结晶紫染色液配制及使用说明

结晶紫水溶液(0.1%)
货号：G1064
规格：100ml
保存：室温，避光，6个月。

产品说明：
结晶紫(Crystal violet)又称甲紫，属于碱性染料，可以和细胞核中的DNA结合，产生细胞核染色，从而将细胞核染成紫色。

结晶紫在细胞学、组织学和细菌学等方面应用极广，是一种优良的染色剂。

操作说明：（仅供参考）
1、样品处理
1对于石蜡切片：
二甲苯中脱蜡5～10min。

换用新鲜的二甲苯，再脱蜡5～10min。

无水乙醇5min。

90%乙醇2min。

70%乙醇2min。

蒸馏水2min。

2对于冰冻切片：
蒸馏水2min。

③对于培养细胞：
用4%多聚甲醛固定。

蒸馏水洗涤2分钟。

更换新鲜的蒸馏水，再洗涤2min。

2、结晶紫染色：
①结晶紫染色液染色。

②用蒸馏水或自来水充分洗涤，进行观察和拍照。

染色结果：
组织或细胞深紫色
注意事项：
1、结晶紫对人体有害，请注意适当防护。

2、第一次使用本试剂时建议先取1～2个样品做预实验。

3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

相关产品：
G1072结晶紫甲醇溶液2.5%
G1071结晶紫饱和甲醇溶液
G1070草酸铵结晶紫染色液。

革兰氏染色法
1 染色液
1.1 结晶紫溶液：结晶紫乙醇饱和溶液（取结晶紫约4~8g，溶于95%乙醇100ml中）20ml，1%草酸铵溶液80ml，将上述两溶液混合，过滤。

