血管生成实验模型研究进展

缺血性脑卒中后血管生成研究的进展于洋，朱雨岚摘要：缺血性脑卒中是大脑血液和氧气供应不足的结果。

最近的研究表明，缺血性脑卒中后新血管形成不仅可以改善脑缺血区域血供，还可以促进神经发生，改善动物模型和患者的神经功能。

本文就缺血性脑卒中后血管生成的研究进展做以下综述。

关键词：卒中；血管生成诱导剂；血管生成抑制剂文章编号：1008-0074(2021)01-99-04中图分类号：R743.3309文献标识码：A Doi：103969/ji s n1008-007420210126Research progress of angiogenesss after ischemic stroke/Y犝Yang,ZHU Yu—lan//Department of Neurology, Second Affiliated Hospital of Harbin Medical University,Harbin,Heilongjiang,150081,ChinaCorresponding author：ZHU Yu-lan,E-mail：1072376542@Abstract：Ischemicstrokeistheresultofinsufficientbloodandoxygensupplytobrain Recentstudieshaveshown thatneovascularizationafterischemicstrokecannotonlyimprovebloodsupplyincerebralischemicareas，butalso promoteneurogenesisandimproveneurologicalfunctioninanimalmodelsandpatients Thepresentarticle makes fo l owingreviewonresearchprogre s ofangiogenesisafterischemicstrokeKey words:Stroke；Angiogenesis inducing agents；Angiogenesis inhibitors缺血性脑卒中是指大脑血液供应突然停止，其可导致永久性脑损伤。

