实时荧光定量RT-PCR法测定脑胶质瘤中MT1-MMP基因mRNA表达水平——王硕
- 格式:pdf
- 大小:224.29 KB
- 文档页数:3
一、前言为了营造良好的生活和学习环境,提高寝室文明建设水平,我们寝室在学院领导的指导下,全体室友的共同努力下,开展了一系列寝室文明建设工作。
现将本学期寝室文明建设工作总结如下:二、工作目标1. 提高寝室成员的思想道德素质,培养良好的生活习惯;2. 营造整洁、舒适、安全的寝室环境;3. 增强寝室成员的团队协作能力,提高寝室凝聚力;4. 树立寝室文明形象,为学院创造良好的生活氛围。
三、工作措施1. 加强思想政治教育我们定期组织学习党的路线方针政策、学院规章制度以及寝室文明建设的相关知识,提高寝室成员的思想政治觉悟。
2. 开展寝室卫生整治活动定期对寝室进行卫生大扫除,确保寝室整洁、干净。
同时,对寝室成员的床铺、桌面、地面等进行检查,确保寝室无杂物、无异味。
3. 倡导文明行为在寝室内倡导文明用语、礼貌待人,培养良好的生活习惯。
对寝室成员的不文明行为进行及时制止和纠正。
4. 开展文体活动组织丰富多彩的文体活动,如篮球比赛、棋类比赛、唱歌比赛等,丰富寝室文化生活,提高寝室成员的团队协作能力。
5. 增强安全意识加强寝室安全教育,提高寝室成员的安全防范意识。
定期检查寝室电器、线路等,确保寝室安全。
四、工作成果1. 寝室卫生状况得到明显改善,寝室环境整洁、舒适;2. 寝室成员的思想道德素质有所提高,文明行为得到加强;3. 寝室成员的团队协作能力得到提升,寝室凝聚力不断增强;4. 寝室文明形象得到树立,为学院创造了良好的生活氛围。
五、存在问题1. 部分寝室成员对寝室文明建设的认识不足,文明行为有待提高;2. 寝室卫生整治工作还需加强,部分寝室存在卫生死角;3. 寝室文化活动形式单一,吸引力不足。
六、改进措施1. 加强寝室文明建设宣传,提高寝室成员的认识;2. 定期开展寝室卫生检查,督促寝室成员保持寝室整洁;3. 丰富寝室文化活动形式,提高活动吸引力,增强寝室成员的参与度。
总之,本学期寝室文明建设工作取得了一定的成绩,但也存在一些不足。
实时荧光定量RT-PCR法检测TNF-αmRNA基因表达陈晓;王宇学【期刊名称】《现代检验医学杂志》【年(卷),期】2006(021)004【摘要】目的建立实时荧光定量反转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测TNF-α基因mRNA表达.方法用T-A克隆技术构建含TNF基因的载体作为标准模板,采用荧光Taqman方法及探针标记技术,建立实时荧光定量RT-PCR方法,制备标准曲线,检测肿瘤患者与正常人外周血单个核细胞的TNF-α mRNA表达水平变化,并与半定量RT-PCR检测结果进行比较.结果实时荧光定量RT-PCR检测肿瘤患者外周血单个核细胞TNF-αmRNA 表达明显高于正常人,且半定量RT-PCR结果显示TNF-α出现类似的变化趋势.结论所建立的实时荧光定量RT-PCR用于检测TNF-α mRNA表达,结果用拷贝数表示,比半定量RT-PCR更灵敏、准确.【总页数】3页(P13-15)【作者】陈晓;王宇学【作者单位】湖北中医学院医学检验与技术系,湖北,武汉,430064;湖北中医学院医学检验与技术系,湖北,武汉,430064【正文语种】中文【中图分类】Q503;Q786【相关文献】1.实时荧光定量RT-PCR检测鼻咽癌Survivin mRNA基因表达 [J], 符生苗;蔡俊宏;涂志华;王宇田;邓立群;梁茱;林振群;龚选举2.实时荧光定量 RT-PCR 检测 STAT3 mRNA 在食管鳞状细胞癌中的表达 [J], 彭海英;马育华;高伟3.哮喘患儿单个核细胞FOXP3mRNA表达应用实时荧光定量RT-PCR检测的临床意义 [J], 范光明4.3种猪细胞因子mRNA实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用 [J], 王凤雪;黄双;刘莹;杨勇;孙娜;朱洪伟;张淑琴;程世鹏;温永俊5.实时荧光定量RT-PCR检测鼻咽癌Survivin mRNA基因表达(英文) [J], Shengmiao Fu;Junhong Cai;Zhihua Tu;Yutian Wang;Liqun Deng;Zhu Liang;Zhenqun Lin;Xuanju Gong因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
