BD FACSAria 高速流式细胞分选仪 - 微生物技术国家重点实验室

bd facsduet技术参数BD FACSDuet是一款流式细胞分析仪，其技术参数如下：1.流速：BD FACSDuet流速可以达到每秒2000个事件，使得样本可以快速地通过仪器进行分析。

2.激光器：BD FACSDuet配备了多种激光器，可以使用不同的激光波长进行细胞分析。

常见的波长包括488nm、561nm、405nm和640nm 等。

3.探测器：BD FACSDuet具有多通道的探测器系统，可以同时检测多种细胞标记物。

常用的探测器包括前向散射、侧向散射和多个荧光通道等。

4.参数：BD FACSDuet可以同时获得多个细胞特征参数，包括细胞大小、形态复杂度、表面标记物的表达水平、细胞数量统计等。

5.支持的样本类型：BD FACSDuet适用于多种类型的细胞样本，包括悬浮细胞、固定细胞、细胞培养液等。

6.自动补偿：BD FACSDuet具有自动补偿功能，能够对荧光信号之间的重叠进行补偿，减少误差。

7.数据分析软件：BD FACSDuet配备了专业的数据分析软件，可以对获得的细胞数据进行进一步的分析和可视化。

8.样本处理：BD FACSDuet除了进行流式细胞分析外，还支持样本的排序、提取和储存，满足不同实验需求。

9.操作界面：BD FACSDuet拥有友好的操作界面，易于操作和学习，即使对于新手也能够快速上手使用。

10.应用领域：BD FACSDuet广泛应用于生命科学研究、医学诊断、药物研发等领域，可以帮助科研人员更好地理解细胞的结构和功能。

总结起来，BD FACSDuet是一款功能强大的流式细胞分析仪，具有快速流速、多种激光器、多通道探测器、多个细胞特征参数等优点。

它适用于不同类型的细胞样本，具有自动补偿功能和专业的数据分析软件。

BD FACSDuet操作简便，广泛应用于生命科学研究和医学诊断等领域。

作为流式技术的先行者，碧迪医疗提供集设备、试剂、软件和服务于一体的流式细胞领域整体解决方案，为生物医学前沿研究、药物开发、临床诊疗提供强大支持，满足客户需求。

自1994年进入中国市场以来，碧迪医疗持续培训了众多专业流式细胞术实验操作人员，帮助提升科研工作者和临床医生的研发创新能力，助力中国生物科技和医疗事业的可持续发展。

其中，碧迪医疗临床流式抗体及质控产品提供多色通道，注册合规，保障检测质量，更贴近临床检测需求。

提供超过161种III类及I类有证试剂，满足各类流式临床应用需求。

专业的流式抗体提供者，超过20,000个货号，50种荧光素可供选择，助力科研工作者更好的进行探索与发现。

先进技术来源于2000年诺贝尔化学奖，更亮、更稳定，提供更多选择。

BD Sirigen 流式抗体分析型流式细胞仪分析型流式细胞仪临床试剂分选型流式细胞仪碧迪医疗科研试剂生物信息数据分析软件单细胞平台科研平台临床平台BD FACSymphony™ A5 SE BD FACSymphony™ S6BD FACSDiscover™ S8BD FACSMelody™BD Rhapsody™单细胞分析系统BD FACSAria™ Fusion BD FACSAria™ III BD FACSymphony™BD FACSLyric™BD FACSPresto™ System 自动加样系统BD FACS SPA III™BD FACSDuet™BD FACSPresto™ CartridgeBD FACSCanto™ II BD FACSCanto™BD LSR Fortessa™ X-20BD LSR Fortessa™BD FACSymphony™ A1BD FACSCelesta™BD Accuri™ C6 Plus 流式数据分析软件FlowJo™单细胞数据分析软件SeqGeq™禁忌内容或者注意事项详见说明书。

BD Aria III高端分选型流式细胞仪碧迪医疗器械（上海）有限公司生物科学部第一部分高端分选型流式细胞仪产品及市场概述流式细胞仪（Flow Cytometer ,FCM）一种集激光技术、电子物理技术、光电测量技术、电子计算机以及细胞荧光化学技术、单克隆抗体技术为一体的新型高科技仪器。