㊀㊀［摘要］㊀缺血性心脏病（ＩＨＤ），也称为冠心病，是由冠状动脉狭窄或阻塞引起的一组疾病㊂治疗ＩＨＤ诱导血管生成和血管重建至关重要㊂近年来研究表明，外泌体可以通过促进血管生成，从而减轻心肌缺血再灌注损伤，抑制纤维化和促进心脏再生等作用，对ＩＨＤ具有保护作用㊂促血管生成的研究可能为ＩＨＤ的治疗提供新的选择㊂该文对ＩＨＤ促血管生成治疗方法的研究进展作一综述㊂㊀㊀［关键词］㊀缺血性心脏病；㊀新血管形成；㊀血管内皮生长因子；㊀干细胞；㊀外泌体㊀㊀［中图分类号］㊀Ｒ４５３㊀［文献标识码］㊀Ａ㊀［文章编号］㊀１６７４－３８０６（２０２３）１１－１２００－０５㊀㊀ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７４－３８０６．２０２３．１１．２０Ａｄｖａｎｃｅｓｉｎｔｒｅａｔｍｅｎｔｍｅｔｈｏｄｓｏｆａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓｉｎｄｕｃｅｄｂｙｉｓｃｈｅｍｉｃｈｅａｒｔｄｉｓｅａｓｅ㊀ＺＨＡＮＧＸｕｅ，ＬＩＵＭｅｉ⁃ｌａｎ．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＹａｎｂｉａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｊｉｌｉｎ１３３０００，Ｃｈｉｎａ㊀㊀［Ａｂｓｔｒａｃｔ］㊀Ｉｓｃｈｅｍｉｃｈｅａｒｔｄｉｓｅａｓｅ（ＩＨＤ），ａｌｓｏｋｎｏｗｎａｓｃｏｒｏｎａｒｙｈｅａｒｔｄｉｓｅａｓｅ，ｉｎｃｌｕｄｅｓａｇｒｏｕｐｏｆｄｉｓｅａｓｅｓｃａｕｓｅｄｂｙｃｏｒｏｎａｒｙａｒｔｅｒｙｓｔｅｎｏｓｉｓｏｒｏｂｓｔｒｕｃｔｉｏｎ．ＩｔｉｓｃｒｕｃｉａｌｔｏｔｒｅａｔＩＨＤ⁃ｉｎｄｕｃｅｄａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓａｎｄｖａｓｃｕｌａｒｒｅｃｏｎ⁃ｓｔｒｕｃｔｉｏｎ．Ｉｎｒｅｃｅｎｔｙｅａｒｓ，ｒｅｓｅａｒｃｈｅｓｈａｖｅｓｈｏｗｎｔｈａｔｅｘｏｓｏｍｅｓｃａｎａｌｌｅｖｉａｔｅｍｙｏｃａｒｄｉａｌｉｓｃｈｅｍｉａ⁃ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｊｕｒｙ，ｉｎｈｉｂｉｔｆｉｂｒｏｓｉｓ，ａｎｄｐｒｏｍｏｔｅｈｅａｒｔｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｂｙｐｒｏｍｏｔｉｎｇａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ，ｗｈｉｃｈｈａｓａｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｅｆｆｅｃｔｏｎＩＨＤ．Ｒｅｓｅａｒ⁃ｃｈｅｓｏｎｐｒｏｍｏｔｉｎｇａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓｍａｙｐｒｏｖｉｄｅｎｅｗｏｐｔｉｏｎｓｆｏｒｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆＩＨＤ．Ｉｎｔｈｉｓｐａｐｅｒ，ｔｈｅａｄｖａｎｃｅｓｉｎｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｍｅｔｈｏｄｓｏｆａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓｉｎｄｕｃｅｄｂｙＩＨＤｉｓｒｅｖｉｅｗｅｄ．㊀㊀［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］㊀Ｉｓｃｈｅｍｉｃｈｅａｒｔｄｉｓｅａｓｅ（ＩＨＤ）；㊀Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ；㊀Ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ（ＶＥＧＦ）；Ｓｔｅｍｃｅｌｌ；㊀Ｅｘｏｓｏｍｅ㊀㊀缺血性心脏病（ｉｓｃｈｅｍｉｃｈｅａｒｔｄｉｓｅａｓｅ，ＩＨＤ）的发病率及病死率均呈逐年上升趋势㊂ＩＨＤ是心血管疾病（ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒｄｉｓｅａｓｅ，ＣＶＤ）发生的危险因素［１］㊂ＩＨＤ的主要病理生理原因是动脉粥样硬化，血流逐渐阻塞导致心脏组织氧合不良，伴有内皮功能障碍和年龄相关性血管生成反应下降［２］㊂心肌缺血坏死后若不及时进行干预，将导致心室重构，进一步促进心力衰竭的发生［３］㊂尽管可以通过溶栓㊁经皮冠脉介入及冠状动脉旁路移植术等治疗方式开通闭塞和狭窄的冠状动脉，及时抢救濒临缺血坏死的心肌，防止心功能进一步下降，降低病死率［４］㊂但部分患者由于冠状动脉生理的因素而无法进行以上治疗㊂因此，血管内皮生长因子（ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ＶＥＧＦ）治疗被认为是较好的治疗方式［５］㊂血管生成是导致新血管形成的复杂过程，可以治疗从重要器官和组织进出的病理受损或缺乏的血液流动有功能的血管系统，通过运送氧气和营养物质㊁清除垃圾及输送免疫细胞，对维护组织和器官正常运行至关重要［６］㊂新血管生成由ＶＥＧＦ诱导且同时需要许多细胞和蛋白质的参与㊂除了细胞因子㊁基因治疗外，间充质干细胞（ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓ，ＭＳＣｓ）还分泌微囊泡／外泌体，为治疗ＩＨＤ提供了一种新的血管生成治疗方法［７］㊂本文对细胞因子㊁蛋白质㊁基因或细胞外囊泡诱导血管生成作一综述㊂１㊀血管生成血管生成是由缺血／缺氧诱导的内皮细胞（ｅｎｄｏ⁃ｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ，ＥＣｓ）的适应性反应㊂血管生成是指从现有的血管中形成新的血管，随后在体内扩张血管网络的过程［８］㊂通过血管生成过程产生微血管将有助于恢复缺血组织和细胞的血液和氧气供应，从而减少缺血／缺氧诱导的细胞损伤㊂研究显示，治疗性血管生成可加强这一过程，从而改善缺血心肌的血供［９］㊂治疗性血管生成涉及外源性给药，促进新生血管形成后的生长，以恢复组织的循环㊂在正常生理情况下，机体通过产生精准数量的促血管生成生长因子使血管生成维持稳定状态，如ＶＥＧＦ㊁碱性成纤维细胞生长因子（ｂａｓｉｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ｂＦＧＦ）㊁肝细胞生长因子（ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ＨＧＦ）和缺氧诱导因子⁃１（ｈｙｐｏｘｉａ⁃ｉｎｄｕｃｉｂｌｅｆａｃｔｏｒ⁃１，ＨＩＦ⁃１）［１０］㊂在病理生理状态下，血管生成机制可分为３个基本步骤：（１）激活；（２）ＥＣｓ的增加和转移；（３）管腔结构和血管网络形成［１１］㊂血管生成生长因子可以直接与受体结合或间接激活ＥＣｓ，开启下游信号通路，促使毛细血管新生㊂通过周围的外周细胞㊁周细胞和基质细胞的稳定信号的影响重新建立稳态［１２］㊂静脉生成是内皮祖细胞在毛细血管的位置组装，而动脉生成是通过发芽和肠套叠从现有的血管形成新的血管的一个过程［１３］㊂研究表明，新生血管的形成不仅依赖于原有血管的发芽，而且还来自于从骨髓循环的内皮祖细胞，这些内皮祖细胞与新生血管结合并促进新生血管的形成［１４］㊂２㊀促血管生成细胞因子促血管生成生长因子通常以纳米颗粒作为载体，通过增加局部浓度促进血管生成直接转移到靶组织，通过转录㊁病毒载体或ＤＮＡ质粒间接促进其基因表达［６］㊂ＣＶＤ患者的心肌细胞和ＥＣｓ经常暴露于缺氧和炎症中，从而刺激缺氧诱导因子（ｈｙｐｏｘｉａ⁃ｉｎｄｕｃｉｂｌｅｆａｃｔｏｒ，ＨＩＦ）㊂ＨＩＦ可通过ＨＩＦ⁃１α途径增加各种促血管生成因子的数量，进而促进血管生成㊂ＶＥＧＦ长期以来被认为是血管生成过程中的中枢调节因子㊂ＶＥＧＦ⁃Ａ通过激活酪氨酸激酶和破坏ＥＣｓ黏附连接处ＶＥＧＦ受体２（ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｒｅｃｅｐｔｏｒ２，ＶＥＧＦＲ２）／钙黏蛋白５复合物的稳定性，提高血管的通透性［１５］，恢复ＥＣｓ的完整性和血管功能㊂因此，它可以补偿缺血缺氧，保护受损的心肌，缺氧和营养缺乏会导致转录共激活因子⁃１（ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ⁃ａｃｔｉｖａｔｅｄｒｅｃｅｐｔｏｒ⁃ｇａｍｍａｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒ⁃１，ＰＧＣ⁃１）的激活㊂ＰＧＣ⁃１是线粒体功能的主要调节因子，通过提高ＶＥＧＦ的表达促进血管生成㊂ＰＧＣ⁃１进一步协同激活孤核受体⁃α（ｅｓｔｒｏｇｅｎ⁃ｒｅｌａｔｅｄｒｅｃｅｐｔｏｒ⁃ａｌｐｈａ，ＥＲＲ⁃α）以控制独立于ＨＩＦ的血管生成途径［１６］㊂Ｊｉｎ等［１７］发现，缺氧也能诱导ＥＣｓ产生肿瘤坏死因子⁃α（ｔｕｍｏｒｎｅｃ⁃ｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ⁃α，ＴＮＦ⁃α），这表明自分泌周期可以通过核因子⁃κＢ（ｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒ⁃κＢ，ＮＦ⁃κＢ）依赖性过程介导，激活ＨＩＦ，上调ＶＥＧＦ，促进血管生成㊂这在ＥＣｓ中形成了ＴＮＦ⁃α／ＮＦ⁃κＢ／ＨＩＦ／ＶＥＧＦ信号级联㊂Ｇｕｏ等［１８］发现在动脉粥样硬化斑块中，ＣＤ１６３＋巨噬细胞通过ＣＤ１６３／ＨＩＦ１α／ＶＥＧＦ⁃Ａ通路参与ＶＥＧＦ⁃Ａ的表达㊂膜联蛋白Ａ１直接诱导心肌巨噬细胞向血管生成和修复表型极化，刺激心肌巨噬细胞释放大量ＶＥＧＦ⁃Ａ，从而诱导血管生成和心脏修复［１９］㊂对照临床试验未能证明在安全载体剂量下的治疗功效㊂由于ＶＥＧＦ在分泌后仍然紧密地定位在每个产生细胞周围的微环境中，即使在几十或几百微米的距离上，不同的生长因子浓度也不会均匀分布㊂因此，即使在某些区域表达过量，总ＶＥＧＦ剂量相当低，也足以引起异常的血管生长㊂如果可以实现生长因子浓度或表达水平的均匀分布，则可以控制生理血管生成［１３］㊂ｂＦＧＦ也称为成纤维细胞生长因子⁃２（ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ⁃２，ＦＧＦ⁃２），是ＦＧＦ家族的成员㊂ＦＧＦ主要通过ＲＡＳ／ＭＡＰ激酶途径与ＦＧＦ受体结合和激活，从而调节细胞增殖㊁存活㊁迁移和分化等生物学功能［６］㊂ＦＧＦ与ＶＥＧＦ的受体不同，ＦＧＦ受体被发现在ＥＣｓ和平滑肌细胞上表达，这有助于形成成熟的血管网络㊂ＦＧＦ⁃２是各种细胞类型的有丝分裂原㊁周细胞的募集因子和细胞外基质的生产者［２０⁃２１］㊂ＨＧＦ及其受体在心脏㊁肾脏和肝脏等受伤组织中高度表达，以诱导这些器官的血管生成㊂ＨＧＦ诱导冠状动脉ＥＣｓ系中基质金属蛋白酶⁃２（ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅａｓｅ⁃２，ＭＭＰ⁃２）和尿激酶的表达，ＭＭＰ的酶功能对于继续促进血管生成过程至关重要，ＨＧＦ上调ＭＭＰ以消化基底膜，从而导致细胞外基质溶解及丧失完整性［２０⁃２２］㊂虽然研究发现，生长因子具有显著的血管生成特性，但由于其半衰期短且体内生物稳定性差，其疗效较差㊂３㊀蛋白质／基因治疗新血管生成是由ＶＥＧＦ诱导的，同时需要许多细胞和蛋白质的参与［２３］㊂利用蛋白质或基因在细胞水平上刺激血管生成是一种成熟的治疗方法㊂蛋白质治疗可通过静脉㊁动脉内㊁肌肉内或心肌内注射重组血管肽进行㊂基因治疗涉及外源核酸转移到靶细胞，以刺激所选基因的持续治疗表达㊂蛋白质的局限性是外源蛋白在靶组织中的半衰期较短［２４］，降低了治疗效益，临床试验采用基因治疗延长蛋白的表达时间㊂基因转移可能是病毒性的，也可能是非病毒性的㊂其一直以来使用腺病毒载体作为载体，已被证明可以提高ＤＮＡ转移的效率［２］㊂经皮冠状动脉成形术中Ａｄ⁃ＶＥＧＦ１６５与质粒ＤＮＡ⁃ＶＥＧＦ１６５的心肌内注射㊂Ａｄ⁃ＶＥＧＦ１６５可使心肌灌注程度提高［２５］㊂有研究使用同时编码ＶＥＧＦ和ＰＤＧＦ的组合质粒，发现其对ＥＣｓ迁移和血管形成具有诱导作用［２６］㊂因此，采用这种配对方法，同时给予ＦＧＦ⁃２和ＰＤＧＦ⁃β可以显著改善大鼠和兔缺血后肢模型的侧支网络形成和血液灌注［２７］㊂同时使用２种或２种以上的蛋白质㊁基因，或蛋白质和基因的结合，是一种更有效㊁更稳定的促进血管生长的方法㊂第一代心血管ＶＥＧＦ临床试验中，ＶＥＧＦ蛋白递送也被用于治疗糖尿病患者的慢性足部溃疡，但疗效有限㊂限制ＶＥＧＦ功效的主要问题是其治疗剂量，例如通过基因递送，已被证明具有较大难度，较低剂量的基因治疗载体无效，较高剂量的基因治疗载体则会迅速引起异常血管生长［２８⁃２９］㊂４㊀细胞治疗细胞治疗是通过控制心脏缺血时的自分泌和旁分泌机制来刺激和调节治疗性血管生成的生物途径的最佳选择，骨髓细胞（ｂｏｎｅｍａｒｒｏｗ⁃ｄｅｒｉｖｅｄｃｅｌｌｓ，ＢＭＣｓ）受到关注［３０］㊂目前的干细胞研究集中在通过改善细胞归巢㊁结合细胞疗法和使用驻留细胞群来优化细胞治疗［３１］㊂研究显示，慢性ＩＨＤ患者使用ＢＭＣｓ治疗后心脏功能得到改善，且具有安全性［３２］㊂有研究表明，在急性心肌梗死和慢性缺血性心肌病动物模型中，ＭＳＣｓ移植后整体体积减小了约７％，心功能改善了约１１％［３３］㊂Ｋａｒａｎｔａｌｉｓ等［３４］研究也证实，冠状动脉旁路移植术患者心肌内注射ＭＳＣｓ可使注射部位的血管新生，瘢痕减少，改善组织灌注及区域功能㊂ＭＳＣｓ的心脏保护作用得益于其促进新生血管形成的能力，原因可能为：（１）ＭＳＣｓ分泌可溶性旁分泌因子，促进血管生成；（２）ＭＳＣｓ能够分化成形成血管基础的ＥＣｓ㊁周细胞和平滑肌细胞㊂这些过程都参与了ＭＳＣｓ对ＩＨＤ疾病的作用机制，促进ＭＳＣｓ血管生成主要是通过分泌ＣＸＣＬ１㊁ＣＸＣＬ５㊁ＣＸＣＬ６㊁ＣＸＣＬ８㊁ＨＧＦ等细胞因子［３５⁃３６］㊂这种类型的治疗性血管生成还存在一些问题㊂移植的细胞可能在组织／器官（如心脏）中具有不可预测和不可控的行为，心肌内直接注射是将细胞或副产物直接注射到损伤组织中，通常需要开胸手术，可能会引起术后疼痛和增加患者预后不良的风险㊂因此，干细胞试验效率降低和移植后生存率低［３７］㊂５㊀外泌体ＢＭＣｓ可迅速从骨髓中动员并重新招募到缺血心脏，促进血管生成和心脏修复㊂近年来的研究表明，ＭＳＣｓ的作用主要是通过分泌旁分泌因子，包括抗凋亡因子㊁促血管生成因子和外泌体，而不是通过分化为心肌细胞［３８］㊂对旁分泌信号的高度关注，促使人们更多地关注细胞外囊泡，而不仅是细胞本身㊂这些囊泡中最受关注的是外泌体，外泌体被广泛地认为是无细胞治疗的候选者［３９］㊂外泌体是一种纳米大小的颗粒，从质膜释放为多泡体㊂它被认为是细胞之间通信㊁免疫调节㊁增殖㊁细胞衰老和分化的重要媒介，通过将各种生物活性物质如ｍＲＮＡ㊁ｍｉｃｒｏＲＮＡ㊁蛋白质和脂质从一个细胞转移到另一个细胞［４０］㊂ＭＳＣｓ衍生的外泌体对促进血管生成㊁抗细胞凋亡及抗炎方面发挥心脏保护作用㊂越来越多的证据表明，ＨＩＦ⁃１α增强的血管生成在介导心脏保护中起着关键作用，Ｅｘｏ⁃ＨＩＦ⁃１α对缺血心脏的促血管生成和保护作用是通过ＶＥＧＦ和ＰＤＧＦ介导的㊂此外，缺氧损伤的ＥＣｓ的血管生成㊁增殖和迁移也被Ｅｘｏ⁃ＨＩＦ⁃１α所改善［４１］㊂Ｈｕａｎｇ等［４０］研究发现，过表达ｍｉＲ⁃１２６通过激活ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ和ＭＡＰＫ／ＥＲＫ通路以及释放ＶＥＧＦ和ｂＦＧＦ因子，促进ＭＳＣｓ向ＥＣｓ的分化㊂在缺氧组织中，ＳＤＦ⁃１和ＣＸＣＲ⁃４也是细胞迁移的重要因素㊂缺血的心肌和血管组织分泌ＳＤＦ⁃１来吸引ＣＸＣＲ⁃４表达的细胞㊂Ｓｈｉ等［３５］发现ＳＤＦ⁃１／ＣＸＣＲ⁃４可能通过激活ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ信号通路介导ＢＭＣｓ向心肌梗死的迁移㊂因此，ＭＳＣｓ分泌的旁分泌因子在新生血管形成过程中发挥重要作用㊂６㊀结语ＩＨＤ是严重威胁人类健康的疾病，介入治疗和药物治疗在心血管治疗方面取得了巨大突破㊂ＣＶＤ患者逐年增多，其发病率和病死率均较高㊂为了减少ＩＨＤ造成的危害，新的医学疗法需要更多的实验研究来证明㊂促血管生成是治疗ＩＨＤ的一种较有前景的方法㊂但是在基因治疗方面，血管生成基因治疗诱导的增量毛细血管水平的血管化，本身可能不足以改善大肌区血管重建术，挽救缺血心肌㊂腺相关病毒的转染也可能会诱导免疫和炎症反应，从而损害缺血心肌的功能㊂另外，血液和氧气的短缺也会影响注射的干细胞㊂尤其是干细胞移植后生存率低㊁移植途径等都限制了ＭＳＣｓ治疗发展㊂近年来，研究探讨了多种新策略来增强基于干细胞的疗法，细胞来源的外泌体也降低了使用细胞疗法的限制㊂在缺氧㊁酸中毒和氧化应激反应中，微囊泡的释放增加，增强ＭＳＣｓ的旁分泌作用㊂另外，血管生成与动脉粥样硬化的冲突是ＩＨＤ促血管生成治疗中存在的问题㊂新生血管有利于缺血心肌，而脆弱和出血的新生血管也会导致斑块的不稳定㊁破裂和出血㊂未来需要更多的研究来解决这些问题㊂参考文献［１］胡盛寿，高润霖，刘力生，等．‘中国心血管病报告２０１８“概要［Ｊ］．中国循环杂志，２０１９，３４（３）：２０９－２２０．［２］ＤｒａｇｎｅｖａＧ，ＫｏｒｐｉｓａｌｏＰ，Ｙｌä⁃ＨｅｒｔｔｕａｌａＳ．Ｐｒｏｍｏｔｉｎｇｂｌｏｏｄｖｅｓｓｅｌｇｒｏｗｔｈｉｎｉｓｃｈｅｍｉｃｄｉｓｅａｓｅｓ：ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓｉｎｔｒａｎｓｌａｔｉｎｇｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌｐｏｔｅｎｔｉａｌｉｎｔｏｃｌｉｎｉｃａｌｓｕｃｃｅｓｓ［Ｊ］．ＤｉｓＭｏｄｅｌＭｅｃｈ，２０１３，６（２）：３１２－３２２．［３］ＴｅｒｉｎｇｏｖａＥ，ＴｏｕｓｅｋＰ．Ａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎｉｓｃｈｅｍｉｃｈｅａｒｔｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ］．ＪＴｒａｎｓｌＭｅｄ，２０１７，１５（１）：８７．［４］梁㊀飞．主动脉内球囊反搏辅助下非体外循环冠状动脉搭桥术治疗重症冠心病患者的临床研究［Ｊ］．辽宁医学杂志，２０２２，３６（６）：１８－２１．［５］黄麓颖，李程玉．血管内皮细胞生长因子受体１在心肌缺血／再灌注损伤中保护作用的研究进展［Ｊ］．中国临床新医学，２０２２，１５（３）：２６９－２７２．［６］ＩｎａｍｐｕｄｉＣ，ＡｋｉｎｔｏｙｅＥ，ＡｎｄｏＴ，ｅｔａｌ．Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓｉｎｐｅｒｉｐｈｅｒａｌａｒｔｅｒｉａｌｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ］．ＣｕｒｒＯｐｉｎＰｈａｒｍａｃｏｌ，２０１８，３９：６０－６７．［７］ＺｈａｏＬ，ＪｏｈｎｓｏｎＴ，ＬｉｕＤ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓｏｆａｄｉｐｏｓｅ⁃ｄｅｒｉｖｅｄｓｔｅｍｃｅｌｌｓｆｏｒｉｓｃｈｅｍｉｃｄｉｓｅａｓｅｓ［Ｊ］．ＳｔｅｍＣｅｌｌＲｅｓＴｈｅｒ，２０１７，８（１）：１２５．［８］ＡｎｇｕｌｏＪ，ＰｅｉｒóＣ，ＲｏｍａｃｈｏＴ，ｅｔａｌ．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅ⁃ｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ（ＶＥＧＦ）⁃ｉｎｄｕｃｅｄｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ，ａｒｔｅｒｉａｌｒｅｌａｘａｔｉｏｎ，ｖａｓｃｕｌａｒｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙａｎｄａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓｂｙｄｏｂｅｓｉｌａｔｅ［Ｊ］．ＥｕｒＪＰｈａｒｍａｃｏｌ，２０１１，６６７（１⁃３）：１５３－１５９．［９］ＭｉｔｓｏｓＳ，ＫａｔｓａｎｏｓＫ，ＫｏｌｅｔｓｉｓＥ，ｅｔａｌ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓｆｏｒｍｙｏｃａｒｄｉａｌｉｓｃｈｅｍｉａｒｅｖｉｓｉｔｅｄ：ｂａｓｉｃｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｃｏｎｃｅｐｔｓａｎｄｆｏｃｕｓｏｎｌａｔｅｓｔｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ［Ｊ］．Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ，２０１２，１５（１）：１－２２．［１０］ＣａｒｍｅｌｉｅｔＰ，ＪａｉｎＲＫ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｍｅｃｈａｎｉｓｍｓａｎｄｃｌｉｎｉｃａｌａｐｐｌｉｃａ⁃ｔｉｏｎｓｏｆａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ，２０１１，４７３（７３４７）：２９８－３０７．［１１］ＲｅｎＸ，ＵｓｔｉｙａｎＶ，ＰｒａｄｈａｎＡ，ｅｔａｌ．ＦＯＸＦ１ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｉｓｒｅｑｕｉｒｅｄｆｏｒｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆｅｍｂｒｙｏｎｉｃｖａｓｃｕｌａｔｕｒｅｂｙｒｅｇｕｌａｔｉｎｇＶＥＧＦｓｉｇｎａｌｉｎｇｉｎｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ［Ｊ］．ＣｉｒｃＲｅｓ，２０１４，１１５（８）：７０９－７２０．［１２］ＪａｉｎＡ，ＥｌｇｅｎｄｙＩＹ，Ａｌ⁃ＡｎｉＭ，ｅｔａｌ．Ａｄｖａｎｃｅｍｅｎｔｓｉｎｐｈａｒｍａｃｏ⁃ｔｈｅｒａｐｙｆｏｒａｎｇｉｎａ［Ｊ］．ＥｘｐｅｒｔＯｐｉｎＰｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ，２０１７，１８（５）：４５７－４６９．［１３］Ｇｉａｎｎｉ⁃ＢａｒｒｅｒａＲ，ＤｉＭａｇｇｉｏＮ，ＭｅｌｌｙＬ，ｅｔａｌ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｖａｓｃｕｌａｒ⁃ｉｚａｔｉｏｎｉｎｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅｍｅｄｉｃｉｎｅ［Ｊ］．