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Snail启动子荧光素酶报告基因载体的构建及其应用江冠民;李玲玲;张坤水;谢婉莹;张秋桂;杜军【期刊名称】《中国现代医学杂志》【年(卷),期】2013(23)31【摘要】目的构建Snail启动子荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic-Snail-luc并对其进行生物活性的鉴定及其初步的应用研究.方法通过PCR技术从人血液基因组中钓出我们需要的具有启动子活性的Snail片段,双酶切后与双酶切的pGL3-Basic 空载体连接成重组体pGL3-Basic-Snai1-luc,通过转化扩增,筛选出阳性克隆,并通过酶切,测序及生物学活性检测鉴定构建好的荧光素酶报告基因载体.结果成功地构建了pGL3-Basic-Snai1-luc荧光素酶报告基因载体,并在CNE2细胞内鉴定了其在TGF-β1的诱导下,能启动荧光素酶的表达.此外,笔者通过Western blotting检测表明TGF-β1能显著性的诱导Snail蛋白的表达,充分证明了我们构建的pGL3-Basic-Snail-luc是具有生物学功能的.结论具有生物活性的pGL3-Basic-Snai1-luc的构建成功为研究Snai1在EMT过程中的调控机制研究和以snail为靶标的抗肿瘤药物快速高通量的筛选提供了非常重要的研究工具.【总页数】6页(P12-17)【作者】江冠民;李玲玲;张坤水;谢婉莹;张秋桂;杜军【作者单位】南华大学附属第一医院检验科,湖南衡阳421001;中山大学附属第五医院中心实验室,广东珠海519000;中山大学附属第二医院药剂科,广东广州510120;南华大学附属第一医院检验科,湖南衡阳421001;南华大学附属第一医院检验科,湖南衡阳421001;中山大学药学院微生物与生化药学,广东广州510006【正文语种】中文【中图分类】R73-3【相关文献】1.人MTERF3基因启动子的克隆及其荧光素酶报告基因载体的构建 [J], 张晓娟;孙美涛;梅雯;自加吉;杨勇琴;熊伟;2.人源DNMT1基因启动子荧光素酶报告基因载体的构建及其活性检测 [J], 黄滔;曹玉祥;张志坚;周兴路;魏慧君;吴志浩3.TFF1基因启动子双荧光素酶报告基因载体的构建及活性鉴定 [J], 李俊龙; 刘小康; 王祎4.水牛HSD17B1基因启动子荧光素酶报告基因载体构建与分析 [J], 陆杏蓉;段安琴;马小娅;梁莎莎;邓廷贤5.DAB2IP启动子荧光素酶报告基因载体的构建及其应用 [J], 王舰梅;周铁军;张熙曦;鲁梦婕;刘勇因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
NOX4报告基因重组质粒的构建及表达调控初探NOX4报告基因重组质粒的构建及表达调控初探作者赵丽君刘燕翔刘珍王伯瑶黄宁吴琦【摘要】目的构建NOX4荧光素酶报告基因质粒载体，探讨NOX4基因表达调控机制。
方法以细胞基因组DNA为模板作，采用PCR扩增NOX4基因上游调控序列533bp，插入质粒载体，构建重组质粒，重组质粒经酶切和测序鉴定。
将转染A549细胞，通过细胞因子刺激观察报告基因表达水平。
结果酶切及测序证实NOX4报告基因质粒构建成功。
转染报告基因的A549细胞以细胞因子刺激，结果显示NOX4表达增强。
结论成功构建了NOX4荧光素酶报告基因质粒载体，为进一步研究NOX4基因的表达规律及生理功能奠定了基础。
【关键词】NOX4;报告基因;表达调控还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸NADPH氧化酶首先发现于中性粒细胞和单核/巨噬细胞，在吞噬微生物病原体时，NADPH氧化酶被激活，细胞发生呼吸爆发，产生大量活性氧簇reactive oxygen species,ROS，成为机体抵抗微生物感染的重要成分[1]。
近年，在非吞噬细胞质膜上发现了NADPH氧化酶的同源物家族，被命名为NOXNADPH oxidase蛋白家族。
人类基因组同源性检索发现了7种NADPH氧化酶，即NOX1、NOX2、NOX3、NOX4、NOX5、Duox1和Duox2[2-4]。
