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水产品中丙酸睾酮激素的同位素稀释气相色谱-质谱法分析田良良;曹立民;王建华;徐杰;林洪【摘要】针对鱼虾等水产品中的丙酸睾酮残留,以诺龙-D3为内标研究了气相色谱-质谱(GC/MS)检测技术.捣碎匀浆后的样品中加入内标诺龙-D3和饱和NaCl溶液混匀后,叔丁基甲醚超声提取,-80℃冷冻20 min脱脂,SilicaSPE柱净化和柱前三甲基硅烷化后,进行GC/MS分析.选择离子监测(SIM)模式下,根据丙酸睾酮和诺龙-D3衍生物定量离子质量色谱图的峰面积比值,内标标准曲线法定量.实验结果表明,在0.025 ～ 1.0 mg/L范围内,衍生物定量离子峰面积比值与丙酸睾酮浓度呈现良好线性关系,相关系数为0.999 7；方法定量检出限为1.0μg/kg.当添加水平为1.0～10.0 μg/kg时,回收率为74.1％～99.5％,相对标准偏差为3.0％～8.3％.通过对市场上8种鱼贝类的检测,进一步证明该法可实现对样品进行灵敏、准确的定性定量分析.[中国渔业质量与标准,2011,1(3):55-61]【期刊名称】《中国渔业质量与标准》【年(卷),期】2011(001)003【总页数】7页(P55-61)【关键词】丙酸睾酮;水产品;气相色谱-质谱【作者】田良良;曹立民;王建华;徐杰;林洪【作者单位】中国海洋大学食品科学与工程学院,山东青岛266003;中国海洋大学食品科学与工程学院,山东青岛266003;山东出入境检验检疫局技术中心,山东青岛266002;中国海洋大学食品科学与工程学院,山东青岛266003;中国海洋大学食品科学与工程学院,山东青岛266003【正文语种】中文【中图分类】S94丙酸睾酮（Testosterone Propionate），又名丙酸睾丸酮、丙酸睾丸素，是天然雄性激素睾酮的酯化衍生合成产物，广泛地应用于临床中。
在水产养殖业中，为了达到促进动物生长、提高生长率和产量的目的，在利益的驱动下，丙酸睾酮作为一种性激素和蛋白质同化激素［1］而被使用。
同位素稀释高分辨质谱法测定鱼组织中6种多环芳烃
近年来，可燃冰的巨大潜力已经成为一个全球性的研究热点，多环芳烃（PAHs）作为一种最具潜在毒性的间隔性污染物，其在环境中的时间和空间扩散已经引起了广泛的关注。
为加深对多环芳烃污染分布特征的认知，研究人员近来采用稀释同位素质谱法（IRMS）对鱼组织中的多环芳烃成分进行定量分析。
IRMS技术能够提供准确的多环芳烃浓度估计，它通过基于质谱的测量来检测
大多数水生环境的多环芳烃。
稀释同位素质谱法有效提供了无污染物和模式化理论进行对比的有力依据，特别是对于定量确定多环芳烃污染物的浓度测定及时间序列变化等，具有重要的研究价值。
以鱼组织为例，研究者采用稀释同位素质谱法测定多环芳烃的含量，其中包括
蒽醌（Anthracene）、萘（Naphthalene）、二甲蒽（Fluorene）、咔唑芘（Pyrene）、芘（Chrysene）和苯（Benzo(a)pyrene）6种污染物。
研究人员采用
高灵敏度和高分辨质谱仪，检测每个样品中多环芳烃组分的含量，并选用稀释同位素进行校正估算。
通过本研究，通过稀释同位素质谱法测定鱼组织中多环芳烃的浓度，可以帮助
研究人员深入了解多环芳烃的污染分布特征，以及其时间的变化特征，从而更好地控制和管理多环芳烃污染。
因此，稀释同位素质谱法是研究多环芳烃污染的重要
方法，也有助于提高环境检测的准确性和可靠性。