ＳｔｅｍＣｅｌｌｓＴｒａｎｓｌＭｅｄ，２０２０，９（４）：４３３－４４４．［１４］ＰｏｔｚＢＡ，ＰａｒｕｌｋａｒＡＢ，ＡｂｉｄＲＭ，ｅｔａｌ．Ｎｏｖｅｌｍｏｌｅｃｕｌａｒｔａｒｇｅｔｓｆｏｒｃｏｒｏｎａｒｙａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓａｎｄｉｓｃｈｅｍｉｃｈｅａｒｔｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ］．ＣｏｒｏｎＡｒｔｅｒｙＤｉｓ，２０１７，２８（７）：６０５－６１３．［１５］ＷｕＸ，ＲｅｂｏｌｌＭＲ，Ｋｏｒｆ⁃ＫｌｉｎｇｅｂｉｅｌＭ，ｅｔａｌ．Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓａｆｔｅｒａｃｕｔｅｍｙｏｃａｒｄｉａｌｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ［Ｊ］．ＣａｒｄｉｏｖａｓｃＲｅｓ，２０２１，１１７（５）：１２５７－１２７３．［１６］ＡｒａｎｙＺ，ＦｏｏＳＹ，ＭａＹ，ｅｔａｌ．ＨＩＦ⁃ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＶＥＧＦａｎｄａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓｂｙｔｈｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒＰＧＣ⁃１ａｌｐｈａ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ，２００８，４５１（７１８１）：１００８－１１１２．［１７］ＪｉｎＦ，ＺｈｅｎｇＸ，ＹａｎｇＹ，ｅｔａｌ．Ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔｏｆｈｙｐｏｘｉａ⁃ｉｎｄｕｃｅｄａｎｇｉｏ⁃ｇｅｎｅｓｉｓｂｙＬＤＬｉｎｖｏｌｖｅｓａＨＩＦ⁃ｃｅｎｔｅｒｅｄｓｉｇｎａｌｉｎｇｎｅｔｗｏｒｋｌｉｎｋｉｎｇｉｎｆｌａｍ⁃ｍａｔｏｒｙＴＮＦαａｎｄａｎｇｉｏｇｅｎｉｃＶＥＧＦ［Ｊ］．Ａｇｉｎｇ（ＡｌｂａｎｙＮＹ），２０１９，１１（２）：３２８－３４９．［１８］ＧｕｏＬ，ＡｋａｈｏｒｉＨ，ＨａｒａｒｉＥ，ｅｔａｌ．ＣＤ１６３＋ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓｐｒｏｍｏｔｅａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓａｎｄｖａｓｃｕｌａｒｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙａｃｃｏｍｐａｎｉｅｄｂｙｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎｉｎａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ［Ｊ］．ＪＣｌｉｎＩｎｖｅｓｔ，２０１８，１２８（３）：１１０６－１１２４．［１９］ＦｅｒｒａｒｏＢ，ＬｅｏｎｉＧ，ＨｉｎｋｅｌＲ，ｅｔａｌ．Ｐｒｏ⁃ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃｍａｃｒｏｐｈａｇｅｐｈｅ⁃ｎｏｔｙｐｅｔｏｐｒｏｍｏｔｅｍｙｏｃａｒｄｉａｌｒｅｐａｉｒ［Ｊ］．ＪＡｍＣｏｌｌＣａｒｄｉｏｌ，２０１９，７３（２３）：２９９０－３００２．［２０］ＡｒｕｎｋｕｍａｒＰ，ＤｏｕｇｈｅｒｔｙＪＡ，ＷｅｉｓｔＪ，ｅｔａｌ．Ｓｕｓｔａｉｎｅｄｒｅｌｅａｓｅｏｆｂａｓｉｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ（ｂＦＧＦ）ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｅｄｐｏｌｙｃａｐｒｏｌａｃｔｏｎｅ（ＰＣＬ）ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓｐｒｏｍｏｔｅａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓｉｎｖｉｖｏ［Ｊ］．Ｎａｎｏｍａｔｅｒｉａｌｓ（Ｂａｓｅｌ），２０１９，９（７）：１０３７．［２１］ＢａｉＹ，ＢａｉＬ，ＺｈｏｕＪ，ｅｔａｌ．ＳｅｑｕｅｎｔｉａｌｄｅｌｉｖｅｒｙｏｆＶＥＧＦ，ＦＧＦ⁃２ａｎｄＰＤＧＦｆｒｏｍｔｈｅｐｏｌｙｍｅｒｉｃｓｙｓｔｅｍｅｎｈａｎｃｅＨＵＶＥＣｓａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓｉｎｖｉｔｒｏａｎｄＣＡＭａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ［Ｊ］．ＣｅｌｌＩｍｍｕｎｏｌ，２０１８，３２３：１９－３２．［２２］ＳｈｏｅｉｂｉＳ，ＭｏｚｄｚｉａｋＰ，ＭｏｈａｍｍａｄｉＳ．Ｉｍｐｏｒｔａｎｔｓｉｇｎａｌｓｒｅｇｕｌａｔｉｎｇｃｏｒｏｎａｒｙａｒｔｅｒｙａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ［Ｊ］．ＭｉｃｒｏｖａｓｃＲｅｓ，２０１８，１１７：１－９．［２３］Ｙｌä⁃ＨｅｒｔｔｕａｌａＳ，ＢｒｉｄｇｅｓＣ，ＫａｔｚＭＧ，ｅｔａｌ．Ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃｇｅｎｅｔｈｅｒａｐｙｉｎｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒｄｉｓｅａｓｅｓ：ｄｒｅａｍｏｒｖｉｓｉｏｎ？［Ｊ］．ＥｕｒＨｅａｒｔＪ，２０１７，３８（１８）：１３６５－１３７１．［２４］ＡｎｎｅｘＢＨ，ＳｉｍｏｎｓＭ．Ｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ⁃ｉｎｄｕｃｅｄｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｎｇｉｏｇｅｎ⁃ｅｓｉｓｉｎｔｈｅｈｅａｒｔ：ｐｒｏｔｅｉｎｔｈｅｒａｐｙ［Ｊ］．ＣａｒｄｉｏｖａｓｃＲｅｓ，２００５，６５（３）：６４９－６５５．［２５］ＳｋóｒａＪＰ，ＡｎｔｋｉｅｗｉｃｚＭ，ＫｕｐｃｚｙńｓｋａＤ，ｅｔａｌ．ＬｏｃａｌｉｎｔｒａｍｕｓｃｕｌａｒａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎｏｆＡＮＧ１ａｎｄＶＥＧＦｇｅｎｅｓｕｓｉｎｇｐｌａｓｍｉｄｖｅｃｔｏｒｓｍｏｂｉｌｉｚｅｓＣＤ３４＋ｃｅｌｌｓｔｏｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｔｉｓｓｕｅｓａｎｄｐｒｏｍｏｔｅｓａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓｉｎａｎａｎｉｍａｌｍｏｄｅｌ［Ｊ］．ＢｉｏｍｅｄＰｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ，２０２１，１４３：１１２１８６．［２６］孙㊀安，毕翔宇，韩祥祯，等．联合应用血管内皮生长因子及血小板衍生生长因子ＢＢ干预骨髓间充质干细胞的血管化及增殖能力［Ｊ］．中国组织工程研究，２０２０，２４（１）：１－６．［２７］ＣａｏＲ，ＢｒåｋｅｎｈｉｅｌｍＥ，ＰａｗｌｉｕｋＲ，ｅｔａｌ．Ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃｓｙｎｅｒｇｉｓｍ，ｖａｓ⁃ｃｕｌａｒｓｔａｂｉｌｉｔｙａｎｄｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔｏｆｈｉｎｄ⁃ｌｉｍｂｉｓｃｈｅｍｉａｂｙａｃｏｍｂｉｎａ⁃ｔｉｏｎｏｆＰＤＧＦ⁃ＢＢａｎｄＦＧＦ⁃２［Ｊ］．ＮａｔＭｅｄ，２００３，９（５）：６０４－６１３．［２８］ＲｕｂａｎｙｉＧＭ．Ｍｅｃｈａｎｉｓｔｉｃ，ｔｅｃｈｎｉｃａｌ，ａｎｄｃｌｉｎｉｃａｌｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓｉｎｔｈｅｒａ⁃ｐｅｕｔｉｃｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎｏｆｃｏｒｏｎａｒｙｃｏｌｌａｔｅｒａｌｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｂｙａｎｇｉｏｇｅｎｉｃｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｓ［Ｊ］．ＭｏｌＴｈｅｒ，２０１３，２１（４）：７２５－７３８．［２９］Ｂｅｒｒｙ⁃ＫｉｌｇｏｕｒＣ，ＣａｂｒａｌＪ，ＷｉｓｅＬ．Ａｄｖａｎｃｅｍｅｎｔｓｉｎｔｈｅｄｅｌｉｖｅｒｙｏｆｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｓａｎｄｃｙｔｏｋｉｎｅｓｆｏｒｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｃｕｔａｎｅｏｕｓｗｏｕｎｄｉｎｄｉｃａｔｉｏｎｓ［Ｊ］．ＡｄｖＷｏｕｎｄＣａｒｅ（ＮｅｗＲｏｃｈｅｌｌｅ），２０２１，１０（１１）：５９６－６２２．［３０］ＸｕＺＭ，ＨｕａｎｇＦ，ＨｕａｎｇＷＱ．ＡｎｇｉｏｇｅｎｉｃｌｎｃＲＮＡｓ：ａｐｏｔｅｎｔｉａｌｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｔａｒｇｅｔｆｏｒｉｓｃｈａｅｍｉｃｈｅａｒｔｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ］．ＬｉｆｅＳｃｉ，２０１８，２１１：１５７－１７１．［３１］ＢａｒｔｕｎｅｋＪ，ＴｅｒｚｉｃＡ，ＤａｖｉｓｏｎＢＡ，ｅｔａｌ．Ｃａｒｄｉｏｐｏｉｅｔｉｃｃｅｌｌｔｈｅｒａｐｙｆｏｒａｄｖａｎｃｅｄｉｓｃｈａｅｍｉｃｈｅａｒｔｆａｉｌｕｒｅ：ｒｅｓｕｌｔｓａｔ３９ｗｅｅｋｓｏｆｔｈｅｐｒｏ⁃ｓｐｅｃｔｉｖｅ，ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ，ｄｏｕｂｌｅｂｌｉｎｄ，ｓｈａｍ⁃ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄＣＨＡＲＴ⁃１ｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌ［Ｊ］．ＥｕｒＨｅａｒｔＪ，２０１７，３８（９）：６４８－６６０．［３２］ＫａｎｄａｓｗａｍｙＥ，ＺｕｏＬ．Ｒｅｃｅｎｔａｄｖａｎｃｅｓｉｎｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｃｏｒｏｎａｒｙａｒｔｅｒｙｄｉｓｅａｓｅ：ｒｏｌｅｏｆｓｃｉｅｎｃｅａｎｄｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ［Ｊ］．ＩｎｔＪＭｏｌＳｃｉ，２０１８，１９（２）：４２４．［３３］ＫａｎｅｌｉｄｉｓＡＪ，ＰｒｅｍｅｒＣ，ＬｏｐｅｚＪ，ｅｔａｌ．Ｒｏｕｔｅｏｆｄｅｌｉｖｅｒｙｍｏｄｕｌａｔｅｓｔｈｅｅｆｆｉｃａｃｙｏｆｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｔｈｅｒａｐｙｆｏｒｍｙｏｃａｒｄｉａｌｉｎｆａｒｃ⁃ｔｉｏｎ：ａｍｅｔａ⁃ａｎａｌｙｓｉｓｏｆｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌｓｔｕｄｉｅｓａｎｄｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ［Ｊ］．ＣｉｒｃＲｅｓ，２０１７，１２０（７）：１１３９－１１５０．［３４］ＫａｒａｎｔａｌｉｓＶ，ＤｉＦｅｄｅＤＬ，ＧｅｒｓｔｅｎｂｌｉｔｈＧ，ｅｔａｌ．Ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓｍｅｓｅｎ⁃ｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓｐｒｏｄｕｃｅｃｏｎｃｏｒｄａｎｔｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔｓｉｎｒｅｇｉｏｎａｌｆｕｎｃ⁃ｔｉｏｎ，ｔｉｓｓｕｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ，ａｎｄｆｉｂｒｏｔｉｃｂｕｒｄｅｎｗｈｅｎａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄｔｏｐａｔｉｅｎｔｓｕｎｄｅｒｇｏｉｎｇｃｏｒｏｎａｒｙａｒｔｅｒｙｂｙｐａｓｓｇｒａｆｔｉｎｇ：ｔｈｅｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅｒａｎｄｏｍ⁃ｉｚｅｄｓｔｕｄｙｏｆｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｔｈｅｒａｐｙｉｎｐａｔｉｅｎｔｓｕｎｄｅｒｇｏｉｎｇｃａｒｄｉａｃｓｕｒｇｅｒｙ（ＰＲＯＭＥＴＨＥＵＳ）ｔｒｉａｌ［Ｊ］．ＣｉｒｃＲｅｓ，２０１４，１１４（８）：１３０２－１３１０．［３５］ＳｈｉＷ，ＸｉｎＱ，ＹｕａｎＲ，ｅｔａｌ．Ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ：ｔｈｅｍａｉｎｍｅｃｈａ⁃ｎｉｓｍｏｆＭＳＣｓｉｎｉｓｃｈｅｍｉｃｈｅａｒｔｄｉｓｅａｓｅｔｈｅｒａｐｙ［Ｊ］．ＦｒｏｎｔＣａｒｄｉｏ⁃ｖａｓｃＭｅｄ，２０２１，８：６３３３００．［３６］ＫｕｃｈｒｏｏＰ，ＤａｖｅＶ，ＶｉｊａｙａｎＡ，ｅｔａｌ．Ｐａｒａｃｒｉｎｅｆａｃｔｏｒｓｓｅｃｒｅｔｅｄｂｙｕｍｂｉｌｉｃａｌｃｏｒｄ⁃ｄｅｒｉｖｅｄｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓｉｎｄｕｃｅａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓｉｎｖｉｔｒｏｂｙａＶＥＧＦ⁃ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｐａｔｈｗａｙ［Ｊ］．ＳｔｅｍＣｅｌｌｓＤｅｖ，２０１５，２４（４）：４３７－４５０．［３７］ＨｅｓｌｏｐＪＡ，ＨａｍｍｏｎｄＴＧ，ＳａｎｔｅｒａｍｏＩ，ｅｔａｌ．Ｃｏｎｃｉｓｅｒｅｖｉｅｗ：ｗｏｒｋ⁃ｓｈｏｐｒｅｖｉｅｗ：ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇａｎｄａｓｓｅｓｓｉｎｇｔｈｅｒｉｓｋｓｏｆｓｔｅｍｃｅｌｌ⁃ｂａｓｅｄｔｈｅｒａｐｉｅｓ［Ｊ］．ＳｔｅｍＣｅｌｌｓＴｒａｎｓｌＭｅｄ，２０１５，４（４）：３８９－４００．［３８］向祖金，张㊀静，杨㊀简．干细胞旁分泌效应在缺血性心脏病中的研究进展［Ｊ］．巴楚医学，２０２１，４（４）：１１１－１１４．［３９］ＬｉａｎｇＸ，ＤｉｎｇＹ，ＺｈａｎｇＹ，ｅｔａｌ．Ｐａｒａｃｒｉｎｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆｍｅｓｅｎ⁃ｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌ⁃ｂａｓｅｄｔｈｅｒａｐｙ：ｃｕｒｒｅｎｔｓｔａｔｕｓａｎｄｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ［Ｊ］．ＣｅｌｌＴｒａｎｓｐｌａｎｔ，２０１４，２３（９）：１０４５－１０５９．［４０］ＨｕａｎｇＦ，ＦａｎｇＺＦ，ＨｕＸＱ，ｅｔａｌ．ＯｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｍｉＲ⁃１２６ｐｒｏ⁃ｍｏｔｅｓｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓｔｏｗａｒｄｅｎｄｏｔｈｅ⁃ｌｉａｌｃｅｌｌｓｖｉａａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆＰＩ３Ｋ／ＡｋｔａｎｄＭＡＰＫ／ＥＲＫｐａｔｈｗａｙｓａｎｄｒｅｌｅａｓｅｏｆｐａｒａｃｒｉｎｅｆａｃｔｏｒｓ［Ｊ］．ＢｉｏｌＣｈｅｍ，２０１３，３９４（９）：１２２３－１２３３．［４１］ＳｕｎＪ，ＳｈｅｎＨ，ＳｈａｏＬ，ｅｔａｌ．ＨＩＦ⁃１αｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌ⁃ｄｅｒｉｖｅｄｅｘｏｓｏｍｅｓｍｅｄｉａｔｅｓｃａｒｄｉｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎｉｎｍｙｏｃａｒｄｉａｌｉｎｆａｒｃｔｉｏｎｂｙｅｎｈａｎｃｅｄａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ［Ｊ］．ＳｔｅｍＣｅｌｌＲｅｓＴｈｅｒ，２０２０，１１（１）：３７３．［收稿日期㊀２０２３－０３－２０］［本文编辑㊀韦㊀颖］本文引用格式张㊀雪，柳美兰．缺血性心脏病促血管生成治疗方法的研究进展［Ｊ］．中国临床新医学，２０２３，１６（１１）：１２００－１２０４．㊀㊀［摘要］㊀幽门螺杆菌（Ｈｐ）感染与慢性胃炎㊁消化性溃疡㊁胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤和胃癌等多种疾病相关，感染Ｈｐ的患者均应进行根除治疗㊂随着全球抗生素耐药率的提高，Ｈｐ根除率呈下降趋势，新的Ｈｐ根除方案有待被发掘㊂伏诺拉生（ＶＰＺ）作为一种新型钾离子竞争性酸阻滞剂，具有强效㊁稳定且持续的抑酸作用，对抗生素耐药的患者也能取得较好疗效，作为质子泵抑制剂的替代疗法已逐渐受到重视㊂该文就ＶＰＺ的作用机制㊁药理学特性及治疗研究现状等作一综述㊂㊀㊀［关键词］㊀幽门螺杆菌；㊀伏诺拉生；㊀质子泵抑制剂；㊀研究进展㊀㊀［中图分类号］㊀Ｒ５７３ ３＋９；Ｒ４５３ ９㊀［文献标识码］㊀Ａ㊀［文章编号］㊀１６７４－３８０６（２０２３）１１－１２０４－０６㊀㊀ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７４－３８０６．２０２３．１１．２１ＰｒｏｇｒｅｓｓｉｎｔｈｅｓｔｕｄｙｏｎｔｈｅｅｒａｄｉｃａｔｉｏｎｏｆＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉｗｉｔｈａｎｅｗａｃｉｄｉｎｈｉｂｉｔｏｒｖｏｎｏｐｒａｚａｎ㊀ＺＥＮＧＬｉｎ，ＮＩＥＧａｎｇ．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＧａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ⁃ＴｏｗｎＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＣｈｏｎｇｑｉｎｇＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ４０００００，Ｃｈｉｎａ㊀㊀［Ａｂｓｔｒａｃｔ］㊀Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ（Ｈｐ）ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｉｓａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｖａｒｉｏｕｓｄｉｓｅａｓｅｓｓｕｃｈａｓｃｈｒｏｎｉｃｇａｓｔｒｉｔｉｓ，ｐｅｐｔｉｃｕｌｃｅｒ，ｇａｓｔｒｉｃｍｕｃｏｓａ⁃ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｌｙｍｐｈｏｉｄｔｉｓｓｕｅｌｙｍｐｈｏｍａａｎｄｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒ，ｅｔｃ，ａｎｄａｌｌｔｈｅｐａｔｉｅｎｔｓｉｎｆｅｃｔｅｄｗｉｔｈＨｐｓｈｏｕｌｄｂｅｇｉｖｅｎｅｒａｄｉｃａｔｉｏｎｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆＨｐ．Ａｓｔｈｅｇｌｏｂａｌａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｒａｔｅｉｎｃｒｅａｓｅｓ，ｔｈｅｅｒａｄｉｃａｔｉｏｎｒａｔｅｏｆＨｐｄｅｃｒｅａｓｅｓｙｅａｒｂｙｙｅａｒ，ａｎｄｎｅｗｅｒａｄｉｃａｔｉｏｎｓｃｈｅｍｅｓｏｆＨｐｎｅｅｄｔｏｂｅｅｘｃａｖａｔｅｄ．Ｖｏｎｏｐｒａｚａｎ（ＶＰＺ），ｗｈｉｃｈｉｓａｎｏｖｅｌｐｏｔａｓｓｉｕｍ⁃ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅａｃｉｄｂｌｏｃｋｅｒｓ，ｈａｓｓｔｒｏｎｇ，ｓｔａｂｌｅａｎｄｌｏｎｇ⁃ｌａｓｔｉｎｇａｃｉｄ⁃ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅｅｆｆｅｃｔｓ．ＰａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｃａｎａｌｓｏａｃｈｉｅｖｅａｇｏｏｄｅｆｆｅｃｔｗｈｅｎｕｓｉｎｇＶＰＺ．Ｉｔｓｔｒｅａｔｍｅｎｔａｓａｎａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅｔｈｅｒａｐｙｏｆｐｒｏｔｏｎｐｕｍｐｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓｈａｓｇｒａｄｕａｌｌｙｇａｉｎｅｄｓｅｒｉｏｕｓａｔｔｅｎｔｉｏｎ．Ｔｈｉｓｐａｐｅｒｒｅｖｉｅｗｓｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆａｃｔｉｏｎ，ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌｐｒｏｐ⁃ｅｒｔｉｅｓａｎｄｔｈｅｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｒｅｓｅａｒｃｈｓｔａｔｕｓｏｆＶＰＺ．㊀㊀［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］㊀Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ（Ｈｐ）；㊀Ｖｏｎｏｐｒａｚａｎ（ＶＰＺ）；㊀Ｐｒｏｔｏｎｐｕｍｐｉｎｈｉｂｉｔｏｒ；㊀Ｒｅｓｅａｒｃｈｐｒｏｇｒｅｓｓ。