概括来说，流式细胞术就是对于处在快速直线流动状态中的细胞或生物颗粒进行多参数、快速的定量分析和分选的技术。

随着各项相关技术的迅速发展，流式细胞技术已经成为日益完善的细胞分析和分选的重要工具。

我们可以看到，目前全球商业化流式细胞仪产品的研究开发主要遵循两个方向：一类以分析功能为主的，应用于临床检测及常规的科研系统；另一类是具备高速分选功能的高端科研型，研发趋势是越来越多的荧光检测参数，同时越来越快的分选速度，以适应越来越高的科学研究的需求。

在分选型的高端产品来说，BD公司、Dako-Cytomation与Beckman-Coulter公司都相继推出了几代产品。

1999年BD公司在原FACSVantage的基础上，推出了FACSVantage SE（分选升级型，将细胞分选功能推到一个新的高度，25,000个细胞/秒，同时增配Accudrop等选件，使得分选调试变得简单），2000年又在其基础上推出Diva系统，这是一个全数字化的系统，分析速度大大提高，同时做到四路分选。

同期的Beckman-Coulter公司的同类产品是Altra，该产品雷同于BD的FACSVantage SE，但在性能参数方面比FACSVantage SE都要差，竞争力相对较弱，于2003年停产。

同期，在高端分选型流式细胞仪市场上Dako-Cytomation公司于1996年推出了Moflo，这款产品可进行高速分析和分选，但因为操作复杂，性能不稳定而未得到广泛使用，2007年Beckman-Coulter公司在自己无法研发出新一代的流式细胞分选仪的情况下，从DAKO公司收购了Moflo，并更名为Moflo XDP，但并未改变Moflo的硬件结构。

关于FACSAria 流式细胞仪的使用与保养知识FACSAria是B-D公司2003年最新推出的世界上第一台台式高速多荧光检测和分选的流式细胞仪，结合目前用户的使用情况，在这里提供有关FACSAria使用保养和维护的小知识，以确保仪器能够良好地运行。

一．仪器的运行环境流式细胞仪属于一种高精密度的仪器，环境是决定仪器运行状态好坏的重要因素之一。

有的用户将仪器放置在一个很小的空间内，仪器在运行过程中将产生热量，由于空间过小，将会影响散热，造成仪器内部过热。

轻者，会影响电子元件和集成电子线路的工作环境，使它们偏离工作区；严重者，部分电子元件本身工作中产生的热量无法排出，最后使该元件烧坏。

有些用户给出的空间足够大，但是防尘做的不好。

桌子和仪器上到处可见灰尘。

流式细胞仪属于精密的光学仪器，如果灰尘附着在它的光学部件上，对仪器的检测灵敏度和分辨率会造成很大的影响。

因此，仪器放置的位置应离窗户稍远些，放置仪器的房间与走道之间最好有一个缓冲带。

尽量少开或不开窗户，要勤清洁仪器周围的灰尘，养成良好的习惯，确保仪器一直工作在良好的状态中。

二．仪器的开机和关机开机前，先掀起流动室和分选室的罩盖，开启电源，开计算机，等计算机进入WINDOWS后，开启激光电源，运行B-D FACS DiVA软件，检查废液、鞘液、双蒸水、酒精及清洗液的提示器是否有报警（见下图），如果有，应倒掉废液或灌满所提示桶内的液体，然后执行BD FACSDiVa仪器菜单中的“Fluidics Startup”,该命令的功能是清除仪器管道内的所有液体，换成鞘液桶内液体。

从 B D FACSDiVa分选（Sort）菜单，进入分选模式（Sort Setup），选择所需要的分选速度（High、Medium和Low），点击液流显示窗上的开液流开关，检查液流是否正好流入废液槽中间，否则，调整废液槽的位置。

