沙氏葡萄糖肉汤对照培养基使用说明

化学品安全技术说明书第一部分化学品及企业标识产品中文名称：沙氏葡萄糖液体培养基产品英文名称：Sabouraud Dextrose Broth产品编号：021096企业名称：广东环凯微生物科技有限公司地址：广东省广州市黄埔区广州开发区科学城神舟路788号邮编：510663公司网址电子邮件地址：*********************传真号码：************销售热线：************-8602技术热线：************-8877/8876推荐用途和限制用途：生化研究/分析第二部分危险性概述GSH危害性类别非危险物质或混合物GSH标签要素非危险物质或混合物其它危害（健康危害、环境危害）未见报道第三部分成分/组成信息混合物化学品成分：参考培养基使用说明。

有害物质成分：无第四部分急救措施一般信息：无特殊的措施要求。

皮肤接触：立即用清水彻底清洗。

眼睛接触：立即提起眼睑，用大量流动清水冲洗15min。

如不适就医。

吸入：如果吸入，将人员移动到新鲜空气处，如果没有呼吸，进行人工呼吸操作，并联系医生。

食入：如误食，用水冲洗口腔，如不适就医。

就医信息：出示产品使用说明或者此SDS。

第六部分 泄露应急处理个人防护：穿个人实验服,佩戴手套和口罩,避免吸入干粉。

环境保护措施：用湿布和地拖擦拭干净。

清洁/收集措施：保持干燥。

迅速清洗弄脏的区域。

第七部分 操作处置与储存安全操作注意事项：防止粉尘扬起，应提供通风设备。

储存注意事项：贮存于避光、干燥处，用后立即旋紧瓶盖。

第八部分 接触控制/个人防护职业接触限值没有已知的国家规定的暴露极限。

工程控制：提供安全淋浴和洗眼设备个人保护措施呼吸系统防护：在通风橱里称取产品，佩戴口罩。

眼睛防护：佩戴安全眼镜。

身体防护：穿实验室服。

手防护：戴防化学品手套。

其他防护：常规的工业卫生操作，工作后及时清洗双手。

第九部分 理化特性外观：粉末 pH 值： 5.6±0.2 颜色：淡黄色 气味： 特征性 熔点：无数据资料 沸点： 无数据资料 燃点：无数据资料 闪点： 无数据资料 爆炸限度下限：无数据资料 上限： 无数据资料 热分解：无数据资料 溶解性：按产品使用说明上的用量比例加蒸馏水，加热煮沸至完全溶解，溶液呈黄色澄清无沉淀。

（1）大肠埃希菌（Escherichia coli）取供试液10ml（相当于供试品1g、1ml、10cm2），直接或处理后接种至适量（不少于100ml）的胆盐乳糖培养基中，培养18～24 小时，必要时可延长至48 小时。

取上述培养物0.2ml，接种至含5ml MUG 培养基的试管内，培养，于5 小时、24 小时在366nm 紫外线下观察，同时用未接种的MUG 培养基作本底对照。

若管内培养物呈现荧光，为MUG 阳性；不呈现荧光，为MUG 阴性。

观察后，沿培养管的管壁加入数滴靛基质试液，液面呈玫瑰红色，为靛基质阳性；呈试剂本色，为靛基质阴性。

本底对照应为MUG 阴性和靛基质阴性。

如MUG 阳性、靛基质阳性，判供试品检出大肠埃希菌；如MUG 阴性、靛基质阴性，判供试品未检出大肠埃希菌；如MUG 阳性、靛基质阴性，或MUG 阴性、靛基质阳性，则应取胆盐乳糖培养基的培养物划线接种于曙红亚甲蓝琼脂培养基或麦康凯琼脂培养基的平板上，培养18～24 小时。

若平板上无菌落生长、或生长的菌落与表3 所列的菌落形态特征不符，判供试品未检出大肠埃希菌。

若平板上生长的菌落与表3 所列的菌落形态特征相符或疑似，应进行分离、纯化、染色镜检和适宜的鉴定试验，确认是否为大肠埃希菌。

表3 大肠埃希菌菌落形态特征培养基菌落形态曙红亚甲蓝琼脂呈紫黑色、浅紫色、蓝紫色或粉红色，菌落中心呈深紫色或无明显暗色中心，圆形，稍凸起，边缘整齐，表面光滑，湿润，常有金属光泽麦康凯琼脂鲜桃红色或微红色，菌落中心呈深桃红色，圆形，扁平，边缘整齐，表面光滑，湿润（2）大肠菌群（Coliform）取含适量（不少于10ml）的乳糖胆盐发酵培养基管3 支，分别加入1∶10 的供试液1ml（含供试品0.1g 或0.1ml）、1∶100的供试液1ml（含供试品0.01g 或0.01ml）、1∶1000 的供试液1ml（含供试品0.001g 或0.001ml），另取1 支乳糖胆盐发酵培养基管加入稀释液1ml 作为阴性对照管。

沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂培养基配制标准操作规程
1．目的
规范沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂培养基配制标准操作规程，保证培养基质量。

2．原理
绝大多数真菌在此培养基中能利用葡萄糖及蛋白胨分别作为碳源和氮源进行生长繁殖。

培养基形成的pH5.6环境也适合于真菌的生长。

3．用途
真菌分离的常规培养基，适用于各种标本的初代分离，对酵母、霉菌都适用。

4．配方
葡萄糖40g,蛋白胨10g，琼脂20g，蒸馏水1000ml。

5.操作步骤
先取700ml蒸馏水将琼脂加热溶解，300ml蒸馏水溶解葡萄糖和蛋白胨，两者混合均匀后分装试管，加塞后121℃高压灭菌10分钟。

置斜面冷却。

贴标签及标注制备日期和有效期。

如制备平皿培养基，可在高压灭菌后倾注无菌平皿。

可添加氯霉素200mg（适用于含细菌的标本，如痰、粪、尿、脓及皮屑等）、放线菌酮500mg（适用于甲屑标本，可抑制污染真菌，促进皮肤藓菌生长），均可在高压消毒前加入。

6.结果判断
培养物出现气泡者为阳性。

7.注意事项
严格控制高压灭菌的温度与时间，以防因温度过高或时间过长导致葡萄糖焦化、培养基颜色变深。

8.有效期限
试管：3个月；平皿：2周。

9.质控
培养基色泽为黄色半透明。

每批培养基制备后应抽检5%（>100支，抽检10支）分别置37℃及25℃48小时，观察有无细菌、真菌的生长。

分别接种酵母及真菌的标准菌株，观察能否正常生长。

抑菌剂效力检查法指导原则抑菌剂效力检查法系用于测定灭菌、非灭菌制剂中抑菌剂的活性，以评价最终产品的抑菌效力，同时也可用于指导生产企业在制剂研发阶段抑菌剂的确定。

如果药物本身不具有充分的抗菌活性，那么应根据制剂特性（如水溶液制剂）添加适宜的抑菌剂，以防止制剂在正常贮藏和使用过程中可能发生的微生物污染和繁殖，尤其是多剂量包装的制剂，避免因药物微生物污染及变质而对患者造成伤害。

在药品生产过程中，抑菌剂不能用于替代药品生产的GMP管理，不能作为非灭菌制剂降低微生物污染的唯一途径，也不能作为控制多剂量包装制剂灭菌前的生物负载的手段。

所有抑菌剂都具有一定的毒性，制剂中抑菌剂的量应为最低有效量。

同时，为保证用药安全，最终包装容器中的抑菌剂有效浓度应低于对人体有害的浓度。

要求具有抗菌活性的制剂（参见制剂通则），不管是添加的抑菌剂，还是药物本身具有抗菌活性，在药物研发阶段，均应确认其抗菌效力。

抑菌剂的抗菌效力在贮存过程中有可能因药物的成分或包装容器等因素影响而提高或降低，因此，应验证最终容器中的抑菌剂效力在效期内不因贮藏条件而降低。

本试验方法和抑菌剂抑菌效力判断标准用于包装未启开的成品制剂。

产品分类需要进行本试验的药品分为四类（见表1），以便标准的制定和执行。

表1 产品分类类别 药品1 类 注射剂、其他非肠道制剂，包括乳剂、耳用制剂、无菌鼻用制剂及眼用制剂2 类 局部给药制剂、非灭菌鼻用制剂及用于黏膜的乳剂3 类 口服制剂（非抗酸制剂）4 类 抗酸制剂培养基培养基的制备1.胰酪胨大豆肉汤培养基酪蛋白胨 17.0g 磷酸二氢钾 2.5g大豆木瓜蛋白酶消化物 3.0 g 氯化钠 5.0g葡萄糖 2.5g 水 1000ml 除葡萄糖外，取上述成分混合，微温溶解，调pH约7.0，煮沸，加入葡萄糖溶解后，摇匀，滤清，调节pH使灭菌后为7.3±0.2，分装，灭菌。

