黄曲霉毒素B1快速检测卡(胶体金法)说明书

苏微黄曲霉毒素B1免疫亲和柱使用说明书【产品用途】黄曲霉毒素B1（AFB1）免疫亲和柱适合于和AFB1酶免分析试剂盒、HPLC或液质结合使用，定量检测AFB1。

用该免疫亲和柱净化样品，提高了样品的纯度。

纯化后的样品可用不同的分析方法测定。

【适应范围及产品性能】用于定性、定量检测谷物、粮油、饲料等样本中AFB1时的样本前处理。

柱吸附能力：≥50ng/支，≥100ng/支（可根据要求选择相应柱容量）；回收率：75%~90%。

柱内凝胶：Protein A琼脂糖凝胶特点：载量大，单抗定向偶联，易洗脱，回收率高。

【测定原理】本产品测定的基础是抗原抗体反应，黄曲霉毒素B1（AFB1）单克隆抗体连接在柱内凝胶介质上，样品中的AFB1经过提取、过滤、稀释，然后将样品提取液缓慢通过AFB1免疫亲和柱，在免疫亲和柱内，AFB1与抗体结合，洗涤液通过免疫亲和柱除去未被结合的杂质。

最后采用甲醇洗脱AFB1，然后进行相关分析。

【产品组成】标准品（选配）；25支/盒；1mL柱管/支；说明书1份；【所需材料】（不提供）（1）设备及器皿耗材：天平、粉碎机、离心机、高速均质器（18000r/min~22000 r/min）；量筒、50mL玻璃漏斗、微量移液器（100μL~1000μL）、定量滤纸、玻璃微纤维滤纸（直径11cm，孔径1.5μm）、20mL玻璃注射器等。

（2）试剂：甲醇（色谱级）、pH7.4磷酸盐缓冲液（PBS）、pH7.0磷酸盐缓冲液（PBS）、吐温-20、蒸馏水或去离子水。

【样品制备及净化】（1）谷物、花生及其制品----准确称取25.0g粉碎的样品，加入5.0g氯化钠，----与125.0mL甲醇-水溶液（7+3）混合，以均质器高速搅拌提取2min或振荡提取30min，----用定量滤纸过滤，----准确移取15mL滤液并加入30mL水稀释，用玻璃微纤维滤纸过滤，至滤液澄清，备用。

----准确移取15.0mL混合液进行过亲和柱。

1ELISA kit for quantitative detection of aflatoxin B1一、概要黄曲霉毒素主要是两种霉菌黄曲霉及 A.paraticus的二级代谢物。

这些霉菌在湿热的环境和耕作土地上污染的植物产生。

黄曲霉毒素B1（AFB1）属于自然最强烈的致癌物质，它一般产生于花生、玉米、巴西坚果和棉花种子中。

本试剂盒利用酶联免疫吸附测定法（ELISA）对各种谷物、饲料及其他食品中的AFB1含量进行快速、定量检测。

二、原理本试剂盒是利用直接竞争酶联免疫吸附微孔模式进行检测，灵敏度可达0.1 µg/kg（ppb）。

样品或标准品中游离的黄曲霉毒素B1与酶标抗原竞争结合包被在微孔中的抗体上的结合位点，经洗板洗去多余的酶标抗原与黄曲霉毒素B1后加入显色剂与反应底物，其与酶标物作用而成蓝色，加入反应停止液后颜色由蓝色转变为黄色，黄色越深则表明黄曲霉毒素B1越少，用酶标仪在450 nm处测定光吸收值可准确定量检测样品中的黄曲霉毒素B1的污染水平。

三、试剂盒构成1、反应板支架……………………………………………………………………………1块2 黄曲霉毒素B1抗体包被反应板……………………………………………………96孔3、黄曲霉毒素B1标准品溶液（0 ppb，0.1 ppb，0.25 ppb，0.5 ppb，1 ppb，2 ppb）…1套4、酶标记物…………………………………………………………………4瓶5、酶稀释液……………………………………………………………………1瓶6、样品稀释液………………………………………………………………1瓶7、显色剂溶液………………………………………………………………………1瓶8、反应底物溶液………………………………………………………………1瓶9、终止液………………………………………………………………………………1瓶10、浓缩洗涤液（20 X）………………………………………………………1瓶四、注意事项1、试剂盒请置放于2-8℃条件下保存，使用过程中不要让微孔干燥，使用后立即将试剂放回至2-8℃条件下冷藏。