NOX家族广泛表达于机体的组织器官，它们的生物学功能成为当前研究的热点领域。
为了探讨NOX家族中NOX4在机体炎症和免疫反应中的作用，我们构建NOX4报告基因重组质粒OX4，并初步观察了炎症细胞因子对该基因表达水平的影响。
1 主要材料和试剂A549上皮细胞株、E.coli DH5α为本实验室保存。
荧光素酶报告基因载体，海肾荧光素酶内对照报告载体及System为Promega产品。
质粒提取，PCR产物纯化及凝胶回收试剂盒购自Omega 公司。
DMEM培养基、转染试剂Lipofectamine2000购自Invitrogen公司。
-----------------------------------Docin Choose -----------------------------------豆 丁 推 荐↓精 品 文 档The Best Literature----------------------------------The Best Literature热带医学杂志2009年2月第9卷第2期·硕博专栏论著·[文章编号]1672-3619（2009）02-0147-04基金项目：广东省自然科学基金（No．32874）；广东省医学科研基金（No．2004382）。
作者简介：刘贝娜（1982－），女，硕士研究生，主要从事鼻咽癌基因多态性方面的研究。
*通讯作者：何英，女，硕士生导师，副主任医师，E-mail ：ying-h＠tom．comPLUNC （palate ，lung and nasal epithelium clone ）基因即腭、肺、鼻上皮细胞克隆，多在口腔、鼻、呼吸和消化道的上皮表面或分泌腺中高表达［1－3］。
多项研究表明PLUNC 基因与鼻咽癌关系十分密切，其表达下调可能有助于鼻咽癌的发生，为抑瘤基因的候选者［4，5］。
我们前期对该方面也做了更深入的研究［6］，发现hPLUNC 基因启动子区多态位点C－1888T 与中国广东人群鼻咽癌易感性关系非常密切（OR＝2．8－3．3，P ＜0．001），而且携带单倍体型C－C 的个体更易患鼻咽癌（OR＝1．86，95％CI＝1．34－2．56，P ＝0．00016），说明hPLUNC 基因的遗传多态性可能影响了广东人群鼻咽癌的易感性。
本研究采用PCR 技术从人类基因组中克隆了PLUNC 基因1888位点含C ／T 的2种单倍体型的荧PLUNC 基因启动子区荧光素酶报告载体的构建与鉴定刘贝娜1，何英1*，王爽2（1．南方医科大学南方医院耳鼻咽喉头颈外科，广州510515；2．南方医科大学病理学教研室，广州510515）【摘要】目的构建人PLUNC （palate ，lung and nasal epithelium clone ）基因启动子区C-1888T SNP 位点不同单倍型荧光素酶报告基因表达载体。
!"卷#期#$$!年%月生物工程学报!"#$%&%’()*$+,(-.#(/%0"$(,(12&’()!"*’)#!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!+,-./#$$!收稿日期：#$$$0!$0$1，修回日期：#$$$0!#0$%。
基金项目：国家自然科学基金资助（#21""$#$）。
二恶英反应增强子调控的虫荧光素酶报告基因质粒的构建张志仁"徐顺清周宜开任恕吕斌（华中科技大学同济医学院环境医学研究所，武汉市?%$$%$）摘要为加强二恶英类化学物质的快速筛选和半定量检测，我们构建了一在二恶英反应增强子调控下的虫荧光素酶报告基因质粒。
二恶英反应增强子来源于@A B &质粒，++3&启动子来源于@C ,D +质粒，上述两者连接后与虫荧光素酶载体连接，转染人A 4@E #肝癌细胞，以#，%，"，10四氯代二苯并二恶英（3C F F ）诱导报告基因表达后检测虫荧光素酶活性。
结果表明该质粒中虫荧光素酶的表达受二恶英反应增强子的调控，且在一定浓度范围内虫荧光素酶的活性与3C F F 的量呈线性关系。
研究显示该质粒转染的细胞株有望用于快速筛选及半定量检测二恶英，可进一步加强研究作为二恶英类化学物质监测的常规方法。