结晶紫不可用龙胆紫代替。

前者是纯品，后者不是单一成分，易出假阳性。

结晶紫溶液放置过久会产生沉淀，不能再用。

1.2 助染剂
碘1g
碘化钾2g
蒸馏水300ml
将碘与碘化钾先行混合，加入少许蒸馏水，充分振荡。

待完全溶解后再加入其余的蒸馏水。

当溶液由棕黄色变为淡黄色时应弃去。

为易于储备，可将上列碘与碘化钾溶于30ml蒸馏水中，用前稀释。

1.3 脱色剂
95%乙醇。

1.4 复染剂
沙黄0.25g
95%乙醇10ml
蒸馏水90ml
将沙黄溶于乙醇中，待完全溶解后加入蒸馏水。

2 染色步骤
2.1 将培养18~24h的培养物涂片，要涂得薄些。

2.2 将涂片在火焰上加温固定，待冷却后滴加结晶紫溶液，1min后水洗。

2.3 滴加助染剂，1min后水洗。

2.4 滴加脱色剂，摇动玻片，直至无紫色脱落为止（约20~30s）水洗。

2.5 滴加复染剂，1min后水洗，晾干，镜检。

呈紫色者为革兰氏阳性菌，红色者为阴性菌。

细胞克隆结晶紫染色
细胞克隆结晶紫染色是一种常用的细胞克隆检测方法。

该方法利用了结晶紫染色对细胞核和细胞质的不同亲和性，使不同克隆的细胞形态上能够区分出来。

具体步骤如下：
1.将需要检测的细胞分散在培养皿中，使其尽可能单独生长。

2.将培养皿中的细胞用PBS液洗涤，去除培养基等物质。

3.加入10%的甲醛固定细胞。

4.将细胞洗涤掉甲醛后，加入0.1%结晶紫染液。

5.在30秒-1分钟内，细胞吸收染料后，再用去离子水冲洗干净。

6.待细胞晾干后，观察细胞形态、染色质、核仁等细胞器的形态，以区分不同的克隆。

需要注意的是，由于该方法只能检测单克隆的细胞，因此如果需要检测多克隆的情况，可以在细胞培养过程中加入适量的细胞抑制剂，使每个克隆只分裂一次，从而形成单克隆。

第1页，共1页草酸铵结晶紫染色液(2.5%)
货号：G1061
规格：10ml/100ml/500ml
保存：2-8℃保存，有效期1年。

产品说明：
草酸铵结晶紫染色液是革兰氏染色法中的一种成分。

革兰阳性菌染色中，细胞经草酸铵结晶紫染色后再经Gram碘液处理，形成不溶性复合物，该复合物不能通过细胞壁，不易被脱色，所以保持紫色。

染色后细菌与环境形成鲜明对比，可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征，而用以分类鉴定。

操作步骤(仅供参考)：
1、按实验具体要求操作或参考下列革兰氏染色的方法。

2、涂片：取待检细菌，于载玻片中央涂成薄层或者在载玻片上滴加少许无菌水，取菌与水混合均匀，涂
成薄层。

3、干燥：涂片后在室温下自然干燥，也可在酒精灯上略加温，使之迅速干燥。

4、固定：手持载玻片一端，标本面朝上，在酒精灯的火焰外侧快速来回移动。

5、初染：滴加结晶紫染色液染色，清水冲洗去染色液。

6、媒染：滴加Gram碘液，并覆盖载玻片室温放置，水洗。

7、脱色：滴加脱色液摇动，直至流下的脱色液不出现紫色为止，立即用水冲去脱色液，终止反应。

8、复染：滴加沙黄染色液染色，水洗。

9、干燥。

镜检：置油镜观察。

染色结果：
革兰氏阳性菌：蓝色至紫色；革兰氏阴性菌：红色。

注意事项：
1、涂片之前，应事先在背面做好圆圈标记，以便判断后续试验的位置。

2、待检细菌培养时间会影响染色，阳性菌培养时间过长或已死亡或细菌溶解，常呈阴性。

3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

A液：结晶紫2.5g，95%乙醇25mL。

B液：草酸铵1.0g，蒸馏水1000mL。

制备时，将结晶紫研细，加入95%乙醇溶解，配成A液。

将草酸铵溶于蒸馏水，配成B液。

两液混合静止48h后，过滤后使用。

2．鲁格尔氏（路戈氏）碘液碘1.0g，KI 2.0g，蒸馏水300mL。

先用3~5 mL蒸馏水溶解KI，再加入碘片，稍加热溶解，加足水过滤后使用。

3．脱色液：95%乙醇；或丙酮乙醇溶液：95％乙醇70mL，丙酮30mL4．沙黄（番红）染色液2.5％沙黄（番红）乙醇溶液：沙黄（番红）2.5g，95%乙醇100mL。

此母液存放于不透气的棕色瓶中，使用时取20mL母液加80mL蒸馏水使用。

5．0.1％美兰染色液0.1g溶解于100mL蒸馏水中。

6．吕氏碱性美蓝色染色液A液：美蓝0.3g，95%乙醇30mL。

B液：KOH 0.01g，蒸馏水100mL，分别配制A液和B液，混合即可。

7．瑞氏染色液瑞氏染料粉未0.3g,甘油3mL，甲醇97mL。

将染料放乳钵内研磨，先加甘油，后加甲醇，过夜后过滤即可。

8．5％孔雀绿水溶液（芽孢染色用）孔雀绿5.0g,蒸馏水100mL。

先将孔雀绿放乳钵内研磨，加少许95％乙醇溶解，再加蒸馏水。

9．黑色素水溶液（荚膜负染色用）黑色素10g，蒸馏水100mL，40％甲醛（福尔马林）0.5mL。

将黑色素溶于蒸馏水中，煮沸5min，再加福尔马林作防腐剂，用玻璃棉过滤。

A液：单宁酸5.0g，FeCL3 1.5g，福尔马林(15%) 2.0mL，1%NaOH 1.0mL，蒸馏水100mL。

B液：AgNO3 2.0g,蒸馏水100mL。

将AgNO3溶解后，取出10mL备用，向其它的90mL硝酸银液中加浓氢氧化铵，则形成很厚的沉淀，再继续滴加氢氧化铵到刚刚溶解沉淀成为澄清溶液为之。

再将备用的硝酸银慢慢滴入，则出现薄雾，但轻轻摇动后，薄雾状的沉淀又消失，再滴入硝酸银，直到摇动后，仍呈现轻微而稳定的薄雾状沉淀为之。

结晶紫-柠檬酸染色液(0.1%)
简介：
结晶紫是一种可以和细胞核中的DNA 结合的碱性染料，对细胞核染色。

三苯甲烷染料和甲基紫是用于验证淀粉样物的第一个人工合成染料。

结晶紫-柠檬酸染色液(0.1%)主要由结晶紫、柠檬酸等组成，是一种组织或细胞染色时常用的可以把细胞核染成深紫色的染色液。

组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、样品处理
a)对于石蜡切片：
二甲苯中脱蜡5～10min 。