《粮油检验粮食中黄曲霉毒素B1检测胶体金快速定量法》编制说明黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1简写为AFB1）是二氢呋喃氧杂萘邻酮的衍生物，含有一个双呋喃环和一个氧杂萘邻酮（香豆素）。

黄曲霉毒素B1是已知的化学物质中致癌性最强的一种。

在天然食物中以黄曲霉毒素B1最为多见，危害性也最强，国家质检总局规定黄曲霉毒素B1是大部分食品的必检项目之一。

黄曲霉毒素B1对包括人和若干动物具有强烈的毒性，其毒性作用主要是对肝脏的损害。

黄曲霉毒素B1污染的食物主要是花生、玉米、稻谷、小麦、花生油等粮油食品，且以南方高温、高湿地区受污染最为严重。

目前，GB 2761-2011《食品安全国家标准食品中真菌毒素限量》中对谷物及其制品中黄曲霉毒素B1的最高限量为20μg/kg。

黄曲霉毒素B1的检测方法主要有高效液相色谱法、酶联免疫法、胶体金免疫层析法等，以往利用胶体金免疫快速检测法可对黄曲霉毒素B1样品进行定性分析，适用于阳性样品的初筛，不能准确定量。

本标准项目是通过化学合成法制备黄曲霉毒素B1人工抗原，利用此抗原免疫实验动物制备黄曲霉毒素B1单克隆抗体，基于此原料基础上开发黄曲霉毒素B1快速检测试纸条，再通过胶体金读数仪进行大米、玉米、小麦样品中黄曲霉毒素B1的定量分析。

本标准有助于提高粮食样品检测、监测效率，降低成本，保护环境，保障从业人员健康安全。

1工作简况1.1任务来源及起草单位本行业标准是在2012年12月国家粮食局标准质量中心组织对美国Charm公司开发的ROSA真菌毒素快速定量测试系统进行测试验证，并对验证结果进行专家评审通过的基础上提出并立项。

根据国家粮食局标准质量管理办公室质检办便函[2014]15号文件《关于下达2014年粮油行业标准制定计划的通知》的要求，由湖北省粮油食品质量监测站牵头负责《粮油检验粮食中黄曲霉毒素B1检测胶体金快速定量法》的起草工作。

起草单位成立了标准起草组负责进行本标准的各项工作。

快灵生物黄曲霉毒素B1检测卡检测原理：快灵生物黄曲霉毒素B1检测卡基于胶体金免疫层析技术。

检测时，样品中的黄曲霉毒素B1在流动过程中与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制了抗体与固相载体膜上的黄曲霉毒素B1-BSA偶联物的结合，如果样品中的黄曲霉毒素B1含量大于灵敏度，检测线在规定时间内不显颜色，结果为阳性，反之，检测线显红色色带，结果为阴性。

无论检测液中黄曲霉毒素B1浓度高低，C线均显红色色带。

适用情况：黄曲霉毒素B1检测卡适用于饲料、粮食、食品企业进行黄曲霉毒素B1的定性或半定量检测；检测样品：谷物、饲料、发酵酒、酱油、醋、食用油等；检测下限：5ppb；试纸特点：黄曲霉毒素B1检测卡可以通过调整稀释倍数准确地检测5ppb、10ppb、20ppb、50ppb或更高阈值；回收率高而稳定（80%左右）；黄曲霉毒素B1检测卡检测背景影响小；通过设置检测梯度实现半定量检测；无毒无害，安全环保；有效期：2~30°C保存18个月。

常见问题：1）用试剂盒定量检测为阳性，但是用试纸卡检测为阴性？答：黄曲霉毒素的生长是呈现不均匀性的，采样不均一可能导致这种结果。

2）说明书后面的残留限量表怎么用？答：残留限量表上面一栏标注有“残留限量”单位是ppb的栏目，是要客户根据自己要测定的标准来选择下面对应稀释液的数量，比如客户是饲料厂，国标规定黄曲霉毒素B1的含量不能超过20ppb，那么在试验中，客户需要加的稀释液的量就是20ppb下面对应的数量。

3）除了产品以外，客户还需要购买其他配套设备和试剂吗？答：配套设备只需要准备基础的实验器材，比如烧杯，电子称等，试剂需要配备乙酸乙酯有机溶剂，规格是分析纯，到普通的化学试剂店就可以买到，价格便宜。