关键词二恶英类化学物质，虫荧光素酶，报告基因，二恶英反应增强子中图分类号G "12文献标识码B文章编号!$$$0%$5!（#$$!）$#0$!"$0$H二恶英类化学物质是一大类能与芳香烃受体结合，并产生二恶英类毒性损害的化学物质。
它们结构相近，与机体作用产生毒性的机理也相近。
这类物质主要包括多氯代二苯并二恶英，多氯代二苯并呋喃和多氯联苯中的某些种类。
它们毒性作用广泛，且作用剂量低，在环境中广泛存在，并且可以通过生物链富集，对人类健康危害极大［!"#］。
荧光素酶质粒构建
荧光素酶质粒构建技术是一种利用荧光素酶来构建一个质粒的
新技术，它为我们构建和定制原核和真核质粒提供了有力的工具。
由于质粒的构建超过了普通的克隆技术，它也被称为合成克隆技术。
荧光素酶质粒构建的原理是在原始质粒的基础上，通过荧光素酶将一系列指定的DNA序列，经过PCR扩增后，分离出指定序列碱基变化的新质粒。
此外，质粒构建还可以通过荧光素酶和适当的酶反应来调节新质粒的结构，这极大地提高了质粒的制备速度和效率。
荧光素酶质粒构建的应用范围广泛，主要有两大类。
第一类是基因组构建，它可以应用于基因组工程，如基因合成和基因改造。
第二类是抗性分析，它可以帮助我们了解以往未知的抗性机制，从而有利于抗性基因的有效筛查和抗菌品种的选育。
此外，荧光素酶质粒构建也可以用于肿瘤治疗研究。
例如，用于肿瘤细胞上的特定基因的构建，以及抗肿瘤抗体的表达系统的构建。
这些研究都可以帮助我们了解抗癌的新机制，从而提高抗癌药物的开发效率。
由于荧光素酶质粒构建技术的出现，它使得质粒的制备变得更加简单、快速而有效。
在质粒构建领域，荧光素酶质粒构建技术已经成为一种新的标准，为我们的研究带来了极大的便利。
总之，荧光素酶质粒构建技术是一种重要的技术，它是构建原核和真核质粒的重要工具，其应用范围十分广泛。
通过质粒的构建，我们可以更好地了解不同的生物体的结构和功能，以及促进药物研发的
过程。
在未来，质粒技术将继续发挥重要作用，为研究带来更多便利，助力生命科学的发展。
中国农业大学硕士学位论文植物性物质对德国小蠊的生物活性研究姓名：***申请学位级别：硕士专业：农业昆虫与害虫防治指导教师：***20040501摘要德国小蠊（Ｂｌａｔｔｅｌｌａｇｅｒｍａｎｉｃａ）是目前世界上虽重要的也是最难防治的城市卫生害虫之一。
利用植物性物质是目前德国小蠊生物防治中一个很有潜力的发展方向。
本研究选用三大类共１４种植物性物质对德国小蠊的防治进行了研究，同时对２种常用驱避剂和２种常用卫生害虫杀虫剂对德国小蠊的作用进行了测定，以期对植物性物质的作用进行比较评价。
选取了７种植物源化合物．测定了它们对德国小蠊的毒性和驱避性，结果表明，鱼藤酮、川楝素和印楝素对德国小蠊具有不同程度的胃毒作用，其中鱼藤酮乙酸乙酯溶液作用较强。
８小时死亡率已达１００％，川楝素和印楝素对德国小蠊也表现出一定的毒杀作用。
观察还发现印楝素和苦参碱对德国小蠊的发育有致畸作用，苦参碱和川楝索影响其卵鞘形成；进一步对这儿种化合物的驱避性进行研究，结果表明盐酸黄连素、鱼藤酮乳油和印楝素乳油对德国小蠊有不同程度的驱避作用，其驱避率分别为９６．７％、５１．３％和５０．１％，另外观察到鱼藤酮乙酸乙酯溶液和盐酸黄连素对德国小蠊具有较强的触杀活性，供试虫全部被击倒的时间分别为８小时和４８小时。
对不同浓度的川楝素的生物测定表明，川楝素的浓度越商，德国小蠊死亡越快，用０．５％、１％、２％的川楝素乙酸乙酯溶液处理的德国小蠊ＬＴ５０分别为１８、１５．２、１４．１天，０．２５％的川楝素乙酸乙酯溶液对德国小蠊已无致死效应；当川楝素浓度增大到２％时，对德国小蠊致死效果的增强效应已不明显。
四种植物提取物对德国小蠊的研究表明：桔皮油对德国小蠊具有很好的毒杀效果。
触杀试验结果表明，桔皮油、芥末油和生姜汁对德国小蠊若虫表现出一定程度的触杀作用，其校正死亡率率分别为５８．６２％、２９．３１％和１５．５２％，观察尚未发现大蒜提取物对德国小蠊触杀作用。
驱避实验结果表明，冷浸提法和索氏提取法提取的橘皮油、生姜汁、芥末油、和大蒜提取物均对德国小蠛表现出一定程度的驱避作用，其第一天驱避率分别为７７．８％、４２．５％、４８．８％、６１．１％、９６．５％，持效期分别为４、７、２、８、１４天。
