细菌形态结构观察实验报告精品篇
生物学实验报告
报告题目培养基的制备与灭菌
姓名刘伟
学号055656565
指导教师:xxxxxx
学习中心培养基的制备与灭菌
一、目的要求
1. 掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。
2. 掌握培养基的配置原则和方法。
3. 掌握高压蒸汽灭菌的操作方法和注意事项。
二、基本原理
牛肉膏蛋白胨培养基：
是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供细菌生长繁殖之用。
高压蒸汽灭菌：
主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。将灭菌的物品放在一个密闭和加压的灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅内水沸腾而产生蒸汽。待蒸汽将锅内冷空气从排气阀中趋尽，关闭排气阀继续加热。此时蒸汽不溢出，压力增大，沸点升高，获得高于100℃的温度导致菌体蛋白凝固变性，而达到灭菌的目的。
三、实验材料
1. 药品：牛肉膏、蛋白胨、nacl、琼脂、1mol/l的naoh和hcl溶液。
2. 仪器及玻璃器皿：天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、三
角瓶、培养皿、玻璃漏斗等。
3. 其他物品：药匙、称量纸、ph试纸、记号笔、棉花等。
四、操作步骤
（一）玻璃器皿的洗涤和包装
1．玻璃器皿的洗涤
玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。将三角瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中．用毛刷刷洗，然后用自来水及蒸馏水冲净。移液管先用含有洗涤剂的水浸泡，再用自来水及蒸馏水冲洗。洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。
2．灭菌前玻璃器皿的包装
（1）培养皿的包扎：培养皿由一盖一底组成一套，可用报纸将几套培养皿包
成一包，或者将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内，加盖灭菌。包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。
（2）移液管的包扎：在移液管的上端塞入一小段棉花(勿用脱脂棉)，它的作
用是避免外界及口中杂菌进入管内，并防止菌液等吸入口中。塞入此小段棉花应距管口约0.5cm左右，棉花自身长度约1~1.5cm。塞棉花时．可用一外围拉直的曲别针、将少许棉花塞入管口内。棉花要塞得松紧适宜，吹时以能通气而又不使棉花滑下为准。
先将报纸裁成宽约5cm左右的长纸条，然后将已塞好棉花的移液管尖端放在长条报纸的一端，约成45℃角，折叠纸条包住尖端，用左手握住移液管身，有手将移液管压紧．在桌面
上向前搓转，以螺旋式包扎起来。上端剩余纸条，折叠打结，准备灭菌。
（二）液体及固体培养基的配制过程
1．液体培养基配制
（1）称量（假定配制1000ml培养基）
按培养基配方比例依次准确地称取3.0g牛肉膏、10.0 g蛋白胨、5.0gnacl放入烧杯（或1000ml刻度搪瓷杯）中．牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯。
（2）溶化
在上述烧杯中先加入少于所需要的水量（如约700ml），用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解，将药品完全溶解后，补充水到所需的总体积（1000ml）；如果配制固体培养基时，将称好的琼脂放人已溶的药品中，再加热溶化，最后补足所损失的水分。
（3）调ph
调ph：一般用ph试纸测定培养基的ph。用剪刀剪出一小段ph试纸，然后用镊子夹取此段ph试纸，在培养基中蘸一下，观看其ph范围，如培养基偏酸或偏碱时，可用1mol/l naoh 或1mol/l hcl溶液进行调节。调节ph时，应逐滴加入naoh或hci溶液，防止局部过酸或过碱，破坏培养基中成分。边加边搅拌，并不时用ph试纸测试，直至ph达7.4-7.6。反之，用1mol／lhcl进行调节。
2．固体培养基的配制
配制固体培养基时，应将已配好的液体培养基加热煮沸，再将称好的琼脂(1.5~2％)加
入，并用玻棒不断搅拌，以免糊底烧焦。继续加热至琼脂全部融化，最后补足因蒸发而失去水分。
（三）培养基的分装
根据不同需要，可将已配好培养基分装入试管或三角瓶内，分装时注意不要使培养基沾污管口或瓶口，造成污染。如操作不小心，培养基沾污管口或瓶口时，可用镊子夹一小块脱脂棉，擦去管口或瓶口的培养基，并将脱脂棉弃去。
1．试管的分装
取一个玻璃漏斗，装在铁架上，漏斗下连一根橡皮管，橡皮管下端再与另一玻璃管相接，橡皮管的中部加一弹簧夹。分装时，用左手拿住空试管中部，并将漏斗下的玻璃管嘴插入试管内，以右手拇指及食指开放弹簧夹，中指及无名指夹佐玻璃管嘴，使培养基直接流入试管内。装入试管培养基的量视试管大小及需要而定，若所用试管大小为15×150 mm时，液体培养基可分装至试管高度1／4左有为宜；如分装固体或半固体培养基时，在琼脂完全融化后，应趁热分装于试管中。用于制作斜面的固体培养基的分装量为管高1／5(约3—4mi)，半固体培养基分装量为管高的1／3为宜。
2．三角瓶的分装
用于振荡培养微生物时，可在250 m1用于制作
平板培养基用时，可在250 m1三角瓶中加入150ml粉(按2％计算)，灭菌时瓶中琼脂粉同时被融化。
（四）棉塞的制作及试管、三角瓶的包扎
为了培养好气性微生物，需提供优良通气条件，同时为防止杂菌污染，则必须对通入试管或三角瓶内空气预先进行过滤除菌。通常方法是在试管及三角瓶口加上棉花塞等。
1．试管棉塞的制作
制棉塞时，应选用大小、厚薄适中的普通棉花一块，铺展于左手拇指和食指扣成的团孔上，用右手食指将棉花从中央压入团孔中制成棉塞．然后直接压入试管或三角瓶口。也可借用玻璃棒塞入，也可用折叠卷塞法制作棉塞。
制作的棉塞应紧贴管壁，不留缝隙，以防外界微生物沿缝隙侵入，棉塞不宜过紧或过松，塞好后以手提棉塞，试管不下落为准。棉塞的2／3在试管内，1／3在试管外。目前也有采用硅胶塞代替棉塞直接盖在试管口上。
将装好培养基并塞好棉塞或硅胶塞的试管捆成一捆，外面包上一层牛皮纸。用记号笔注明培养基名称及配制日期，灭菌待用。
2．三角瓶棉塞制作
通常在棉塞外包上一层纱布，再塞在瓶口上。有时为了进行液体振荡培养加大通气量，则可用8层纱布代替棉塞包在瓶口上，目前也有采用硅胶塞直接盖在瓶口上。
在装好培养基并塞好棉塞或包扎八层纱布或盖好硅胶塞的三角瓶口上，再包上一层牛皮纸并用线绳捆好，灭菌待用。
（五）培养基的灭菌
将上述培养基以0.103mpa，l21℃，20min高压蒸气灭菌。
灭菌过程：
1. 加水：首先将内层锅取出，再向外层锅内加入适量的水，使水面没过加热蛇
管，与三角搁架相平为宜。切勿忘记检查水位，加水量过少，灭菌锅会发生烧干引起炸裂事故。
2. 装料：放回内层锅，并装入待灭菌的物品。注意不要装得太挤，以免妨碍蒸
汽流通而影响灭菌效果。装有培养基的容器放置时要防止液体溢出，三角瓶与试管口端均不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包扎的纸而透入棉塞。
3. 加盖：将盖上与排气孔相连的排气软管插入内层锅的排气槽内，摆正锅盖，
对齐螺口，然后以对称方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气，并打开排气阀。
4. 排气：打开电源加热灭菌锅，将水煮沸，使锅内的冷空气和水蒸汽一起从排
气孔中排出。一般认为当排出的气流很强并有嘘声时，表明锅内的空气已排尽，沸腾后约需5分钟。
5. 升压：冷空气完全排尽后，关闭排气阀，继续加热，锅内压力开始上升。