4）试验中提到的纯水可以用蒸馏水代替吗？答：可以。

5）检测时间大概多久？答：加上前处理最多需要半个小时。

6）阴性和阳性各代表什么意思？答：阴性代表样品中不含有毒素或者含有的毒素含量没有超过检测的限量；阳性代表样品中的毒素含量超过了检测限量。

附件2食用油中黄曲霉毒素B1的快速检测胶体金免疫层析法（KJ201708）1范围本方法规定了食用油中黄曲霉毒素B1的胶体金免疫层析快速检测方法。

本方法适用于花生油、玉米油、大豆油及其他植物油脂等食用油中黄曲霉毒素B1的快速测定。

2原理本方法采用竞争抑制免疫层析原理。

样品中的黄曲霉毒素B1经提取后与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制抗体和试纸条或检测卡中检测线（T线）上抗原的结合，从而导致检测线颜色深浅的变化。

通过检测线与控制线（C线）颜色深浅比较，对样品中黄曲霉毒素B1进行定性判定。

3试剂和材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的二级水。

3.1试剂3.1.1甲醇。

3.1.2十二水磷酸氢二钠。

3.1.3二水磷酸二氢钠。

3.1.4氯化钠。

3.1.5吐温-20。

3.1.6提取液：30%甲醇水或胶体金免疫层析检测试剂盒专用提取液或根据产品使用说明书配置。

—1—3.1.7稀释液：称取2.90 g十二水磷酸氢二钠（3.1.2），0.296 g二水磷酸二氢钠（3.1.3），4.50g 氯化钠（3.1.4），溶解于400 mL水中，加入0.5 mL吐温-20（3.1.5），用水稀释至500mL，混匀即成稀释液；或使用胶体金免疫层析检测试剂盒专用稀释液。

3.2参考物质黄曲霉毒素B1参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量见表1，纯度均≥90%。

表1 黄曲霉毒素B1参考物质中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量注：或等同可溯源物质。

3.3标准溶液的配制3.3.1 黄曲霉毒素B1标准储备液（0.1 mg/mL）：精密称取适量黄曲霉毒素B1标准品（3.2），置于10 mL容量瓶中，用甲醇（3.1.1）溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为0.1 mg/mL的黄曲霉毒素B1标准储备液；或可直接购买黄曲霉毒素B1标准储备液。

-20℃避光保存备用，有效期3个月。

黄曲霉毒素 B1酶联免疫检测试剂盒使用说明书Ⅰ．样品处理方法一、食品1、脂肪含量小的固体样品（如大米、玉米、小米等）称取5.0g样品（已粉碎）于100ml具塞三角瓶中，准确加入25.0ml甲醇水（1+1）溶液，振摇15min，过滤，弃去1/4初滤液，收集试样滤液，根据样品的国家允许量标准，用A试剂将滤液进行稀释（见表1：样品稀释表）。

将样品稀释液进行定量或限量测定。

2、酱油、醋称取5.0g样品于25ml小烧杯中，用5ml蒸馏水将试样转移到125ml分液漏斗中，加入20ml三氯甲烷，加塞轻轻振摇3min，静置分层。

放出下层三氯甲烷层，经盛有约5g预先用三氯甲烷湿润的无水Na2SO4过滤器于100ml蒸发皿中，再加5ml三氯甲烷于分液漏斗中，重复振摇提取，三氯甲烷层一并滤于蒸发皿中，最后用少量三氯甲烷洗涤过滤器，洗液并于蒸发皿中，65℃水浴通风挥干。

挥干冷却后，准确加入25.0ml 甲醇水（1+1），将蒸发皿中的凝结物充分溶解。

根据样品的国家允许量标准，用A试剂将提取液进行稀释（见表1：样品稀释表）。

将样品稀释液进行定量或限量测定。

3、食用油（如菜油、麻油、色拉油、花生油等）称5.0g油样于25ml小烧杯中，用20ml石油醚或正乙烷分次将试样转移至125ml分液漏斗中，准确加入25.0ml甲醇水（1+1）溶液，加塞轻轻振摇5min，静置分层，放出下层甲醇水提取液。