同位素稀释高分辨质谱法测定鱼组织中6种多环芳烃汤桦;陈大舟;吴雪;徐锐锋;钟石林;邵明武;王覃【摘要】采用气相色谱-双聚焦高分辨磁式质谱联用仪开发了同位素稀释质谱法(IDMS)测定鱼组织中6种多环芳烃(PAHs).以二氯甲烷为提取溶剂,将冻干鱼组织样品加入氘代的同位素内标后,在50℃下索氏提取18 h,采用凝胶排阻色谱(GPC)联用,固相萃取(SPE)进行净化,通过条件优化,采用二氯甲烷作为GPC的流动相,在3.5 mL·min-1流速下,收集14～34 min的流出液,浓缩后用氟罗里硅土SPE小柱净化,V(环己烷):V(二氯甲烷)=1:1的溶液洗脱,以高分辨多离子方法(HRMS-MID)检测,单点校正法定量.6种PAHs在3个添加水平的检测回收率为95%～105%,精密度(RSD)为1.7%～6.0%,最小检出限为0.8～1.6μg·kg-1.【期刊名称】《质谱学报》【年(卷),期】2010(031)004【总页数】6页(P208-213)【关键词】同位素稀释质谱法(IDMS);多环芳烃(PAHs);鱼组织;凝胶排阻色谱(GPC);固相萃取(SPE)【作者】汤桦;陈大舟;吴雪;徐锐锋;钟石林;邵明武;王覃【作者单位】中国计量科学研究院,北京,100013;中国计量科学研究院,北京,100013;中国计量科学研究院,北京,100013;中国计量科学研究院,北京,100013;中国计量科学研究院,北京,100013;中国计量科学研究院,北京,100013;北京市理化分析测试中心,北京,100089【正文语种】中文【中图分类】O657.6多环芳烃(polycyclic aromatic hydrocarbons,PAHs)是指由2个或2个以上苯环以线状、角状或簇状排列的化合物(如萘、蒽等),是一类惰性较强的碳氢化合物[1],正是由于这种较强的惰性使它们较稳定的广泛地分布于环境中。
气相色谱-质谱法检测动物肌肉组织中残留的甾类同化激素陈捷;秦燕;张美金【期刊名称】《色谱》【年(卷),期】2006(24)1【摘要】建立了不同动物肌肉中甾类同化激素残留的气相色谱/质谱(GC/MS)检测方法.样品经酶解、组织捣碎和超声提取后,用叔丁基甲醚萃取和反相固相萃取柱净化,进一步衍生后进行GC/MS分析,分别测定雄激素(表睾酮(ETS)、丙酸睾酮(PTS)、19-去甲基睾酮(17β-NT)、甲基睾酮(MTS))和雌激素(雌二醇(17β-ES)、雌三醇(EST)、炔雌醇(EES)、雌酮(ESN)、苯甲酸雌二醇(BES)).实验结果表明,ETS、17β-NT、MTS、PTS、BES、ESN、17β-ES、EES和EST的定量检测限为1.0～2.0μg/kg.在2.0μg/kg的定量检测低限添加水平,上述9种激素的平均回收率为62.5%～80.5%,相对标准偏差为12.5%～26.8%.该法可实现对样品进行灵敏、准确的定性定量分析.【总页数】4页(P19-22)【作者】陈捷;秦燕;张美金【作者单位】广州出入境检验检疫局食品检测中心,广东,广州,510623;广州出入境检验检疫局食品检测中心,广东,广州,510623;广州出入境检验检疫局食品检测中心,广东,广州,510623【正文语种】中文【中图分类】O658【相关文献】1.动物组织中多种残留非类固醇同化激素的液相色谱-串联质谱法同时测定 [J], 许泓;庞国芳;林安清;古珑;何佳;张曼;张骏;林娜2.动物肌肉组织中甾类同化激素多组分残留的液相色谱-质谱检测方法 [J], 秦燕;陈捷;张美金3.固相萃取-气相色谱/质谱法同时检测动物组织中多种β-兴奋剂残留量的研究 [J], 林维宣;田苗;董伟峰4.超高效液相色谱-串联质谱法检测动物肌肉组织中19种β-受体激动剂残留 [J], 李丹;孙雷;毕言锋;苏富琴;徐秉恩;王鹤佳;徐士新5.超高压液相色谱-串联质谱法快速测定牛肉、牛肾中3种甾类同化激素药物残留量 [J], 王飞;宓捷波;葛含光因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