6. 保压：当压力表指针达到所需压力时，控制电源，开始计时并维持压力至所
需的时间。如本实验中采用0.1mpa，121.5℃，20分钟灭菌。
灭菌的主要因素是温度而不是压力，因此锅内的冷空气必须完全排尽后，才能关闭排气阀，维持所需压力。
7. 降压：达到灭菌所需的时间后，切断电源，让灭菌锅温度自然下降，当压力
表的压力降至“0”后，方可打开排气阀，排尽余下的蒸汽，旋松螺栓，打开锅盖，取出灭菌物品，倒掉锅内剩水。压力一定要降到“0”后，才能打开排气阀，开盖取物。否则就会因锅内压力突然下降，使容器内的培养基或试剂由于内外压力不平衡而冲出容器口，造成瓶口被污染，甚至灼伤操作者。
（六）斜面和平板的制作
1．斜面的制作
将已灭菌装有琼脂培养基的试管，趁热置于木棒或玻棒上，使成适当斜度，凝固后即成斜面。斜面长度不超过试管长度l／2为宜。如制作半团体或固体深层培养基时，灭菌后则应垂直放置至凝固。
2．平板的制作
将装在三角瓶或试管中已灭菌的琼脂培养基融化后，待冷至50℃左右倾入无菌培养皿中。温度过高时，皿盖上的冷凝水太多；温度低于50℃，培养基易于凝固而无法制作平板。
平板的制作应在火旁进行，左手拿培养皿，右手拿三角瓶的底部或试管，左手同时用小指和
手掌将棉塞打开，灼烧瓶口，用左手大拇指将培养皿盖打开一缝，至瓶口正好伸入，倾入10~15ml培养基，迅速盖好皿盖，置于桌上，轻轻旋转平皿，使培养基均匀分布于整个平皿中，冷凝后即成平板。
（七）培养基的灭菌检查
灭菌后的培养基，一般需进行无菌检查。最好取出1~2管(瓶)，置于37℃温箱中培养1~2天，确定无菌后方可使用。篇二：微生物实验报告
脓汁和粪便标本中病原菌的检测
专业：学号：姓名：
一、实验目的
探究检测其病原菌的类型并通过一系列的观察与鉴定从而确定其病原菌的名称和性质。在实践中学习培养基的制备、消毒和灭菌，细菌的分离与培养，细菌群体和个体形态特征的观察，细菌生化反应鉴定等技巧。从而掌握微生物实验的各种操作方法，培养对微生物实验的兴趣。
二、实验材料
器材
打火机、油性笔、酒精灯、接种环、接种针、污物盘、普通冰柜、隔水式电热恒温培养箱、奥林巴斯cx21型生物显微镜、电炉、试管（带棉塞）、称量纸、药勺、牛皮纸、硫酸纸、橡皮筋、尺子、锥形瓶、高压蒸汽灭菌器、镊子、玻片、吸水纸、拭镜纸
试剂药品
普通营养琼脂培养基、蒸馏水、脓汁标本、粪便标本、石蜡油、生理盐水、结晶紫、卢戈碘液、95%乙醇、稀释复红、葡萄糖微量发酵管（2支）、乳糖微量发酵管（2支）、青霉素抗菌素纸片、链霉素抗菌素纸片、庆大霉素抗菌素纸片、血浆、福氏志贺菌诊断血清
三、方法与步骤
干粉培养基→蒸馏水→加热溶化→分装→集中放在试管筐里→罩上硫酸纸、牛皮纸→用橡皮筋扎好→放入讲台边的灭菌桶或灭菌筐内→送到高压蒸汽灭菌室（洗刷室）→灭菌→（1）平板培养基：倾注平板10ml→琼脂完全凝固后，平板倒放→4℃冰箱保存备用。
（2）斜面培养基：培养基趁热斜放→琼脂凝固以后，4℃冰箱保存备用。→贴上标签后灭菌使用。
①空气的细菌学检查
每组1个营养琼脂平板，选择采样地点（实验室、卫生间或任选地点）→将平板盖打开，盖朝下放置在平板旁边→平板暴露于空气中15min→平板倒扣盖上→作标记→37℃温箱培养24h→观察结果。
②人体体表的细菌学检查
甲乙常规洗手，丙丁标准洗手。甲和乙、丙和丁共用1个平板
按规定在普通平板上接种手指上的细菌。第1格为洗手前，第2格为洗手后，第3格为消毒后，第4格空白对照。
接种环烧灼灭菌→分别取脓汁标本与粪便标本点在普通平板和依红美蓝平板上，各做两份，→烧掉接种环上多余的标本→冷却后，应用分区划线分离法，将脓汁标本接种于营养琼脂平板（2份），粪便标本接种于伊红美蓝平板（2份）→接种环烧灼灭菌→将平板倒置37℃培养18～24h→观察结果。
接种环烧灼灭菌→挑选平板上典型的四种单菌落（白色、黄色、紫黑色、粉红色）进行斜面接种纯培养→做好标记→接种环烧灼灭菌→斜面培养基置于37℃培养过夜→保存备用
①革兰氏染色：
取洁净载玻片→用灭菌操作后的接种环取生理盐水1-2环于玻片上→挑取细菌培养物少许与盐水轻轻抹匀→待涂片干燥后在酒精灯火焰外侧快速来回2-3回合→结晶紫初染1min→
水洗→卢戈碘液媒染1min→水洗→95％乙醇脱色约20s→水洗→稀释品红→复染1min→水洗→吸干,镜检。
②肉汤接种法:
接种环烧灼灭菌→分别在斜面培养物中挑取菌苔少许→立即移入肉汤培养基管中→在接近液面的管壁上轻轻研磨→沾取少量肉汤调和→混匀→试管口通过火焰2-3次灭菌→塞好棉塞→35℃培养4~6h
接种环烧灼灭菌→分别取之前实验中得到的四种菌液在普通平板密集涂布→接种环烧灼灭菌→标记:青、链、庆→镊子火焰消毒→贴青霉素、链霉素、庆大霉素纸片→按压→镊子消毒→倒置37℃培养18～24h→观察结果取干净玻片一张→在左右两边分别滴加兔血浆1-2滴，生理盐水1滴→接种环烧灼灭菌→冷却→分别用接种环取之前实验所得到的白色和黄色菌苔(2～3个菌落的菌量)与血浆研磨混合→边混匀边观察结果→接种环烧灼灭菌→稍等片刻，观察结果
接种针烧灼灭菌→用灭菌接种针分别刮取实验所得到的紫黑色和粉红色菌苔→分别接种在葡萄糖发酵微量管中和乳糖发酵微量管内→接种环烧灼灭菌→将微量管平放在平板内→37℃培养过夜后→观察结果。
接种针烧灼灭菌→分别用接种针在紫黑色和粉红色的斜面取菌→从半固体培养基中心垂直刺入，可刺达近底管处，但不要到达管底→循原来的路线退出接种针→试管口迅速通过火焰2-3次灭菌→塞好棉塞→烧灼灭菌接种针→37℃培养24h→观察结果
取洁净的载玻片一张→将磨面近端设为对照区→滴加生理盐水15ul→远端设为试验区→滴加福氏志贺菌诊断血清15ul→接种环烧灼灭菌→用接种环分别取粉红色菌苔→研磨于盐水或血清内，混合均匀→接种环烧灼灭菌→载玻片来回倾侧→观察结果
四、结果与讨论对脓汁中细菌的分析讨论
1、用普通平板，从脓汁标本中分离出金黄色和白色两种菌落。
2、在显微镜下观察时，这两种细菌均为g+球菌，排列不规则，呈葡萄串状，是典型的葡萄球菌。
3、结合菌落的颜色，可以初步断定，这是金黄色葡萄球菌和白色葡萄球菌。
4、通过血浆凝固酶试验，观察到黄色菌落的细菌能使血浆产生颗粒性物质，说明为凝固酶阳性；白色菌落则没有凝集反应，说明其为凝固酶阴性。
5、最后进行的是药敏试验，从培养基上可以观察到，不同的抗生素所形成的抑菌圈不同。其中青霉素对金黄色葡萄球菌最敏感。
对粪便中细菌的分析讨论
1、用伊红美蓝平板分离菌落时，可以从粪便标本中分离出紫黑色具有金属光泽的菌落和粉红色半透明菌落。
2、在显微镜下观察时，这两种菌均为g-杆菌，排列不规则，从形态上不能鉴别是什么细菌。
3、经糖发酵试验，可以观察到，紫黑色的细菌能使葡萄糖和乳糖的试管变色和产生气体；粉红色的细菌只能使葡萄糖的试管变色。
4、经半固体动力试验，观察到紫黑色的细菌使半固体培养基成浑浊状态，粉红色的细菌只在接种针插入的方向聚集。
5、综上所述，紫黑色的细菌为大肠埃希菌，粉红色的细菌为志贺菌。
6、最后进行药敏试验时，发现大肠埃希菌对青霉素不敏感，对庆大霉素和链霉素都敏感。综上所述，脓汁标本中分离得黄色菌落为金黄色葡萄球菌，白色菌落为白色葡萄球菌，致病菌为金黄色葡萄球菌；粪便标本中分离得紫黑色菌落为大肠埃希菌，粉红菌落为福氏志贺菌，致病菌为福氏志贺菌。篇三：微生物实验报告
动物微生物及免疫学实验报告
一、实验目的
（一）掌握一般培养基的制备原理及要求，掌握培养基酸碱度的测定，熟悉一
般培养基的制备过程和各种器皿灭菌方法。
（二）掌握细菌分离培养的基本要领和方法，掌握细菌抹片的制备方法和革兰
氏染色法及油镜的使用方法，并认识革兰氏染色的反应特性。
（三）掌握学习用微生物学原理诊断疾病的一般方法及步骤。
二、实验用品
（一）器材
量筒、烧杯、电子天平、漏斗、三角烧瓶、空试剂瓶、玻璃棒、玻璃平皿、刻度吸管、ph 试纸、纱布、脱脂棉、天平、电炉、试剂瓶瓶塞、扎绳、放大镜、包装纸、洗耳球、酒精灯、载玻片、火柴、吸水纸、剪刀、记号笔、接种环、注射器、镊子、钳子、毫米尺、培养箱、水浴培养箱、高压蒸汽灭菌锅、油镜