同时，观察液流是否是一条线，如果不是，要将喷嘴取下重装。

在日常关机前，必须先将激光器关掉，因为激光长时间照射在没有液流流动的流动室石英杯壁上，会影响它的光学特性，降低其透光率。

BD FACSLyric 临床流式细胞仪是高性能的集成解决方案，可在用户、仪器和站点之间实现准确、可靠和可重复的结果。

它是一款性能卓越、灵敏度极高的流式细胞仪，能够展示出优异的分辨率和改善的分离能力，使得难以分辨的暗淡和稀有细胞群体更容易被解析。

此外，它还具有高度的重现性，有助于实现自动化标准化，并通过实验的可移植性促进合作。

就技术参数而言，BD FACSLyric 临床流式细胞仪有多种配置可选，包括2激光4色，2激光6色，3激光8色，3激光10色，以及3激光12色等不同型号。

每种配置都具备独特的性能优势，能满足不同的科研需求。

FACS Aria流式细胞分选调试参数和最佳条件的设定_医学论文FACS Aria流式细胞分选调试参数和最佳条件的设定_医学论文作者：曹云新, 胡金涛, 杨安钢【摘要】目的：探讨FACS Aria流式细胞仪分选细胞亚群的调试参数和最佳设定条件. 方法: 采用进口分选质控试剂Accudrop Beads和自配鞘液为材料. 在FACS Aria流式细胞仪上，对分选液滴的振荡频率(Freq)、振动幅度（Ampl）和液滴间隔值（Gap）进行调试，摸索分选的最佳设定值. 结果：使用100 mm喷嘴，主液流窗Ampl设定为30±2，Gap灰带宽度为(2.0±0.5) mm，侧液流断点窗 4个分叉斑点直径调为(2±0.2) mm，4叉液流束光斑调至集中明亮，边界清晰，液滴偏转延时值为25±1附近，调试效率最高. 其分选纯度可达99%, 分选回收率可达98%. 结论: 流式分选条件的设定和建立，对于提高分选细胞活性，获得高纯度和高回收率的细胞，提供了快速调试的途径.【关键词】流式细胞术；分选细胞；条件【Abstract】 AIM: To find the optimal adjustment conditions and parameters for sorting cell subsets with FACS Aria flowcytometer. METHODS: Using imported sorting quality control Accudrop Beads and self made sheath fluid as materials, we kept adjusting the oscillation frequency and amplitude (Ampl) and the gaps between drops (Gap) of the sorted sample until an optimal configuration for the sorting was found and set. RESULTS: Using the 100 um nozzle, the mainstream window Ampl was set at 30±2, the Gap width at (2.0±0.5) mm, and each spot of the four forks in the side stream breakoff point window was (2±0.2) mm, the light spot of the 4 fork streams was adjusted until it was focused and bright and had clear boundaries. When the drop declination delay value was 25±1, the adjustment efficiency reached its optimum, with its purity at 99% and sorting recovery rate at 98%. CONCLUSION: Rapid adjustment and fixing of the conditions for sorting with flow cytometry is ofsubstantial significance to the purity, activity and precision of the sorted cells as well as the stability, efficiency and success of sorting.【Keywords】 flow cytometry sorting cell conditions0 引言在流式细胞分选前的参数设定和调试是细胞分选的关键性工作，它的好坏与快慢，直接影响细胞分选的效率、纯度和精度. 目前国内外对于分选技术方法学研究和探讨的文献报道并不多见［1-2］. FACS Aria流式细胞仪是集临床和科研为一体的高精密分析和高速细胞分选的仪器，其主要用途是从细胞群中高速分选出被指定的细胞、细胞器或质点，以便做进一步细胞鉴定、功能研究或细胞克隆培养，其分选速度之快是其它方法无法比拟的［3-4］. 由于分选之前仪器的条件设置和调试比较繁琐、费时,如果不能很好地掌握这些参数和条件的设置技巧，将会对分选细胞的效率、纯度、精度以及活性的保持产生较大影响. 为最大限度地发挥仪器的功能和效率，我们对细胞分选调试的参数和最佳条件的设定做了一些探索和研究.1 材料和方法1.1 材料FACS Aria分选型流式细胞仪, 稀释鞘流液FACSFlow，溶血液和分选质控试剂Accudrop Beads等均为美国 Becton Dickinson 公司产品； Q Prep型免疫学样品制备仪，美国 Beckman Coulter 公司产品；分选所用标本为第四军医大学西京医院查体健康人肝素抗凝全血.1.2 方法1.2.1 样品制备将Accudrop Beads用FACSFlow液稀释后备用，分选样品用含肝素的真空采血管收集抗凝血2～3 mL,充分混匀，每份取100 mL全血样品加入CD4 FITC和CD8 PE避光染色30 min, 上Q Prep型免疫学样品制备仪,溶解红细胞，稳定和固定白细胞，3 h内上机分析和分选.1.2.2 主液流调校观察主液流窗的主液滴和卫星点及液流断点位置状况：将主液流断点窗的Stream打开，并设为中速（应用70 mm喷嘴）,相对固定液滴振荡频率（Freq）,调液滴振动振幅（Ampl），使第1液滴的值落在240附近，液滴间隔值（Gap）尽量恒定,使液流断点位于窗口的中上部.1.2.3 侧液流调校打开侧液流窗的高压，激活分选测试（Test sort）窗. 此时运用主液流窗中的Ampl调试，使四束偏转液流和废液流 5个光斑间距尽可能地拉开，各光斑调至明亮、集中. 