分选型流式细胞仪

流式细胞仪分选原理流式细胞仪是一种高效、快速、准确的细胞分析工具，它能够实现对细胞的快速分类、计数和分选。

其分选原理主要基于光散射和荧光信号的检测与分析。

本文将详细介绍流式细胞仪的分选原理及其应用。

一、光散射的检测与分析流式细胞仪通过激光束照射样品细胞，细胞与光发生相互作用后会发生光散射。

光散射分为前向散射、侧向散射和后向散射三种。

前向散射主要与细胞的大小和形状有关，可用来区分不同类型的细胞。

侧向散射则与细胞的复杂度和颗粒物含量相关，可用来评估细胞的复杂度和颗粒物含量。

后向散射则与细胞的内部结构有关，可用来评估细胞的核质比。

二、荧光信号的检测与分析流式细胞仪通过荧光染料标记的抗体或荧光染料直接标记的细胞，可以检测到细胞表面或内部相关蛋白、DNA或RNA的荧光信号。

这些信号可以用于检测细胞的免疫表型、细胞周期和细胞凋亡等生物学特性。

通过检测细胞的荧光信号，可以实现对不同类型细胞的快速分类和分析。

三、细胞的分选在细胞检测和分析的基础上，流式细胞仪还可以实现对特定类型细胞的分选。

分选是通过细胞仪中的细胞排序系统实现的，通常采用静电分选或压力分选的方式。

静电分选是通过根据细胞的光信号特征将其分为阳性和阴性细胞，然后通过高压电极将细胞引导到相应的收集器中。

压力分选则是通过调整细胞流速和压力差，使目标细胞以一定方式排列并被分选。

四、流式细胞仪在生命科学中的应用流式细胞仪在生命科学研究中具有广泛的应用。

首先，它可以用于免疫表型分析，通过检测细胞表面标记物的荧光信号，可以对细胞的免疫表型进行精确的鉴定。

其次，流式细胞仪可以用于细胞周期分析，通过检测DNA荧光信号的强度，可以确定细胞所处的不同周期阶段。

此外，流式细胞仪还可以用于细胞凋亡分析、细胞功能研究以及肿瘤细胞的分选等。

总结：流式细胞仪的分选原理主要基于光散射和荧光信号的检测与分析。

通过光散射可以评估细胞的大小、形状、复杂度和颗粒物含量等特征，而荧光信号则可以用于检测细胞的免疫表型、细胞周期和细胞凋亡等生物学特性。

流式细胞仪细胞分选的操作步骤细胞分选的简要操作步骤一、上样前的准备FACSCalibur可以分选细胞进行培养或功能性研究，而这些研究需要清洁环境以保持分选后细胞不受污染继续培养，因此在样本制备，上机检测分选等过程中需严格按无菌技术操作。

1、应用无菌技术制备下列无菌工作液。

●3L 70% 乙醇（用无菌蒸馏水配制）●5L 无菌蒸馏水●5L 无菌PBS2、在干净的鞘液筒中加入3L 70% 乙醇。

盖紧盖子，振摇鞘液筒，确保桶内壁被乙醇充分洗涤。

安好鞘液筒。

3、将过滤器短接，否则乙醇将破坏滤膜。

4、用70%乙醇冲洗收集管接口处，并喷洒进样口处的空气。

5、在收集管接口处安装2支BD 50ml收集管（若不使用浓缩器）。

6、放上一支装有70 % 乙醇的进样管。

7、设分选门（画一个空门使机器进行分选操作）。

9、从Acquire menu选择SortSetup 。

在Sort Gate菜单中选择步骤７设定的分选门。

按液流控制键RUN。

10、在Setup方框中打叉，点击Acquisition Control菜单中Acquire。

11、跑乙醇直至2支收集管注满（每管注满需要9min），点击Pause，Abort。

12、再重复上述步骤2次，共需要1h。

13、断开鞘液筒，在鞘液筒中加入500mL 无菌蒸馏水，振摇鞘液筒，倒掉液体，反复操作直至洗净桶内壁残余乙醇。

14、在鞘液筒中加入3L无菌蒸馏水，盖紧盖子。

安好鞘液筒。

15、在收集管接口处安装2支新的收集管。

16、放上一支装有无菌蒸馏水的进样管。

17、点击Acquisition Control菜单中Acquire。

18、跑无菌蒸馏水直至2支收集管注满（每管注满需要9min），点击Pause，Abort。

19、再重复上述步骤2次，共需要1h。

20、断开鞘液筒，在鞘液筒中加入3L 无菌PBS，盖紧盖子。

安好鞘液筒。

21、在收集管接口处安装2支新的收集管。

22、放上一支装有无菌PBS的进样管。

BD Aria III高端分选型流式细胞仪碧迪医疗器械（上海）有限公司生物科学部第一部分高端分选型流式细胞仪产品及市场概述流式细胞仪（Flow Cytometer ,FCM）一种集激光技术、电子物理技术、光电测量技术、电子计算机以及细胞荧光化学技术、单克隆抗体技术为一体的新型高科技仪器。