2. 胰酪胨大豆琼脂培养基除上述胰酪胨大豆肉汤培养基的处方和制法，加入14.0g琼脂，调pH使灭菌后为7.3±0.2，分装，灭菌。

2010年无菌、微生物限度检查培训班讲义《中国药典》2010年版微生物限度（无菌）检查新增修订情况2010年版《中国药典》为建国以来的第九版药典。

2007年底开始工作，2010元月正式出版，2010年10月1日起实施（中华人民共和国卫生部公告（第5号））国家局、国家药典委员会、 120多家参与单位、数百位专家第一部分：无菌检查的新增修订前言部分1、新增规定：“防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。

”2、新增规定：“日常检验还需要对环境进行监控。

”3、新增规定：“无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训。

培养基部分1、删除：1. 硫乙醇酸盐流体培养基后括号（用于培养好氧菌、厌氧菌）的说明2、删除：2. 改良马丁培养基后括号（用于培养真菌）的说明3、删除：3. 选择性培养基项下加入适量中和剂或表面活性剂后面的“如对氨基苯甲酸（用于磺胺类供试品）、聚山梨酯80（用于非水溶性供试品）或β-内酰胺酶（用于β-内酰胺类供试品）¡±等说明。

修订为：在培养基灭菌或使用前加入适宜的中和剂、灭活剂或表面活性剂，其用量同验证试验。

(中和剂、灭活剂见微生物限度检查法中表1）4、将原第 6. 0.5%葡萄糖肉汤培养基（用于硫酸链霉素等抗生素的无菌检查）修订排列为第 4. ——按顺序排列归类培养基1.～4. 均为直接用于无菌检查的液体培养基。

培养基灵敏度检查部分1、修订了黑曲霉的孢子悬液制备方法：规定应使用含0.05％（v/v）聚山梨酯80的0.9％无菌氯化钠溶液，洗脱孢子及稀释孢子液，制成每1ml中含孢子数小于100 cfu的孢子悬液。

删除了：（用管口带有薄的无菌棉花或纱布能过滤菌丝的无菌毛细吸管）吸出孢子悬液的操作方法2、新增加稀释后的工作用菌液的保存条件和保存期限：“菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用，若保存在2～8℃，可在24小时内使用。

黑曲霉孢子悬液可保存在2℃～8℃，在验证过的贮存期内使用。

标准菌种确认标准操作规程一目的建立标准菌种确认标准操作规程，以减少菌种污染和生长特性的改变，保证实验结果的可靠性和准确性。

二范围本规程适用于质量控制实验室所用标准储备菌株。

三内容1.1 试验菌株大肠埃希菌（Escherichia coli）[CMCC(B)44102]金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）[CMCC(B)26003]枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）[CMCC(B)63501]白色念珠菌（Candida albicans）[CMCC(F)64941]黑曲霉（Aspergillus niger）[CMCC(F)98003]铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）[CMCC(B)10104]生孢梭菌（Clostridium sporogenes）[CMCC(F)98001]1.1.1 标准菌株1.1.1.1 标准菌株应来自认可的国内或国外菌种收藏机构。

1.1.1.2 标准菌株经过复活并在适宜的培养基中生长后，即为标准储备菌株。

1.1.1.3 标准储备菌株应进行纯度和特性确认。

1.1.2 工作菌株1.1.2.1 标准储备菌株可用于制备每两个月或定期转种的工作菌株。

1.1.2.2 工作菌株的传代次数应严格控制，不得超过 5 代（从菌种收藏机构获得的标准菌株为第0代），以防止过度的传代增加表型变化的风险。

因此必要时，应对工作菌株的纯度和特性进行确认。

1.2 菌种确认试验的主要内容1.2.1 菌种的纯度确认1.2.1.1 纯度检测：是指通过适当的方法检测菌种是否为纯培养物。

1.2.1.2 试验内容①菌落形态：在特定的培养基上，将待检测培养物稀释涂布或平板划线，适宜培养后，同一平板上的单菌落的大小、形状、颜色、质地、光泽等是否相似；对于两种或以上形态的出发菌株，应再分别挑取单菌落划线或稀释涂布培养，检测是否重复出现相同特征。

②镜检特征：对数生长期的培养物革兰氏染色反应应呈现一致性；细胞形状、大小、荚膜、芽孢等特征应相似。