气相色谱质谱联用技术对水产品中激素多残留检测的研究一、研究背景随着全球经济的快速发展和人民生活水平的提高，水产品的消费量逐年攀升，为人们提供了丰富的营养和美味。
然而水产品中的激素残留问题也日益引起了广泛关注，激素类化合物在环境中具有较强的生物活性，能够干扰生物体的生长发育、生殖功能等，对人体健康造成潜在危害。
因此对水产品中激素多残留进行检测和控制，对于保障消费者的健康和维护生态环境具有重要意义。
传统的水产品检测方法主要包括理化指标检测、微生物污染检测和重金属污染检测等，这些方法在一定程度上可以反映水产品质量状况，但对于激素类化合物的检测效果较差。
近年来随着科技的发展，气相色谱质谱联用(GCMS)技术作为一种高灵敏度、高分辨率的分析手段，已经在环境监测、食品安全等领域取得了显著的应用成果。
因此本研究拟采用GCMS技术对水产品中激素多残留进行检测，以期为水产品质量监管提供科学依据。
目前关于水产品中激素多残留的研究主要集中在鱼类和贝类两个方面。
然而虾、蟹、龙虾等甲壳类水产品中的激素残留问题尚未引起广泛关注。
此外由于甲壳类水产品的生长周期较短，激素类化合物在其体内的积累程度相对较低，因此现有的检测方法往往难以满足实际需求。
本研究将针对这一问题，通过建立高效、准确的GCMS检测方法，探讨虾、蟹、龙虾等甲壳类水产品中激素多残留的现状及其影响因素，为相关政策制定和技术改进提供参考。
1. 水产品中激素多残留问题随着全球经济的快速发展，水产养殖业得到了迅猛的发展。
然而在水产养殖过程中，为了提高产量和经济效益，部分养殖户可能会使用激素类药物来促进鱼类生长。
这些激素类药物可能对人体健康产生潜在风险，因此对水产品中激素多残留问题进行检测和控制具有重要意义。
气相色谱质谱联用技术(GCMS)是一种高灵敏度、高分辨率的分析方法，可以同时测定水中多种化合物的含量。
本文将采用GCMS技术对水产品中激素多残留进行检测研究，以期为相关政策制定提供科学依据。
气相色谱-离子阱质谱法测定海洋贝类中多残留有机氯农药、多氯联苯和多环芳烃方杰;王凯雄【期刊名称】《分析化学》【年(卷),期】2007(35)11【摘要】本研究建立了凝胶渗透色谱和铝硅胶柱前处理,气相色谱-离子阱质谱法测定海洋贝类体内20种有机氯农药、28种多氯联苯和16种多环芳烃的多残留分析方法.通过对凝胶渗透色谱的组分收集时间和铝硅胶柱的正戊烷淋洗体积的实验条件优化,实现了样品索氏提取液的凝胶渗透色谱初步净化、铝硅胶柱色谱的组分分离和进一步去除干扰物质.结果表明,多氯联苯、有机氯农药和多环芳烃各化合物的方法检出限分别为0.01～0.14,0.02～0.17和0.52～0.81 ng/g(湿重),样品的加标回收率和相对标准偏差分别为:多氯联苯84.1%～120.2%、5.6%～15.9%;多环芳烃62.3%～123.1%、8.7%～20.5%;有机氯农药77.3%～127.5%、3.1%～18.7%.本方法降低了样品的前处理成本,缩短了样品处理时间,可应用于海洋贝类体内持久性有机污染物的实际监测.【总页数】7页(P1607-1613)【作者】方杰;王凯雄【作者单位】浙江大学环境与资源学院环境工程系,杭州,310029;浙江省舟山海洋生态环境监测站,舟山,316004;浙江大学环境与资源学院环境工程系,杭州,310029;浙江树人大学生物与环境工程学院,杭州,310015【正文语种】中文【中图分类】O6【相关文献】1.气相色谱-质谱法测定贝类样品中的有机氯农药 [J], 曹方方;费金岩;许人骥;许秀艳;郑晓燕;于海斌2.离子阱串联质谱法测定土壤及沉积物中的有机氯农药与多氯联苯 [J], 杨佳佳;吴淑琪;佟玲;宋淑玲;田芹3.表面活性剂结合QuEChERS-气相色谱-串联质谱法同时测定大豆油中有机氯农药、多氯联苯及多环芳烃 [J], 李晓贝;刘福光;周昌艳;陈珊珊4.气相色谱-质谱法测定土壤中多环芳烃及有机氯农药 [J], 代敏; 李东旭; 林诗云;黄进敏5.气相色谱-串联质谱法测定植物样品中17种有机氯农药和8种多氯联苯 [J], 佟玲;杨佳佳;吴淑琪因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