（二）试剂及材料
肘胨、蛋白胨、猪胆盐、氯化钠、琼脂、乳糖、0.01%结晶紫水溶液、0.5%中性红水溶液、血清、胰化蛋白胨、酵母提取物、氢氧化钠、盐酸、牛血清、革兰氏染色液、蒸馏水、小白鼠、病猪内脏
三、实验步骤
（一）培养基的制备（所有用到的器皿都已121℃高压灭菌15~30min，倾注平板在无菌操作台内完成，并放在无菌操作台内）
1、麦康凯培养基
（1）组成：蛋白胨17g、肘胨3g、猪胆盐5g、氯化钠5g、琼脂17g、乳糖
10g、0.01%结晶紫水溶液10ml、0.5%中性红水溶液5ml、蒸馏水1000ml
（2）方法：将蛋白胨、肘胨、猪胆盐和氯化钠溶解于400ml蒸馏水中，调节
液混合，分装于烧瓶内，用纱布、扎绳等捆好后，121℃高压灭菌
15~30min。待冷却至50~ 55℃时，加入结晶紫和中性红水溶液，摇匀后
倾注平板。
注：结晶紫和中性红水溶液配好后需经高压灭菌。
2、血清平板
（1）组成：营养琼脂、牛血清
（2）方法：将灭菌的营养琼脂加热熔化，冷却至45~50℃时，加入牛血清，并
混匀，倾注平板。
注：不得将牛血清一并加入后再灭菌。
3、lb培养基
（1）组成：胰化蛋白胨10g、酵母提取物5g、氯化钠10g、琼脂15g
（2）方法：在950ml蒸馏水中加入胰化蛋白胨、酵母提取物、琼脂和氯化钠，
调节ph至7.4，加热熔化，分装于瓶中，用纱布、扎绳等捆好后，121℃高压灭菌15~30min。待冷却至50~ 55℃时，倾注平板。
4、液体培养基（在lb培养基的基础上，装入大试剂瓶中，不加琼脂，不分装）
（二）病料取材在病猪死亡后，首先用显微镜检查其末梢血液膜片中是否有炭疽杆菌存在，未发现，则立即用消毒的器械对其进行生理解剖，观察其病理特征现象，取出病猪的十二指肠、胃、肝脏三处的组织物，并注意组织的完整性，用储物袋密封保存。
（三）细菌粗培养
1、消毒灭菌：操作人员先用消毒水清洗手或戴好实验手套，再用消毒水对无菌操作台内桌面及用酒精灯外焰对待用器械进行火焰灭菌。
2、接种
（1）在无菌操作台酒精灯旁打开用储物袋密封保存的病料，先左手持镊子右
手持剪刀，把病料剪出一个小口。
（2）右手持灭过菌的接种环，左手持平板，并用拇指、食指及中指将平皿揭
开约20左右，然后将接种环前端插入小口旋转一下后，再用划线接种的方法接种到一个血清平板上。
（3）用记号笔在平板底部作好日期、操作人员、部位等标记，并将平板倒放。
以此方法，分别接种十二指肠、胃粘膜、肝脏于血清平板上，各接种2个血清平板。
3、培养：将接种好的血清平板倒扣放入37℃培养箱中，反向培养24小时。注：划线接种时尽量划开，以保证长出单个菌落，且划线时接种环应尽量倾斜，以免划破培养基（后同）；待接种完毕后熄灭无菌操作台内酒精灯，关闭好无菌操作台窗口，打开无菌操作台内的紫外灯。。
（四）细菌纯培养
1、菌落特征判断
待粗培养的细菌培养24小时后，取出用放大镜观察记录单个小菌落的形态特征并用实验报告纸记录好，并在平板底部上做好观察标记，其形态特征包括大小、形状、菌落边缘、表面构造、隆起度、湿润度、透明度、颜色等。2、取单个菌落进行革兰氏染色镜检
（1）取干净的载玻片，用记号笔在其一面做好正反面标记，再在载玻片另一
面中央滴上一小滴蒸馏水。
（2）将接种环在火焰上灭菌，待冷却后，在酒精灯旁从标记的单个小菌落中
取少许细菌置于蒸馏水中混匀（同时盖好平板倒扣置于一旁），用接种环涂成直径约1.5cm 的菌膜，再在酒精灯火焰上方以钟摆速度通过固定好细菌，待冷却进行染色。
（3）先滴加草酸结晶紫溶液染色1~2min，再水洗；然后滴加革兰氏碘液溶液
染色1~2min，再水洗；随后滴加95%的酒精脱色30~60s，再水洗；最后滴加稀释的品红进行复染30~60s，再水洗；待干燥或吸水纸吸干后镜检。
（4）将干燥的载玻片放在1000倍油镜下，滴加一滴松柏油进行镜检，观察其
形态特征，判断细菌的种属。
3、细菌接种培养
（1）消毒灭菌：操作人员先用消毒水清洗手或戴好实验手套，再用消毒水对
无菌操作台内桌面及用酒精灯外焰对待用器械进行火焰灭菌。
（2）接种：右手持灭过菌的接种环，左手持平板，并用拇指、食指及中指将
平皿揭开约20左右，然后将接种环插入揭开的平板口内蘸去一下镜检标记的小菌落，再用划线接种的方法接种到一个血清平板、lb平板或麦康凯平板上。并用记号笔在平板底部作好日期、操作人员、菌种、部位等标记，将平板倒放。
（3）将接种好的平板倒扣放入37℃培养箱中，反向培养24小时。
注：油镜用完后应立即清理物镜上的松柏油；划线接种时尽量划开，以保证长出单个菌落；待接种完毕后熄灭无菌操作台内酒精灯，关闭好无菌操作台窗口，打开无菌操作台内的紫外灯。。
（五）菌液的制备1、镜检：用革兰氏染色法在1000倍油镜下镜检，观察并记录是否为纯培养的细菌。
2、分装液体培养基：先对无菌操作台及需要使用的器械进行消毒灭菌，然后用钳子揭开一个空试剂瓶，用倾倒的方法在酒精灯旁从液体培养基大试剂瓶中分装于空试剂瓶内，并立即盖上液体培养基大试剂瓶瓶塞。
3、接种：右手持接种环，用火焰对其进行灭菌，待冷却后，取出纯培养的平板，在无菌操
作台内酒精灯旁，蘸去少许细菌，左手倾斜液体培养基，将接种环，伸入液体培养基内搅动，然后取出对接种火焰环灭菌，并用灭菌的包装纸捆绑好后，用记号笔做好相应标记，置于一旁。
4、培养摇菌：将接种好的液体培养基置于水浴培养箱中培养24小时。注：分装一个培养基就接种一个培养基，不得全部分装完后再一个一个接种。
（六）小鼠致病性实验
1、保定：选择健康的青壮年小白鼠，先用右手抓住尾巴，旋转数周让其眩晕，然后用左手的拇指和食指捏住两耳及头部皮肤，并翻转左手，使其头部朝下，以达到内脏前移的目的。
2、接种：先用酒精棉球蘸取酒精对注射部位擦洗消毒，再用注射器注射吸取0.2ml菌液注射于小白鼠腹腔中。
3、观察：将接种的小白鼠放在适宜的环境下生活，并在鼠笼处用记号笔标记好接种时间、菌种等。
4、再培养鉴定：待小白鼠死亡后，对其进行解剖，观察其内脏病变情况，并取肝脏直接涂在相应培养基上，在适宜条件下反向培养24小时后，取菌落细菌进行镜检观察判断。
注：在注射小白鼠2小时候需要观察小白鼠是否因注射时伤害到内脏而死亡。
八,讨论:
1,为什么培养用的培养皿和培养基,在接种前必须高温处理为什么要用无菌棉棒
2,提示4相当于细菌,真菌一般培养方法中的哪一个步骤
3,通过各组的交流,你认为细菌和真菌的分布情况怎样
4,什么环境下不可能有细菌和真菌在这个探究中,不可能有细菌和真菌的情况存在吗是什么情况为什么
5,根据你的探究活动进行总结:细菌和真菌的生活必须具备哪些基本条件
6,培养细菌或真菌时,为什么要在培养基中加入牛肉汁或牛奶
7,请你在下面帮幼儿园的老师画一副漫画,让孩子们知道手上就有细菌或真菌,饭前便后必须洗手.请自命题
微生物实验 微生物实验 细菌形态观察 细菌分布 消毒灭菌
细菌形态观察 一、实验目的 1.掌握光学显微镜（油镜）的使用及日常维护 2.掌握细菌的三种形态 3.掌握临床常见细菌的形态及染色 4.掌握细菌的特殊结构 5.了解支原体、衣原体、立克次氏体、螺旋体及真菌的结构特点 二、实验原理 1. 普通光学显微镜（油镜）的使用 1. 在标本欲检部位滴一滴香柏油，然后转换油镜头 2. 从侧面观察并慢慢转动粗调节器，使油镜头浸没在油滴内，当油镜头几乎接触玻片时 停止转动，以免碰撞玻片，用双眼观察目镜，同时调节细调节器，直至细菌清晰 3. 根据需要调节显微镜亮度 2. 普通光学显微镜的维护 1.移动显微镜时，用右手持镜壁，左手托镜座，平端于胸前 2.油镜用毕后，要立即用擦镜纸擦去香柏油；再用滴有二甲苯的擦镜纸擦油镜头；最 后，用干净擦镜纸将镜头上的二甲苯擦去，以免损伤油镜头 3.镜头擦净后，降低接物镜并将其转成八字形，罩好镜罩放入柜内 4.做好使用记录 3．微生物知识 1．细菌按形态分类： 球菌：球形（包括双球菌、四联球菌、八叠球菌、葡萄球菌、链球菌等） 杆菌：杆状（包括单杆菌、双杆菌、链杆菌、分枝杆菌、双歧杆菌等） 螺旋菌：螺旋状（包括螺旋菌、弧菌等） 2．细菌的基本结构 细胞壁、细胞膜、细胞质、核质、核蛋白体 3．细菌的特殊结构 荚膜：如肺炎双球菌 鞭毛：又分单毛菌、双毛菌、丛毛菌、周毛菌。如：变形杆菌为周毛菌 菌毛 芽胞：如破伤风梭菌、炭疽芽胞杆菌、肉毒梭菌 4．微生物是一切肉眼看不见或看不清的微小生物的总称，包括原核类、真核类和非细胞类。 原核类：细菌、放线菌、蓝藻、衣原体、支原体、立克次氏体 真核类：真菌、原生动物、显微藻类 非细胞类：病毒、亚病毒 5．真菌 单细胞：圆形、芽生孢子。如：酵母菌
