(PAS反应与联苯胺反应)
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实验十五糖类的显示方法——PAS反应
仪器设备:恒温水浴锅
器具:盖玻片、载玻片、培养皿、滤纸、镊子、吸水纸、剪刀、解剖盘、解剖针、棕色滴瓶染色缸
材料:蛙血
试剂及其配置:甲醇原液、Ringer氏生理盐水1N盐酸亚硫酸水1%亮绿甘油/PBS 封片剂Schiff”s 试剂肝素抗凝剂(每毫升生理盐水含1mg肝素钠)、1%过碘酸水溶液
a:1NHCl: 浓盐酸8.5ml定容至100毫升
b:亚硫酸水:10%偏重亚硫酸钠5毫升
1NHCl 5毫升
蒸馏水90毫升
c:Schiff”s试剂:称取0.5g碱性品红(basic fuchsin),加入到100ml煮沸的
蒸馏水中,时时搅拌,继续煮5分钟,使之充分溶解,但勿
使沸腾。
然后冷却至50℃时用滤纸过滤。
往虑液中加入10ml
1mol/L盐酸,冷却至25℃时,加入1g偏重亚硫酸钠(NaHSO3),
摇荡后塞紧玻璃塞在室温避光处静置12-24小时,使其颜色
退至淡黄色。
然后加入1g活性炭,用力摇荡1分钟,封严
瓶塞,储存于4℃冰箱备用。
使用前升至室温。
注意随时盖紧瓶口,不要过长时间暴
露在空气中,并用黑纸或暗盒避光,以避免氧化变成红色。
如变成红色即失去染色能力。
d:1%过碘酸水溶液:1g过碘酸溶解于100ml蒸馏水中
e:甘油/PBS封片剂(0.01M PBS:甘油=1:9 (V/V))
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pas反应实验报告本文是一篇有关“PAS反应实验”的实验报告,共计1000字左右。
一、实验原理PAS反应是碳水化合物、蛋白质和肝醛蛋白中存在的羰基和氨基的特性之一。
当羰基和氨基接触到PAS试剂时,它们会形成共价键,并形成稳定的偶联物。
该反应可以用于鉴定和定量蛋白质中的氨基和羰基。
本实验中使用的PAS试剂是1%苯胺、30%盐酸和1%PAS(苯磺酸)。
PAS试剂可以将氨基和羰基标记为紫色,并且只能产生一定数目的偶联。
二、实验过程1.制备标准蛋白样品将1ml的标准蛋白(0.05mg/ml)加入9ml的去离子水中,制备0.005mg/ml的标准蛋白样品。
2.进行PAS反应将实验室提供的蛋白质标本与PAS试剂混合,放置30分钟。
随后,在450nm处测量吸光度值。
3.制备多巴胺样品将10mg的多巴胺粉末溶解在10ml的去离子水中,制备1mg/ml的多巴胺溶液。
三、实验结果及分析实验中,标准蛋白样品的吸光度值测量结果如下表所示:测定次数吸光度值1 0.1012 0.0993 0.1034 0.0985 0.102平均吸光度值为0.101,表明标准蛋白样品反应后碳水化合物中含有的羰基和蛋白质中的氨基均被标记为紫色。
实验结果表明,PAS反应可以用于鉴定和定量含有羰基和氨基的样品。
四、实验结论本实验使用了PAS试剂进行了标准蛋白样品和多巴胺样品的实验。
结果表明,PAS反应可以用于标记样品中存在的羰基和氨基,并确定其存在量的大小。
因此,PAS反应是一种快速而有效的检测含有羰基和氨基的样品的方法。