此后安装两路或四路分选收集管装置. 打开分选窗，点开分选门，观察偏转的分选液流是否落入分选相应的收集管正中. 如果没有，可轻轻左右拉动侧液流窗的电压滚动条，使分选液流准确落入收集管中. 之后关闭分选电压. 将主液流窗中实际调出的Drop1值添到Drop1默认窗口中. 液流调整好后的Gap值应在默认值±3的范围内.1.2.4 确定液滴偏转延迟加电时间建立一个新的实验文件夹，再建立两个子文件夹(Specimen和Tube). 在右侧电脑的通用工作页面上建立获取模板，用横轴FSC A和纵轴SSC A建立一个散点图，并设单个微球的矩形门P1. 点击Tube使其变为绿色的采集箭头,打开分选窗口，在Device窗口中将选项设为2 Tube，在Precision中选为Initial，在Target events选项中选为Continuous. 赋予Left 为P1. 上样已稀释的Accudrop beads，调整细胞流速为每秒2000～4000个，打开分选电压，点击滤光片图标（Optical Filter）. 此时，侧液流窗口出现两个框，调整Drop delay值，使左框中粗调和细调的光斑值均大于等于95%.2 结果2．1 主液滴、卫星点及液流断点最佳位置主液流窗中主液滴、卫星点及液流断点最佳位置，Gap灰带的适中位置在主液流窗的中上部，主液滴各滴形状规则，卫星点融入液滴良好（图1A）. 而Gap灰带位置落的较高时，液滴无规则形状，无卫星点出现(图1B). 若调试不合理，卫星点太多（图1C）. 图1D～F也均属调试不佳，无法进行正常分选的图形.2.2 侧液流断点窗5叉斑点状况4个分叉斑点直径应在2 mm左右,中间废液斑点应在4 mm左右. 此外，如果看不到左边两束的斑点，可用下方摄像头的螺钉调整，直到光斑较亮较粗为止. 下方摄像头螺钉主要是用来调激光照明灯亮度强弱的，当调到最佳位置时，激光灯珠最亮，此时4叉液流会显示的很清除.2.3 CD4+ T和CD8+ T淋巴细胞亚群分选结果人全血经CD4 异硫氰酸荧光素（fluoresceinisothiocyanate，FITC）和CD8 藻红蛋白(phycoerythrin，PE)直接标记染色后，分别获得的CD4＋ T 和CD8＋ T淋巴细胞亚群分选结果（图2），分选纯度为99%, 回收率达到98%. 说明仪器的分选参数设置正确,仪器分选处于最佳状态.3 讨论流式细胞分选是现代细胞分析领域重要的技术之一［5］. 流式细胞分选功能主要是由细胞分选器来完成, 其原理是由喷嘴射出的液流柱在电信号作用下发生振动,断裂形成均匀的小液滴. 系统根据选定的某个参数由逻辑电路判明是否将被分选,而后由充电电路对选定细胞液滴充电,带电液滴携带细胞通过静电场而发生偏转,落入收集器中, 使用不同孔径的喷嘴及改变液流速度,都可能会改变分选效果［6］. 从参数测定经逻辑选择再到脉冲充电需要一段延迟时间. 精确的调校仪器参数和设定液滴的延迟偏转时间是决定分选质量的关键,可根据具体要求进行适当调整.我们在调试中发现，刚开机时主液流窗常常出现图1E和图1F所示的不规则图形. 此时不要急于调整Ampl等参数，而应先开关几次Stream，待液流断点出现图形有所改善后，再调试Amp1,Freq, Drop1,Gap和Drop delay. 调整主液流液滴断点位置和卫星点时，Amp1的值应≤70,如果&gt70仍然无法调好，应立即关闭液流，然后反复开关2～3次. 若仍无效果，应检查喷嘴，看是否堵塞. 卸下喷嘴超声清洗后再重新调试，确保卫星点融入主液滴的位置正确. 主液流中的卫星点用100 mm喷嘴时应不大于3个，而70 mm喷嘴不大于5个, Gap框外的值结合Ampl做微小调试，使其达到恒定并不再有太多波动，即可获得如图1A理想的调试结果. 而调侧液流断点窗5叉斑点时，如出现液流分束不清楚、有毛刺，可进一步调整主液流窗的Ampl，也可以同步调整侧液流窗中的2nd 和3nd Drop，给这些液滴的加电量添加一个适当的补偿因子，使之达到液流分束明亮、集中、清楚. 液滴延迟时间能否快速调整好，与Accudrop Beadsd的稀释浓度和P1门是否赋予分选窗，以及分选窗中的Sort是否打开有很大关系. 液滴延迟用于设置细胞检测点与断点处之间的时间间隔，通常为10～140液滴间隔，调整液滴延迟数值决定了即将偏转的液滴的加电时间，调试时应遵循的规律是Drop值愈小，Drop delay应愈小.综上所述，该方法可以快速、准确地设置流式细胞仪的分选参数. 对于做6，24，96孔板和载波片分选细胞也非常实用，可为使用流式细胞仪进行细胞亚群分选的科研人员提供一定的参考价值.【参考文献】［1］Francisco JA, Campbell R, Iverson BL, et al. Production and fluorescence activated cell sorting of Escherichia coli expressing a functional antibody fragment on the external surface［J］. Proc Natl Acad Sci USA, 1993, 90(22): 10444-10448.［2］Lekkerkerker A, Logtenberg T. Phage antibodies against human dendritic cell subpopulations obtained by flow cytometry based selection on freshly isolated cells［J］. J Immunol Methods, 1999, 231(1 2):5363.［3］Georgiou G, Stathopoulos C, Daugherty PS, et al. Display of heterologous proteins on the surface of microorganisms: From the screening of combinatorial libraries to live recombinant vaccines［J］. Nat Biotechnol, 1997, 15(1): 29-34.［4］何小军, 胡静, 夏云, 等. 流式细胞术检测临床实体瘤细胞周期蛋白表达的方法研究［J］. 中国实验诊断学, 2007, (01): 20-23.［5］辛忠涛. 流式细胞分选技术在微生物表面展示文库筛选中的应用进展［J］. 微生物学免疫学进展, 2003, (03)：62-66.［6］徐勇. 免疫磁珠分离及流式细胞仪分选纯化外周血CD34+/CD90+干细胞［J］. 临床检验杂志，2004, (04)：871-873.。