气相色谱-质谱法检测鱼肉中MS-222残留刘海新;张农;余颖;姜琳琳;李庐峰;王艳君【期刊名称】《福建水产》【年(卷),期】2013(035)006【摘要】本文建立了鱼肉中MS-222残留GC-MS检测方法.鱼肉样品经乙腈提取,氮吹浓缩,盐酸溶液引导MS-222电离,Waters Oasis MCX固相萃取柱净化后,气相色谱-四极杆质谱检测.方法检出限为2.5 μg·kg-1、定量限为5.0 μg·kg-1;0.0025～1.0 μg·mL-1范围内线性关系良好(R≥0.9996);MS-222浓度范围在5.0～100.0 μg·kg-1的鱼肉加标样,日内和日间平均回收率为78.4％～91.2％,相对标准偏差为3.62％～9.49％.结果表明,该检测方法适用于低浓度水平鱼肉中MS-222残留检测.【总页数】7页(P441-447)【作者】刘海新;张农;余颖;姜琳琳;李庐峰;王艳君【作者单位】福建省水产研究所,福建厦门361013;福建省水产研究所,福建厦门361013;福建省水产研究所,福建厦门361013;福建省水产研究所,福建厦门361013;福建省水产研究所,福建厦门361013;福建省水产研究所,福建厦门361013【正文语种】中文【中图分类】O657【相关文献】1.鱼肉制品中多氯联苯的检测-气相色谱串联质谱法 [J], 夏静雪2.气相色谱-负化学离子源/质谱法测定鱼肉中残留农药 [J], 金珍;林竹光3.亚临界1,1,1,2-四氟乙烷萃取-气相色谱-质谱法测定鱼肉中6种性激素残留 [J], 卢杰;冯晓梅;隋晓;陈曼华;韩玉谦;薛长湖4.气相色谱-质谱法测定鱼肉中8种环境激素的残留量 [J], 李雪银;黄孟丽;张莹5.气相色谱-质谱法测定鱼肉中8种环境激素的残留量 [J], 李雪银;黄孟丽;张莹因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
收稿日期:2004208204;修回日期:2004212221作者简介:朱 坚(1961～),男(汉族),浙江人,高级工程师,从事食品残留分析研究。
E 2mail :jianzhu @第26卷第3期2005年8月质谱学报Journal of Chinese Mass Spectrometry SocietyVol.26 No.3Aug.2005气相色谱2质谱法测定肝、肾和肉中11种β2受体激动剂残留量朱 坚,李 波,方晓明,陈家华,杨景贤(上海出入境检验检疫局,上海 200135)摘要:对用气相色谱2质谱法(GC/MS )同时测定肝、肾和肉中11种β2受体激动剂残留的方法进行研究。
样品经p H 5.2的乙酸钠缓冲溶液提取,提取液经β2盐酸葡萄糖醛苷酶2芳基硫酸酯酶水解,用高氯酸沉淀蛋白质,经异丙醇2乙酸乙酯(6∶4,体积比)液2液分配,再经阳离子交换树酯(SCX )小柱净化后,用N ,O 2双(三甲基硅基)2三氟乙酰胺衍生化。
用美托洛尔为内标,同时测定11种β2受体激动剂。
对肝、肾和肉样品进行添加回收实验,平均回收率为71%～94%,变异系数为4.6%～18.7%,最低检测限(LOQ )为0.002～0.0005mg/kg 。