第二单元细菌的形态与结构 第一节细菌的形态 一、细菌大小的测量单位 微米（μm） 1μm = 1/1000mm。 二、细菌的形态 球菌（coccus）：直径0.8~1.2μm。呈双球状、链状、葡萄状等多种样式排列形式。 杆菌（bacillus）：长度：0.6-10μm不等，直径：0.3~1.0μm。 螺型菌（spiral bacterium）：菌体有数量不等的弯曲。 （1）弧菌（vibrio）：只有一个弯曲。如霍乱弧菌 （2）螺菌（spirillum）：菌体有数个弯曲。如鼠咬热螺菌 （3）螺杆菌：呈螺旋状弯曲。如幽门螺杆菌 （4）弯曲菌：呈U型、S型等。如空肠/结肠弯曲菌 第二节细菌的基本结构 一、细菌基本结构的构成 （一）细胞壁（cell wall）：包绕在细胞膜外一层坚韧膜状结构。厚10~80（nm） 化学组成：肽聚糖（peptidoglycan）（粘肽） 聚糖支架：N-乙酰胞壁酸、N-乙酰葡萄糖胺借助β-1，4糖苷键相互连接组成。 四肽侧链：与聚糖支架上的胞壁酸分子连接。 五肽交联桥：连接两个相邻的四肽侧链。 肽聚糖由聚糖支架与四肽侧链及五肽交联桥共同构成。 功能：保持菌体固有形态，保护细菌不受外界的低渗环境的破坏（维持菌体内外的渗透压）。革兰阳性菌细胞壁结构 革兰阴性菌细胞壁结构
革兰阳性细菌细胞壁特点： 1.肽聚糖含量丰富，层厚，15-50层，20~80nm 2.细胞壁中含有大量磷壁酸（teichoic acid） 3.四肽侧链与五肽交联桥相连，形成三维立体结构 革兰阴性细菌细胞壁特点： 1.肽聚糖含量少，层薄，1-3层,10~15nm 2.细胞壁中不含磷壁酸（teichoic acid） 3.缺少五肽交联桥，四肽侧链直接相链,形成二维网状结构 4.肽聚糖层外包绕外膜层：脂质双层、脂蛋白、脂多糖。 5. 脂多糖是革兰阴性细菌内毒素主要成分。 革兰阳性菌细胞壁结构
篇一：培养基的制备与灭菌实验报告 陕西师范大学远程教育学院 生物学实验报告 报告题目培养基的制备与灭菌 姓名刘伟 学号 专业生物科学 批次/层次 指导教师 学习中心培养基的制备与灭菌 一、目的要求 1. 掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。 2. 掌握培养基的配置原则和方法。 3. 掌握高压蒸汽灭菌的操作方法和注意事项。 二、基本原理 牛肉膏蛋白胨培养基： 是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供细菌生长繁殖之用。 高压蒸汽灭菌： 主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。将灭菌的物品放在一个密闭和加压的灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅内水沸腾而产生蒸汽。待蒸汽将锅内冷空气从排气阀中趋尽，关闭排气阀继续加热。此时蒸汽不溢出，压力增大，沸点升高，获得高于100℃的温度导致菌体蛋白凝固变性，而达到灭菌的目的。 三、实验材料 1. 药品：牛肉膏、蛋白胨、nacl、琼脂、1mol/l的naoh和hcl溶液。 2. 仪器及玻璃器皿：天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、三 角瓶、培养皿、玻璃漏斗等。 3. 其他物品：药匙、称量纸、ph试纸、记号笔、棉花等。 四、操作步骤 （一）玻璃器皿的洗涤和包装 1．玻璃器皿的洗涤 玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。将三角瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中．用毛刷刷洗，然后用自来水及蒸馏水冲净。移液管先用含有洗涤剂的水浸泡，再用自来水及蒸馏水冲洗。洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。 2．灭菌前玻璃器皿的包装 （1）培养皿的包扎：培养皿由一盖一底组成一套，可用报纸将几套培养皿包 成一包，或者将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内，加盖灭菌。包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。 （2）移液管的包扎：在移液管的上端塞入一小段棉花(勿用脱脂棉)，它的作 用是避免外界及口中杂菌进入管内，并防止菌液等吸入口中。塞入此小段棉花应距管口约0.5cm左右，棉花自身长度约1~1.5cm。塞棉花时．可用一外围拉直的曲别针、将少许棉花塞入管口内。棉花要塞得松紧适宜，吹时以能通气而又不使棉花滑下为准。 先将报纸裁成宽约5cm左右的长纸条，然后将已塞好棉花的移液管尖端放在长条报纸的一端，约成45℃角，折叠纸条包住尖端，用左手握住移液管身，有手将移液管压紧．在桌面上向前
细菌的形态与结构带 答案
第一章细菌的形态与结构 一、单5选1 1.用来测量细菌大小的单位是： A.pm B.mm C.μm D.nm E.cm 2.下列哪种结构不是细菌的基本结构： A.细胞壁 B.鞭毛 C.细胞膜 D.细胞质 E.核质 3.下列哪种结构不是细菌的特殊结构： A.鞭毛 B.芽胞 C.菌毛 D.细胞质 E.荚膜 4.革兰阳性菌细胞壁的成分是： A.脂蛋白 B.肽聚糖 C.几丁质 D.胆固醇 E.脂多糖 5.细菌细胞壁的主要功能是： A.生物合成 B维持细菌外形保护菌体 C.参与物质交换 D.呼吸作用 E.能量产生 6.革兰阳性菌细胞壁的特殊成分是： A.肽聚糖 B.几丁质 C.胆固醇 D.磷壁酸 E.脂多糖 7.革兰阴性菌细胞壁的特殊成分是： A.肽聚糖 B.磷壁酸 C.外膜 D.五肽交联桥 E.脂多糖 8.具有抗吞噬作用的细菌结构是： A.细胞壁 B.荚膜 C.芽胞 D.鞭毛 E.菌毛 9.普通菌毛是细菌的一种： A.细长波状的丝状物 B.运动器官 C.多糖质 D.可传递遗传物质的器官 E.黏附结构 10.抵抗力最强的细菌结构是：
A.芽胞 B.外膜 C.鞭毛 D.核糖体 E.细胞壁 11.细菌核质以外的遗传物质是： A.mRNA B.核蛋白体 C.质粒 D.性菌毛 E.异染颗粒 12.参与细菌呼吸、生物合成及分裂繁殖的结构是： A.菌毛 B.荚膜 C.鞭毛 D.中介体 E.胞浆膜 13.与细菌侵袭力有直接关系的结构是： A.质粒 B.异染颗粒 C.芽胞 D.中介体 E.荚膜 14.细菌L型的形成与以下哪种结构有关： A.中介体 B.细胞膜 C.细胞壁 D.细胞质 E.核质 15.细菌鞭毛的主要作用是： A.与运动有关 B.与致病力有关 C.与抵抗力有关 D.与分裂繁殖有关 E.与结合有关 16.溶菌酶的灭菌机制是： A.竞争肽聚糖合成中所需的转肽酶 B.与核蛋白体的小亚基结合 C.裂解肽聚糖骨架的β-1，4糖苷键 D.竞争性抑制叶酸的合成代谢 E.破坏细胞膜 17.青霉素抗菌的作用机制是： A.干扰细菌蛋白质的合成 B.破坏细胞壁中的肽聚糖结构 C.破坏细胞膜 D.抑制细菌的酶活性 E.抑制细菌的核算代谢 18.革兰染色所用试剂的顺序是： A.稀释复红→碘液→酒精→结晶紫 B.结晶紫→酒精→碘液→稀释复红 C.结晶紫→碘液→酒精→稀释复红 D.稀释复红→酒精→结晶紫→碘液
