植物检疫之实验室检测

《植物有害生物检疫》实验指导书适用专业：动植物检疫、农学王建国，向妙莲，李小珍编写江西农业大学农学院植保系2008年1月目录第一部分室内实验植物检疫实验注意事项实验1 检疫性有害生物鞘翅目一……………………………………………………………实验2 检疫性有害生物鞘翅目二……………………………………………………………实验3 鳞翅目检疫性有害生物………………………………………………………………实验3 鳞翅目检疫性有害生物………………………………………………………………实验5 双翅目检疫性有害生物二……………………………………………………………实验6 同翅目检疫性有害生物………………………………………………………………实验7 其他检疫性有害生物…………………………………………………………………实验8 产地检疫………………………………………………………………………………实验9 洗涤检验………………………………………………………………………………实验10 分离培养检验…………………………………………………………………………实验11 生理生化检验…………………………………………………………………………实验12 染色检验………………………………………………………………………………实验13 噬菌体检验……………………………………………………………………………第二部分教学实习植物有害生物检疫教学实习计划………………………………………………………………《植物有害生物检疫》实验注意事项1、每人准备HB和3H绘图铅笔个一支，橡皮一块，厘米尺和小刀各一把。

《江西农业大学实验报告纸》20病装订成册。

2、实验前，预习实验指导书。

3、显微镜安指定号码使用，用完后复原，经教师检查后，放回原处。

4、实验过程中，必须保持安静，按照实验要求和操作规程，认真进行实验。

5、实验报告要求正确、整洁、清晰，当天课后教师批改（教师指定的日期除外）。

第四章植物检疫程序现场检验：是检疫人员在现场环境中对植物、植物产品或其他限定的商品进行的直观检查，以确定是否存在有害生物和/或确认是否符合植物检疫法规要求的法定程序。

现场检查的主要方法：肉眼检查、过筛检查、X光机检查和检疫犬检查等。

实验室检测：由检验人员在实验室中借助一定的仪器设备对样品进行深入检查的植物检疫法定程序，以确认有害生物是否存在或鉴别有害生物的种类。

实验室检测常用方法：比重检测、染色检测、洗涤检测、保湿萌芽检测、分离培养与接种检测、噬菌体检测、显微镜检测、血清学检测、鉴别寄主检测、分子鉴定和计算机辅助鉴定等产地检疫：是在植物或产品出境或调运前，输出方的植物检疫人员在其生长期间到原产地进行检验、检测的过程。

预检：是在植物或植物产品入境前，输入方的植物检疫人员在植物生长期间或加工包装时到产地或加工包装场所进行检验、检测的过程。

产地检疫和预检意义①提高检疫结果的准确性；②简化现场检验的手续，加快商品流通；③避免货主的经济损失。

隔离检疫：是将拟引进的植物种子、苗木和其他繁殖材料，在植物检疫机关指定的场所内，在隔离条件下进行试种，在其生长期间进行检验和处理的检疫过程。

第七章危险性植物病原生物真菌1、小麦印度腥黑穗病菌越冬场所：病菌以冬孢子或菌瘿在土壤中、种子表面或粪肥中越冬。

传播途径：远距离传播－冬孢子随种子的调运传播。

近距离传播－病区主要靠带菌土壤传播。

粪便和秸秆也能传病；随气流传播到麦穗上进行侵染。

检测方法①直接镜检法：50克麦种加100ml水，加1滴吐温20，震荡洗涤30分钟，洗涤液通过上铺滤纸的布氏漏斗，用抽气泵抽滤，1%-3%的KOH湿润滤纸，在25-50倍解剖镜下镜检。

②氢氧化钠鉴定法：用0.2%NaOH溶液浸种24h (20℃)。

病粒发病部位乌黑发亮，健康部位灰黄色。

③洗涤检验、冬孢子形态鉴定：同小麦矮化腥黑穗病菌。

④过滤抽提---离心富集技术：分级过筛-α-淀粉酶酶解-蔗糖密度梯度离心对小麦中的孢子富集，进行检测。

《动植物检疫学》实验指导书罗佳、刘国坤编福建农林大学植物保护学院2010．9．实验要求一实验室制度1 提前10分钟到达实验地点，不迟到、早退，不穿拖鞋、背心上课。