关键词:β2受体激动剂;残留量;气相色谱2质谱法;肝;肾;肉中图分类号:O657.63;R974.3 文献标识码:A 文章编号:100422997(2005)032129209Analysis of 11β2Agonist R esidues in Liver ,Kidney and Meatby G as Chromatography 2Mass SpectrometryZHU Jian ,L I Bo ,FAN G Xiao 2ming ,C H EN Jia 2hua ,YAN G Jing 2xian(S hanghai Ent ry 2Ex it I ns pection and Quarantine B ureau ,S hanghai 200135,China )Abstract :The met hod for t he determination of β2agonist residues in liver ,kidney and meatby gas chromatograp hy 2mass spect romet ry (GC/MS )has been developed.The sample was ext racted in acetate buffer of p H5.2and t he ext raction was hydrolyzed by β2glucuronidase/arylsulfatase ,t hen t he p rotein was p recipitated wit h perchloricacid.The supernatant was passed t hrough a SCX cation 2exchange column and derivatized wit h N ,O 2bis (t rimet hylsilyl )t rifluoroacetamide (BSTFA ).Wit h metop rolol as internal standard ,eleven β2agonist s were determined at one time.The experimental result s from of spiked liver ,kidney and meat sample inditated t hat t he average recoveries ranged from 71%to 94%,t he variation coeffi 2cient was 4.6%218.7%,t he limit s of detection (LODs )were 0.00220.005mg/kg.K ey w ords :β2agonist s ;residue ;gas chromatograp hy 2mass spect romet ry ;liver ;kidney ;meat β2受体激动剂,属苯乙醇胺类,为儿茶酚胺、肾上腺素和去甲肾上腺素的化学类似物。
26 食品安全导刊 2010年10月刊ANALySIS & TEST 分析与检测有机氯农药H CH(六六六)和D DT （滴滴涕）是脂溶性的难降解人工化合物，可由大气输送或河流、污水排放进入海洋，其具有较强的亲脂性，比较容易在脂肪组织中聚集并且在食物链中进行生物累计，更容易累积在食物链末端的人体内，因此，必须采用一种有效的方法来分析检测海洋生物中的有机氯农药残留，以提升水产品的安全性，从而保障消费者的食用安全。
气相色谱/质谱联用技术的分析挑战用气相色谱/质谱联用技术对海洋生物样品（贻贝，蚌类）中的有机氯农药残留进行检测极具挑战性。
虽然可以同时使用快速溶剂萃取技术、尺寸排阻色谱以及氧化铝萃取技术处理样品，但提取样品中仍然含有大量基质，采用单四极杆气相色谱/质谱联用系统时，在选择离子检测模式下，这些基质不仅干扰定量分析，而且会造成衬管以及气相色谱柱出现问题，从而导致气相色谱保留时间漂移和信号强度衰减。
□ 安捷伦科技公司 供稿利用气相色谱/质谱/质谱联用技术分析海洋生物中的有机氯农药残留同时，也会使质谱离子源会很快被污染。