根据样品的国家允许量标准，用A试剂将提取液进行稀释（见表1：样品稀释表）。

将样品稀释液进行定量或限量测定。

4、葡萄酒准备称取5.0g葡萄酒于125ml分液漏斗中，加入20ml三氯甲烷，加塞轻轻振摇3min，静置分层。

放出下层三氯甲烷层，经盛有约5g预先用三氯甲烷湿润的的无水Na2SO4过滤器于100ml蒸发皿中，再加5ml三氯甲烷于分液漏斗中，重复振摇提取，三氯甲烷层一并滤于蒸发皿中，最后用少量三氯甲烷洗涤过滤器，洗液并于蒸发皿中， 65℃水浴通风挥干。

黄曲霉毒素是由黄曲霉和寄生曲霉中产毒菌株所产生的有毒代谢产物，最主要的4种分别为：B1、B2、G1、G2。

黄曲霉毒素具有很强的急性毒性，也有明显的慢性毒性及强致癌性。

黄曲霉毒素主要污染粮、油及其制品，其中受污染最严重的是花生、棉籽、玉米及其制品；其次是稻米、小麦、大麦、高粱、芝麻、茶叶等。

【检测原理】该试剂盒采用免疫竞争法分析原理结合胶体金标记技术进行检测。

【检测范围】酱油检测限为5ppb花生、玉米、小麦、大米、茶叶、饲料检测限为10ppb食用油检检测限为10ppb【产品组成】名称数量名称数量黄曲霉毒素B1卡10条样品稀释液11瓶样品稀释液21瓶乙酸乙酯1瓶15ml离心管2只2ml离心管10只一次性手套3只滴管10支说明书1份【检测步骤】1、酱油检测：取100ul酱油加入配套的2ml离心管中，加400ul稀释液1，摇匀. 取出试纸，开封后平放在桌面，用滴管向试纸孔缓慢而准确地逐滴加入3滴检测液。

5~10分钟判断结果，半小时后的结果判读无效。

2、花生、玉米、小麦、大米、茶叶、饲料等检测⑴. 取5g以上有代表性的粉碎后的谷物样品（过20目筛），准确称取0.5g均匀粉碎试样，加入到配套的15ml离心管中。

⑵．向离心管中准确加入纯净水和乙酸乙酯各2mL，将瓶塞盖紧密封，用力振荡5分钟，4000rpm离心1分钟（备注：如实验室没有大离心机设备，可以用小离心管取1.5ml上清液，用小离心机离心）。