实时荧光定量RT-PCR检测急性白血病中Bmi-1基因mRNA的表达及意义于琦;孟秀香;袁宏;王楠;姜艳梅;马末娇【摘要】[目的]建立荧光实时定量RT-PCR ( FQ RT-PCR)检测Bmi-1基因mRNA的方法并研究该基因在急性白血病细胞中表达的意义.[方法]根据 Genbank 提供的序列,设计目的基因Bmi-1及内参基因GAPDH的扩增引物,将 Bmi-1及GAPDH RT-PCR扩增片段克隆入载体pMD18-T simple,经测序鉴定正确后,进行纯化、定量及系列稀释,应用 SYBR GreenⅠ荧光染料,建立检测Bmi-1 mRNA的FQ RT-PCR方法,并对其线性及特异性进行评价.应用此方法检测21例急性白血病及10例健康人外周抗凝血中Bmi-1 mRNA的表达水平.[结果]该方法的线性范围为1.0×103~1.0×108copies/μL,相关系数为-1.00,熔解曲线分析扩增产物显示单一的峰,熔解温度(Tm)为80.4℃.急性白血病患者的相对表达量为0.56±0.12,健康对照组中Bmi-1 mRNA的相对表达量为0.19±0.08,两者的表达差异有统计学意义(P<0.05).[结论]实时荧光定量RT-PCR方法检测Bmi-1基因表达,具有高敏感性和高特异性等优点,可作为进一步研究 Bmi-1基因的方法.Bmi-1基因参与急性白血病的发生,可能是一种新的肿瘤标志物.【期刊名称】《大连医科大学学报》【年(卷),期】2010(032)001【总页数】4页(P90-93)【关键词】Bmi-1基因;急性白血病;SYBR GreenⅠ;实时荧光定量RT-PCR【作者】于琦;孟秀香;袁宏;王楠;姜艳梅;马末娇【作者单位】大连医科大学,检验医学院,辽宁,大连,116044;泰山医学院,医学检验系,山东,泰安,271016;大连医科大学,检验医学院,辽宁,大连,116044;大连医科大学,附属第一医院,检验科,辽宁,大连,116011;大连医科大学,附属第一医院,检验科,辽宁,大连,116011;大连医科大学,附属第一医院,检验科,辽宁,大连,116011;中国人民解放军第210医院,辽宁,大连,116013【正文语种】中文【中图分类】R446;R557癌基因Bmi-1 (B cell-specific Moloney murine leukemia virus insertion site 1)是转录抑制因子Polycomb group(PcG)家族中的一员,在胚胎发育、细胞增殖和细胞周期的调控中起着极其重要的作用。
实时荧光定量RT-PCR技术在肿瘤研究中的应用
实时荧光定量RT-PCR技术是一种常用的分子生物学技术,已在肿瘤研究中得到广泛应用。
它的主要优点包括快速、准确、可靠、灵敏和高通量,使其成为诊断和检测肿瘤的首选方法之一。
实时荧光定量RT-PCR技术通过检测RNA的表达水平来识别
分子生物学过程的差异,这些差异可以标示癌细胞。
该技术可以定量分析获得的数据,并通过荧光信号的实时记录来实现数据的实时分析。
在肿瘤研究中,实时荧光定量RT-PCR技术广泛应用于检测和鉴定癌症相关基因的表达水平。
它可以分析单个分子和复杂分子组合的表达,如miRNA、mRNA和蛋白质。
此外,它还可
以分析多种基因的表达水平,从而确定肿瘤的进展和转移情况。
在临床实践中,实时荧光定量RT-PCR技术的应用范围非常广泛。
它可以检测肿瘤细胞DNA上的突变,确定癌症的类型和
分级以及筛选潜在治疗药物的反应性。
此外,该技术还可以用于肿瘤早期筛查,预测治疗效果和判断患者的预后。
总之,实时荧光定量RT-PCR技术在肿瘤研究中有着重要的应用和作用。