实验一细胞多糖的PAS反应目的:掌握细胞中多糖(如淀粉、细胞壁纤维素等)原位显示的PAS反应原理,熟悉PAS的技术。
一、PAS反应原理过碘酸(HI04·2H20)作为一种强的氧化剂,能够打开C—C键,将-CHOH-CHOH-、-CHOH-CHO、-CHOH-COOH、-CHOH-CH2NH2等的羟基氧化为醛基。
但它不继续氧化新形成的醛基。
所以,有充分的醛基与Schiff试剂中的无色碱性品红化合而形成紫红色物质,使细胞中的多糖(如淀粉、细胞壁纤维素等)原位显示出来。
二、器材、试剂及材料1、器材显微镜,载/盖玻片、镊子、刀片、吸水纸。
2、试剂(1)过碘酸酒精溶液过碘酸(HI04·2H20)0.4g95%乙醇35ml0.2M醋酸钠(27.2g+1000mlH2O)5ml蒸馏水10ml(2)Schiff试剂先将100ml蒸馏水煮沸,然后加人0.5g碱性品红,充分搅拌,必要时可再煮5分钟,使之充分溶解。
待溶液冷却至50℃时,过滤,向溶液中加10ml1NHCl。
冷却至25℃时。
加0.5g偏重亚硫酸钠(Na2S2O5)盖严,置于暗处,经几天后红色稍裉,溶液呈白或淡黄色。
如果仍有红色,可加活性炭0.25g摇l分钟,过滤,装入棕色瓶并外包黑纸,放入冰箱中备用。
(3)亚硫酸(临用时配制)普通自来水200ml,10%偏重亚硫酸钠10ml,1NHCl 10ml。
(4) 1NHCl取82.5ml比重为1.19的浓盐酸加蒸馏水至1000ml.(5)70%乙醇3、材料洋葱鳞茎表皮及鳞片肉细胞,橡胶种子胚乳.三、实验方法1、取洋葱鳞茎表皮细胞(或徒手切取鳞片肉细胞、橡胶种子的胚乳的切片),浸于过碘酸酒精溶液中10分钟左右(对照为70%酒精)。
2、用70%酒精洗1-2分钟。
3、入Schiff试剂中染15分钟。
4、亚硫酸水洗三次。
5、蒸馏水洗1-3次,装片镜检。
结果:多糖部分(如细胞壁、淀粉粒等)呈紫色。
四、作业1、比较经过碘酸酒精溶液处理与对照间的细胞多糖部分的显色情况,说出细胞中多糖(如淀粉、细胞壁纤维素等)原位显示的PAS反应原理。
名词解释pas反应
嘿,你知道 PAS 反应不?这可真是个神奇的玩意儿呢!PAS 反应啊,简单来说,就是一种用来检测组织中多糖物质的化学反应。
比如
说吧,就像你去寻宝,PAS 反应就是那个能帮你找到隐藏宝藏——多
糖的神奇工具!
咱来仔细讲讲啊,想象一下,组织就像是一个大宝藏箱,里面藏着
各种宝贝,多糖就是其中之一。
PAS 反应呢,就像是一把特别的钥匙,能把这个宝藏箱打开,让我们看到多糖在哪里。
在生物学和医学领域,PAS 反应可重要啦!医生们会用它来诊断一
些疾病呢。
好比说,在某些疾病中,组织里的多糖会发生变化,这时候,PAS 反应就能像个敏锐的侦探一样,发现这些异常。
“哎呀,这 PAS 反应可真厉害啊,那它具体是怎么操作的呀?”你可能会这么问。
嘿嘿,其实就是把组织切片,然后用特定的试剂处理,
接着就能看到多糖显示出特别的颜色啦。
我记得有一次,在实验室里,大家都在认真地做着 PAS 反应的实验。
一个同学不小心弄错了步骤,结果啥都没检测出来,大家都笑他太马
虎啦!这也说明了,做这个实验可得仔细认真呢!