2 遵守实验室管理规则，按学号顺序入座，保持课堂安静。

3 爱护公物，对标本、仪器按要求操作，不随意拆卸。

课前、课后要检查所用标本、仪器，若发现有损坏或遗失，立即报告指导教师。

损坏仪器等物品应按规章赔偿。

4 保持实验室卫生，实验材料残体、纸屑、铅笔屑应倒入垃圾桶内。

5 实验结束后，将仪器、标本擦拭干净后放回原位；值日生应清理实验桌、实验台和地板等，关好门窗，关闭水、电开关。

二课前准备1 预习：认真阅读实验内容，了解实验方法、步骤和要求。

2 用具：实验报告纸、绘图铅笔、炭素墨水钢笔、橡皮擦、小刀、尺子等。

三实验报告1 一般在课堂内完成，采用专用实验报告纸。

2 实验报告用铅笔完成。

实验报告要整洁、清晰，根据操作步骤和内容完成。

3 根据报告纸设置图画，注意大小、位置；根据观察标本设计图画比例，力求准确、美观，轮廓用线条表示，明暗处通过梅花细点表示，不要涂抹。

图中文字标注以平行虚线引出，一般放在图右侧，并注意对齐。

图下文字标注居中。

实验一植物检疫性病害的症状观察及病原鉴定（验证性实验）一、实验目的要求：通过对实验室保存的我国进境植物检疫性病、杂草、全国农业植物检疫性病原病害标本进行症状观察，掌握这些重要检测性病害的症状特点及病原种类。

并通过对实验室保存的检疫性病原玻片、新鲜病原培养物进行观察，掌握其病原物形态特征特点。

二、实验仪器与材料：实验室保存的各种类型的病害蜡叶及液浸标本，植物病原真菌重要的属的永久玻片。

多媒体幻灯片、挂图或图片等。

一些检疫性植物病原真菌的平板培养物等。

解剖针、载玻片、盖玻片、显微镜。

三、实验内容和方法：（一）植物检疫性病害症状的观察1、大豆疫病：大豆疫病可以发生在大豆生育期的各个阶段。

幼苗期：烂根、猝倒、烂苗。

在植株复叶出现以后，病菌侵染下胚轴和根部，呈水渍状褐色，根部逐渐腐烂,植株萎蔫、叶下垂，不脱落.成株期根部出现水渍状，逐渐变为褐色至黑褐色，为害茎杆时，病情较轻，病斑颜色较浅红褐色，病，严重植株矮化，叶片从下而上萎蔫，叶柄缓慢下垂，与茎杆成八字形，叶柄不会从茎杆上脱落。

植物的病毒检测技术植物病毒病害是一类重要病害,几乎在各类作物上都有发生,严重影响农作物的产量和质量,用一般的方法难以防治,是生产上的一大难题。

种植无病毒种子、苗木是一种非常有效的防治措施。

因而如何对种子、苗木等无性繁殖材料以及在发病早期对植株进行快速准确地检测诊断就显得尤为重要。

最初植物病毒检测主要依靠生物学性状,但生物学方法费时费力,检测周期长,而且易受环境条件的影响,反应不稳定、重复性差。

目前植物病毒检测主要是血清学检测(以病毒外壳蛋白为基础)和核酸检测,前者主要包括ELISA、快速免疫滤纸测定、免疫胶体金技术、免疫毛细管区带电泳、免疫PCR 等;后者主要有PCR、分子信标、实时RT-PCR和核酸杂交等。

1 血清学检测方法1．1 酶联免疫吸附测定(ELISA)酶联免疫吸附测定是一种采用固相(主要为聚苯乙烯酶联板) 吸附,将免疫反应和酶的高效催化反应有机结合的方法,其基本原理是以酶催化的颜色反应指示抗原抗体的结合。

该方法首先将同源特异抗体吸附在反应器皿底部，加入欲测试的含病毒的样品，病毒与抗体结合，病毒颗粒被固定，再加入标记的特异抗体和酶的底物，酶与底物反应后会出现有颜色的溶液其强度与病毒浓度成正比，用此方法可测定出病毒的浓度。

ELISA方法简单,灵敏度高,特异性强,适于大量样品的检测,目前该方法已被广泛用于植物病毒检测。

在此基础上加以改进又发展了一些新的检测方法,如A 蛋白酶联吸附(SPA-ELISA)、斑点免疫吸附(DIBA)、直接组织斑免疫测定( IDDTB) 、伏安酶联免疫分析[1]、快速ELISA 等。

1．2 快速免疫滤纸测定法(Rapid immuno-filter paper assay , RIPA) 快速免疫滤纸测定类似乳胶凝集反应,其原理是把待测病毒的抗体吸附在乳胶颗粒上,通过大颗粒乳胶间接反应小颗粒病毒的存在。

