植物检疫之实验室检测共33页
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第四章植物检疫程序现场检验:是检疫人员在现场环境中对植物、植物产品或其他限定的商品进行的直观检查,以确定是否存在有害生物和/或确认是否符合植物检疫法规要求的法定程序。
现场检查的主要方法:肉眼检查、过筛检查、X光机检查和检疫犬检查等。
实验室检测:由检验人员在实验室中借助一定的仪器设备对样品进行深入检查的植物检疫法定程序,以确认有害生物是否存在或鉴别有害生物的种类。
实验室检测常用方法:比重检测、染色检测、洗涤检测、保湿萌芽检测、分离培养与接种检测、噬菌体检测、显微镜检测、血清学检测、鉴别寄主检测、分子鉴定和计算机辅助鉴定等产地检疫:是在植物或产品出境或调运前,输出方的植物检疫人员在其生长期间到原产地进行检验、检测的过程。
预检:是在植物或植物产品入境前,输入方的植物检疫人员在植物生长期间或加工包装时到产地或加工包装场所进行检验、检测的过程。
产地检疫和预检意义①提高检疫结果的准确性;②简化现场检验的手续,加快商品流通;③避免货主的经济损失。
隔离检疫:是将拟引进的植物种子、苗木和其他繁殖材料,在植物检疫机关指定的场所内,在隔离条件下进行试种,在其生长期间进行检验和处理的检疫过程。
第七章危险性植物病原生物真菌1、小麦印度腥黑穗病菌越冬场所:病菌以冬孢子或菌瘿在土壤中、种子表面或粪肥中越冬。
传播途径:远距离传播-冬孢子随种子的调运传播。
近距离传播-病区主要靠带菌土壤传播。
粪便和秸秆也能传病;随气流传播到麦穗上进行侵染。
检测方法①直接镜检法:50克麦种加100ml水,加1滴吐温20,震荡洗涤30分钟,洗涤液通过上铺滤纸的布氏漏斗,用抽气泵抽滤,1%-3%的KOH湿润滤纸,在25-50倍解剖镜下镜检。
②氢氧化钠鉴定法:用0.2%NaOH溶液浸种24h (20℃)。
病粒发病部位乌黑发亮,健康部位灰黄色。
③洗涤检验、冬孢子形态鉴定:同小麦矮化腥黑穗病菌。
④过滤抽提---离心富集技术:分级过筛-α-淀粉酶酶解-蔗糖密度梯度离心对小麦中的孢子富集,进行检测。
实验一种子洗涤检验法
一、目的要求
掌握种子洗涤检验法,确定麦种样品表面附着带菌种类和带菌量。
二、基本原理
洗涤法是种子检验常用的方法之一,用于检测种子表面附着的真菌孢子或颖壳上的病原线虫,如黑粉菌的厚垣孢子、霜霉菌的卵孢子、锈菌的夏孢子以及分生孢子等。
其方法是将一定量的被检样品放入容器中,加入一定量的无菌水,充分振荡一定时间,使样品表面所带的病菌孢子尽量洗涤下来,而后将洗涤液经离心机沉淀,镜检沉淀物,确定病原菌种类并计数。
三、材料、试剂与仪器
材料:带菌麦种。
试剂:蒸馏水、无菌水等。
仪器:显微镜、振荡器、离心机、血球计数器、接物测微尺、药物天平、三角瓶(100ml)、烧杯(100ml)、刻度离心管、滴管、镊子、载玻片、二甲苯(双层瓶
装)、镜头纸、脱脂纱布等。
四、实验操作
•从被检种子样品中取25g放入三角瓶中,加无菌水50ml,将三角瓶加塞后在振荡器上振荡15min。
•将洗涤液分装于两支刻度离心管中,在天平上称重平衡后,放入离心机的对称孔中,以10000rpm速度离心5min。
•用吸管吸去上层部分清水,留下1ml管底沉淀液,将两管底沉淀液摇匀,合并后备用。
•镜检和测定孢子负荷量)。
•五、实验作业
•列出原始数据,计算每克种子上的带菌量。
每克种子所带孢子数=K×N×L/W
其中 N=1个小方格中孢子的平均数。