PAS 反应就像是一把打开组织多糖秘密的钥匙,让我们能更好地了
解生物体内的奇妙世界。
它虽然看似只是一个小小的化学反应,但在
科学研究和医学诊断中却有着大大的作用呢!所以啊,可千万别小瞧了它哟!我的观点就是,PAS 反应真的是超级神奇且重要的呀!。
实验七细胞组分的化学反应【实验目的】了解核酸、蛋白质、糖及酶的细胞化学反应原理,掌握Brachet反应及碱性蛋白、酸性蛋白、糖原和过氧化物酶的细胞化学染色方法。
【实验用品】一、材料和标本蟾蜍、小白鼠各一只、肝脏石腊切片、培养的Hela细胞。
二、器材和仪器光学显微镜、解剖器材、蜡盘、载玻片、吸水纸、染色缸、盖玻片、水浴箱。
三、试剂PBS缓冲液(pH7.2)、甲基绿一呱咯宁醋酸缓冲液、纯丙酮、l/2丙酮+1/2二甲苯、纯二甲苯、70%乙醇、5%三氯醋酸、0.1%碱性固绿、0.1%酸性固绿、0.5%硫酸铜、联苯胺混合液、1%番红、无水乙醇、过碘酸酒精液、Schiff 氏酒精液、亚硫酸水、Ehrlieh苏木精、95%乙醇、Carnoy固定液(甲醇:冰醋酸=3:1,体积比)【实验内容】细胞的组织化学方法,是研究细胞成分常用的方法之一。
它是利用化学试剂与细胞内的某些物质进行化学反应,从而在细胞局部形成有色沉淀物,再通过显微镜对组织内的生物化学成分进行定性、定位、定量研究。
一、Brachet反应一显示细胞内的DNA和RNA(一)原理细胞经甲基绿一呱咯宁混合液处理后,其中的DNA和RNA出现不同的呈色反应,一般认为这是由于带有负电荷的核酸对碱性染料呱咯宁和甲基绿具有亲和力,且这两种染料的作用有选择性,甲基绿染高聚分子的DNA呈蓝绿色,呱咯宁染低聚分子的RNA呈红色。
由此对细胞中的DNA和RNA进行定位、定性、和定量分析。
(二)方法l.接种Hela细胞于盖片上并培养24~48小时,使长成单层。
2.取出盖片,用PBS(pH7.2)轻轻冲洗盖片表面去除残渣。
3.放入Carnoy固定液中固定l小时。
4.浸入甲基绿一呱咯宁醋酸缓冲液中30分钟染色。
实验一细胞的基本形态结构的观察实验原理与目的(1)通过观察动、植物细胞,了解细胞形态的多样性并掌握光镜下细胞的基本形态结构。
(2)初步掌握临时制片技术和显微绘图的方法。
实验原理细胞是生命活动的基本结构单位和功能单位。
构成人体或其他高等动物或植物的细胞种类繁多,形态各异。
细胞的形态都与它们的功能相适应。
如具有运输O2和CO2功能的红细胞为双凹盘状;具有感受刺激与传导功能的神经细胞呈星芒形,附有长短不等的树枝状突起;上皮细胞是柱形或扁平形;巨噬细胞则呈不规则形状,并能伸出伪足,以利于为执行吞噬和消灭外源的病原微生物的功能。
虽然细胞在形态上多种多样、大小不同,但却具有共同的基本结构特点,即都是由细胞膜(cellmembrane)、细胞质(cytoplasm)和细胞核(nucleus)组成。
实验用品1.器具:显微镜、载玻片、盖玻片、推片、吸管、镊子、牙签、擦镜纸、吸水纸、小剪刀。
2.材料:洋葱、人口腔上皮细胞、鸡血液、人血细胞涂片、蟾蜍血细胞涂片。
3.试剂:2%碘液、Giemsa染液。
试剂配制1.2%碘液:称取碘片2g,碘化钾5g,蒸馏水100ml混匀溶解即可。
2.吉姆萨(Giemsa)染液:吉姆萨粉(Giemsastain)l.0g甘油(AR)66ml甲醇(AR)66ml将Giemsa粉放入研钵中,先加入少量甘油,研磨至无颗粒为止,然后再将全部甘油倒入,放56℃温箱中2h后,加入甲醇,将配制好的染液密封保存棕色瓶内(最好于0~4℃保存)。