细菌形态结构观察实验报告精品篇 生物学实验报告 报告题目培养基的制备与灭菌 姓名刘伟 学号055656565 指导教师:xxxxxx 学习中心培养基的制备与灭菌 一、目的要求 1. 掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。 2. 掌握培养基的配置原则和方法。 3. 掌握高压蒸汽灭菌的操作方法和注意事项。 二、基本原理 牛肉膏蛋白胨培养基： 是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供细菌生长繁殖之用。 高压蒸汽灭菌： 主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。将灭菌的物品放在一个密闭和加压的灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅内水沸腾而产生蒸汽。待蒸汽将锅内冷空气从排气阀中趋尽，关闭排气阀继续加热。此时蒸汽不溢出，压力增大，沸点升高，获得高于100℃的温度导致菌体蛋白凝固变性，而达到灭菌的目的。 三、实验材料 1. 药品：牛肉膏、蛋白胨、nacl、琼脂、1mol/l的naoh和hcl溶液。 2. 仪器及玻璃器皿：天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、三 角瓶、培养皿、玻璃漏斗等。 3. 其他物品：药匙、称量纸、ph试纸、记号笔、棉花等。 四、操作步骤 （一）玻璃器皿的洗涤和包装 1．玻璃器皿的洗涤 玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。将三角瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中．用毛刷刷洗，然后用自来水及蒸馏水冲净。移液管先用含有洗涤剂的水浸泡，再用自来水及蒸馏水冲洗。洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。 2．灭菌前玻璃器皿的包装 （1）培养皿的包扎：培养皿由一盖一底组成一套，可用报纸将几套培养皿包 成一包，或者将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内，加盖灭菌。包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。 （2）移液管的包扎：在移液管的上端塞入一小段棉花(勿用脱脂棉)，它的作 用是避免外界及口中杂菌进入管内，并防止菌液等吸入口中。塞入此小段棉花应距管口约0.5cm左右，棉花自身长度约1~1.5cm。塞棉花时．可用一外围拉直的曲别针、将少许棉花塞入管口内。棉花要塞得松紧适宜，吹时以能通气而又不使棉花滑下为准。 先将报纸裁成宽约5cm左右的长纸条，然后将已塞好棉花的移液管尖端放在长条报纸的一端，约成45℃角，折叠纸条包住尖端，用左手握住移液管身，有手将移液管压紧．在桌面
实验一细菌形态观察(一) （基础实验，4学时） 一、实验目的和要求 1.掌握显微镜油镜的使用 2.验证三种类型细菌的形态，认识细菌的基本形态。 二、实验原理 普通光学显微镜由机械装置和光学系统两大部分组成，物镜的性能直接影响显微镜的分辨率。几种物镜中，油镜的放大倍数最大，对微生物学研究最为重要。使用油镜需在载玻片与镜头之间加滴镜油，主要有如下原因： 1.增加照明亮度； 2.增加显微镜的分辨率 细菌的形态微小（以μm计），个体基本形态为球形、杆状和螺旋形，其中以杆状细菌最为常见。 三、实验用具 光学显微镜、擦镜纸、细菌标本、滤纸、液体石蜡； 枯草杆菌、四联球菌、大肠杆菌、变形杆菌、细菌三型、八叠球菌等细菌的永久染色装片 四、实验步骤 （一）调试显微镜 显微镜左前方，镜罩叠放在右上方，插电源。聚光器上提至最上方，打开光圈；开电源，调光源。 （二）观察 1、放置标本于载物台上，用粗调节器上升载物台至最高位置。 2、低倍镜下，用粗调节器找到要观察的样品区域 3、换高倍镜，用细调节器找到要观察的样品区域 4、移开高倍镜，滴液体石蜡，从侧方注视，将油镜缓慢转至正下方，调至物像清晰，绘图 5、提起镜筒，换染色装片，观察，绘图。 （三）用后显微镜清理 1、观察后下降载物台，取下载玻片，将油镜转出，擦镜头3～5次。 2、将光线调至最小，关闭电源和光圈，下降聚光器。将显微镜各部分还原。 五、注意事项 1、使用油镜必须按先用低倍镜和高倍镜观察，再用油镜观察的程序操作。 2、转换镜头时，一定要从侧面注视，切忌用眼睛对着目镜，以免压碎玻片而损坏镜头。 六、作业 绘出观察到的几种细菌的个体形态视野图，注明总放大倍数。
实验七、细菌的显微观察（形态、大小） 一、实验目的和内容 目的：1.了解油镜的原理和使用方法。 2.掌握细菌形态观察的基本方法。 3.了解细菌的基本形态特征。 内容：1.学习显微镜（油镜）的使用方法。 2.学习细菌涂片和简单染色法。 3.用油镜观察枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌染色装片。 二、实验原理 油镜的放大倍数可达100Χ，但其焦距和直径很小，需要很大的光照强度。由于空气和玻璃的折射率不同，如果是镜与装片之间介质为空气时会发生折射，降低视野的照明度，而香柏油的折射率与玻璃相近，光线不会发生折射从而提高视野的照明度和分辨率。 单染色是用单一染色剂对细菌进行染色的方法。由于细菌在中性、弱酸性或碱性溶液中带负电荷，碱性染料在电离后染色离子带正电荷，因此使细菌着色。常用的染料有美篮、碱性复红、结晶紫、孔雀绿等。 三、实验材料和用具 （1）菌种：培养12-16h的苏云金杆菌（Bacillus thuringiensis）或者枯草杆菌（Bacillus subtilis），培养24小时的青枯假单胞杆菌。 （2）染色液和试剂：吕氏碱性美蓝染液(或草酸铵结晶紫染液)，石炭酸复红染液、结晶紫、鲁哥尔碘液、95 %酒精、复染剂（蕃红）、二甲苯、香柏油。 （3）器材：废液缸、洗瓶、载玻片、接种杯、酒精灯、打火机、记号笔、擦镜纸、显微镜。 四、实验内容及步骤 1、实验内容： （1）细菌单染色：分别制备标号为1、2及同学自己分离的细菌玻片并染色； （2）口腔内微生物形态观察 2、实验步骤： 清洗载玻片中心加半滴水无菌操作取菌涂布于水中（1cm左右）干燥火焰固定染色（1min）水洗吸水晾干显微镜下观察、记录图示/描述各菌形状 五、实验小结
第1章细菌的形态与结构 [各型试题] 一、名词解释 1、荚膜 2、芽胞 3、质粒 4、鞭毛 5、中介体 6、菌毛 7、cell wall of bacterium 8、lipopolysaccharide(LPS) 9、L-form of bacterium 10、Gram staining 二、填空 1、细菌的结构中与革兰染色性和致病性有关是。 2、细菌的特殊结构有、、和。 3、细菌的遗传物质有和。 4、经革兰染色后，被染成紫色的是菌，被染成红色的是。 5、细菌的基本形态有球形菌，和。 6、螺形菌的菌体弯曲螺旋状，致病性螺形菌主要包括，螺菌，弯曲菌和。 7、细菌的基本结构依次是，，细胞质和核质（拟核）。 8、革兰氏阴性菌细胞壁的脂多糖即内毒素包括类脂A，和3种成分。 9、革兰氏阳性菌细胞的主要结构肽聚糖，是由，和五肽交联桥3部分组成。 10、按细菌鞭毛的数目和排列方式，将鞭毛菌分为单毛菌，，和周毛菌4种。 三、选择题 A型题 1、细菌细胞壁的主要功能是： A、生物合成 B、维持细菌的外形 C、参与物质交换 D、呼吸作用 E、能量产生 2、具有抗吞噬作用的细菌结构是:
