P53、PCNA、ki-67在大肠癌中的表达与临床意义
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P53、PCNA、ki-67在大肠癌中的表达与临床意义
黄志伟;蔡雪彦
【摘 要】目的 检测P53、PCNA、ki-67在大肠癌中的表达及其与大肠癌及临床病理因素的关系,为大肠癌临床的诊疗提供一定的依据.方法 应用免疫组化法(SP法)检测53例大肠癌中P53(突变型)、PCNA、ki-67蛋白的表达.结果 P53蛋白、PCNA蛋白、Ki-67蛋白在大肠癌组织中的表达分别为67.92%、100%、86.79%,与在相对应的正常大肠粘膜组织中的表达(分别为0%、7.14%、10.71%)相比,差异有显著统计学意义(P＜0.01).ki-67蛋白的表达和患者性别有相关性.此外,PCNA蛋白和ki-67蛋白表达呈正相关.在大肠癌中P53蛋白与PCNA蛋白、ki-67蛋白之间表达无相关性.结论 1.P53、PCNA和ki-67蛋白在大肠癌中的过表达可能与大肠癌的发生发展密切相关.2.在大肠癌组织中,PCNA、ki-67和P53之间的表达均无明显相关,提示大肠癌发生过程中肿瘤细胞的增殖与抑癌基因突变是相对独立的致病机制.3.PCNA表达与ki-67表达呈显著正相关,而PCNA表达与大肠癌患者性别无关,ki-67表达则与大肠癌患者性别有关,提示ki-67在大肠癌不同性别患者间表达差异受ki-67不同于PCNA的细胞周期影响.
【期刊名称】《中国组织化学与细胞化学杂志》
【年(卷),期】2013(022)006
【总页数】5页(P508-512)
【关键词】P53;PCNA;ki-67;免疫组化;大肠癌
【作 者】黄志伟;蔡雪彦 【作者单位】广东省中山市人民医院病理科,528403;广东省中山市人民医院病理科,528403
【正文语种】中 文
【中图分类】R735.3
大肠癌是常见的恶性肿瘤之一，是多种致癌因素作用下发生的恶性病变。我国大肠癌发病率近些年以较快的速度增加，尤以城市为甚，我国年轻人直肠癌发病率有增高趋势，且预后较差。本研究应用免疫组织化学法检测P53（突变型）、PCNA、ki－67在53例大肠癌中的表达，研究其与大肠癌及临床病理因素的关系，旨在为大肠癌临床的诊疗提供一定的依据。
材料和方法
1．材料
标本来源于2008年2月至2010年12月广东中山市人民医院病理科大肠癌临床手术切除组织石蜡切片存档标本。标本经10%甲醛固定，常规石蜡包埋。大肠癌共53例，其中男29例，女24例；年龄18－82岁，≤55岁者13例，＞55岁者40例；按肿瘤大小分：≥4cm肿瘤20例，＜4cm肿瘤33例；按肿瘤所在部位分：肿瘤部位位于乙状结肠16例，位于直肠37例。28例正常对照组织标本为大肠粘膜。
2．主要试剂
鼠抗人P53、PCNA、ki－67单抗（上海长嘉生物公司）；即用型超敏SP试剂盒（福州迈新生物公司）；DAB显色试剂盒（福州迈新生物公司）。
3．方法
3．1具体步骤 每例石蜡标本连续切片（厚4μm）常规脱蜡入水；抗原修复；滴加3%过氧化氢阻断过氧化酶、正常山羊血清封闭液、一抗、二抗、链霉菌抗生物素－过氧化酶溶液后，经DAB显色，苏木素复染，梯度酒精脱水、二甲苯透明后中性树胶封片观察。空白对照试验：用PBS代替一抗作为阴性对照组。
3．2免疫组织化学结果判断
每一批免疫组化均设已知阳性对照和用PBS代替一抗的空白对照。P53、PCNA、ki－67阳性表达定位于细胞核内。以组织结构及背景清晰，细胞内有明显的棕黄色颗粒染色为阳性细胞。判定标准参照1996年全国免疫组织化学技术与诊断标准化专题研讨会意见，以连续观察10个高倍视野（10×40），免疫反应阳性细胞数超过25%作为组织阳性诊断标准。免疫反应阳性细胞数占总细胞数小于25%为
（－），25%－50% 为 （＋），51%－75% 为 （＋＋），大于75%为（＋＋＋）。
4．统计学处理
实验结果数据应用SPSS13．0统计软件进行统计分析，各蛋白表达与大肠癌临床病理关系采用四格表χ2检验或等级资料的秩和检验；各蛋白表达相关性分析采用Spearman分析；检验水准α＝0．05，P＜0．05为差异有统计学意义，P＜0．01为差异有显著性统计学意义。
结 果
1．HE染色结果
大肠正常粘膜组织共28例，镜下可见肠腺体大小较一致，腺管细胞成整齐单层排列，细胞核浆比例正常，间质少量淋巴细胞、浆细胞及单核细胞浸润，胞核未见明显异型。
大肠癌标本共53例，镜下可见癌细胞聚集，排列紊乱，细胞异型明显。肿瘤侵及粘膜下层1例，侵及浅肌层3例，侵及深肌层13例，侵及全层35例，侵及浆膜外1例；伴淋巴结转移19例，无淋巴结转移34例。
2．免疫组化结果
2．1P53与大肠癌关系
P53在大肠癌、正常肠粘膜的表达（见表1和图1－2）
P53蛋白阳性染色主要位于胞核，呈棕褐色或黄褐色细颗粒状。53例大肠癌组织中，P53阴性18例，阳性36例，阳性表达率为67．92%；28例正常大肠粘膜中，P53阴性、弱阳性和强阳性表达分别为28例、0例、0例，阳性表达率为0%；P53在大肠癌组织中的表达较在正常肠粘膜中表达明显增高。应用四格表χ2检验，组间蛋白表达差异有显著统计学意义（P＜0．01）。
表1 P53在大肠癌、正常肠粘膜的表达Table 1 The expression of P53in the
colorectal cancer and the normal colon mucosa组别 例数 P53阴性 阳性