重组人HIF-1α真核表达质粒的构建和鉴定陆蕴松;高忠礼;刘光耀【期刊名称】《吉林大学学报（医学版）》【年(卷),期】2009(35)2【摘要】目的:构建重组人HIF-Ia真核表达质粒,为进行人HIF-1α基因的克隆与表达做准备.方法:从人外周血细胞中提取总RNA,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法反转录合成cDNA.分别以含有绿色荧光蛋白(EGFP)片段的质粒PIREGFP质粒和反转录合成的cDNA为模板,加入所设计的3对引物[EGFP-linker、HIF-1α)上游(up)和下游(down)引物]所扩增目的基因片段分别与T载体连接后转化大肠杆菌DH5α,LB/Amp平板培养基筛选菌落,提取质粒.测序正确后经酶切先后克隆进入pVAXl载体.结果:通过聚合酶链反应(PCR)分别获得约870、1 199和672 bp的特异性DNA片段,分别与T载体连接后测序,测序结果与GenBank所提供的基因序列相同.将以上3个片段依次连入pVAXl载体后,所得质粒经酶切鉴定后获得约1 800 bp片段,与预想结果一致.结论:成功构建了重组人HIF-1α真核表达质粒pVAxl-EGFP-linker-HIF-1α.【总页数】4页(P318-321)【作者】陆蕴松;高忠礼;刘光耀【作者单位】吉林大学中日联谊医院骨科,吉林,长春,130033;吉林大学中日联谊医院骨科,吉林,长春,130033;吉林大学中日联谊医院骨科,吉林,长春,130033【正文语种】中文【中图分类】Q78【相关文献】1.人HIF-1α基因RNAi重组腺病毒的构建及对人肺腺癌SPCA-1细胞HIF-1α表达的影响 [J], 宋现让;魏玲;王兴武;宋宝;郑燕2.重组人HIF-1α真核表达载体质粒的构建和鉴定 [J], 邱龄;肖传实;曾秋棠;李茂莲;王改玲;赵文燕3.重组人HIF-1α真核表达载体质粒的构建与鉴定 [J], 黄大林;陈森洲;袁桂峰;徐亚娟;刘菁4.p VT102U/α-bgln重组真核表达质粒的构建和鉴定 [J], 林志楷;叶冰莹;潘海芳;陈由强;陈如凯5.人HIF-1α基因重组腺病毒的构建与鉴定 [J], 蒋春华;高钰琪;黄庆愿;黄缄;贺伟峰;段小军因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
重组质粒转染蟑螂对黑胸大蠊浓核病毒的拯救张晓东 张珈敏 郭海涛 朱丽华 胡远扬(武汉大学病毒研究所,武汉430072)摘 要 用Glassmilk法纯化PfDN V dsDNA,在其3 端和Pst 切开的pU C119质粒的3 端分别加dG和dC尾,连接、转化、筛选得到分子量为8.7kb的重组质粒。
通过酶切证明插入DN A为PfDN V全基因组DNA。
利用DEA E dex tran转染技术,将此重组质粒导入黑胸大蠊幼虫体内,此重组质粒能使虫体发病死亡。
电镜超薄切片观察发现虫体细胞内存在大量的病毒粒子。
同样,在免疫扩散实验中虫体PBS浸出液能与抗PfDNV的抗体产生沉淀线。
用重组质粒感染致死的虫体喂食健康黑胸大蠊,也能使其发病死亡,通过电镜可以观察到在细胞内增殖的病毒粒子。
关键词 浓核病毒,黑胸大蠊,重组质粒,病毒拯救黑胸大蠊浓核病毒(Per ip lanete f uliginosa Densovirus,PfDNV)是我室1991年在国内首次报道并在国内外第一个分类鉴定的蟑螂细小病毒[1]。
我们对该病毒的理化特性和病理进行了系统的研究,并构建了PfDNV全基因组克隆和酶切亚克隆重组质粒。
为了进一步研究黑胸大蠊浓核病毒感染、复制及其基因表达机理,我们进行了重组质粒感染复原病毒基因特征的实验,并证实含病毒全基因重组质粒转染黑胸大蠊幼虫后可以拯救出感染性的病毒粒子。
1 材料和方法1.1 病毒和病毒DNA P fD NV由本室分离、增殖和保存。
病毒DNA提纯方法参照N akagaki[2]所叙述方法并略有修改。
用于克隆的PfDN V dsDNA经琼脂糖电泳后,切取含完整的PfDN V dsDN A片段的凝胶,通过Na 溶液溶胶,G lassmilk水浴吸附,乙醇漂洗液漂洗,最后用T E溶液洗脱,得到纯化DNA备用。
1.2 病毒全基因组克隆和酶切亚克隆的构建 克隆战略如图1所示。
PfDN V DNA加dG尾,质粒pU C119加上dC尾,连接、转化和筛选按 分子克隆实验指南 [3]所述进行。