A、细胞壁 B、荚膜 C、芽胞 D、鞭毛 E、菌毛 3、革兰染色所用染液的顺序是: A、稀释复红-碘液-乙醇-结晶紫 B、结晶紫-乙醇-碘液-稀释复红 C、结晶紫-碘液-乙醇-稀释复红 D、稀释复红-乙醇-结晶紫-碘液 E、稀释复红-结晶紫-碘液乙醇 4、细菌的芽胞: A、是细菌的繁殖形式 B、是细菌的有性遗传物质 C、仅在肠杆菌科出现 D、通常是在缺氧条件下形成 E、是细菌在不利环境条件下形成有抗性的休眠体 5、与内毒素有关的细菌结构是: A、外膜 B、核膜 C、线粒体膜 D、荚膜 E、细胞膜 6、芽胞与细菌有关的特性是: A、抗吞噬作用 B、产生毒素 C、耐热性 D、粘附于感染部位 E、侵袭力 7、无细胞壁结构的微生物是: A、革兰阴性菌 B、真菌 C、支原体 D、立克次体 E、衣原体 8、不属于细菌基本结构的是: A、鞭毛 B、细胞质 C、细胞膜 D、核质（拟核） E、细胞壁 9、内毒素的主要成分为: A、肽聚糖 B、蛋白质 C、鞭毛 D、核酸 E、脂多糖 10、关于细菌L型，错误的说法是: A、主要是由肽聚糖结构的缺陷引起 B、可在体外试验中形成 C、呈多形性E、失去产生毒素的能力而使其致病性减弱 11、细菌大小的测量单位是： A、cm B、mm C、um D、毫微米 E、微微米
实验一细菌的形态结构观察及显微镜油镜的使用 【目的和要求】 1．熟悉微生物实验室规则并xx。 2．掌握细菌基本形态和特殊结构的观察方法。 3．掌握光学显微镜油镜的使用和维护方法，了解荧光显微镜和暗视野显微镜的构造和使用方法。 【试剂与器材】 1．示教片：各种球菌、杆菌、弧菌、荚膜、鞭毛、芽胞的示教片。 2．器材及其他：光学显微镜、载玻片、擦镜纸、香柏油、脱油剂等。 【实验内容】 一、细菌基本形态和特殊构造的观察 1．细菌的基本形态（各种球菌、杆菌、弧菌等） 观察要点：注意细菌的染色性、相对大小、形状及排列方式。 2．特殊结构的观察（荚膜、芽胞、鞭毛） 观察要点：注意这些特殊结构的大小、形状及其在菌体中的位置，均有助于细菌的鉴定。 二、光学xx油镜的使用 1．光学xx的构造 光学显微镜是观察细菌形态最常用的一种仪器，其构造分为机械部分和光学部分，机械部分包括：镜座、镜臂、载物台、镜筒、镜头转换器、调焦装置等；光学部分包括：接物镜、接目镜、反光镜、聚光器、光圈等（见图1-1）。 图1-1光学xx的构造
显微镜的接物镜有低倍镜、高倍镜、油镜三种，放大倍数依次增高，其识别 方法为： （1）低倍镜：镜头标志为10×或，镜头最短，其上常刻有黄色环圈。 （2）高倍镜：镜头标志为40×或，镜头较长，其上常刻有蓝色环圈。 （3）油镜：镜头标志为100×或，镜头最长，其上常刻有白色环圈，或“oil”字样。 2．油镜的使用原理 图1-2xx油镜的使用原理 油镜的放大倍数高而透镜很小，自标本片透过的光线，因玻片和空气的折光率不同（玻璃n=1.52，空气n=1.0），部分光线经载玻片进入空气后发生折射，不能进入接物镜，致使射入光线较少，物象不清晰。在油镜和载玻片之间滴加和玻璃折光率相近的香柏油（n=1.515），则使进入油镜的光线增多，视野光亮度增强，物象清晰（见图1-2）。 3．使用方法 （1）采光：使用显微镜时必须端坐，将显微镜放在胸前适当位置。将低倍镜转到中央并对准下面的聚光器，打开光圈，转动反光镜，使光线集中于聚光器（以灯光为光源时，使用凹面反光镜，以自然光为光源时用平面反光镜）。根据所观察的标本，通过升降聚光器和缩放光圈以获得最佳光度。当用低倍镜或高倍镜观察时，应适当缩小光圈，下降聚光器；当用油镜观察时，光线宜强，应把光圈完全打开，并将聚光器上升到最高位置。 （2）低倍镜调焦：将欲观察的标本置载物台上，用弹簧夹和推进器固定，将待检部位移至视野正中央，上升载物台至不能升高为止。用左眼观察接目镜，缓慢调节粗调节器，使载物台下降，待看到模糊的图像时，再调节细调节器，直至看到清晰的图像为止。
一、名词解释 1.微生物 2.微生物学 3.医学微生物学 4. 荚膜 5.细胞壁 6. 鞭毛 10. 芽胞11. 细菌L型12. 菌落 二、填空题： 1.医学微生物包括、和三大部分 2.原核细胞型微生物包括、、、、、，共六类微生物。 3.病毒必须在内才能增殖，为型微生物。 4.正常菌群对人体具有、、和等作用。 5.测量细菌大小的单位是。 6.细菌的基本形态有、和。 7.细菌细胞内的遗传物质有和两种，其中不是细菌生命活动所必需的。 8.细菌的菌毛有和两种，前者与有关，后者具有作用。 9.经革兰染液染色后，被染成紫色的是菌，被染成红色的是菌。 10.细菌的特殊结构有、、和。 11.革兰阴性菌细胞壁的脂多糖包括、和3种成分。 12.革兰阴性菌细胞壁的肽聚糖是由、构成。 13. 革兰阳性菌细胞壁的主要结构肽聚糖，是由、和构成。 14. 固体培养基是在液体培养基中加入，加热溶化经冷却凝固后即成当加入时，即成半固体培养基。 15.细菌的繁殖方式是绝大多数细菌繁殖一代用时为，而结核杆菌繁殖一代用时为。 16.半固体培养基多用于检测细菌。 17.根据菌落的特点可将菌落分为光滑型菌落、和。 18. 细菌色素分为和两种。 19．细菌生长繁殖的条件包括充足的、适宜的、合适的酸碱度和必需的气体环境。 20．大多数致病菌生长的最适PH值为，最适温度为，而结核杆菌生长的最适PH值为，霍乱弧菌生长的最适PH值为。 21．细菌群体生长的生长曲线可分为、、和。四个时期，细菌的形态、染色、生理等性状均较典型的是期。 22. 培养基按其用途不同可分为、、、、。 三、单项型选择题 1. 下列描述的微生物特征中，不是所有微生物共同特征的是（） A.个体微小 B.分布广泛 C.种类繁多 D.可无致病性 E.只能在活细胞内生长繁殖 2. 不属于原核细胞型的微生物是（） A.螺旋体 B.放线菌
第一章细菌的形态与结构 一、单5选1 1.用来测量细菌大小的单位是： A.pm B.mm C.μm D.nm E.cm 2.下列哪种结构不是细菌的基本结构： A.细胞壁 B.鞭毛 C.细胞膜 D.细胞质 E.核质 3.下列哪种结构不是细菌的特殊结构： A.鞭毛 B.芽胞 C.菌毛 D.细胞质 E.荚膜 4.革兰阳性菌细胞壁的成分是： A.脂蛋白 B.肽聚糖 C.几丁质 D.胆固醇 E.脂多糖 5.细菌细胞壁的主要功能是： A.生物合成 B维持细菌外形保护菌体 C.参与物质交换 D.呼吸作用 E.能量产生 6.革兰阳性菌细胞壁的特殊成分是： A.肽聚糖 B.几丁质 C.胆固醇 D.磷壁酸 E.脂多糖 7.革兰阴性菌细胞壁的特殊成分是： A.肽聚糖 B.磷壁酸 C.外膜 D.五肽交联桥 E.脂多糖 8.具有抗吞噬作用的细菌结构是： A.细胞壁 B.荚膜 C.芽胞 D.鞭毛 E.菌毛 9.普通菌毛是细菌的一种： A.细长波状的丝状物 B.运动器官 C.多糖质 D.可传递遗传物质的器官 E.黏附结构 10.抵抗力最强的细菌结构是： A.芽胞 B.外膜 C.鞭毛 D.核糖体 E.细胞壁 11.细菌核质以外的遗传物质是： A.mRNA B.核蛋白体 C.质粒 D.性菌毛 E.异染颗粒 12.参与细菌呼吸、生物合成及分裂繁殖的结构是： A.菌毛 B.荚膜 C.鞭毛 D.中介体 E.胞浆膜 13.与细菌侵袭力有直接关系的结构是：
A.质粒 B.异染颗粒 C.芽胞 D.中介体 E.荚膜 14.细菌L型的形成与以下哪种结构有关： A.中介体 B.细胞膜 C.细胞壁 D.细胞质 E.核质 15.细菌鞭毛的主要作用是： A.与运动有关 B.与致病力有关 C.与抵抗力有关 D.与分裂繁殖有关 E.与结合有关 16.溶菌酶的灭菌机制是： A.竞争肽聚糖合成中所需的转肽酶 B.与核蛋白体的小亚基结合 C.裂解肽聚糖骨架的β-1，4糖苷键 D.竞争性抑制叶酸的合成代谢 E.破坏细胞膜 17.青霉素抗菌的作用机制是： A.干扰细菌蛋白质的合成 B.破坏细胞壁中的肽聚糖结构 C.破坏细胞膜 D.抑制细菌的酶活性 E.抑制细菌的核算代谢 18.革兰染色所用试剂的顺序是： A.稀释复红→碘液→酒精→结晶紫 B.结晶紫→酒精→碘液→稀释复红 C.结晶紫→碘液→酒精→稀释复红 D.稀释复红→酒精→结晶紫→碘液 E.稀释复红→结晶紫→碘液→酒精 19.关于细菌L型的描述，错误的一项是： A.呈高度多样性，G-菌 B.在固体培养基上，可形成“油煎蛋”样菌落 C.分离培养需用低渗高琼脂培养基 D.去除抑制后，可恢复原有形态 E.是细胞壁缺陷仍然可以生长繁殖，具有致病力的细菌 20.细菌芽胞的特点是： A.抗吞噬作用 B.毒素活性 C.耐高温 D.黏附作用 E.侵袭力 21.细菌芽胞与高度耐热有关的特有化学组分是： A.核酸 B.肽聚糖 C.磷脂 D.多糖 E.吡啶二羧酸盐 22.构成细菌H抗原的结构是： A.鞭毛 B.荚膜 C.细胞壁 D.芽胞 E.菌毛 23.检测细菌具有鞭毛的培养方法是：
