。
分析快速等优点。
该方法也逐渐应用于MAL的分析当中。
三、气相色谱-质谱法
MALs的分子量较大。
且极性较高。
上机前为了降低待测物的极性、提高质谱检测的灵敏度。
必须经过衍生化处理。
由于操作繁琐．该方法在MALs分析中的应用也不多见。
采用电喷雾离子化源，正离子检测方式对各主要成分进行一级全扫描，将对应的准分子离子峰进行二级全扫描质谱分析，通过与对照品的色谱和质谱行为对比，以对MALs残留进行分析。
四、高效液相色谱法
由于MALs具有发光团。
多数具有较强的UV吸收。
因此可用紫外检测器(UV)包括二极管阵列检测器(DAD)对其进行检测。
目前该方法已成为大多数实验室MAL残留检测的常用方法。
以下为HPLC 法对大环内酯类抗生素的分析。
五、结语
综上所述，可以看出，对大环内酯类抗生素的分析领域越来越广泛，分析手段也逐渐复杂，分析抗生素的种类也趋于多样化，可以预见，随着人们各种安全意识的增强，以及现代仪器自动化和联用技术的发展、普及和完善，对大环内酯类抗生素的分析研究也将会增加，而且必将趋于更加简单、快捷、灵敏和高效。