随着该技术的不断改进和发展,相信它将会在未来的肿瘤治疗和预防方面发挥更加重要的作用。
实时荧光定量PCR检测人脑胶质瘤、髓母细胞瘤中SAMD14的表达龚范勇;葛盈盈;肖绍文【摘要】目的分析人胶质瘤和髓母细胞瘤中SAMD 14 mRNA的表达情况及其与临床参数间的关系.方法使用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测10例正常人脑组织、24例胶质瘤患者和11例髓母细胞瘤患者肿瘤组织中SAMD 14 mRNA的相对表达量,分析其表达与患者临床病理学特征的关系.结果胶质瘤、髓母细胞瘤组织中SAMD 14 mRNA的表达水平低于正常脑组织,胶质瘤中SAMD 14 mRNA的表达水平高于髓母细胞瘤组织(P<0.05).SAMD 14 mRNA相对表达量与性别、年龄、肿瘤直径和KPS评分等因素无关(P>0.05).结论 SAMD 14 mRNA的低表达可能与胶质瘤和髓母细胞瘤的发生、发展有关.%Objective To analyze the expression of SAMD 14 mRNA in human glioma and medulloblastoma,and to study their association with clinical features of glioma and medulloblastoma.Methods The expression of SAMD 14 mRNA was detected in 10 human normal brain tissues, 24 glioma tissues and 11 medulloblastoma tissues by qRT-PCR, then the relationship of their expression and clinical features were analyzed.Results The expression of SAMD 14 mRNA was lower in glioma and medulloblastoma tissues than in human normal brain tissues.The expression of SMAD14 mRNA was higher in glioma tissues than in medulloblastoma tissues(P<0.05).There is no significant difference between the expression of SMAD14 mRNA and clinical features(Sex, age, tumor diameter and KPS scores,etc).ConclusionThe low expression of SAMD 14 were possibly related to tumorigenesis of glioma and medulloblastoma.【期刊名称】《微创医学》【年(卷),期】2017(012)002【总页数】5页(P162-165,186)【关键词】胶质瘤;髓母细胞瘤;SAMD14;荧光定量PCR【作者】龚范勇;葛盈盈;肖绍文【作者单位】广西医科大学第一附属医院,南宁市 530021;广西医科大学基础医学院,广西高校基础医学重点实验室,南宁市 530021;广西医科大学第一附属医院,南宁市 530021【正文语种】中文【中图分类】R739.41神经胶质瘤简称胶质瘤,也称为胶质细胞瘤,是最常见的原发性中枢神经系统肿瘤,约占所有颅内原发肿瘤的一半。
rt-pcr检测基因表达水平的原理一、 rt-pcr检测基因表达水平的基本原理1. rt-pcr技术是一种用来检测基因表达水平的常用方法,其中rt代表逆转录(reverse transcription),pcr代表聚合酶链式反应(polymerase ch本人n reaction)。
2. rt-pcr技术通过将RNA转录成cDNA,然后进行聚合酶链式反应来扩增特定基因的片段,从而检测基因的表达水平。