血管生成过程中的自噬调控作用及自噬信号通路调控机制研究进展周罗慧，柏亚明，孙毅，王昱冕，王红昆明医科大学/昆明医科大学附属心血管病医院（云南省阜外心血管病医院），云南昆明650000摘要：自噬（Autophagy）可分为巨自噬、微自噬和分子伴侣介导自噬（Chaperone mediated autophagy，CMA）三种，自噬体、自体吞噬泡及溶酶体是自噬发生的必要条件，自噬的生理功能主要有内源性管家机制、外源性防御和应激调控机制、特异性融合等。

自噬对血管生成的调控具有双重性，自噬相关蛋白、炎症因子可通过促进细胞自噬，促进血管生成，抑制选择性自噬接头蛋白p62（Sequestosome-1，SPSTM1）等自噬相关蛋白的表达可抑制血管生成。

自噬相关AMPK信号通路可通过调控单磷酸腺苷酸活化蛋白激酶的表达，调控血管生成；Notch信号通路等信号通路通过CBF-1/RBP-Jκ依赖途径、CSL非依赖途径调控心肌缺氧损伤，保护心肌细胞，促进血管生成。

关键词：自噬；细胞自噬；自噬调控；自噬信号通路；血管生成doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2021.06.028中图分类号：R541文献标志码：A文章编号：1002-266X（2021）06-0108-04年龄≥50岁、高脂血症（hyperlipoidemia，HL）、动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）及高血压等均为心血管疾病的影响因素［1］。

全世界范围内每年死于心血管疾病的患者高达1500万例，且≥50%以上存活患者生活无法自理［2-3］。

细胞自噬（Autophagy）在人体的生理、病理过程中随处可见。

自噬处于正常表达状态时能起到清理细胞内过量或受损的细胞器和蛋白质，继而维持蛋白质平衡，调节细胞内循环。

若机体受到严重损害时，自噬又会参与其中，过度自噬时还会参与疾病进展。

当细胞出现过度自噬可参与机体的病理过程。

血管损伤后的血管生成和再生对心血管疾病的发生发展具有重要意义。

血管形成测定血管形成是从已经存有的血管床中通过内皮细胞增殖和迁移,以芽生或非芽生的方式生成新生血管系统的过程，与正常的生理过程(如伤口愈合、胚胎发育等)和很多病理过程(如肿瘤的生长和转移、类风湿性关节炎、脑和心血管等疾病)密切相关1,2。