所不同的是RIPA使用了一种红色乳胶,从而使检测更加简单和直观。

一、名词解释1.检疫监管：检疫机关对进出境或调运的植物、植物产品的生产、加工、存放等过程实行监督管理的检疫程序。

2.检疫处理：一种采取扑杀即全部杀掉，尸体深埋或焚烧，另一种则退回。

对于动物产品也可通过物理、化学方法进行消毒处理。

3.隔离检疫：是将进出境或国内调运的有关动植物在检疫机关指定的场所内，于隔离条件下进行饲养或种植，并在其生长期内进行检验、检测和处理的一项措施。

4.检疫许可：是在输入某些检疫物时，输入单位向检疫机关提前提出申请，检疫机关审查并决定是否输入的法定程序。

5.传染源:就是受感染的动物，指体内有病原体寄居、生长、繁殖，并能排到体外的动物。

6.产地检疫：是动植物或动植物产品在国内省（地）间或省（地）内进行调运前，由检疫人员在其生长或生产期间于原产地进行检验、检测、以防止管制性动物疫病或植物有害生物在国内传播或扩散的一项措施。

7.检疫申报：是检疫物输入或输出时由货主或代理人向检疫机关及时声明并申请检疫的法定程序。

8.动物疫病：指危害或可能危害动物及动物产品的任何传染病和寄生虫病。

9.有害生物风险分析（PRA）：是以生物的或者其它科学的和经济依据，确定一种有害生物是否应该限制和加强防治措施力度的评价过程。

10.限时检疫：11.植物疫区：是指在某一植物检疫性有害生物发生分布未广的情况下，对发生了这一有害生物的地区，为了防止其向未发生地区传播扩散，经省（自治区，直辖市）人民政府批准而划定，并采取封锁，消灭措施的区域。

12.植物保护区：是指在某一植物检疫性有害生物发生已较普遍的情况下，对尚无此有害生物分布的地区，为了防止其被污染或被人为传入，经省（自治区，直辖市）人民政府批准而划定，并采取保护措施的区域。

1.植物产品：是指来源于植物未经加工或者虽经加工但仍有可能传播病虫害的产品，如粮食、豆、棉花、油、麻、烟草、籽仁、干果、鲜果、蔬菜、生药材、木材、饲料等。

2.实验室检测：是指借助于实验室仪器设备对动物样品进行动物疫病检查、鉴定的法定程序。

植物检疫复检流程一、什么是植物检疫复检呢？简单来说，就是对之前已经检疫过的植物或者植物产品再检查一次。

这就好比咱们人去医院复查一样，看看之前的状况有没有什么新变化。

你想啊，植物也是有生命的，在运输或者储存过程中可能会发生一些状况，所以再检查一遍就很有必要啦。

二、谁来做这个复检呢？通常是由专业的植物检疫人员来做这个工作。

这些检疫人员就像是植物的健康卫士，他们可是经过专门训练的哦。

他们熟悉各种植物可能出现的病虫害，对植物检疫的标准也了如指掌。

就像超级英雄守护城市一样，他们守护着植物的健康。

三、复检前的准备。

1. 通知相关方。

检疫人员要通知货主或者相关的责任人，告诉他们要进行复检啦。

这个通知就像是一张请柬，不过这张请柬可没有那么让人开心，但它是非常重要的。

就像你要去朋友家做客，提前打个招呼一样。

2. 收集资料。

检疫人员还得收集之前检疫的资料，看看之前有什么特殊情况没有。

这就好比侦探破案之前要收集线索一样，之前的检疫资料就是他们的重要线索。

四、复检的具体操作。

1. 外观检查。

检疫人员会先看看植物或者植物产品的外观。

他们会像挑水果一样，仔细查看植物的叶子有没有发黄、有没有斑点，枝干有没有损伤等等。

这是最直观的检查方法，如果植物看起来就病恹恹的，那肯定是有问题啦。

2. 抽样检查。

光看外观还不够，有时候还得抽样。

这抽样就像是抽奖一样，不过抽到的可不是什么奖品，而是要拿去做更深入检查的样本。

检疫人员会按照一定的规则抽取样本，然后送到实验室去做进一步的检测。

3. 实验室检测。

在实验室里，那些样本可就要接受各种高科技的检测啦。

像是检测有没有害虫的虫卵，有没有病菌之类的。

这就像是给植物做一个全身的CT扫描，把它身体里的小毛病都找出来。

五、复检后的处理。

1. 合格的情况。

如果复检后发现植物或者植物产品是合格的，那就皆大欢喜啦。

就像学生考试及格了一样，货主可以松一口气啦。

检疫人员也会给相关的证明，让这些植物或者植物产品可以继续它们的旅程，不管是去市场上销售还是种到地里。