3. rt-pcr检测基因表达水平的原理可以分为逆转录和聚合酶链式反应两个步骤。
4. 逆转录是将RNA转录成cDNA的过程,通过逆转录酶(reverse transcriptase)的作用,RNA可以被转录成cDNA。
5. 聚合酶链式反应是将cDNA扩增的过程,通过聚合酶和引物(primer)的作用,cDNA可以被扩增成大量的目标片段。
二、 rt-pcr检测基因表达水平的具体步骤1. 提取RNA:首先需要从待检测的组织或细胞中提取总RNA,保证RNA的完整性和纯度对后续实验非常重要。
2. 逆转录:将提取的RNA进行逆转录反应,将RNA转录成cDNA。
逆转录反应需要逆转录酶和随机引物或特异性引物。
3. pcr扩增:将逆转录后得到的cDNA进行聚合酶链式反应,使用特异性引物对目标基因进行扩增。
聚合酶链式反应的过程需要聚合酶、引物和dNTP。
4. 分析结果:最后通过凝胶电泳或实时荧光定量PCR等方法对扩增产物进行定量和分析,得到基因表达水平的信息。
三、 rt-pcr检测基因表达水平的优缺点1. 优点:rt-pcr检测基因表达水平的灵敏度高,可以检测低表达基因;检测结果定量化准确,能够得到基因的具体表达量;方法简单、快速、高效,适用于大规模的基因表达分析。
2. 缺点:需要严格控制反应条件和引物设计,以避免假阳性结果;受到RNA的完整性和纯度的影响,需谨慎处理RNA样本;无法区分剪接异构体,对于复杂基因的表达分析存在局限性。
实时荧光定量RT-PCR检测糖皮质激素α-受体mRNA表达水平方法的建立熊涛;曹政【期刊名称】《湖北大学学报(自然科学版)》【年(卷),期】2008(030)003【摘要】建立用荧光定量RT-PCR的方法检测人糖皮质激素α-受体(GR-α)mRNA水平的标准曲线.根据人糖皮质激素α-受体mRNA序列(GeneBank No. NM_000176)设计引物,反转录出cDNA,再插入到PMD18-T载体中.再根据cDNA 设计引物和探针,采用TaqMan探针荧光定量RT-PcR的检测方法,构建人GR-α基因表达量的标准曲线.由PMD18-T-GR-α所构建的标准曲线线性关系良好(反应体系中含1×101-1×105拷贝数的人GR-α基因分子时,扩增反应Ct值与拷贝数的对数呈较好的线性关系)、灵敏度高(可检测出低于10个拷贝/μL的样品)、特异性强、准确可靠.【总页数】4页(P294-297)【作者】熊涛;曹政【作者单位】长江大学,生命科学学院,湖北,荆州,434025;长江大学,生命科学学院,湖北,荆州,434025【正文语种】中文【中图分类】Q785;S565.403.2【相关文献】1.实时荧光定量RT-PCR检测胃癌患者外周血hTERT mRNA表达水平 [J], 胡海雷2.实时RT-PCR定量检测NGF mRNA表达水平方法的建立 [J], 杨克红;祝晓光;蒋志文;刘浩;吴华璞3.Real time RT-PCR定量检测BDNF mRNA表达水平方法的建立 [J], 杨克红;许冰莹;葛树星;闫俊岭;卢珊珊;吴兰鸥4.实时荧光定量RT-PCR检测鹿源致病性大肠杆菌aphA基因mRNA表达水平[J], 张晶;王全凯;王玮;王丽艳;尹秀玲;韩春田;邓旭明;柳巨雄5.实时荧光定量RT-PCR检测糖皮质激素对肉仔鸡空肠葡萄糖转运载体mRNA表达的影响 [J], 李勇;蔡辉益;刘国华;董晓玲;张姝;常文环;郑爱娟;陈桂兰因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
荧光定量RT-PCR技术在评估肿瘤化疗敏感性中的应用进展梁俊青;李碧丽;苏秀兰
【期刊名称】《内蒙古医学院学报》
【年(卷),期】2010(032)003
【摘要】荧光定量RT-PCR技术是目前检测组织中mRNA表达水平的一种最新的分子生物学技术.通过荧光定量RT-PCR技术检测肿瘤化疗过程中靶mRNA的动态变化可能为评估肿瘤化疗敏感性另辟蹊径,现综述荧光定量RT-PCR技术在评估肿瘤化疗敏感性研究中的应用进展.