血管形成中的主要细胞是内皮细胞，它存有于所有的血管上，通过内皮细胞的迁移、增殖、分化和结构重建构成了新的毛细血管网。

除内皮细胞在血管发生过程起重要作用外，支持细胞(如肿瘤细胞、外周细胞、平滑肌细胞、成纤维细胞)、细胞外基质、血液细胞和体液成分也都与血管的发生相关。

所以，血管发生的测定非常复杂。

当今尚未有任何一种体外的实验方法能精确地模拟这个复杂的过程，但结合体外、体内血管形成的测定方法，能够有效地了解血管发生的作用机理。

本文介绍了当前体内外用来研究血管形成的一些基本方法和最新方法，并对这些方法的优缺点实行了深入探讨。

体外测定血管形成的方法主要侧重于外源性抑制剂或刺激因子对内皮细胞的迁移、增殖和成管的作用。

对内皮细胞的测定，关键问题在于内皮细胞具有物种和器官的差异性。

内皮细胞表型的差异已在大血管衍生的内皮细胞(如人脐静脉内皮细胞)和微血管器官的内皮细胞(如人类皮肤毛细血管内皮细胞)中被证实3,4。

在培养中，内皮细胞的活化状态、染色体表型、细胞表面抗原的表达和它们的生长特性都会发生改变，将失去体内生长的一些特性3。

另外，在体外，内皮细胞在静止环境、动态环境、结合不同的基质的情况下，它们的特征也不同，所以它并不能完全代表体内复杂的生理过程。

即使用内皮细胞作为模型来研究体内血管发生具有很大的局限性，但体外测定方法具有快速、易定量、可重复性高等特点。

1.1内皮细胞增殖测定法血管内皮细胞的增殖是血管发生的重要步骤。

当前，已有多种成熟的细胞增殖测定方法，如四氮唑盐还原法等。

3H?残叵汆奏げ羧敕ê拖赴?周期动力学检测法是两种主要的细胞增殖测定方法。

四氮唑盐〔3??(4,5??dimethylthiazol??2??yl)??2,5??diphenyl??tetrazoliu mbromide,MTT〕还原法，又称MTT比色法，是一种最常用的检测细胞存活和生长的方法。

血管 ．同前述 法一样意在排 陈原先存在的血管的影响 ， Ｔ
较 好地 定 量 分析
删． 确定其 是否为内皮细胞组成
肿瘤微血管生成 ， 在大多数肿瘤进行性生 妊过程巾起重 要 作用 ，电是肿瘤侵袭与转移的关键 抗肿瘤微血管 ＃成已 成 为研 究热 点之～ 、也是肿瘤治疗 的希望所在 。 该领域 的
维生 长 ， 与生理状态相差甚远 ： 后来发现， 细胞基质对 内皮细 胞生 长有重要影响 ， 故而在培养系统中加＾ Ｉ型胶原形成细 胞外 基质 ， 内皮细胞生 长其 中， 可形成血管形态 ， 为接近生 较 理状 态。该系统 可称作 内皮细胞体 外三维培养 。 １２ 共 同培养模型
谊 蒂 目磐 ： ０ １ ０ ２ ０ ９ 【 ８
代表体内情况 ． 其应用价值有限
Ｉ３ 血 管段 培 养 模 型
为了克服细胞培 养的不足 ， 使血管生成过程与体内过程
相似 ． ９ ６ Ｋ ｔ￣ １９ 年 ａ ． ｋ础 ｌ 、 ｏｅ ｏ ｈ ｎ在 ｏ Ｒ ｂｒ 等的组织 培养基础 ｎ ｔ 上， 建立完善了＾胎盘血管段培养 模型 。其方法如下 ： 材 ① 料： 剖宫产后 ２ 小时内 ， ４ 取直径为 ｌ ～ ｎ的胎 盘表浅血 ｎ ｍ ｍｌ 管 ， ２ｍ～５ｍ． 长 ｃ ｃ 无菌条件下将其剪成 ｌ ｌ ｍ ｎ ～ ｎ的片段 ｍ ＠培养 ：８ ４ 孔培养板每－ Ｊ １ 凝血酶 ， 加＾ ０ ５ ｌ ９ Ｅ￣＾ ５ ｌ Ｉ ］ 再 ｍ ９ １ 培养基 ， 迅速摇匀 ．于凝固前将一血管小片段置 于培养孑 中 Ｌ 央 ， ０ 内血管段被包 围在形成的凝胶 中 ， ３秒 然后每孔再 加＾ ０５ ｌ９ ｍ ９培养液和一定量的待测剂 ． １ 常规培养 ， 每周换 液两 次 一 观察 ： ２ ③ 每 天观察一次 ， 用专 门的图像分 析系统定量分 析 ． 出生长 曲线。 检测 ： 作 ④ 培养约 ３ 周后将母本血管从纤维

抗肿瘤血管生成药物的研发及临床试验研究研究题目：抗肿瘤血管生成药物的研发及临床试验研究摘要：肿瘤血管生成是肿瘤生长和转移的重要因素。

本研究的目标是针对抗肿瘤血管生成的药物进行研发和临床试验研究。

我们将通过综合文献研究的方式梳理已有的研究成果，分析各类抗肿瘤血管生成药物的特点和免疫调节机制。

然后，我们将设计并开展一系列实验，包括细胞实验、动物模型实验和临床试验。

通过对采集到的数据的整理和分析，我们将在已有研究成果的基础上提出新的观点和方法，为解决实际问题提供有价值的参考。

关键词：抗肿瘤血管生成药物、免疫调节、细胞实验、动物模型、临床试验一、引言肿瘤的生长和进展需要大量氧气和营养物质的供应，因此肿瘤组织内部的血管生成对于肿瘤的发展起到至关重要的作用。

抗肿瘤血管生成药物作为一类重要的抗癌治疗药物，可以通过抑制肿瘤血管生成、破坏肿瘤血管网络或对肿瘤血管产生杀伤作用等机制来达到抗肿瘤的目的。

然而，已有的抗肿瘤血管生成药物仍然存在一定的局限性和副作用，因此需要进一步的研发和优化。

本研究旨在通过综合文献研究、实验设计和临床试验研究等方法，对抗肿瘤血管生成药物进行深入研究，提出新的观点和方法，为解决实际问题提供有价值的参考。

二、研究方法1. 综合文献研究利用数据库和搜索引擎，搜集和整理近年来关于抗肿瘤血管生成药物的研究文献。

对文献进行分类和梳理，总结各类抗肿瘤血管生成药物的特点和作用机制，分析其研究进展和临床应用情况。

2. 细胞实验选择适当的肿瘤细胞株，使用不同的抗肿瘤血管生成药物处理细胞，观察细胞增殖、迁移和凋亡的变化。

使用MTT法、细胞周期分析和流式细胞术等技术对处理后的细胞进行评估。

通过Western blot和实时定量PCR技术，检测抗肿瘤血管生成药物对相关通路和基因的调节作用。

3. 动物模型实验建立合适的小鼠瘤模型，通过皮下植入肿瘤细胞或移植肿瘤组织等方式。

将具有相同瘤质和瘤体积的小鼠随机分组，分别给予抗肿瘤血管生成药物和对照药物进行治疗，观察肿瘤生长、体积的变化以及小鼠的存活率。

第1篇一、实验目的1. 了解血管生成的基本原理和过程。

2. 掌握体内成血管实验的方法和步骤。

3. 分析实验结果，探讨血管生成过程中的关键因素。

二、实验原理血管生成是指血管新生的过程，包括血管形成和血管再生两个阶段。

血管生成在生理和病理过程中都具有重要意义，如组织修复、肿瘤生长等。

本实验采用体内成血管实验，通过构建一个模拟血管生成的模型，观察血管生成的过程，分析影响血管生成的因素。

三、实验材料1. 实验动物：C57BL/6小鼠，雌雄各5只，体重20-25g。

2. 实验试剂：血管内皮生长因子（VEGF）、血小板衍生生长因子（PDGF）、肝素钠、透明质酸酶等。

3. 实验仪器：显微镜、手术器械、组织切片机、凝胶成像系统等。

四、实验方法1. 术前准备：实验动物术前禁食12小时，自由饮水。

实验前1小时给予肝素钠0.5ml静脉注射，以防止血栓形成。

2. 手术操作：（1）将小鼠麻醉，消毒腹部皮肤。

（2）沿腹部正中线切开皮肤，暴露腹壁。

（3）将腹壁两侧的肌肉组织分离，暴露腹主动脉。

（4）在腹主动脉下端用细线结扎，形成一段无血管区域。

（5）将VEGF、PDGF、肝素钠和透明质酸酶混合均匀，注入无血管区域。

（6）缝合腹壁，无菌敷料包扎。

3. 观察与记录：（1）术后第3天、第7天、第14天，观察小鼠腹部皮肤颜色、质地及血管生成情况。

（2）取小鼠腹主动脉、肝、脾、肾等组织，进行组织切片。

（3）用显微镜观察组织切片，记录血管生成情况。

五、实验结果1. 术后第3天，观察小鼠腹部皮肤颜色正常，质地柔软，无异常。

2. 术后第7天，观察小鼠腹部皮肤颜色开始变红，质地变硬，血管生成明显。

3. 术后第14天，观察小鼠腹部皮肤颜色红润，质地柔软，血管生成更为明显。

4. 组织切片观察结果显示，实验组小鼠腹主动脉、肝、脾、肾等组织均出现血管生成现象，与对照组相比，血管密度明显增加。

六、实验讨论1. 体内成血管实验结果表明，VEGF、PDGF、肝素钠和透明质酸酶等试剂能够促进血管生成。

3D生物打印血管研究
技术挑战和未来展望
技术挑战和未来展望
▪ 生物材料选择与优化
1.生物兼容性：选择适合打印的生物材料，确保与人体组织的 兼容性，避免免疫反应。 2.机械性能：优化生物材料的机械性能，使其能够与人体血管 具有相似的弹性和抗压性。 3.生物活性：提高生物材料的生物活性，促进细胞生长和分化 ，加速血管形成。
实验结果和数据分析
▪ 血管功能和血流分析
1.打印的血管在体外实验中表现出正常的血管收缩和舒张功能。 2.通过模拟血流实验，证明了打印的血管具有良好的血流性能。 3.血管内壁细胞表现出正常的抗凝血功能。
▪ 生物材料降解和组织相容性分析
1.使用的生物材料在体内具有适当的降解速率，与周围组织相容性良好。 2.打印的血管在植入体内后，没有引起明显的免疫反应和炎症反应。 3.通过组织学分析，证明了打印的血管与周围组织形成了良好的连接。
1.临床试验：开展严格的临床试验，评估3D生物打印血管在治疗缺血性疾病等方面 的安全性和有效性。 2.法规与伦理：遵守相关法规和伦理规定，确保临床研究的合规性和道德性。 3.商业化推广：与产业界合作，推动3D生物打印血管的商业化进程，使其能够广泛 应用于临床。
▪ 技术拓展与联合应用
1.技术融合：结合其他先进技术，如基因编辑、微流控等，提高3D生物打印血管的 性能和功能。 2.跨学科合作：加强与其他学科的交叉合作，共同研发新型血管生物打印技术。 3.个性化治疗：根据患者的具体病情和需求，定制个性化的3D生物打印血管治疗方 案。
3D生物打印血管研究
生物材料和细胞选择
生物材料和细胞选择
▪ 生物材料选择
1.生物相容性：选择的生物材料应与人体组织具有良好的相容性，避免引起免疫排 斥反应。 2.生物活性：材料应具有生物活性，能够促进细胞生长和分化，以利于血管的形成 。 3.机械性能：材料应具有适当的机械性能，以支撑血管的结构和功能。 在选择生物材料时，需要考虑到其安全性、有效性和可行性。目前常用的生物材料

血管生成与血管疾病的研究进展血管是组成人体循环系统的重要结构之一，负责输送营养物质、氧气和代谢产物，保障身体各器官的正常功能。

在人类发育和生长过程中，不仅需要维持正常的血管功能，还需要不断产生新的血管，满足身体各部位的不同需求。

血管生成是一种复杂而精密的生物学过程，涉及多种细胞类型、信号通路和基因调控。

因此，对血管生成的研究一直是生物医学领域的热点之一。

血管生成的主要机制包括血管内皮细胞（EC）增殖、分化及空隙扩张、血管平滑肌细胞（SMC）增殖和迁移、上皮细胞差异化和提供支持性物质（如基质蛋白和生长因子等）。

理解这些生物学过程与机制对于治疗多种血管疾病（如心肌梗死、冠心病、癌症、眼睛疾病等）至关重要。

在过去几十年中，血管生成研究开拓了许多新领域，特别是在心血管系统、肿瘤和眼睛等领域。

值得一提的是，生长因子（GF）在这一领域中扮演了核心角色，这些因子可与EC和其它细胞类型结合，并激活特定的信号通路，进而对血管生成的不同阶段产生积极或消极的调节作用。