图1是海洋生物样品的全扫描总离子流图（TIC），质量数范围设置为 50～550a m u。
当所有分析物从柱中洗脱后，仍有大量基质存留于色谱系统中。
图2 为选择离子监测模式下纯溶剂在两个提取物注射前后的色谱对比图，显示了当样品中分析物从柱中洗脱后，仍有大量基质残存于色谱系统中。
采用Agilent 7000A GC/MS/MS 可分析海洋生物中的有机氯农药残留采用气相色谱/三重串联四极杆多反应监测分析模式时，因为多重残留分析需要对多反应监测的分段时间进行认真设置，所以采集数据时避免保留时间漂移尤其重要。
本文建立了Agilent 7000A三重串联四极杆气相色谱/质谱联用系统（简称Agilent 7000A GC/MS/MS）多反应监测模式，结合安捷伦微板流路控制技术和对高沸点组分的反吹技术来对海洋生物样品中有机氯杀虫剂进行分析。
氘代同位素内标气相色谱2质谱法测定鱼贝类肌肉中β2雌二醇残留邹龙 林洪3 江洁(中国海洋大学食品科学与工程学院,青岛266003)摘 要 建立了不同鱼贝类肌肉组织中以氘代同位素为内标测定β2雌二醇残留量的气相色谱/质谱(GC /M S )方法。
样品中加入内标β2雌二醇2D 2和乙酸钠缓冲溶液匀质后,用乙腈超声提取,经过正己烷脱脂,C 18固相萃取柱净化和柱前三甲基硅烷化后,进行GC /M S 分析。
根据β2雌二醇和内标衍生物保留时间、主要特征离子及其相对丰度和平均质谱图定性;选择离子监测(SI M )模式下,根据β2雌二醇和内标衍生物定量离子质量色谱图的峰面积比值,内标标准曲线法定量。
实验结果表明,在0.005～0.25mg/L 范围内,衍生物定量离子峰面积比值与β2雌二醇浓度呈现良好线性关系,相关系数为0.9995;方法定量检出限为0.2μg/kg 。
当添加水平为0.2～5.0μg/kg 时,回收率为68.5%～100.1%,相对标准偏差为4.8%～10.1%。
通过对市场上7种鱼贝类的检测,进一步证明该法可实现对样品进行灵敏、准确的定性定量分析。
关键词 雌二醇,水产品,氘代内标,衍生化,固相萃取,气相色谱2质谱 2006210219收稿;2007203207接受本文系本文系农业部行业标准“水产品中雌二醇残留量的测定2气相色谱2质谱法”基金资助项目(No .47)3E 2mail:linhong@ouc .edu .cn1 引 言雌二醇(ES )是一种天然雌激素,属于甾类同化激素,有α和β两种构型。
由于β2雌二醇为生物学效应最强的内源性雌激素而被广泛应用于临床[1];ES 具有较强的蛋白质同化作用,能促进动物生长,并可使动物单性化,减少过度繁殖,提高产量,而被用于水产养殖业[2]。
但β2雌二醇可在动物组织内形成残留,通过食物链进入人体,易导致儿童性早熟、男孩女性化,致畸致癌[1]等,严重威胁人类的健康。
国外有关尿[3]、血[4]、畜禽组织[5～8]中β2雌二醇残留检测的文献报道较多,但未见对水产品,尤其是鱼贝类肌肉组织的专门报道。
国内关于动物源性食品中该物质的残留量检测有少量报道[9,10],且研究对象只限于一种鱼贝类,有其局限性。
目前所用的分析方法有放射免疫测定法(R I A )[11]、高效液相色谱法(HP LC )[10]、气相色谱2质谱法(GC /MS )[3～9,12]和液相色谱2质谱法(LC /MS )[13]等。
相比较而言,GC /MS 法比较适合低浓度水平(μg/kg )雌二醇的分析。
采用适当的衍生化技术和选择离子监测(SI M )模式,即使在鱼贝类肌肉组织低目标物浓度、高基质背景的情况下,也能消除背景干扰,改善灵敏度,提高检出限。
但目前国内尚没有成熟的针对鱼贝类肌肉组织中β2雌二醇残留检测的GC /MS 确证方法。
本研究建立了不同鱼贝类肌肉组织中β2雌二醇残留量的GC /MS 测定方法。