【总页数】3页(P337-339)
【作者】梁俊青;李碧丽;苏秀兰
【作者单位】内蒙古医学院,内蒙古,呼和浩特010059;内蒙古医学院,内蒙古,呼和浩特010059;内蒙古医学院附属医院临床研究中心
【正文语种】中文
【中图分类】R730.53
【相关文献】
1.实时荧光定量RT-PCR技术在疾病相关mRNA定量检测方面的应用进展 [J], 刘永萍;凌扬
2.论敏感性分析在专利技术评估中的应用 [J], 胡川
3.SELDI-TOF-MS技术在预测肿瘤化疗敏感性中的应用 [J], 傅文凡;赵健
4.荧光定量PCR检测技术在动物检疫中的应用进展 [J], 李波;蒋慧娴;杨瑾;任志彬;商建成
5.荧光定量PCR技术原理及在分子诊断中的应用进展 [J], 张金波;罗佳滨;张春斌;朱金玲;吕冬霞
因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
实时荧光定量RT-PCR法测定脑胶质瘤中MT1-MMP基因mRNA表达水平首都医科大学附属天坛医院神经外科副主任刘维生耿会娟王硕肖新如陈善文赵继宗摘要:目的探讨胶质瘤恶性程度和MT1-MMP基因mRNA表达水平的关系。
方法采用实时荧光定量RT-PCR法检测34例脑胶质瘤和7例正常脑组织(取自癫痫病人手术切除脑组织)中MT1-MMP的mRNA表达水平。
结果经实时荧光定量RT-PCR法检测,正常脑组织和低级别、高级别胶质瘤的△△Ct(循环阈值)值分别为(0.834±0.517)、(4.063±2.309)和(7.072±4.072)。
正常脑组织与低级别、高级别胶质瘤之间,低级别、高级别胶质瘤之间MT1-MMP基因mRNA表达水平的差异具有统计学意义(P<0.05)。
结论脑胶质瘤中存在MT1-MMP基因mRNA高水平的表达,随着肿瘤恶性级别的增加,MT1-MMP基因mRNA表达水平有增高趋势。
365医学网转载请注明365医学网转载请注明关键词:神经胶质瘤;间质胶原酶;逆转录聚合酶链式反应mRNA expression of MT1-MMP gene in glioma byquantitative real-time fluorescence RT-PCRLIU Weisheng1,GENG Huijuan2,WANG Shuo1,et al.1.Department of Neurosurgery;2.Department of Clinical Laboratory,Beijing Tiantan Hospital,Capital University of Medical Sciences,Beijing100050,ChinaAbstract:Objective To explore the relationship between malignancy of glioma and mRNA expression ofMT1-MMP gene.Methods The mRNA expression of MT1-MMP gene in34gliomas and7normal brain tissues (from epileptic focus resection)was detected by quantitative real-time RT-PCR method.Results By Real-timeRT-PCR method,the△△Ct(cycle threshold)values of the normal brain tissue and low-grade,high-grade glioma were0.834±0.517,4.063±2.309,and7.072±4.072respectively.There was statistical significance of difference