GF的研究依托于细胞的展种体系、动物模型及人类临床实验，在基础及应用角度产生了许多具有突破性的成果。

目前，人们广泛关注的是血管生成在肿瘤和心脑血管疾病中的作用。

在肿瘤领域中，性状多样的GF和肿瘤诱导因子（TIS）在肿瘤血供新生中起重要作用。

一些药物及干预手段，如血管内皮生长因子抑制剂和血管内皮生长因子受体阻断剂，已经通过了临床试验并获得了批准使用。

在心脑血管疾病方面，研究者们尝试通过生物材料、基因治疗和细胞治疗等方法去促进新血管的生成，改善低氧缺血的症状和治疗梗死等严重疾病。

另一方面，血管疾病也是血管生物学领域中一个备受关注的问题，包括心血管疾病、眼睛疾病等。

研究者们已经将重心从治疗向预防转移，利用基因库、高通量筛选、体内及体外模型等技术寻找与各类疾病相关的新分子标记和化合物。

通过研究血管生成机制，发展替代性疗法和生物标记物，有望为疾病预防和治疗提供新思路。

•综述•血管生成在骨代谢及骨质疏松症中的作用研究进展齐保玉魏戌1>2朱立国li2戴建业3孙凯i2银河u章轶立41中国中医科学院望京医院脊柱二科，北京100102 ; 2中医正骨技术北京市重点实验室100007; 3兰州大学药学院730020; 4北京中医药大学中医学院100029通信作者：魏戌，Email:weixu.007@163. com【摘要】目前，骨质疏松症（O P)的防治主要集中于抑制骨吸收，但其局限性已显现。

近年文献报道，血管生成与O P关系密切,而且发现血管生成与骨代谢间存在特定的“耦合”关系。

血管生成，尤其是H型血管，可能通过影响骨形成、骨吸收及骨重塑进程的方式，在O P发生、发展及防治过程中发挥着重要的调节作用。

本文重点梳理血管生成与骨代谢和0P之间的关系，可更全面、系统地认识O P,为其防治研究提供新的思路和理论支撑。

【关键词】骨质疏松症;骨代谢;成骨细胞;破骨细胞基金项目：国家自然科学基金（81704102);中国博士后科学基金（2019M662284);国家中医药领军人才支持计划——“岐黄学者”计划；中华中医药学会（2017—2019年度）青年人才托举工程项目(C A C M-2017-QNRC2-A03);中国中医科学院“十三五”重点领域科研项目（ZZ10422);江西省博士后研究人员择优资助科研项目（2019K Y18)DOI：10.3760/l21383-20200326-03066Research progress on the role of angiogenesis in bone metabolism and osteoporosis Qi Baoyu 2,WeiXu12，Zhu Liguo1 2，Dai Jianye3，Sun Kai1 2，Yin He1 2，Zhang Yili4. 1 Orthopedics Department ofWangjing Hospital, China Academy of Chinese Medical Sciences, Beijing 100102 y China；2 Beijing Key Labo­ratory of Orthopedics of Traditional Chinese Medicine^ Beijing, 100007, China；3School of Pharmacy,Lanzhou University, Lanzhou 730020, China；4Institute of Traditional Chinese Medicine, Beijing University ofChinese Medicine, Beijing 100029, ChinaCorresponding author: Wei Xu, Email: tueixu. 007@ 163. com【Abstract】At present, the prevention and treatment of osteoporosis (OP) is mainly focus on the in-hibition of bone resorption, and the limitations have now emerged. In recent years, it has been reported thatangiogenesis is closely related to OP, and there is a specific coupling relationship between angiogenesis andbone metabolism. Angiogenesis, especially H-type blood vessels, may play an important regulatory role inthe occurrence, development, and prevention of OP by influencing bone formation, resorption and remode­ling. This article focuses on sorting out the relationship between angiogenesis and bone metabolism as well asOP, in order to understand OP disease more comprehensively and systematically, and provide new ideas andtheoretical supports for studies of the prevention and treatment of OP.【Key words】Angiogenesis; Osteoporosis；Bone metabolism；Osteoblast；OsteoclastFund program: National Natural Science Foundation of China (81704102); China Postdoctoral Sci-ence Foundation (2019M662284) ；Foundation for Leading Talents of National Administration of TraditionalChinese Medicine-Qihuang Scholar；Foundation for Young Talents Training of China Association of ChineseMedicine (2017-2019) ( CACM-2017-QNRC2-A03) ；Scientific Research Project in the "Thirteenth Five-Year Plan" of China Academy of Chinese Medical Sciences (ZZ10-022) ；Research Project of Jiangxi Prov­ince Postdoctoral Researchers (2019KY18)DOI ： 10. 3760/cma. j. cnl21383-20200326-03066骨质疏松症（osteoporosis，OP)患者常伴有其他 病理/生理活动的改变，其中血管生成（angiogene­sis)与骨代谢过程关系密切[1]。

Ａ ＪＰｔｏ，９ ９ １５ ３ ７ ９— ５ ． ｍ ａ ｌ１９ ，５ （ ）：３ ７ ２ ｈ
［ ］蒋金玲 ， ３ 于颖彦． 血管生成拟态是对经典肿瘤血 管生成理论 的补充
［ ］ 内科 理 论 与 实 践 ，０ ０，（ ）：ｇ Ｊ． ２ １ ５ ２ １３—１６ ８．
最近研究显示 ， ｏａ 的表达涉 及到黑 色素 瘤 的形成与 侵 Ｎｄｌ 袭。在胚胎发育 中， ｏａ 维 持未分 化胚 胎干 细胞 的 自我更 新达 ， 是在 侵袭 性强 的黑 但
・
３ ２・ １
局 解 手 术 学 杂 志 ２ １ ０ ２年 第 ２ 卷 １
第３ 期
Ｊ Ｅ Ｎ ＴＯ Ｅ Ｕ Ｇ， ０ ２ Ｖ １２ ， ｏ ３ Ｇ Ａ Ａ Ｐ Ｒ Ｓ Ｒ ２ ｌ ， ｏ １ Ｎ ． Ｒ ．
的形成 ， 并伴随肿瘤细胞侵袭和迁移能 力下降 。
虑非 内皮细胞依 赖性 血管途 径 ， Ｖ 如 Ｍ。Ｖ 形 成 的信 号 通路 Ｍ 的初步 研究 提示 ， 以抑制其 信号 通路 的调节 因子 ， 而阻 断 可 从 Ｖ Ｍ形成 的途径 ， Ｖ 的靶 向治疗提供 了新思 路 ， 为 Ｍ 带来 了新希 望 。除此之外 ， 运用光镜 、 电镜 、 免疫组化 的方法观 察到某些肿
结 构 基 质 。ＭＭＰ２是 一 种 细 胞 外 蛋 白 水 解 酶 ， 要 由 肿 瘤 细 － 主
［ 考文献 ］ 参
［ ］Ｆ ｌｍ ｎＪ ｕ ｒａｇｏｅ ｅｉ ｔｅａ ｅｔ ｍｐｉ ｔ ｎ Ｊ ． ｎｌ １ ｏ ａ ．Ｔ ｍｏ ｎｉｇｎｓ ｒｐｕｉ ｉ ｌ ａｉ ｓ ］ Ｎ Ｅ ｇ Ｊ ｋ ｓｈ ｃ ｃ ｏ ｌ
瘤 组 织 内 Ｖ 形 成 的 环 状 或 网络 状 结 构 图 像 ， 以 为肿 瘤 的诊 Ｍ 可