更换新鲜的二甲苯，再脱蜡5～10min 。

无水乙醇5min 。

90%乙醇2min 。

70%乙醇2min 。

蒸馏水2min 。

b)对于冰冻切片：
蒸馏水2min 。

c)对于培养细胞：
用4%多聚甲醛固定10min 以上。

蒸馏水洗涤2min 。

更换新鲜的蒸馏水，再洗涤2min 。

1、 染色：
Crystal Violet Stain 染色。

用蒸馏水或自来水充分洗涤，可进行观察和拍照。

注意事项：
1、 如果需要脱水、透明和封片处理，需自备二甲苯，中性树胶或其它封片剂。

编号 名称 DZ0057 Storage 结晶紫-柠檬酸染色液(0.1%) 100ml
RT 避光 使用说明书 1份
2、第一次使用本试剂时建议先取1～2个样品做预实验。

3、结晶紫对人体轻微有害，请注意适当防护。

4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

集落实验结晶紫染色
《集落实验结晶紫染色》
一、实验目的
1、了解芒硝实验结晶紫染色的基本过程和实验步骤；
2、掌握芒硝实验结晶紫染色的实验技术；
3、理解芒硝实验结晶紫染色的基本原理。

二、实验材料
芒硝、苯酚、稀硫酸、乙醇、碘化银粉末、盐酸、醋酸钠、稀盐酸等。

三、实验步骤
1、将苯酚、芒硝和稀硫酸以1:1:2的比例配制成比色液，然后加入少量乙醇；
2、将试样放入比色液中，将容器放在温床（或室温）中反应2-3分钟；
3、将试样取出，放入碘化银粉末后，放入温床（或室温）反应10分钟；
4、将试样放入盐酸中反应2-3分钟；
5、将试样放入醋酸钠中反应1-2分钟；
6、将试样放入稀盐酸中反应2-3分钟；
7、将试样取出，放入乙醇中，浸泡1-2分钟，拧干后，观察染色效果。

四、实验原理
芒硝实验结晶紫染色的原理是将芒硝、苯酚和稀硫酸配制成比色液，然后将其放入试样中，反应后生成芒醛和亚苯酚；接着，将试样放入碘化银粉末中反应，向反应中加入氧化剂，亚苯酚便会发生氧化作用，合成芒醛。

芒醛在酸性或中性溶液中会发生酯化反应，生成紫色的有机结晶，从而实现紫色染色的目的。

结晶紫水溶液(0.1%)操作说明及注意事项
货号：G1064
规格：100ml
保存：室温，避光，6个月。

产品说明：
结晶紫(Crystal violet)又称甲紫，属于碱性染料，可以和细胞核中的DNA结合，产生细胞核染色，从而将细胞核染成紫色。

结晶紫在细胞学、组织学和细菌学等方面应用极广，是一种优良的染色剂。

操作说明：（仅供参考）
1、样品处理
1对于石蜡切片：
二甲苯中脱蜡5～10min。

换用新鲜的二甲苯，再脱蜡5～10min。

无水乙醇5min。

90%乙醇2min。

70%乙醇2min。

蒸馏水2min。

2对于冰冻切片：
蒸馏水2min。

③对于培养细胞：
用4%多聚甲醛固定。

蒸馏水洗涤2分钟。

更换新鲜的蒸馏水，再洗涤2min。

2、结晶紫染色：
①结晶紫染色液染色。

②用蒸馏水或自来水充分洗涤，进行观察和拍照。

染色结果：
组织或细胞深紫色
注意事项：
1、结晶紫对人体有害，请注意适当防护。

2、第一次使用本试剂时建议先取1～2个样品做预实验。

3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

1 目的
建立微生物实验室细菌形态和主要构造检验方法，以鉴定菌种。

2 范围
本规程适用于我司革兰氏染色测试实验。

3 职责
质量部微生物实验员负责按此规程进行革兰氏染色测试。

4 染液的配制
4.1 0.5%结晶紫染色液
称取1g结晶紫，放入250ml试剂瓶中，加95%乙醇2ml,溶解后加入200ml蒸馏水摇匀即可。

4.2 革兰氏碘液
分别称取碘 1g和碘化钾2g放入蒸馏水300ml中，溶解摇匀即可。

4.3 脱色剂
95%乙醇
4.4 复染液（番红染液）
称取番红0.25g，加入10ml 95%乙醇内，然后用90ml蒸馏水稀释，摇匀即可。

5 革兰氏染色程序
5.1 涂片
用纱布擦净载玻片，以无菌接种环取一小滴无菌生理盐水，然后用无菌接种环挑取少数菌苔（菌落）或液体培养物（不必加生理盐水），在玻璃片中央涂成一薄膜。

5.2 干燥
涂片后放室温中自然干燥。

5.3 固定
将载玻片迅速通过火焰三次（其目的是杀死细菌），使菌体与载玻片粘附牢固，以及改变对染料的通透性。

5.4 初染
滴加结晶紫染液于已固定的载玻片上，染1min，水洗。