BD FACSAria高速流式细胞分选仪自从1974年BD公司与美国斯坦福大学合作研制出全球第一台流式细胞分选仪，BD公司就不断推陈出新，在流式细胞技术领域里始终保持领先地位。

BD公司最新推出的革命性的流式细胞高速分选仪FACSAria，更是划时代的流式细胞仪。

这一新型仪器是BD公司25年的流式细胞仪研制经验的集体智慧的结晶。

BD FACSAria流式细胞分选仪的名字来自音乐名词Aria, 取意引人注目的独奏，因为它不需要特殊的房间设备，也不要求使用者有多年的技术经验，就可以独立完成工作。

BD FACSAria 的高速细胞分选和多色分析的性能极佳，而操作却非常简便。

BD FACSAria流式细胞分选仪为高性能流式细胞仪建立了更高的新标准。

由于使用了全新的设计，BD FACSAria流式细胞仪成为世界上第一台使用石英杯流动池固定校准的，可以完成高速细胞分选的台式流式细胞仪。

BD FACSAria流式细胞分选仪使用了许多先进技术，大大降低了高速分选的成本，易于使用，分选与分析性能无与伦比，是科学研究的一大进步。

BD FACSAria流式细胞分选仪的核心技术BD FACSAria流式细胞分选仪的核心是石英杯流动检测池。

仪器使用了全新设计，实现了完全的固定光路系统。

这一设计使用户从繁琐的仪器优化调整工作中解放出来，将主要精力集中在科学研究上。

使用这种新型石英杯流动检测池，可以在低功率激光器的条件下，获得非常高的检测灵敏度。

因此，仪器可以使用空气制冷的固态激光光源，这样一来，BD FACSAria流式细胞分选仪就不再使用与高功率激光器配套的特殊电源和冷却设备了。

BD FACSAria使用光导纤维系统，将激光器发射出的激光束精确、稳定地聚焦在样本流轴心位置。

光导纤维将三根激光束（波长分别为488 nm、633 nm和407 nm）精确汇聚在棱镜上，再通过棱镜，激光束聚焦在石英杯流动检测池的中间（图1）。

由于样本轴流位于石英杯流动检测池的中心，而激光束聚焦的位置也固定在中心，所以每日开机不再需要做仪器的优化调整。