!!作者单位"Q "###Q 杭州#浙江大学医学院附属第一医院呼吸内科肿瘤血管生成的实验研究方法刘!容!周建英!!!摘!要"!血管生成在肿瘤的生长与转移中具有重要的意义(各种促血管生成因子与血管生成抑制因子之间的平衡与失衡是肿瘤血管生成重要的调控因素(血管生成的实验研究模型各自有其优缺点#根据研究内容来选择合适的研究方法非常重要(离体模型简便易行#容易定量研究#可用于初步研究#但需在体模型的研究来进一步证实(在体模型操作繁琐%耗时#但更接近体内复杂的血管生成过程(!关键词"!血管生成’肿瘤’实验研究方法R .3+’&$A #+A ($()#)&))&1)!#)$?3’4#.+S $P -&’1@-’49:8;&!<=8’<3>?86;-!&<3!@A8B -C -’8#<78D -!6<*>>-2-&<8B +36;-<&2#.78E -&’4$’-F 8!6-<@A 8B -C &2O C 7332#+&’4K 73,Q "###Q #G 7-’&!4,)-’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’2)"!(9>87>;9;<8<’6D I 7C ’(<<.G <!!血管生成$.9>87>;9;<8<&在肿瘤细胞的生长与转移中具有重要意义(缺乏血管生成表型的肿瘤#无法获得足够的氧和营养物质而往往处于/休眠0状态#获得血管生成的表型对于肿瘤细胞的增生和转移具决定性意义(对肿瘤血管生成的研究#不仅可用于预测肿瘤的预后#而且抑制肿瘤血管生成作为防治实体瘤生长与转移的靶点也有很大的前景(因此#肿瘤血管生成的研究在肿瘤治疗中意义重大(;!肿瘤血管生成调控的概述N ?.F E .89等)"*提出#在肿瘤组织从无血管期到血管期的生长过程中#肿瘤细胞分泌多种血管生成因子$.9>87>;98@J .@=7C <&#弥散于肿瘤周围组织中#附近的血管内皮细胞对这类化学趋化性刺激发生反应#包括血管基底膜降解%内皮细胞游走和增殖(此后的研究陆续发现肿瘤细胞还可诱导内皮细胞表达一些血管生成因子受体#以促进肿瘤血管生成(组织中存在的内源性血管生成抑制因子$.9>87>;9;<8<89?8A 8=7C <&#则以不同的机制作用于血管内皮细胞#对肿瘤血管生成起负调控作用(上述活性因子或来自于肿瘤细胞或来源于某种宿主细胞#故肿瘤血管生成受多种细胞的调控和影响(激活这些细胞并促使其释放促进血管生成的机制尚不十分明确#在已知的发生机制中认为缺氧是最主要的原因#肿瘤细胞的快速增殖导致其缺氧#缺氧可诱导多种促血管内皮细胞生长因子的分泌已被多项研究证实)!*(癌基因的激活%或抑癌基因的失活#也可通过促进肿瘤血管生成来影响肿瘤的演进(此外#!###年T 7>;E <=;89K 和]89f E ;C]\领导的研究组采用基因表达的系列分析$<;C 8.E.9.E G<8<7J >;9;;M F C ;<<879#’(V _&方法#比较研究了结直肠癌和正常肠黏膜血管内皮细胞的基因表达差异(结果发现了R $种差异表达的转录子#提示肿瘤血管生成和生理状态下的血管生成有明显不同)Q *(这一发现引起了血管生成和肿瘤治疗研究者的重视#但这种现象在肿瘤中是否普遍存在#不同组织学类型的肿瘤之间是否有差异#尚待探索(=!肿瘤血管生成的相关因子目前已分离和纯化了至少!#多种血管生成因子和相关因子#其中研究较为深入的是血管内皮生长因子$T _V Z &家族与碱性成纤维细胞生长因子$A Z V Z &(T _V Z 是特异性作用于内皮细胞的生长因子#在血管生成中作用可能是最为重要的(T _V Z 具有血管生长因子所应具备的全部特性#在体内外试验中均有血管生成作用)-*(T _V Z 的表达调节机制尚不完全明确#目前研究表明缺氧可引起T_V Z表达显著增加(T_V Z与肿瘤生长相关的直接证据是#多种人类肿瘤细胞$癌%肉瘤%神经胶质瘤&在鼠的移植瘤研究中#抗人T_V Z单克隆抗体几乎完全抑制了与肿瘤相关的血管生成)-*(其它动物实验也发现许多其它肿瘤的血管生成和肿瘤细胞生长被抗T_V Z的多种治疗方法所抑制#包括小分子T_V Z 受体信号转导抑制剂#反义T_V Z寡核苷酸#T_V Z 受体抗体%抗T_V Z<8+U(等)-#4#5*(几项研究发现抗T_V Z治疗结合化疗或放疗能大大提高抗肿瘤作用)-*(已经用于临床试验的抗T_V Z制剂有"人源化T_V Z单抗$C?DP.AT_V Z&%抗T_V Z+%!抗体%小分子T_V Z+%!信号转导抑制剂%可溶性T_V Z受体等(肿瘤血管生成还可通过非T_V Z依赖的途径#通过促进其它因子表达如A Z V Z(A Z V Z在体内分布很广#对内皮细胞%血管平滑肌细胞%成纤维细胞等有很强的促有丝分裂作用#在体内外均有促血管生成作用(现已证实A Z V Z能通过以下机制刺激肿瘤血管生成"促进血管内皮细胞的增殖和迁移#促进具有降解基底膜作用的蛋白激酶释放#促进内皮细胞形成管状结构’除此以外还能促进肿瘤细胞增殖和肿瘤转移)R*(但目前对A Z V Z的研究还有很多不明之处(>!肿瘤血管生成的抑制因子多项基础和临床研究发现去除原发肿瘤后#导致潜伏体内的微转移灶迅速生长#是由于原发肿瘤能分泌某些可溶性活性因子抑制了远处微转移灶的生长(血管抑素$.9>87<=.=89&是其中发现最早的因子#目前为止至少发现了!R种不同的蛋白质和小分子物质#因其在体内具有抑制肿瘤血管生成作用#统称为内源性血管生长抑制因子$;9H7>;97D< 89?8A8=7C<7J.9>87>;9;<8<&),#$*(研究发现血管生长抑制因子在体内的生物活性半衰期往往显著长于多种血管生成因子#使得血循环中血管生成抑制作用高于血管生成作用#远处微转移灶的血管生成被抑制(当原发肿瘤去除后#循环中抑制因子水平大大降低#微转移灶中血管生成因子与抑制因子的平衡被打破#使其获得血管生成表型而迅速增殖),*(在体内无血管组织中#血管生成抑制因子的水平很高而缺乏血管生成因子#多数正常组织中也有血管生成抑制因子存在(已知的内源性血管生成抑制因子几乎有半数是酶解产物#这些抑制因子最显著的特征之一就是它们都是较大的蛋白质分子的一个肽段(这些发现说明酶解过程可能是体内产生天然血管生成抑制因子所必不可少的一个阶段#这些从大的蛋白质分子酶解得来的抑制因子是目前研究的热门(血管生成抑制因子按其是否来源于细胞外基质可分为两大类"基质来源的内源性血管生成抑制因子如"血管内皮抑素$;9H7<=.=89&%.C C;<=;9%癌抑素$@.9<=.=89&%肿瘤抑素$=D I<=.=89&等’非基质来源的内源性血管生成抑制因子如"血管抑素$.9>87<=.=89&%组织金属蛋白酶抑制剂$6*P0&%干扰素$89=;C J;C79<&%白介素$89=;C E;D X89<&%血小板因子-$0Z-&%血小板反应素%E$=?C7I A7<F79H89%"# 6’0%"&等(不同的血管生成抑制因子可分别通过以下几条途径发挥作用"抑制血管生成因子或其受体#抑制细胞外基质的降解#抑制缺氧信号的转导#以肿瘤血管为靶标(?!肿瘤血管生成的实验研究方法为了研究肿瘤血管生成及其调控机制#分析血管生成因子与抑制因子的活性和作用#验证针对血管生成进行的肿瘤治疗措施等#需要建立血管生成的研究模型(目前研究血管生成的常用方法包括两大类#离体模型和在体模型(离体模型简便易行#便于观察#可用于初步研究#但不能反映在体环境#故其结果需经过在体模型的验证(?<;!血管生成的离体模型!可分为细胞水平与组织水平(?<;<;!细胞水平模型!内皮细胞在经过长期培养后会自行排列成/微血管样结构$@.F8E E.C G%E8X; <=C D@=D C;&0#可通过相位差显微镜以及穿透式电子显微镜的观察(目前常用于肿瘤血管生成的有三维胶分析法$=?C;;%H8I;9<879.E>;EI7H;E&与细胞共同培养模型$@7%@D E=D C;&#就是利用此现象来观察和评估药物及生长因子对于血管生成的影响(三维胶分析法是在原有的二维培养系统中加入细胞外基质$J8A C89>;E或I.=C8>;E或@7E E.>;9>;E&#使得原来在二维培养系统中黏附在培养皿的内皮细胞生长在基质中#形成三维培养系统#最大的优点是便于进行组织学切片与观察微血管的中空结构)"#*(细胞共同培养是将肿瘤细胞与内皮细胞共同培养于含有细胞外基质的培养系统#特点是共同培养时肿瘤细胞与内皮细胞发生互相作用#更接近在体模型)"##""*(但是两者共有的缺点是将内皮细胞的长期置于细胞外基质环境中培养#往往已被激活#离体培养人为因素影响较多#缺乏肿瘤微环境(其它模型还有" K7G H;9小室分析法$A7G A;9@?.I A;C.<<.G<&与B7D9H?;.E89>模型用于研究内皮细胞迁移能力# P.=C8M分析法$I.=C8M.<<.G<&用于研究内皮细胞形成管状结构的功能(?<;<=!组织水平模型!K C7B9等)"!*于"$$5年建立并完善了人胎盘血管段培养模型#不需加入外源性血管生成因子#其优点是具备类似在体模型的特征#能动态%立体观察微血管生成情况#但不能反映肿瘤微环境(?<;<>!其它模型!如器官培养(?<=!血管生成的在体模型!由于肿瘤血管生成的过程#除内皮细胞#尚受到多种细胞$以及细胞外基质的影响#甚至微循环中的多种体液因子都会对其产生作用#因此在体模型的研究非常必要(目前尚无最理想的在体模型#不同的模型有各自的优缺点#而且在体模型很难进行定量研究#有学者推荐采用两种不同的在体模型进行研究互相弥补不足之处)"Q#"-*(常用于肿瘤血管生成的在体模型有"角膜微囊分析法$@7C9;.EI8@C7F7@X;=.<<.G<&%鸡胚绒毛尿囊膜分析法$@?8@X@?7C87%.E E.9=78@I;I A C.9; .<<.G<#N(P&%肿瘤模型$=D I7CI7H;E<&等(?<=<;!角膜血管生成分析法!是将肿瘤细胞或包埋有干预因子的释放载体#置于无血管的动物角膜微囊中#然后观察血管生长情况(移植物生成新的血管#使肿瘤膨胀性生长’如果该血管被阻断#则肿瘤生长立即受阻(因其模拟肿瘤生长环境#能直接动态观察血管生成#一度被认为是血管生成在体研究的/金标准0)""#"Q*(但是仍不能克服炎症反应所致的假阳性#定量困难#操作有一定难度#费用昂贵#较适合初步筛选及定性的研究(?<=<=!鸡胚绒毛尿囊膜分析法!受精后的鸡蛋除去部分外壳以及壳膜#将含有药物或细胞的多聚化合物载体置于绒毛尿囊膜上#继续孵化一定时间后#利用立体显微镜或组织切片等手段观察对血管生成的影响(可用于评价接种物刺激绒毛尿囊膜血管增生的血管生成作用#分析研究促血管生成因子%抑制因子的活性和功能#还可以对接种物#如肿瘤组织%自身的血管生成进行研究#用于分析不同组织的血管生成活性和作用(N(P模型是研究血管生成较好的实验模型#其方法简便#成本低#并可用于进行大样本研究(缺点是实验前已有血管网存在#因此对环境中氧含量变化敏感#干扰实验结果’操作过程容易发生细胞损伤或激活炎症反应#而造成假阳性或假阴性’进行定量分析比较困难)$#"#*(?<=<>!肿瘤模型!将肿瘤细胞移植于免疫缺陷动物的皮下或原位组织内#形成移植瘤后进行药物干预#观察肿瘤生长的大小来验证抗肿瘤效果(由于肿瘤生长需依赖新生血管网#故该模型可用于抗血管生成的研究(对血供丰富或血供贫乏的肿瘤均适用该模型#化学诱导肿瘤也能适用)"Q*(该方法可通过肿瘤组织切片进行以下分析")_染色观察形态学与坏死的情况#P’K染色检测肌纤蛋白$J8A C89&来分析血栓形成#抗N^Q"+N^Q-免疫组化法评价微血管密度#0N U(法观察增殖情况#6[U_/法观察凋亡情况)"Q*(因此#该模型比鸡胚绒毛尿囊膜分析法有优势(不足之处是无法在活体上动态观察血管生成情况’接种于皮下的移植瘤很少发生转移#其实验意义不同于原位接种#而原位移植瘤因部位不同#实验难度差异较大(?<=<?!.9>87I7D<;模型!这是近年来建立的以绿色荧光蛋白$V Z0&基因作为活细胞分子标记#特点是无创性#并可以在活体动物进行肿瘤血管生成的动态观察(缺点是周围组织对V Z0荧光有淬灭作用#从而降低实验的敏感性’环境缺氧会降低V Z0的表达#而影响实验结果)"Q*(目前已经建立血管生成研究的在体模型还有"基质凝胶分析法$I.=C8>;E F E D>.<<.G<&%开窗分析法$@?.I A;C.<<.G<&%鼠背皮下气囊模型$H7C<.E.8C% <.@I7H;E&%仓鼠颊囊模型$?.I<=;C@?;;X F7D@? I7H;E&%眼前房移植瘤模型$.9=;C87C;G;@?.I A;C I7H;E&%兔耳室模型$C.A A8=%;.C@?.I A;CI7H;E&%盘状血管生成分析法$H8<@.9>87>;9;<8<.<<.G<&%鼠耳廓皮下移植瘤模型%基质植入模型$I.=C8.E8I F E.9= I7H;E&#中空纤维分析法$?7E E7BJ8A C;.<<.G<&是近年来新建立的)$*(其它较少应用模型有"海马鱼模型$f;A C.J8<?&%藻酸盐微珠释放分析法$.E>89.=; I8@C7A;.HC;E;.<;.<<.G<&%鸡胚卵黄囊模型$@?8@X ;I A C G798@G7E X<.@&%大网膜+肠系膜模型$7I;9=D I+I;<;9=;C8;<&%鼠腹膜模型$F;C8=79;.E I;I A C.9;&等)""%"Q*(C!结语与展望随着对肿瘤血管生成研究的深入#逐步认识到肿瘤血管生成的机制尚有许多未知领域(多种血管生成相关因子与血管生成抑制因子可相互作用#形成复杂的/血管生成网络$.9>87>;9=8@@.<@.H;&0对血管生成进行调控)"-*(因此#从理论上推测#仅仅抑制某种血管生成因子或添加某种血管生成抑制因子#无法有效地抑制肿瘤血管生成(然而#许多动物实验和一些临床研究的结果却显示#只对血管生成网络中的某一步进行有效干预#就能产生一定的抗血管生成效应(今后的研究如能彻底揭开肿瘤血管生成的机制#或许才能真正找到一种能完全抑制肿瘤血管以及肿瘤生长的治疗方法(参!考!文!献"!(9H;C<79(+#N?.F E.89P(3N79=89D7D<.9H H8<@C;=;I.=?;I.=8@.EI7H;E<7J=D I7C%89H D@;H.9>87>;9;<8<3K D E EP.=?K87E#"$$,#5#",4R%,$$3!!Z7E X I.9S3+7E;7J.9>87>;9<8<89=D I7C>C7B=?.9HI;=.<=.<8<3’;I89&9@7E#!##!#!$""4%",3Q!N C78MK#+.>7N#T;E@D E;<@DT#;=.E3V;9;<;M F C;<<;H89?D I.9 =D I7C;9H7=?;E8D I3’@8;9@;#!####!,$"""$R%!#!3-!Z;C C.C.U#V;C A;C)0#E;N7D=;C S36?;A87E7>G7JT_V Z.9H8=< C;@;F=7C<3U.=P;H#!##Q#$"55$%5R534!Z8E E;D C’#N7D C=89(#(8=%’8%(E8’#;=.E3’8+U(%I;H8.=;H 89?8A8=8797J:.<@D E.C;9H7=?;E8.E>C7B=?J.@=7C<;:;C;E G E8I8=< =D I7C C;<8<=.9@;=7.9=8.9>87>;98@=?C7I A7<F79H89%".9H<E7B< =D I7C:.<@D E.C8f.=879.9H>C7B=?3N.9@;C+;<#!##Q#5Q"Q$"$% Q$!!35!6.X;8‘#].H7I.=<D]#‘D f.B.‘#;=.E3(<I.E E89=;C J;C89> +U(=.C>;=89>:.<@D E.=7C;9H7=?;E8.E>C7B=?J.@=7C.<@.9@;C =?;C.F;D=8@<3N.9@;C+;<#!##-#5-"Q Q54%Q Q R#3R!U D>;9=P(#*7f f7+T3Z8A C7A E.<=>C7B=?J.@=7C%!3*9=S K87@?;I N;E E K87E#!####Q!"""4%"!#3,!&h+;8E E G P’#)7E I>C;9/#’?89>‘#;=.E3(9>87<=.=89".97:;E .9>87>;9;<8<89?8A8=7C=?.=I;H8.=;<=?;<D F F C;<<8797J I;=.<=.<;<A G./;B8<E D9>@.C@897I.3N;E E#"$$-#R$"Q"4%Q!,3 $!08.U#/8.9>b#+.>?D]3_9H7>;97D<89?8A8=7C<7J.9>87>;9<8<3 N.9@;C+;<#!##4#54"Q$5R%Q$R$3"#!’=.=79N(#’=C8A A E89>’P#6.f f G I.9’#;=.E3N D C C;9=I;=?7H< J7C.<<.G89>.9>87>;9;<8<89:8=C7.9H89:8:73*9=S_M F0.=?# !##-#,4"!Q Q%!-,""!刘剑平#侯梅3肿瘤微血管生成模型的应用现状3中国肿瘤# !##!#"""-4%-R3"!!K C7B9]S#P.G9;<’Z#K;f7<(#;=.E3(97:;E89:8=C7.<<.G J7C ?D I.9.9>87>;9;<8<3/.A*9:;<=#"$$5#R4"4Q$%4443"Q!).<.9S#’?9G H;C’^#K8A A G P#;=.E3e D.9=8=.=8:;.9>87>;9;<8< .<<.G<89:8:7%.C;:8;B3(9>87>;9;<8<#!##-#R""%"53"-!6798986#+7<<8Z#N E.D H8703P7E;@D E.CA.<8<7J.9>87>;9;<8< .9H@.9@;C3&9@7>;9;#!##Q#!!"54-$%54453$收稿日期"!##5%#4%"5*********************************************&!简讯!第二届北京协和呼吸病学峰会会议通知为了进一步提高我国呼吸病学的基础研究和临床诊治水平#促进国际交流#推动呼吸病学专科的发展#由中国医学科学院中国协和医科大学%北京协和医院呼吸内科%北京呼吸疾病研究所%北京朝阳医院%中国协和医科大学出版社期刊中心共同主办的/第二届北京协和呼吸病学峰会0将于!##R年-月!R日#Q#日在北京华润饭店召开(/第二届北京协和呼吸病学峰会0大会名誉主席为罗慰慈教授%钟南山教授#大会主席由著名呼吸病学专家朱元珏教授%王辰教授和蔡柏蔷教授担任#参加此次会议的国内外著名呼吸病学专家有数十位之多#充分保证了会议的高学术性(本次会议专家所做的报告以临床应用进展为主#密切结合呼吸内科临床(会议交流的主要内容为"慢性阻塞性肺疾病的新指南%支气管哮喘诊治进展%肺癌的现代诊断和治疗%肺血栓栓塞的诊治%呼吸危重症临床监护%机械通气管理及未来的发展趋势#肺部感染治疗的临床最新进展#内窥镜检查的最新技术及其并发症防治等#大会还特别在会议中安排了/协和疑难病例讨论分析0等特色讲座#使参会代表与演讲专家及时沟通#更直接的学习他们的新技术%新方法%新思维(我们真诚欢迎各位同仁莅临本次盛会#共同促进和加强各地医师间的学术交流#推动我国呼吸病学事业的发展(参会医师可同时获得国家医学继续教育’类学分和+类学分(会议将征集优秀论文#经专家评审后将在,国际内科双语杂志-正式发表(论文截至日期为!##R年Q月"日(会议联系地址"$"####4&北京东城区东单北大街5$号协和明日大厦,"#室;%I.8E"L8<?8B;8?.73 ?7=I.8E3@7I大会组委会联系人"纪时伟豪!电话"#"#%54"!Q$!,%5#,手机""Q Q55,Q Q R!Q传真"#"#%54"!Q$!4。