果蝇S2细胞中高表达荧光素酶重组质粒的构建及活性测定丁洁;周静;袁榴娣【期刊名称】《东南大学学报（医学版）》【年(卷),期】2006(25)6【摘要】目的:构建果蝇S2细胞中高表达荧光素酶的重组质粒.方法:用PCR方法扩增得到pac启动子的基因片段,经酶切亚克隆至pGL3 -Basic的真核表达载体中,转染果蝇S2细胞,通过测定荧光素酶和β-半乳糖苷酶的活性计算荧光素酶的相对活性.结果:构建的重组质粒在S2细胞中荧光素酶的相对活性较pGL3 -Control中增加了2.7万倍.结论:成功构建了果蝇S2细胞中高表达荧光素酶的重组质粒pGL3 -pac.【总页数】4页(P403-406)【作者】丁洁;周静;袁榴娣【作者单位】东南大学基础医学院,遗传与发育生物学系,江苏,南京,210009;东南大学基础医学院,遗传与发育生物学系,江苏,南京,210009;东南大学基础医学院,遗传与发育生物学系,江苏,南京,210009【正文语种】中文【中图分类】Q782【相关文献】1.MDR1启动子/荧光素酶质粒的构建及其在朊蛋白高表达胃癌细胞中的活性检测[J], 葛伏林;王婧;周毅;梁洁;张燕齐;郭雪艳;丁杰2.稳定表达荧光素酶的nm23-H1表达缺失人肺腺癌细胞株的构建及其体内外活性检测 [J], 王红明;朱大兴;吴志浩;周清华3.人肝细胞生长因子受体启动子荧光素酶表达载体的构建及活性测定 [J], 李祯;生秀杰;孙曼;汪志辉;刘启才4.以果蝇表达载体系统构建可稳定表达抗菌性多肽Trappin-2的S2细胞株 [J], 赵秀玲;何金生5.Id3启动子/荧光素酶基因载体的构建及其在WEHI-231细胞中的活性表达 [J], 李晓军;秦喜九美;水口纯一郎因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
荧光素酶编码基因luc在大肠杆菌中的克隆、表达及纯化夏蕾;饶志明;沈微;方慧英;诸葛健【期刊名称】《食品与生物技术学报》【年(卷),期】2008(027)005【摘要】以荧光虫荧光素酶报告载体pXP2 DNA为模板,扩增得到编码萤火虫荧光素酶(LUC)的基因(luc),构建了诱导型表达载体pQE30-luc.将载体导入 E.coliM15获得高效诱导表达萤火虫荧光素酶基因的重组菌M15/pQE30-luc.SDS-PAGE电泳分析显示:重组蛋白的相对分子质量为 60 000 ,表达量占全菌胞内可溶性蛋白质的50.9 %. 利用表达载体pQE30上的His*Tag标记选用Ni柱纯化表达具有活性的萤火虫荧光素酶(LUC),纯化后比酶活达到1.43×10 9 RFU/ mg,纯化倍数达10.6倍,回收率为25.3%.【总页数】5页(P62-66)【作者】夏蕾;饶志明;沈微;方慧英;诸葛健【作者单位】江南大学,工业生物技术教育部重点实验室,江苏,无锡,214122;江南大学,生物工程学院,江苏,无锡,214122;江南大学,工业生物技术教育部重点实验室,江苏,无锡,214122;江南大学,生物工程学院,江苏,无锡,214122;江南大学,工业生物技术教育部重点实验室,江苏,无锡,214122;江南大学,生物工程学院,江苏,无锡,214122;江南大学,工业生物技术教育部重点实验室,江苏,无锡,214122;江南大学,生物工程学院,江苏,无锡,214122;江南大学,工业生物技术教育部重点实验室,江苏,无锡,214122;江南大学,生物工程学院,江苏,无锡,214122【正文语种】中文【中图分类】Q939.97【相关文献】1.精氨酸脱亚胺酶基因在大肠杆菌中的克隆、表达及纯化 [J], 刘咏梅;倪晔;李娜;李利峰;孙志浩2.基因重组降钙素原蛋白在大肠杆菌中的克隆表达及纯化 [J], 陈洁;张志萍;谢惠芳3.MNDA及MNDA-HIN200片段在大肠杆菌中克隆、表达及纯化 [J], 李智;刘勇;郑晓峰;张飞云4.细胞色素P450nor在大肠杆菌中的克隆表达及分离纯化 [J], 陈舒丽;刘德立;蔡朝晖;刘汉才;罗德生5.荧光素酶基因的克隆表达及其产物纯化和鉴定 [J], 唐晨辉;庄美宝;徐帆;王章;龙綮新;庞义因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