L=计数孢子的洗涤液总毫升数。
W =供检验种子克数。
常用的植物检疫方法一、直观检查法1.1 看外观植物检疫的时候啊,这看外观可是个挺重要的法子呢。
就像咱挑水果似的,眼睛得尖。
比如说检查苗木,瞅瞅那叶子有没有发黄啊,有没有长奇怪的斑点或者洞洞啥的。
要是叶子病恹恹的,那可能就有问题喽。
像柑橘苗木,如果叶子上有那种不规则的黄斑,说不定就感染了啥病菌。
这就好比人脸上长了痘痘,肯定是身体哪儿有点不舒服啦。
1.2 查形状再就是形状也得好好瞧。
健康的植物啊,它的枝干啊、果实啊形状都比较规整。
要是发现果实长得歪瓜裂枣的,枝干也奇形怪状,那就得小心喽。
比如说一些被害虫侵害的果树,结的果子可能就会变小、变形,这就是个危险的信号,就像那句老话说的“事出反常必有妖”嘛。
二、实验室检测法2.1 显微镜观察显微镜这玩意儿可厉害啦。
把植物的组织或者害虫啥的放在显微镜下,就像把小虫子或者病菌拉到咱眼皮子底下审问一样。
咱可以看到那些肉眼看不到的病菌孢子啊,害虫的虫卵啊啥的。
比如说检查小麦是否感染锈病,在显微镜下就能看到那些像小棍子一样的锈菌孢子,密密麻麻的,看到这场景,心里就“咯噔”一下,知道这小麦有麻烦了。
2.2 培养检测还有培养检测呢。
把怀疑有病菌的植物组织放在特定的培养基上,就像给病菌一个小窝,让它们“安居乐业”,看它们能不能长出来。
要是长出来了,那就可以确定是啥病菌了。
这就好比钓鱼,把饵放下去,看能钓上来啥。
比如说检测花卉是否感染根腐病菌,把根部组织放在培养基上,要是培养基上出现了那种毛茸茸的菌丝,那根腐病菌就被咱逮着了。
2.3 血清学检测血清学检测也很有用。
这就像是给病菌或者害虫做个特殊的标记。
利用抗原和抗体的反应,就像钥匙和锁一样匹配。
如果检测结果呈阳性,那就说明有咱们要找的病菌或者害虫。
比如说检测植物是否感染病毒,用血清学检测就像火眼金睛一样,能把那些隐藏得很深的病毒给揪出来。
三、诱捕检测法3.1 灯光诱捕灯光诱捕就像是给害虫设个小陷阱。
晚上啊,把那诱虫灯一亮,那些有趋光性的害虫就像飞蛾扑火一样,傻乎乎地就飞过来了。
实验一种子洗涤检验法
一、目的要求
掌握种子洗涤检验法,确定麦种样品表面附着带菌种类和带菌量。
二、基本原理
洗涤法是种子检验常用的方法之一,用于检测种子表面附着的真菌孢子或颖壳上的病原线虫,如黑粉菌的厚垣孢子、霜霉菌的卵孢子、锈菌的夏孢子以及分生孢子等。
其方法是将一定量的被检样品放入容器中,加入一定量的无菌水,充分振荡一定时间,使样品表面所带的病菌孢子尽量洗涤下来,而后将洗涤液经离心机沉淀,镜检沉淀物,确定病原菌种类并计数。
三、材料、试剂与仪器
材料:带菌麦种。
试剂:蒸馏水、无菌水等。
仪器:显微镜、振荡器、离心机、血球计数器、接物测微尺、药物天平、三角瓶(100ml)、烧杯(100ml)、刻度离心管、滴管、镊子、载玻片、二甲苯(双层瓶
装)、镜头纸、脱脂纱布等。
四、实验操作
•从被检种子样品中取25g放入三角瓶中,加无菌水50ml,将三角瓶加塞后在振荡器上振荡15min。
•将洗涤液分装于两支刻度离心管中,在天平上称重平衡后,放入离心机的对称孔中,以10000rpm速度离心5min。
•用吸管吸去上层部分清水,留下1ml管底沉淀液,将两管底沉淀液摇匀,合并后备用。
•镜检和测定孢子负荷量)。
•五、实验作业
•列出原始数据,计算每克种子上的带菌量。
每克种子所带孢子数=K×N×L/W
其中 N=1个小方格中孢子的平均数。
L=计数孢子的洗涤液总毫升数。
W =供检验种子克数。