2 实验部分2.1 仪器与试剂6890N /5973I 气相色谱/质谱联用仪(美国Agilent 公司),配分流/不分流毛细管柱进样器和GC 2MS 化学工作站;Labor ota 40012efficient 旋转蒸发仪(德国Heidol ph 公司);BR4i 高速冷冻离心机(法国Jouan 公司);12通道半自动固相萃取装置(美国Supelco 公司);氮气浓缩仪(北京康林科技有限责任公司)。
β2雌二醇(β2Estradi ol,W ako 公司),纯度≥97%;β2雌二醇2D 2(β2Estradi ol 2D 2,Sig ma 公司),纯度≥98%;N 2甲基2N 2三甲基硅基三氟乙酰胺(MSTF A ,Sig ma 2A ldrich 公司),纯度为99%;二硫赤藓糖醇(DTE,A lfa Aesar 公司),纯度为99%;三甲基碘硅烷(T M I S,Fluka 公司),纯度≥98%;乙腈、甲醇、正己烷均为色谱纯(Fisher 公司),其余试剂为分析纯;Cleanert ODS C 18固相萃取柱(Agela 公司,500g/3L,封端)。
第35卷2007年7月 分析化学(FE NX I HUAXUE ) 研究报告Chinese Journal of Analytical Che m istry 第7期983～9872.2 标准溶液配制用甲醇分别配制β2雌二醇和β2雌二醇2D2标准贮备溶液为100mg/L和200mg/L,-18℃冰箱避光存放。
临用前,分别用甲醇稀释成一系列浓度梯度的β2雌二醇标准工作溶液和0.05mg/L的内标标准工作溶液。
取0.2mol/L乙酸钠溶液237mL和0.2mol/L乙酸溶液63mL,混匀,用冰乙酸调pH,得到0.2mol/L pH5.2的乙酸钠缓冲溶液。
在无水条件下配制衍生化溶液:0.0020g DTE溶解于1mL MST2F A,然后在液面下加入2μL T M I S,混匀,放置过夜后使用,低温避光防潮密封保存。
2.3 样品处理2.3.1 匀质和提取 取鱼贝类肌肉组织,用家庭用搅拌器制样后于-18℃冷冻保存备用。
准确称取5.00g试样于50mL离心管中,加入100μL内标标准工作溶液及5mL乙酸钠缓冲溶液,用匀质器以18000r/m in匀质2次,每次30s后,加入10mL乙腈,充分旋涡混合1m in,室温下超声提取15m in。
取出离心管,以10000r/m in于4℃离心10m in,上清液倒入另一离心管中。
残渣中加入10mL乙腈,按上述方法再提取一次,合并上清液。
2.3.2 净化 加入10mL正己烷,加塞剧烈振荡1～2m in,以10000r/m in于4℃离心5m in,吸弃正己烷层,下层溶液用正己烷重复洗涤一次,合并离心后的溶液于鸡心瓶。
加入0.5mL正丙醇,于45℃水浴条件下旋转蒸发至干。
残渣中加入1mL乙腈,超声波清洗瓶壁1m in后,吸至5mL注射器中。
再用1mL乙腈提取一次,合并溶液并经有机系针头过滤器过滤,再用水稀释至10mL。
样液过C18SPE小柱(过柱前,依次用6mL甲醇、3mL0.1%乙酸溶液和3mL水活化),流速控制在1～2mL/m in。
用3mL水洗涤C18柱,弃掉流出液。
然后用9mL乙腈洗脱,收集洗脱液,氮气吹干。
2.3.3 衍生化 在残渣中准确加入100μL MSTF A2DTE2T M I S衍生化试剂,盖紧塞子并旋涡混合1m in,在60℃烘箱中反应30m in,冷却至室温,于48h内进行气相色谱2质谱分析。
进行标准溶液的衍生化时,先吸取雌二醇和内标标准工作溶液于去活样品反应瓶(美国Agilent公司)中,旋涡混合并氮气吹干,然后同上进行衍生化反应。