I肩际生物丨矢丨-程杂志 202 丨<卜2 J j 第 44 卷第1期Ini J Biom cd K n}i. h'chm ury 2021. \01.44. Nu.l•55 ••综述•自噬与肿瘤血管生成的研究进展王兴芬梁锐张向莲许丽萍天津医科大学第二医院病理科300211通信作者：王兴芬，Email:wangxf_1997@【摘要】自噬(autophagy )是一种特殊的细胞过程，可通过将自身受损的细胞器和大分子物质转运至溶酶体并降解，参与调控细胞存活、生长、分化和内环境稳态的维持，在生命过程的各个方面均起着非常重要的作用研究结果发现，自噬在肿瘤发生、发展及转移过程中起着重要作用，其与血管内皮生长W子协同作用促进肿瘤的血管生成和细胞修复，且可能在肿瘤对抗血管药物治疗耐药机制的产生中起到重要作川通过以肖噬为靶点的靶向治疗,可能是未来抗肿瘤分子靶向治疗的新方向，旨在提供多靶点协同治疗使患者受益：【关键词】自噬；肿瘤；血管生成；抗血管生成治疗'DOI: 10.3760/ 121382-20200810-00110Research progress in autophagy and tumor angiogenesis Wang Xingfen. Liang Rui, Zhang Xianglian. XuLip i ngDepartment oj Patholog}\ the Second Hospital of Tianjin Medical University, Tianjin 30021U ChinaCorresponding author: WangXingfen,Email:*******************【Abstract】Autophagy is a special cellular pmcess, which (-an participate in regulating cell s u i*differentiation and homeostasis maintenance hy transporting damaged organelles and macromoleculai' substances tolysosomes for degradation. Autophagy plays a ven important role in all aspects of life process. Kesearch results showthat autophagy plays an important role in tumor occurrence, development and metastasis. The synergistic effect ofautophagy and vascular endothelial growth factor promotes tumor angiogenesis and cell repair, and may plav animportant role in the development of tumor resistance to anti-vascular drug therajiy. Targeted therapy with autophagyas the target may be a new direction for anti-tumor molecular targeted therapy in the future, aiming to provide multi-target collaborative therapy to benefit patients.【Keywords】Autophagy; Tumor; Angiogenesis; Antiangiogenesis therapyDOI: 10.3760/ 121382-20200810-00110〇引言自嗤(autopliagy)是一种特殊的细胞过程，通过 将受损的细胞器及生物大分子以特殊的转运方式 输送到溶酶体上并进行消化降解：自噬是一种自我 消化过程，广泛存在于真核细胞生物中，其特征为 胞内出现一定数量的自噬体结构自噬是一种细胞 应激防御过程,参与维持细胞的自稳态并在一定程 度上促进细胞的存活；同吋，自噬在机体生长发育 过程中同样具有重要作用，并能影响肿瘤的发生与 转移:研究结果证实，A噬对肿瘤的抗失巢凋亡具 有显著的促进作用，可引发机体的免疫应答，降低淋 巴细胞免疫活性，并促进血管内皮生长因子介导的 肿瘤血管生成。

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４ ９
体 外血 管 生成 三 维 培 养模 型 的构 建
林 菊丽 ，王 彪 ，黄祖根 ，吴正 思 ，鲁 开化 ，庄福 连
是 较 为 成 熟 的体 外 血 管生 成 的 三 维 培 养 方 法 ， 有 操 作 简便 、 维 血 管 样 结 构 形 成 数 量 多 、 具 三 网络 结 构 复杂 等 特点 。
关 键 词 ： 内 皮 ， 管 ；内皮 细 胞 ；细 胞 ， 养 的 ；细胞 培养 技 术 ；脐 静 脉 ；新生 血 管 化 ， 理 性 血 培 病
际应用 价值［ ， 为 今后 针 对 肿 瘤 性 血 管 生 成 的 肿 ５并 ］ 瘤治疗 方法 提供实 验依 据 。
１ 材 料 与 方 法
文 献 Ｅ－ 法 。在 无 菌 条 件 下 ， 新 鲜 的胎 儿 脐 带 ６１ 方 将
脐 静脉一 端 置人 已磨 平 的 １ ６号 针 头 ， 血 钳 固定 ， 止 注 入 Ｐ Ｓ缓 冲 液 反 复 冲洗 至元 血 迹 。止血 钳 夹 住 Ｂ 静 脉另 一端 ， ２ 以 ＯｍＬ的注射 器 向脐 静 脉 内徐 徐注 人 ０ １ 胶 原 酶 溶 液 ， 血 管 充 盈 。立 即将 脐 带 放 ． 至 人 ３ Ｃ 养 箱 内 ， ５ ２ ｎ后 取 出。松 开 止 血 ７。培 １ ～ ５ ｍｉ
ｉ０ ， ０ ０ 苏州 苏净 集 团 ） 体 积 分 数 为 ０ ０ ； ． ５的 Ｃ 。恒 Ｏ 温 培养箱 （ 国 ＲＥ Ｏ 公 司 ） 倒 置 显 微 镜 （ ｙ 美 ＶＣ ； Ｏｌｍ—
凝 胶 经 Ｈ— Ｅ染 色可 见 细 胞 索 及 原 始 血 管 腔 形 成 。 结论

１ ２ 制作 Ｃ ． ＮＶ模 型 的常用激 光
现对 近年来 的 Ｃ Ｖ动物模 型 的制作 进展 综述如 下 。 Ｎ
１ 激 光 诱 导 Ｃ Ｖ 模 型 Ｎ
１ １ 激光诱 导 Ｃ ． ＮＶ模 型 的机 制
血管生 成 是 正 常 组 织 生 长 和 修 复 的 一 种 生 理 过 程， 整个过 程受 到维 持 动态 平 衡 状 态 的血 管 生 成 因子 和抑 制 因子 的严 密 调控 。 当平衡 遭 到破 坏 ， 生 血管 新 形成 。人类 Ｃ Ｖ疾 病 的确切 发病机 制 尚不 明确 ， 是 Ｎ 但 已确 定 与 一 些 血 管 生 成 因 子 ， 血 管 内皮 生 长 因子 如 （ａｃｌｒ ｎ ｏ ｅｉ ｒｗｈ ｆｃ ｒ Ｅ Ｆ 、 性 成 ｖｓｕａ ｄ ｔ ｌ ｌｇｏ ｔ ａｔ ，Ｖ Ｇ ） 碱 ｅ ｈ ａ ｏ 纤 维 细 胞 生 长 因 子 （ ａｉ ｆ ｒｂａｔ ｇ ｗｈ ｆｃ ｒ ｂ ｓ ｂｏ ｌｓ ｒ ｔ ａ ｔ ， ｃｉ ｏ ｏ
ｆｃ ｒ Ｐ Ｇ ） 有密 切联 系 。脉络膜 毛 细血管 内皮 细 ａｔ ， Ｄ Ｆ 等 ｏ 胞 、 细 胞 、 纤 维 细 胞 等 可 以 释 放 这 些 细 胞 因 周 成
外基质 ， Ｎ 的产 生均来 源 于脉 络膜血 管 。 ＣＶ
与人类 Ｃ Ｖ疾病 的发生机 制不 同的是 ， Ｎ 激光 是通 过对 视 网膜产生 机 械损 伤 、 效 应 和光 化 学 等 生 物效 热
Ｃ Ｖ是 许多 脉络 膜视 网膜 疾病 ， Ｎ 如年 龄 相关 性 黄 斑变
性 渗 出期 、 高度 近视 黄 斑变 性 等 发 生 发展 中 的重 要病
ｂＧ ） 、 Ｆ Ｆ 血小 板衍 生生 长 因子 （ ｌ ｅｅ ｄ ｒ ｅ ｒｗｈ ｐａ ｌ ｅｉ ｄｇｏ ｔ ｔ ｔ ｖ

一、实验目的本研究旨在探讨血管生成诱导剂在促进血管新生方面的作用及其分子机制。

通过体外培养血管内皮细胞和体内动物模型，观察血管生成诱导剂对血管新生的影响，并进一步分析其作用机制。

二、实验材料与方法1. 实验材料- 人脐静脉内皮细胞（HUVECs）- 血管生成诱导剂：VEGF、bFGF、FGF-2等- 体外培养试剂：DMEM培养基、胎牛血清、抗生素等- 体内动物模型：大鼠- 实验仪器：倒置显微镜、细胞培养箱、离心机、分光光度计等2. 实验方法1. 体外培养血管内皮细胞- 将HUVECs接种于6孔板，培养于含10%胎牛血清的DMEM培养基中，置于37℃、5%CO2培养箱中培养。

- 当细胞生长至80%融合时，用含不同浓度血管生成诱导剂的培养基替换原培养基，继续培养24小时。

2. 观察血管生成- 将培养好的细胞用台盼蓝染色，在倒置显微镜下观察血管生成情况。

- 使用图像分析软件对血管生成进行定量分析。

3. 体内动物模型- 将大鼠随机分为实验组和对照组，实验组给予血管生成诱导剂，对照组给予生理盐水。

- 观察动物的一般情况，记录体重变化。

- 在实验结束时，取动物心脏，用TTC染色法检测心肌梗死面积。

4. 分子机制分析- 采用RT-PCR检测心肌HIF-1、VEGF、eNOS mRNA的表达。

- 采用Western Blot检测心肌eNOS、iNOS、AKT、p-AKT蛋白表达。

- 采用分光光度法检测血清NO水平。

三、实验结果1. 体外实验- 血管生成诱导剂能显著促进HUVECs的血管生成。

- 不同浓度的血管生成诱导剂对血管生成的影响存在差异，其中VEGF和bFGF 的效果最为显著。

2. 体内实验- 与对照组相比，实验组大鼠的心肌梗死面积明显减小。

- 实验组大鼠的心肌HIF-1、VEGF、eNOS mRNA表达水平显著升高。

- 实验组大鼠的心肌eNOS、AKT、p-AKT蛋白表达水平显著升高。

- 实验组大鼠的血清NO水平显著升高。

血管拟态的研究方法
血管拟态是指在生物体内形成的新血管，通常是由某些生物分子或组织因子的诱导作用而产生。

这些新生的血管可能会在许多疾病的发病机制中发挥重要作用，如肿瘤的生长与转移、糖尿病性视网膜病变、心肌梗死后的再灌注损伤等。

要研究血管拟态，需要一些特定的实验方法。

常见的方法包括： 1. 培养内皮细胞：通过收集动物或人体内皮细胞并在培养皿中培养，可以观察到内皮细胞在分化和增殖时形成新的血管结构。

2. 动物模型：使用小鼠、大鼠等动物建立血管拟态模型，通过注射特定生物分子或组织因子来诱导血管生成，然后观察血管形态、密度等变化。

3. 细胞迁移实验：在体外使用细胞迁移实验，通过观察细胞在特定生物分子或组织因子的作用下的迁移能力，来研究血管拟态的分子机制。

4. 组织切片染色：通过对组织切片进行特定的染色方法，如Immunohistochemistry，可以在切片上检测到特定分子的表达情况，以验证其参与了血管拟态的过程。

以上方法都是研究血管拟态的重要手段，可以为疾病治疗和预防提供新的思路和方法。

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