between normal brain tissue and low-grade,high-grade glioma,and between low-grade and high-grade glioma(P <0.05).Conclusion The mRNA expression of MT1-MMP gene is up-regulated in glioma,and increases with the malignancy grade of glioma.Key words:glioma;interstitial collagenase;reverse transcriptase polymerase chain reaction脑胶质瘤是最常见的颅内原发性肿瘤,但发病机制尚不明确,目前认为其发病与多种基因异常有关。
近年研究发现,MT1-MMP基因与多种肿瘤的发生相关。
本研究采用实时荧光定量RT-PCR法检测脑胶质瘤标本中的MT1-MMP基因mRNA的表达情况,现报告如下。
1材料与方法1.1材料胶质瘤标本中,男17例,女17例;年龄9~76岁,平均48.4岁。
术前均未行放疗或化疗。
胶质瘤标本均经病理证实并按照WHO分级,其中低级别(Ⅱ级)12例,高级别22例(Ⅲ级10例,Ⅳ级12例)。
7例正常脑组织标本取自癫痫病人经手术切除的颞前叶脑组织。
标本切除后30min内置于液氮罐内冷冻贮存。
1.2方法1.2.1总RNA的提取:采用Trizol一步法从冷冻组织中提取总RNA,行琼脂糖凝胶电泳检测,用紫外分光光度仪检测RNA纯度。
1.2.2mRNA逆转录成cDNA:先配制体系A:取总RNA1μg,加入Oligo(dT)1μl,dNTPs(2.5mmol/L)1μl,再加入焦碳酸二乙酯(DEPC)处理的无菌纯水至10μl,65℃5min,迅速插入冰浴中冷却;然后配制体系B:加入10×反应缓冲液2μl,dNTPs(2.5 mmol/L)2μl,Rnase Inhibitor1μl,RNasin1μl,加入DEPC处理的无菌纯水至10μl。
将B管加入A管充分混匀,42℃孵育1h;95℃5min灭活逆转录酶。
cDNA样品于-20℃保存备用。
1.2.3检测模板质量,测定内参GAPDH:PCR反应体系为20μl,以无菌纯水代替DNA 模板作为阴性对照。
PCR反应混合物包括:10×PCR缓冲液2μl,dNTPs(2.5mmol/L) 2μl,上、下游引物(10μmol/L)各0.5μl,DNA模板1μl,Taq酶0.5μl,加无菌纯水至20μl。
立即放入冰中混匀,PCR反应过程:94℃预变性2min;94℃30s,58℃30s,72℃35s,共30个循环;72℃延伸10min,4℃保存。
1.5%琼脂糖凝胶电泳观察扩增结果,以标准参照试剂作为对照。
目的基因片断为100bp。
1.2.4荧光实时定量PCR法扩增:引物序列由北京英骏生物技术有限责任公司合成,以GAPDH作为内参照。
GAPDH上游引物序列:5'-CATCCATGAC AACTTTGGTATC-3';下游引物序列:5'-CCATCACGCCACAGTTTC-3',产物长度为100bp,退火温度60℃。
MT1-MMP上游引物序列:5'-CATCCATGACAACTTTGGTATC-3',产物长度为112bp,退火温度60℃。
下游引物序列:5'-CCCCCATAAAGTTGCTGGATG-3'。
PCR反应体系为20μl,以无菌纯水代替DNA 模板作为阴性对照。
PCR反应混合物包括:包括2×SYBR10μl,ROX0.4μl,上、下游引物(10μmol/L)各1μl,模板1μl,其余用无菌去离子水补足。
为了增加可信度,每个样品作6个重复管,3管MT1-MMP,3管内参,取平均值。
扩增条件:95℃预变性10s,95℃5s,60℃34s,60℃34s,76℃5min,共40个循环。