实验二细菌的染色及形态观察 一、目的要求 1、了解细菌染色的基本原理。 2、掌握细菌的简单染、革兰氏染色及其他染色方法。 3、观察和识别细菌的形态及细菌细胞的特殊结构。 二、实验说明 细菌菌体微小、而且折光率低，在显微镜下特别是在油浸物镜下几乎与背景无反差，很难看清楚，如将其染色，使折光率增大，便容易观察。由于菌体的性质及各部分对某些染料的着色性不同，因此可以利用不同的染色方法来区别不同的细菌及其结构。 用于细菌染色的染色剂是苯环上含有发色基团和助色基团的化合物。发色基团使化合物本身具有染色之能力，助色基团有电离特性，可以于被染物结合，使被染物着色。 染色剂有三种：酸性染色剂（电离后分子带负电荷）；碱性染色剂（电离后分子带电荷）；复合染色剂（在电离后分子不带电荷，故也称为中性染色剂）。酸性染色剂主要用于染细胞质；碱性染色剂主要用于染核和异染颗粒等细胞结构；复合染色剂主要用来染螺旋体和立克次氏体。 三、实验材料 1、显微镜、香柏油、二甲苯、擦镜纸。 2、酒精灯、接种环、载玻片。 3、石炭酸复红染色液、革兰氏染色液、荚膜染色液、鞭毛染色液（配方见附录）。
四、方法步骤 （一）简单染色法 步骤：涂片干燥固定染色水洗干燥镜检。 1、涂片在干净的载玻片中央加一滴蒸馏水，以无菌操作法，从斜面上挑取少量菌种，在载玻片上和水混合后，涂成一均匀薄层。 2、干燥固定涂片让其在空气中自然干燥，有时为使其干燥得快点，也可在酒精灯上加温，但勿贤紧靠火焰。 3、固定待涂片干燥徨，手持载玻片一端，有菌膜的一面向上，在酒精灯火焰上通过几次（用手背触载玻片背面，以不烫手为宜），待冷却后，再加染料。 4、染色玻片置于水平位置。加石炭酸复红液于菌膜部位。染1-2min。 5、水洗倾去染液，斜置玻片，用很细水流的自来水冲洗（切勿使水流直接冲刷在菌膜处），直至洗下水呈无色为止。 6、干燥自然干燥或用吸水纸吸干。 7、镜检。 （二）革兰氏染色法 步骤：涂片干燥固定结晶紫染色水洗吸干 95%酒精脱色水洗吸干蕃红复染水洗 干燥镜检。 1、涂片同简单染色法 2、干燥同简单染色法。
实验十细菌的形态观察（3学时） 一、实验目的、要求 要求学生掌握显微镜油镜的正确使用及保养方法；认识细菌的形态、基本构造和特殊构造。 二、实验原理 一般显微镜有几个放大倍数不同的物镜，例如4×、10×为低倍物镜，40×为高倍物镜，这类物镜与标本之间不需要加任何液体介质进行观察的称为干燥物镜；而100×的称为油浸物镜，使用时需在标本和物镜之间加入折射率大于1的液体，如香柏油(折射率为1.515)作为介质，才能符合该物镜数值孔径(N?A=nsin α/2,式中的n即为介质的折射率，可见其与数值孔径正比例关系；α为镜口角)本身对介质折射率的需求。而数值孔径又与显微镜的分辩率成正比例关系，即数值孔径越大，公式d=0.61λ/N.A (d为分辨距离，单位nm；λ为照明光波长，单位nm；N.A为数值孔径）中的d越小，分辩率则越高。 细菌的形态一般有三种主要类型，即球菌、杆菌、螺旋菌，有些细菌有荚膜、鞭毛、芽孢、菌毛等特殊结构。 三、使用仪器、材料 大肠杆菌、葡萄球菌、枯草杆菌、枯草杆菌（示芽孢）、醋酸杆菌、金黄色葡萄球菌、四联球菌、八叠球菌等的制片，香柏油、二甲苯，显微镜、擦镜纸。 四、实验步骤 一、油镜的使用方法 1、先用低倍物镜观察标本枯草芽孢杆菌或金黄色葡萄球菌的概况。 2、把所要观察的部分移在视野中央，然后更换高倍物镜。 3、把载物台下降(或镜筒上升)约1.5 cm，再把油镜转到工作位置。 4、在盖玻片上所要观察的位置滴一小滴香柏油，细心拧动粗调螺旋，使载物台慢慢上升(或镜筒慢慢下降)。这时要从侧面仔细观察物镜前端与标本之间的距离，先使物镜前端与油滴接触，然后再慢慢上升载物台(或慢慢下降镜筒)，至物镜前端接近而没有碰到盖玻片为止。这步操作要特别小心，防止油镜压碎标本或损坏油镜(油镜的工作距离为0.2 mm)。 5、眼睛从目镜中观察，拧动细调螺旋，使载物台慢慢下降(或镜筒慢慢上升)
练习一细菌的形态与结构 一、填空题 1.细菌的基本形态有球菌、杆菌、螺形菌 2.细菌的基本结构有细胞壁、细胞膜、细胞浆和核质。 3.细菌的特殊结构有鞭毛、荚膜、芽胞和菌毛。 4.细菌的运动器官是鞭毛，其化学成分主要是蛋白质。 5.螺形菌根据菌体的弯曲可分为.弧菌、螺菌两类。 6. 消毒灭菌时，常以杀死芽胞作为判断灭菌是否彻底的指标。 7. 细菌L型主要是由于细菌的细胞壁缺陷而形成的。 8. 青霉素和溶菌酶对革兰阳性菌有明显的杀菌作用。 9. 在适宜的环境中，一个芽胞发芽长成一个繁殖体。 二、单项选择题 3.细菌的基本形态分为三类，这三类是（A ） A.球菌、杆菌和螺形菌 B.球菌、杆菌和螺菌 C.球菌、杆菌和弧菌 D.球菌、杆菌和球杆菌 E.球菌、弧菌和螺菌 4.细菌对外界理化因素抵抗力最强的特殊结构是（C ） A.鞭毛 B.荚膜 C.芽胞 D.菌毛 E.以上都是 5.细菌的芽胞不是细菌的繁殖体，是因为（E ） A.一个细菌只有一个芽胞 B.细菌的休眠状态 C.芽胞对外界的抵抗力强 D.不是所有细菌都有芽胞 E.一个芽胞经发育只能生成一个菌体 7.检查细菌形态最常用的方法是（C ） A.悬滴法 B.暗视野显微镜观察 C.革兰染色法 D.特殊染色法 E.抗酸染色法 8.需电镜下才能见到的结构是（D） A.鞭毛 B.荚膜 C.芽胞 D.菌毛 E.以上都是 10. 青霉素的杀菌机理是（B ） A.干扰细菌脂多糖的合成 B.抑制细菌肽聚糖的合成 C.抑制细菌蛋白质的合成 D.干扰细菌磷壁酸的合成 E.干扰细菌DNA的复制 11.下列哪项不是原核细胞型微生物（E ） A.细菌 B.支原体 C.衣原体 D.立克次体 E.真菌 12.细菌大小的测量单位是（C） A.cm B.mm C.μm D.nm E.m 13.菌体较坚硬有数个弯曲，应为（C ） A.球菌 B.杆菌 C.螺菌 D.弧菌 E.螺形菌
细菌形态结构观察实验报告 其结构分为基本结构和特殊结构. 基本结构是细胞不变部分,每个细胞都有,如细胞壁、膜、核. 特殊结构是细胞可变部分,不是每个都有,如鞭毛、荚膜、芽孢. 1、细胞壁cell wall：位于细胞表面,较坚硬,略具弹性结构. 功能：1）维持细胞外形；2）保护细胞免受机械损伤和渗透压危害；3）鞭毛运动支点；4）正常细胞分裂必需；5）一定的屏障作用；6）噬菌体受体位点所在.另外与细菌的抗原性、致病性有关. 2、细胞膜cell membrane 在细胞壁与细胞质之间的一层柔软而富有弹性的半透性膜.厚7-8nm. 化学组成：蛋白和磷脂,蛋白含量高达75%,种类也多.膜不含甾醇类. 功能：1）高度选择透性膜,物质运输：2）渗透屏障,维持正常渗透压；3）重要代谢活动中心；4）与壁、荚膜合成有关；5）鞭毛着生点,供运动能量. 3、间体mesosome(中质体） 细胞膜内陷形成. 功能：1）拟线粒体,呼吸酶系发达. 2）与壁合成,核分裂,芽孢形成有关. 4、细胞核nuclear body 核质体
原核无明显核,一反差弱的核区. 特点：无核膜、核仁、固定形态,结构简单,细胞分裂前核分裂.一般单倍体. 成分：DNA：环状双链,超线圈结构,负电荷被镁离子、有机碱（精胺、腐胺）所中和. 与真核区别： 5、核糖体ribosome RS 核糖核蛋白的颗粒状结构,RNA+蛋白. 原核：游离态、多聚核糖体,70S 真核：游离态、结合内质网上,70、80S 多聚核糖体：一条mRNA与一定数目的单个RS结合而成. 功能： 6、细胞质及内含物 是无色透明胶状物,原核与真核不同. 主要成分：水、蛋白、核酸、脂类及少量糖和无机盐.富含核糖核酸. 不同细菌细胞内,含不同内含物,是细胞的贮藏物质或代谢产物. （二）特殊结构 1、荚膜capsule：某些细菌细胞壁外面覆盖着一层疏松透明粘性物质.厚度不同,名称不同. 折光率低,负染法观察. 成分：90%以上为水,余为多糖（肽）.