概括来说，流式细胞术就是对于处在快速直线流动状态中的细胞或生物颗粒进行多参数、快速的定量分析和分选的技术。

随着各项相关技术的迅速发展，流式细胞技术已经成为日益完善的细胞分析和分选的重要工具。

我们可以看到，目前全球商业化流式细胞仪产品的研究开发主要遵循两个方向：一类以分析功能为主的，应用于临床检测及常规的科研系统；另一类是具备高速分选功能的高端科研型，研发趋势是越来越多的荧光检测参数，同时越来越快的分选速度，以适应越来越高的科学研究的需求。

在分选型的高端产品来说，BD公司、Dako-Cytomation与Beckman-Coulter公司都相继推出了几代产品。

1999年BD公司在原FACSVantage的基础上，推出了FACSVantage SE（分选升级型，将细胞分选功能推到一个新的高度，25,000个细胞/秒，同时增配Accudrop等选件，使得分选调试变得简单），2000年又在其基础上推出Diva系统，这是一个全数字化的系统，分析速度大大提高，同时做到四路分选。

同期的Beckman-Coulter公司的同类产品是Altra，该产品雷同于BD的FACSVantage SE，但在性能参数方面比FACSVantage SE都要差，竞争力相对较弱，于2003年停产。

同期，在高端分选型流式细胞仪市场上Dako-Cytomation公司于1996年推出了Moflo，这款产品可进行高速分析和分选，但因为操作复杂，性能不稳定而未得到广泛使用，2007年Beckman-Coulter公司在自己无法研发出新一代的流式细胞分选仪的情况下，从DAKO公司收购了Moflo，并更名为Moflo XDP，但并未改变Moflo的硬件结构。

分选型流式细胞仪样品标准
分选型流式细胞仪样品标准如下：
1. 样品类型：分选型流式细胞仪的样品应为单细胞悬浮液。

2. 样品浓度：样品浓度应调至1\~10×10^6cells/ml，浓度过高或过低都会对检测结果造成一定的影响。

3. 样品体积：一般实验只需\~ ml的样品即可。

4. 样品容器：细胞样品应放置在BD FALCON352052试管中，否则无法上机。

5. 样品过滤：上机前务必去除样品中的细胞团块，防止管路堵塞，样品必需预先使用300目的尼龙筛网将细胞过滤。

若未过滤样品即上机而引起机器堵塞及损坏，需负赔偿责任。

6. 对照样品设置：流式细胞术的结果分析主要以对照为参考值，因此，每次实验必须设置对照样品。

对照样品的好坏、是否齐全，决定了实验结果的可信度。

关于对照样品的设定可以咨询仪器管理人员。

请注意，以上标准仅供参考，具体标准可能因不同仪器和实验需求而有所不同，建议咨询相关领域的专家或查阅相关文献资料，获取更准确的信息。

service@ 分选型流式细胞仪技术规格
一． 主要技术参数：
1. 固定光路、无需激光调节
2. 全自动校准，开机预热既可使用，仪器设置、示踪控制、仪器自检自动化程序
3. 分析速度≥10万细胞/秒，分选速度≥7万细胞/秒，分选纯度＞98%，回收率＞80%
4. 荧光灵敏度：FITC ，PE ≤125MESF
5. 四路分选，成分分选、单克隆细胞分选（玻片分选，6-384孔板分选）
6. 自动精确计算液滴延迟时间
7. 实时全自动监测和稳定液流
8. 检测十个以上荧光参数
9. 无菌分选、液流自动清洗和消毒模式
二． 配置
1. 四根激光及以上（可同时使用），可同时进行9色及以上标记；
标配：488nm 固态激光；633nm 氦氖激光；405nm 紫外激光；375nm （UV ）近紫外激光 选配：561nm 等
2. 温控设备：循环水冷却装置控制细胞收集管温度，可在软件上调整温度
3. 软件系统：全数字化获取/分析软件；自动进行仪器质控；自动补偿和脱机补偿功能；
具有自动设门功能；所有的图像结果以及统计数值可直接输出；最好软件安装和使用没有版权限制，软件可以安装在其他计算机上。

4. 数据存储：双硬盘驱动，配备移动硬盘，保证移动数据备份
5. 液流管道/备用喷嘴：大容量液流车提供空气压力，支持长时间分析分选；内置鞘液缓
冲器，保持鞘液压力恒定无气泡；配合仪器自动软件，自动完成开机、关机、排气泡以及多种仪器清洗和维护程序；喷嘴易于安装，位置固定，无需经验，保证仪器设置的可重复性，节省液流调节时间；需提供备用喷嘴。