阳性率癌组53 17 36 67．92%正常组28 28 0 0%
2．2PCNA与大肠癌关系
PCNA在大肠癌、正常肠粘膜的表达（见表2和图3－4）
PCNA蛋白阳性染色主要位于胞核，呈棕褐色或黄褐色细颗粒状。53例大肠癌组织中，PCNA阴性0例，阳性表达率为100%；28例正常大肠粘膜中，PCNA阴性26例，阳性2例，阳性表达率为7．14%；PCNA在大肠癌组织中的表达较在正常肠粘膜中表达明显增高。应用四格表χ2检验，组间蛋白表达差异有显著统计学意义（P＜0．01）。
表2 PCNA在大肠癌、正常肠粘膜的表达Table 2 The expression of PCNA in
the colorectal cancer and the normal colon mucosaχ2＝72．479，P＜0．01组别 例数 PCNA阴性 阳性 阳性率癌组53 0 53 100%正常组28
26 2 7．14%
2．3Ki－67与大肠癌关系 Ki－67在大肠癌、正常肠粘膜的表达（见表3和图5－6）
Ki－67蛋白阳性染色主要位于胞核，呈棕褐色或黄褐色细颗粒状。53例大肠癌组织中，ki－67阴性、弱阳性和强阳性表达分别为7例、20例、26例，阳性表达率为86．79% ，28例正常大肠粘膜中，ki－67阴性、弱阳性和强阳性表达分别为25例、3例、0例，阳性表达率为10．71%；ki－67在大肠癌组织中的表达较在正常肠粘膜中表达明显增高。应用四格表χ2检验，组间蛋白表达差异有显著统计学意义（P＜0．01）。
表3 ki－67在大肠癌、正常肠粘膜的表达Table 3 The expression of ki－67in
the colorectal cancer and the normal colon mucosaχ2＝45．102，P＜0．01组别 例数 Ki－67阴性 阳性 阳性率癌53 8 46 86．79%正常组28
28 3 10．71%
2．4大肠癌组织中P53、PCNA、ki－67表达的相互关系
⑴大肠癌组织中P53和PCNA表达的相关性分析
在大肠癌组织中，当PCNA表达≤50%时，p53蛋白表达≤50%和＞50%分别为16例和2例，当PCNA表达＞50%时，p53蛋白表达≤50%和＞50%分别为24例和11例。采用Spearman秩相关分析，癌组织中P53和PCNA表达呈正相关，但无统计学意义（P＞0．05，表4）。
表4 大肠癌组织中P53与PCNA表达之间的关系Table 4 The corelation of
P53and PCNA expressing in the colorectal carcinomaSpearman相关分析，P＞0．05PCNA P53≤50%＞50%r P≤50% 16 2 0．224 0．107＞50%
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⑵ 大肠癌组织中P53和ki－67表达的相关性分析
在大肠癌组织中，当ki－67表达≤50%时，p53蛋白表达≤50%和＞50%分别为22例和5例，当ki－67表达＞50%时，p53蛋白表达≤50%和＞50%分别为18例和8例。采用Spearman秩相关分析，癌组织中P53和ki－67表达呈正相关，但无统计学意义（P＞0．05）。
表5 大肠癌组织中P53与ki67表达之间的关系Table 5 The corelation of
P53and ki－67 expressing in the colorectal carcinomaSpearman相关分析，P＞0．05Ki67 P53≤50%＞50%r P≤50% 22 5 0．142 0．309＞50% 18
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⑶大肠癌组织中PCNA和ki－67表达的相关性分析
在大肠癌组织中，当ki－67表达≤50%时，PCNA蛋白表达≤50%和＞50%分别为16例和11例，当ki－67表达＞50%时，PCNA蛋白表达≤50%和＞50%分别为2例和24例。采用Spearman秩相关分析，癌组织中ki－67和PCNA表达呈正相关，有显著统计学意义（P＜0．01，表6）。
表6 大肠癌组织中ki67与PCNA表达之间的关系Table 6 The corelation of
ki67and PCNA expressing in the colorectal carcinomaSpearman相关分析，P＞0．01ki－67 PCNA≤50%＞50%r P≤50% 16 11 0．544 0．000＞50%
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讨 论
研究表明，P53基因在正常大肠组织未见表达，在大肠癌的阳性表达率为66．57%，与国内外文献报道的阳性率42%－70%结果一致［1］。组间比较有显著性差异（P＜0．01）。提示P53蛋白主要在胞核发挥作用，与大肠癌的发生发展密切相关。
大量文献表明P53在大肠癌发生、发展中发挥重要作用［2－5］，而且认为，在大肠癌的发生中可能存在两种发病机制：①经典的“染色体不稳定途径”即因为癌基因、抑癌基因突变引起染色体的不稳定，从而导致细胞恶变，其中，p53、K－ras、APC、DCC等基因的突变起重要的作用，而P53在大肠腺瘤癌变过程中被