反应在Light Cycler 荧光定量PCR仪上进行,60℃~95℃缓慢升温,产生MT1-MMP和GAPDH的溶解曲线(解离曲线)。
1.2.5结果分析:实时荧光定量PCR产物利用ABI公司自带的7500PCR系统软件分析,可观察扩增曲线,并对cDNA的含量进行定量分析,计算样本的△△Ct值(样本同内参的对数比值)。
1.3统计学分析.采用SPSS11.5统计软件包,对胶质瘤标本的性别、年龄、病理类型和病理级别间MT1-MMP mRNA表达进行比较,统计方法采用独立样本t检验和单因素方差分析,以P<0.05为差异有统计学意义。
2结果实时荧光定量PCR法中,引物的溶解曲线,均未检测到引物二聚体及其他非特异性荧光信号。
实时荧光定量RT-PCR法检测结果显示,胶质瘤中MT1-MMP基因mRNA表达明显增高,且有随级别增高的趋势。
3讨论胶质瘤是最常见的原发性神经系统肿瘤,约占原发性神经系统肿瘤的40%~60%,年发病率5~10/10万。
因此,从分子水平研究胶质瘤,为临床提供可能的诊断和治疗靶基因显得尤为重要。
Sato等于1994年首先克隆得到MT1-MMP(MMP-14),其在肿瘤的侵袭、扩散、细胞增殖及血管生成中发挥重要作用。
国外研究发现,这种作为前MMP-2激活物的MT1-MMP表达方式可在多种肿瘤中被发现,如肺癌、小肠癌、结肠癌、乳腺癌、膀胱癌、头颈部肿瘤、甲状腺癌、卵巢癌、颈部肉瘤和脑肿瘤。
在肿瘤细胞及周围间质细胞中同样检测到转录产物的存在。
Forsyth等运用RT-PCR和原位杂交技术对39例胶质瘤、7例正常脑组织和数例其他肿瘤的MT1-MMP mRNA进行检测,发现MT1-MMP mRNA转录产物在正常脑组织中表达很少,而在肿瘤标本中过度表达。
Nakada等对6例胶质母细胞瘤进行RNA印记杂交和相关的RT-PCR分析,正常脑组织中未检测到MT1-MMP,而6例胶质母细胞瘤均有MT1-MMP表达。
牛光明等采用原位杂交方法检测42例人脑胶质瘤和8例正常脑组织中MT1-MMP基因mRNA的表达,证实MT1-MMP mRNA的表达和脑胶质瘤的恶性程度呈正相关。
张海泉等用免疫组织化学法检测48例人脑胶质瘤组织和10例正常人脑组织中MT1-MMP的表达,表明MT1-MMP在胶质瘤中的表达与其病理学级别有明显的相关性。
本研究运用实时定量RT-PCR技术检测了34例人脑胶质瘤中MT1-MMP基因mRNA的表达情况,研究结果与文献一致,即胶质瘤标本中存在MT1-MMP基因表达的上调,但机制未明,推测可能与抑癌基因的失活及甲基化有关,有待进一步研究。
本研究还发现胶质瘤中MT1-MMP基因mRNA表达在病人性别、年龄和病理类型之间无统计学差异。
因此,MT1-MMP基因mRNA表达与病人性别、年龄和病理类型不存在相关性,只与病理级别相关。
实时荧光定量RT-PCR是近年发展起来的一种快速、准确且可重复性好的检测基因重复或缺失的新方法,即在PCR反应体系中,加入过量SYBR荧光染料,SYBR特异性地掺入DNA 双链小沟,发射绿色荧光信号,而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号,从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。
因此,可以通过检测反应体系中的SYBR 荧光强度来检测PCR产物的扩增量。
在实时荧光定量PCR中,模板定量有两种方法:绝对定量和相对定量。
相对定量的方法又分为:标准曲线法和比较Ct法。
本实验采用后者,直接通过计算△△Ct得出结果,△△Ct的定义:目标A/目标B=2-△△Ct,△Ct是一个常数,PCR效率相同,△Ct就恒定,而与加样多少无关,Ct表示循环阈值,即每个反应管内的荧光信号到达设定的阈值时所经历的循环数。