分选型流式细胞仪的工作原理分选型流式细胞仪（sorting flow cytometer）是一种用于细胞分选和分析的高级仪器。

它基于流式细胞仪原理，通过将细胞悬浮液以单个细胞为单位通过检测点，实现对细胞的分选和分析。

本文将详细介绍分选型流式细胞仪的工作原理。

分选型流式细胞仪主要由光学系统、流体系统、信号采集系统和控制系统四个部分组成。

光学系统包括激光器、衍射光学系统和荧光光学系统，用于激发和检测细胞中的荧光标记物。

流体系统包括进样系统和分选系统，用于将细胞引入仪器并进行分选。

信号采集系统包括光敏元件和信号处理电路，用于检测和采集光学信号。

控制系统包括仪器控制软件和数据处理软件，用于控制仪器运行和处理采集到的数据。

在分选型流式细胞仪中，细胞悬浮液首先通过进样系统引入仪器。

进样系统通常采用压力驱动的方式，将细胞悬浮液注入进样装置，然后通过微细管道将细胞单个引入检测点。

进样时，仪器会根据预设的参数对细胞进行分类，将目标细胞和非目标细胞分开。

当细胞通过检测点时，激光器会对细胞进行激发，激发光线经过衍射光学系统和荧光光学系统后，被光敏元件接收。

衍射光学系统通过多个透镜和光栅，将光线聚焦到细胞上，使细胞中的荧光标记物发射出的光线进入荧光光学系统。

荧光光学系统通过滤光片和光学透镜，将目标波长的荧光信号聚焦到光敏元件上。

光敏元件通常是一种高灵敏度的光电二极管或光电倍增管，用于将光信号转换为电信号。

信号处理电路对电信号进行放大、滤波和数字化处理，然后传输到控制系统进行进一步处理。

控制系统根据预设的参数，对采集到的数据进行分析和判断，判断细胞的类型和特征。

根据判断结果，控制系统可以对细胞进行分选。

分选系统通过电磁阀和压力控制装置，将目标细胞和非目标细胞分开。

当控制系统判断某个细胞为目标细胞时，会通过信号控制电磁阀，开启对应的通道，使目标细胞通过分选系统，进入收集装置。

而非目标细胞则会被排除到废液中。

分选型流式细胞仪的工作原理基于光学原理和电子技术，通过对细胞的荧光标记物进行激发和检测，实现对细胞的快速分选和分析。

简述流式细胞仪细胞分选原理。

流式细胞仪是一种广泛应用于生物医学领域的实验仪器，主要用于对细胞进行分析、计数和分选。

其原理是通过激光束照射细胞，测量细胞在光学系统中的散射和荧光信号，从而获得有关细胞的信息，并根据设定的参数将细胞进行分选。

流式细胞仪主要由光学系统、流动系统和信号处理系统三个部分组成。

光学系统包括激光器、光学镜头和探测器，用于照射细胞和收集细胞发出的散射和荧光信号。

流动系统包括样本注射器、流动池和流速控制系统，用于将样本中的细胞以单个细胞为单位依次通过光学系统进行测量。

信号处理系统包括放大器、模数转换器和计算机，用于处理和分析收集到的信号，并根据设定的参数进行细胞分选。

在流式细胞仪中，细胞首先通过样本注射器被引入到流动池中，然后通过流速控制系统以恒定的速度流动。

激光器产生的激光束经过光学镜头聚焦后照射到细胞上，细胞与光发生相互作用，产生散射和荧光信号。

光学系统中的探测器收集到的信号经过放大器放大后，转换为模拟电信号，然后通过模数转换器转换为数字信号，最后由计算机进行处理和分析。

细胞在流式细胞仪中的散射信号主要由前向散射（FSC）和侧向散射（SSC）组成。

前向散射信号与细胞的大小和形状有关，侧向散射信号与细胞的复杂度和内部结构有关。

通过测量前向散射和侧向散射信号的强度，可以初步判断细胞的大小、形态和复杂度。

除了散射信号外，流式细胞仪还可以测量细胞的荧光信号。

在实验前，可以将细胞标记上特定的荧光标记物，如荧光染料或荧光标记的抗体。

这些荧光标记物可以与细胞的特定分子或结构结合，从而在流式细胞仪中产生荧光信号。

通过选择适当的激光器和探测器，可以同时测量多种不同波长的荧光信号，实现多参数的分析。

根据测量到的散射和荧光信号，流式细胞仪可以将细胞分为不同的亚群。

这种分选可以根据细胞的大小、形状、复杂度和荧光信号的强度来进行。

通过设定合适的参数和阈值，可以选择性地收集和分选出感兴趣的细胞亚群。

分选过程可以通过电荷击打、压力击打或光束偏转等方式实现。