内容与方法一、洋葱鳞茎表皮细胞制片与观察:1.临时制片:取一擦净的载玻片,在玻片中央滴一滴2%的碘液,将洋葱茎用小刀分为几块,取一块肉质鳞叶,用镊子在其表面轻轻撕下一小块膜质表皮,再用剪刀剪成3~4mm2的小块,置于载玻片的染液中铺平,染色2~3分钟,盖上盖玻片,用吸水纸吸去盖玻片周围多余的染液。
2.观察:将标本置于低倍镜下观察,可见许多长柱状排列整齐、彼此相连的细胞,选择其中较典型的细胞移至视野中央,然后换成高倍镜观察以下结构:1)细胞壁:在每两个细胞相连处,可看到二层壁状结构,是相邻细胞各自的细胞壁,有纤维素构成。
实验三PAS反应与联苯胺反应
一:实验目的:
掌握显示细胞中多糖和过氧化物酶反应的原理和方法。
二:实验原理:
1、高碘酸—希夫试剂反应简称PAS(Periodic Acid Schiff reaction)反应。
组织内的多糖等都用PAS法来显示。
其化学基础是利用过氧酸的氧化作用打开C—C键,将CH2OH—CH2OH变成CHO—CHO。
同样,对CH2OH—CHO,CH2OH—COOH,CH2OH—CH2NH2等物质均有氧化作用而放出醛基,这种新生的醛基和无色品红作用形成紫红色化合物(见图1)。
颜色的深浅与糖类的多少有关。
2、细胞内的过氧化物酶能把许多胺类化合物氧化为有色化合物(见图2),用联苯胺处理样本,细胞内的过氧化物酶能把联苯胺氧化为兰色的苯胺蓝,进而变为棕色产物,因而可以根据颜色反应来判断过氧化物酶的有无或多少。
三:实验材料与试剂
1.材料:土豆块茎、洋葱根尖或鳞茎表皮。
2.器具:显微镜、载波片、单面刀片、培养皿、镊子、染色钵、盖玻片、吸水纸。
3.试剂:
(1)过碘酸酒精溶液:
过碘酸(高碘酸)0.4g
95%酒精35ml
0.2 mol/L醋酸钠5ml (即17.2g醋酸钠溶于1000ml 蒸馏水)
蒸馏水10ml
该液需保存于冰箱,包黑纸,如变黄则失效。
(2)Shiff试剂(详见指导书P75页)
(3)0.1%钼酸铵溶液:称取0.1 g钼酸铵溶于100 ml 0.85%盐水
(4)联苯胺混合液(临用前配制)
联苯胺0.2g
95%乙醇100ml
3%H2022滴
(5)亚硫酸水溶液:取200ml自来水,加10ml10%的偏重亚硫酸钠水溶液和10ml1mol/L 的HCl,三者于使用前混匀。
(6)70%乙醇
四:实验的方法和步骤
1 PAS反应
(1)把马铃薯块茎徒手切成薄片,放入高碘酸溶液浸泡10min,用70%乙醇中浸片刻(2)将薄片浸入Schiff 试剂染色15分钟
(3)取出放入亚硫酸水中洗3次,每次1min
(4) 蒸馏水冲洗片刻,压片观察
2. 联苯胺反应
(1)把洋葱根尖徒手切成20-40 µm厚的薄片或用镊子撕取洋葱鳞茎内表皮一小块(2)浸在溶有0.1%钼酸铵的0.85%盐水溶液中5 min(钼酸铵起催化作用)
(3)浸在联苯胺溶液内2 min至切片出现蓝色
(4)在0.85%盐水溶液中洗1 min
(5)将薄片置于载玻片上展开,盖上盖玻片,显微镜检查
五:实验结果
1.PAS反应:块茎组织细胞内可见到紫红色或深红色的淀粉颗粒,对照片无色或色淡。
2.联苯胺反应:切片中含过氧化物酶部位呈现蓝色或棕色。
六:作业:
绘图表示PAS反应与联苯胺反应的染色结果,并分析。
图1
图2。