2.4 色谱和质谱条件HP25MS毛细管柱(25m×0.32mm×0.52μm);柱初始温度120℃(2m in)15℃/m in250℃5℃/m in300℃(5m in);载气He(≥99.999%),流速1.0mL/m in;进样口温度250℃;不分流进样1μL。
E I离子源和四极杆温度分别为230℃和150℃;接口温度280℃;电离电压70e V;溶剂延迟3m in;电子倍增器电压为1106V;扫描质量范围为40～500a mu。
3 结果与讨论3.1 样品处理条件的选择及优化3.1.1 提取溶剂的选择 雌二醇难溶于水,在弱极性或中等极性的有机溶剂中有较好的溶解度。
尝试用甲醇2缓冲盐溶液、乙腈2缓冲盐溶液、乙腈、氯仿、二氯甲烷、丙酮及乙醚作为提取溶剂。
从提取效率来看,除了氯仿和乙醚在80%以下,其余提取溶剂都相差不大,可达95%以上。
但考虑到鱼贝类肌肉组织中各种内源性杂质多,蛋白质和油脂含量较高的特点,而乙腈对动物蛋白具有良好的沉淀作用,与其它溶剂相比,对脂类化合物的溶解度较小;实验中发现,在对雌二醇低浓度尤其是接近检出限的样品进行定量时,基质中有与雌二醇基峰离子(m/z416)相同的碎片离子,严重干扰雌二醇的定量。
所以,先加入缓冲液不仅可以调节溶液pH为酸性,使雌二醇保持分子状态,而且把产生干扰碎片离子的碱性物质去除了,便于定量离子的选择。
故本方法选用乙腈2乙酸钠缓冲溶液(pH5.2)作为雌二醇的提取溶剂。
3.1.2 C18柱净化 在文献[6,7]中,大多根据杂质的性质采用2～3种不同填料的SPE小柱进行净化。
本实验通过优化条件,选用一种填料的SPE小柱,既减少成本,又能达到较好的净化效果。
上样前用水进行适当的稀释以降低乙腈的强度,使雌二醇能够保留在SPE小柱上。
在其它条件相同的情况下,比较了不同类型、不同种类填料和不同填料量C18固相萃取柱对β2雌二醇回收率的影响,结果见489 分析化学第35卷表1。
通过比较,最终选择了回收率最高的Cleanert ODS C 18固相萃取柱(500g/3L,封端)。
表1 固相萃取柱提取效率的比较Table 1 Comparis on of the extracti on efficiency of different SPE cartridges种类Kind 安捷伦Accubond Ⅱ(Agilent Accubond Ⅱ)500mg200mg 艾杰尔Cleanert (Agela Cleanert )封端200mg Capped 200mg 未封端500mg not 2capped 500mg 封端500mg Capped 500mg 回收率Recovery (%)86.194.996.799.399.8 注(notes ):未封端(not 2capped ),填料表面存在较多的硅醇官能团,能提供额外的极性相互作用(existence of many silanol functi onal gr oup s with extra polar interacti on on the surface of filler );封端(capped ),则反之(absence of silanol functi onal gr oup s with extra polar interac 2ti on on the surface of filler )。
3.1.3 衍生化条件的选择 雌二醇及氘代物结构中含有芳环,侧链C 3、C 17为极性基团,低挥发性,因此不适合直接进行GC /MS 分析。
常用的解决办法就是将其C 3、C 17羟基衍生化(硅烷化、酰化和烷基化)为醚类(bis 2O 2T MS )。
实验中选用了七氟丁酸酐(HF BA )、N 2甲基2N 2三甲基硅基三氟乙酰胺(MSTF A )和MSTF A 2T M I S 2DTE 3种衍生化试剂进行比较。