⑶．用吸管取0.6mL上清液到小玻璃杯中，吹干滤液，然后用0.3ml体积稀释液1复溶杯底固体。

此溶解液即为检测液.⑷．取出试纸，开封后平放在桌面，用滴管向试纸孔缓慢而准确地逐滴加入3滴检测液。

⑸．5~10分钟判断结果，半小时后的结果判读无效。

取1ml待测食用油样品于2ml离心管中，加入1ml样品稀释液2，振荡5min，取上清液100ul，加100ul 样品稀释液1稀释，加样检测。

5~10分钟判断结果，半小时后的结果判读无效。

黄曲霉毒素B 检测卡说明书1. 产品介绍该检测卡是一种用于检测食品中黄曲霉毒素B（简称“黄曲霉素B”）含量的便捷、快速的测试工具。

黄曲霉素B是一种常见的食品毒素，长期摄入可能对人体健康造成危害。

使用该检测卡能够准确、迅速地检测食品中的黄曲霉素B含量，从而保障消费者的食品安全。

2. 产品特点（1）便捷快速：该检测卡采用便携式设计，操作简单，不需要专业设备，30分钟内即可得到检测结果。

（2）高灵敏度：该检测卡具有高灵敏度，能够准确检测低至10ppb（微克/升）的黄曲霉素B含量。

（3）适用广泛：该检测卡适用于各类食品，如谷物、坚果、肉制品等。

（4）可靠准确：该检测卡经过严格的质量控制，具有较高的准确性和可靠性。

3. 使用说明（1）样品处理：将待测试的样品按照说明书的要求进行处理，提取出样品中的黄曲霉素B。

（2）装置准备：在平整的工作台上，将黄曲霉素B检测卡取出，待温度适应后，打开包装袋。

（3）取样：使用专用吸样管吸取待测试样品提取物，滴入检测卡指定位置。

（4）加液：使用专用注射器，向指示位置加入3滴洗涤缓冲液。

（5）等待反应：将检测卡平放，避免震动，等待约5分钟，让反应发生。

（6）解读结果：观察测试线上是否出现红色或粉色条纹。

如果出现了测试线，表示样品中含有黄曲霉素B，颜色深浅与含量成正比。

若没有出现测试线，表示样品中黄曲霉素B含量低于检测限。

4. 注意事项（1）请勿使用已经过期的检测卡，以免影响测试结果。

（2）使用前请仔细阅读产品说明书，并严格按照要求进行操作。

（3）使用过程中注意个人卫生，避免污染样品。

（4）请将检测卡妥善保管，避免受潮、受热等情况。

（5）本检测卡仅用于食品中黄曲霉素B的初步筛查，如需精确测量，请使用专业仪器。

5. 注意事项（1）本产品仅适用于黄曲霉素B的检测，不适用于其他毒素的检测。

（2）本产品仅供科研和食品安全监测使用，不得用于其他非法用途。

（3）本产品的开发商、制造商对于由于使用不当、操作失误等原因造成的检测结果不准确或任何直接或间接损失概不负责。

黄曲霉毒素B1 ELISA快速检测试剂盒【产品概述】黄曲霉毒素是一类真菌（如黄曲霉和寄生曲霉）的有毒的代谢产物，它们具有很强的致癌性。

主要存在于谷物、坚果、棉籽以及一些和人类血液、动物饲料相关的产品中。

天然污染的黄曲霉毒素以AFB1为主。

1993年黄曲霉毒素被世界卫生组织的癌症研究机构划定为类致癌物，是一类毒性极强的剧毒物质。

它被证明对人和动物的肝脏、肾脏等组织和器官具有很大的危害。

产生黄曲霉毒素的霉菌（如黄曲霉、寄生曲霉等）遍及世界各地，黄曲霉的污染可以发生在植物的生长、收获和加工、储藏、运输等过程中、及时发现污染源是最好的预防黄曲霉毒素污染的方法。

【产品原理】本产品是利用免疫竞争法检测原理建立的一种定量检测试剂盒。

具有简单、快速，无需特殊的仪器设备，既可以在实验室进行，也可在农场、饲料混合车间等实地进行测定。

结果准确，灵敏度度为0.05ppb，准确率大于95% 。

适用于谷物、饲料等样板中的黄曲霉毒素的检测。

【产品特性】1）试剂盒灵敏度: 0.05ppb2）试剂盒变异系数：小于20%。

3）试剂盒准确度：回收率范围在80％-110％之间。

【试剂盒组成】1）包被有抗原的96微孔板：1块（96 孔，12 条×8 孔）2）黄曲霉标准品：0 ppb 、0.05 ppb、0.12 ppb、0.25 ppb、0.5ppb、1 .0 ppb、2.0ppb1 瓶× 1.0ml3）200×黄曲霉抗体浓缩液： 1 瓶× 0.25ml4）60×酶标二抗浓缩液： 1 瓶× 0.25ml5）10×浓缩洗涤液： 1 瓶× 50ml6）稀释缓冲液： 2 瓶×40ml7）显色底物液 1 瓶×7ml8）反应终止液： 1 瓶× 7ml9) 试剂盒说明书【仪器试剂】仪器—酶标仪450nm—过滤漏斗—微量移液器20μl～200μl，100μl～1000μl—刻度移液管—天平：感量0.01g—50ml离心管或25ml锥形瓶—定性滤纸试剂—甲醇—蒸馏水【样本的前期处理】1. 玉米、花生等谷物----称取10g样品，加入20ml样品提取液（每100ml中含60ml甲醇，40ml蒸馏水），剧烈振荡3分钟（用手或振荡器）----将提取液用普通滤纸过滤，用稀释缓冲液按1：9的比例稀释过滤液（吸取100u过滤液，加入900ul稀释液缓冲液）样本稀释倍数为20倍2. 饲料（1）普通饲料----称取5g样品，加入25ml样品提取液（每100ml中含60ml甲醇，40ml蒸馏水），剧烈振荡3分钟（用手或振荡器）----将提取液用普通滤纸过滤，用稀释缓冲液按1：9的比例稀释过滤液（吸取100u过滤液，加入900ul稀释液缓冲液）样本稀释倍数为50倍（2）浓缩饲料----称取5g样品，加入25ml样品提取液（每100ml中含60ml甲醇，40ml蒸馏水），剧烈振荡3分钟（用手或振荡器）----将提取液用普通滤纸过滤，取2ml滤液，加入3ml三氯甲烷，振荡1分钟，静置1分钟，3500rpm离心5分钟。