《细菌》教案 虞城县第一中等专业学校林增新 2014-12-25 教学内容分析 本节是模块三《微生物基础》中比较重要的一节，通过讲述细菌的形态结构、生殖方式和细菌有关的基础知识。阐述了细菌是微生物中数量和种类较多的一类，由于观察的困难了解甚少，只好借助图片进行认识和掌握。本节知识为前面的药理学和后面的防疫学起到一个桥梁作用，通过对细菌的细胞壁了解为用药提供依据，通过对芽孢功能的掌握为消毒效果的评价提供标准。 学习情况分析 学生在初中生物已对细菌的大小、形态、结构有所了解，那是站在生物生理学角度掌握的，但细菌的结构特点对动物危害性讲述的不多。学习起来有些困难，教学中通过图片和切换幻灯片进行直观认识较容易理解，通过发挥学生的自主学习和合作学习，让学生明白其一般结构中细胞壁的特点，让细菌分为两类，革兰氏阳性菌和革兰氏阳性菌。对芽孢的功能认识是评价消毒剂效果的标准。 教学目标 1 了解细菌的大小及排列，掌握细菌的形态和结构。 2掌握细菌的营养、生长繁殖和新陈代谢。 3了解细菌的致病性。 教学重点 （1）细菌的形态结构 （2）细菌生长繁殖的条件 教学难点 （1）细菌的特殊结构 （2）细菌的代谢产物 教学方法 教法指导学生阅读和交流，带问题阅读思考和交流，运用多媒体手段增加感性认识，提供丰富信息，多对学生评价激励。 学法自主学习、合作学习根据提示、阅读、思考、交流大胆质疑。
课时安排 共三课时 教学过程 第一课时细菌的形态结构 情境导入 通过切换一张幻灯片，描述大家在生活中都离不开的一种工具“手机”，手机上存在大量的细菌，每平方厘米有12万个来引入这节课。然后让学生打开课本113页我们今天来认识一下细菌。课下我们已经预习了本节内容、今天我们来共同学习一下，首先我们进入本节课第一个模块，打出一张幻灯片。 模块一自学探究 切换一张幻灯片，在上面布置本节内容（幻灯片上显示出）1.细菌的大小是如何测量的？2细菌基本形态有哪些？依其形态又把细菌分为几种名称。3细菌的繁殖方式造成各种细菌怎样的排列。4细菌一般结构有哪些，各有何特点。5细菌的特殊结构有哪些？它们的定义是如何描述的？它们各有何作用? 切换幻灯片后让同学们打开课，然后带着老师布置的问题本进行认真阅读，自学探究开始。这时老师要走下讲台巡视，看一下同学们掌握情况，对个别差的学生要进行辅导让其找到答案，在此要告诉其同学们，要在书本上找到答案并做标记。大部分同学都找到答案后然后进入第二个模块，切换一张幻灯片。 模块二合作探究 个人自学后切换出一张新幻灯片，在上面布置内容，（幻灯片上显示出）1.细菌的大小是如何测量的？2基本形态有哪些？依其形态又把细菌分为几种名称。3细菌的繁殖方式造成细菌的怎么样的排列。4一般结构有哪些有何特点。5细菌的特殊结构有哪些？它们的定义是如何描述的？它们各有何作用? 个人自学后，然后让同学们分成五个小组分别进行讨论学习，把大家认为一致的答案做标记，等待老师提问，这是老师进行第二次巡视看一下各小组的情况，每个小组都完成了。老师进行提问，把每一个问题放到一个小组让其进行回答，回答后让其他小组来评，如有异议让其纠正，达到大家认为一致的答案。这个环节是本节课的关键一定要让学
实验一微生物形态观察 一、实验目的 1．巩固显微镜的使用方法，重点练习油镜的使用； 2．认识细菌、放线菌和霉菌的基本形态特征和特殊结构； 3．练习手绘微生物图片。 二、实验原理 1．细菌基本形态 细菌是单细胞生物，一个细胞就是一个个体。细菌的基本形态有3种：球状，杆状和螺旋状，分别称为球菌、杆菌、螺旋菌。球菌根据细胞分裂后排列方式的不同分为单球菌、双球菌、四联球菌、八叠球菌、链球菌、葡萄球菌等。杆菌分为单杆菌、双杆菌、链杆菌等，是细菌中种类最多的。螺旋菌分为弧菌和螺菌。 除此之外，还有一些特殊形态的细菌。 2．细菌特殊结构 细菌的特殊结构包括荚膜、鞭毛、菌毛、芽孢等。荚膜是某些细菌向细胞壁表面分泌的一层厚度不定的胶状物质，具有抗干燥、抗吞噬和附着作用。鞭毛是某些细菌表面着生的1至数根由细胞内伸出的细长、波曲的丝状体，具有运动功能，在菌体上的着生位置、数目因菌种而异。菌毛（又称纤毛）是在细菌体表的比鞭毛更细、更短、直硬，且数量较多的丝状体，与细菌吸附或性结合有关。芽孢又称内生孢子，是某些细菌生长到一定阶段，在菌体内部产生的圆形、椭圆形或圆柱形休眠体，具有极强的抗热、抗辐射、抗化学药物和抗静水压等特性。 3．真菌的结构特征 菌丝是构成真菌营养体的基本单位，是一种管状细丝。可伸长并产生许多分枝，许多分枝的菌丝相互交织在一起，就叫菌丝体。根据菌丝中是否存在隔膜可分为无隔膜菌丝和有隔膜菌丝。为适应不同的环境条件和更有效地摄取营养满足生长发育地需要，许多真菌的菌丝可以分化成一些特殊的形态，这些特化的形态称为菌丝变态。比如吸器、假根、子实体。 4．放线菌的结构特征 放线菌的形态比细菌复杂些，但仍属于单细胞生物。链霉菌是典型的放线菌，其细胞呈丝状分枝，菌丝直径很小，在营养生长阶段，菌丝内无隔，故一般呈多核的细胞状态。当其孢子落在固体基质表面并发芽后，就不断伸长、分支并以放射状向基质表面和内层扩展，形成大量色浅、较细的具有吸收营养和排泄代谢废物功能的基内菌丝，同时在其上又不断向空间方向分化出颜色较深、直径较粗的分枝菌丝，这就是气生菌丝。不久，大部分气生菌丝成熟，分化成孢子丝，并通过横隔分裂方式，产生成串的分生孢子。 5．微生物菌落 菌落是在固体培养基上（内）以母细胞为中心的一堆肉眼可见的、有一定形态和构造等特征的子细胞集团。细菌的菌落有其自己的特征，一般呈现湿润、较光滑、较透明、较粘稠、易调取、质地均匀以及菌落正反面或边缘与中央部位的颜色一致等。不同形态、生理类型的细菌，在其菌落形态、构造等特征上也有许多明显的反映。 三、实验器材 普通光学显微镜（Nikon YS-100），镜油，镜头纸，擦镜液；
实验一微生物的形态和结构观察 一、实验目的 1、掌握普通光学显微镜的正确使用方法； 2、掌握革兰氏染色法的原理及操作步骤； 3、在显微镜下观察细菌、酵母菌等的个体形态和结构。 二、基本原理 普通光学显微镜是由一组光学系统和支持及调节光学系统的机械系统组成。 普通光学显微镜是由一组光学系统和支持及调节光学系统的机械系统组成。 机械系统包括镜座、镜臂、镜台、物镜转换器、镜筒及调节器等。镜座是显微镜的基座，使显微镜能平稳地放置在桌子上；镜台又称载物台，是放置标本的地方，镜台上有压片夹用以固定被检标本，标本移动器可使标本前后和左右移动，有的标本移动器带有游标尺，可指明标本所在位置；镜臂用以支持镜筒，也是移动显微镜时手握的部位；镜筒是连接目镜
和物镜的金属筒，镜筒上端插入目镜，下端与物镜转换器相接；物镜转换器安装在镜筒的下端，其上装有3~5个不同放大倍数的物镜，可以通过转动物镜转换器随意选用合适的物镜；调节器安装在镜臂基部，是调节物镜与被检标本距离的装置，通过调节粗、细螺旋便可清晰地观察到标本。 光学系统主要包括目镜、物镜、聚光镜和反光镜等，较好的显微镜有内光源。目镜一般由两块透镜组成，不同的目镜上刻有5×、10×和15×等字符以表示该目镜的放大倍数；物镜是显微镜中很重要的光学部件，由多块透镜组成，根据物镜的放大倍数和使用方法的不同，分为低倍物镜（4×、10×和20×）、高倍物镜（40×和45×）和油镜（90×、95×和100×）等。被检物体经显微镜的目镜和物镜放大后的总放大倍数是物镜的放大倍数和目镜放大倍数的乘积。 形态观察主要包括群体形态和个体形态观察两方面。细菌个体微小，且较透明，必须借助染色法使菌体着色，显示出细菌的一般形态结构及特殊结构，在显微镜下用油镜进行观察。根据细菌个体形态观察的不同要求，可将染色分为简单染色、鉴别染色和特殊染色。本实验主要观察微生物的个体形态，掌握在细菌学中广泛使用的重要鉴别染色法——革兰氏染色法；通过此染色，可将细菌鉴别为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G-）两大类。 革兰氏染色有着重要的理论与实践意义，其染色原理是利用细菌的细胞壁组成成分和结构的不同。革兰氏阳性菌的细胞壁肽聚糖层厚，交联而成的肽聚糖网状结构致密，经乙醇处理发生脱水作用，使孔径缩小，通透性降低，结晶紫与碘形成的大分子复合物保留在细胞内而不被脱色，结果使细胞呈紫色。而革兰氏阴性菌肽聚糖层薄，网状结构交联疏松，而且类脂含量较高，经乙醇处理后，类脂被溶解，细胞壁孔径变大，通透性增加，结晶紫与碘的复合物被溶出细胞壁，因而细胞被脱色，再经蕃红复染后细胞呈红色。 三、仪器和药品 仪器：显微镜酒精灯接种柄接种环洗瓶载玻片滤纸镜油擦镜纸无菌水烧杯药品：结晶紫 95%乙醇草酸铵碘碘化钾蕃红二甲苯降酚细菌（培养18~24小时的斜面菌种）细菌酵母菌等标本片。 草酸铵结晶紫染液：A液结晶紫2.0g，95%乙醇20mL；B液草酸铵0.8g，蒸馏水80mL。将A和B充分溶解后混合静止24小时过滤使用。 革氏染液：碘1g ，碘化钾2g ，蒸馏水300mL。 蕃红染液：2.5%蕃红的乙醇溶液10mL，蒸馏水100mL混合过滤。 脱色液：95%乙醇。