根际土壤细菌分离纯化及鉴定实验方案一、方法：稀释涂布分离法二、培养基：1、GPM 培养基(Glucose Peptone Meat extract Agar)2、牛肉膏蛋白胨培养基（NB ）3、金氏培养基B （King ）4、CSEA 培养基(Cold extracted soil extract agar)5、YG6、NA7、无氮培养基8、分解纤维素菌筛选培养基9、TSA 培养基 三、实验流程梯度稀释 涂板分离挑取不同的单菌落于斜面培养 液体培养及液体保种 提取DNAPCR 扩增 酶切带型分型确定操作单元连接转化 克隆子挑选及PCR 鉴定 测序 序列拼接 建树 采集根际土壤样品四、具体实验方案1、采集根际土壤样品：将植株根系及附着的根际土壤一同装入无菌袋带回实验室。
2、土壤样品稀释及选择合适浓度梯度进行涂板分离：梯度稀释土壤样品，取10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6六个梯度涂板，每个浓度梯度涂3个平行，过后放于37℃培养箱中培养1-2d观察菌落生长情况。
选择合适的浓度平板，根据形态、大小、颜色，挑取不同菌株的典型单个菌落，达到分离纯化的目的。
3、挑取不同单菌落于斜面保种：通过上述的分离纯化步骤，可筛选得到不同的菌株，对筛选到的菌株接种于斜面放于37℃培养箱中培养。
最后斜面放于4℃冰箱保存，备用。
4、液体培养及保种：从斜面上挑取菌苔于相应的液体培养基中放摇床上震荡（转速160r/min，37℃）培养。
过后吸取菌液与灭过菌的甘油按7:3的比例于1.5ml灭过菌的EP管中放于-20℃保种。
剩下的菌液用于以下实验。
5、提取DNA（CTAB法）：（1）取1.5ml菌液于1.5ml离心管中，12000r/min离心2min，弃上清。
（2）向沉淀物中加入350ul双蒸水，重新悬浮沉淀。
（3）加入20ul10%SDS和3ul的蛋白酶K（20mg/ml），混匀，于55℃温育1h。
（4）加入50ul 5mol/L NaCl溶液，充分混匀，再加入50ul CTAB/NaCl溶液，混合后再65℃温育30min。
土壤中的微生物一、引言如同生物体内的菌群一样，土壤中，也拥有丰富多样的微生物。
土壤微生物是土壤生态系统中的重要组成部分，其数量、种类和活性直接影响着土壤物理、化学、生物特性与功能，影响着整个土地的质量和生产力。
因此，研究土壤中的微生物对于认识土壤生态系统、维护土地生产能力、创建良好的生态环境及可持续发展具有十分重要的意义。
本篇论文将对土壤中的微生物的种类、作用和研究方法进行介绍和讨论。
二、种类土壤中的微生物种类繁多，主要包括细菌、真菌、放线菌、藻类和原生动物等。
1. 细菌细菌在土壤中是最广泛、数量最多的微生物，数量可高达1克土壤中10亿个。
土壤细菌的分类学十分复杂，目前共发现了300多个属、1000多个种，其中大部分是光合细菌、化学合成细菌和灵敏细菌。
土壤细菌的生态学作用很多，如：发酵有机物质、氮循环、碳循环、硫循环、磷循环、铁循环等。
2. 真菌真菌也是土壤中的主要微生物，分为两类，分别为真菌菌丝体和真菌孢子。
前者称为菌体，后者称为萎缩体。
真菌能够分解和吸收土壤中的有机物，对于提高土壤质量有着非常重要的作用。
真菌还有许多其他的作用，如腐生拮抗作用、土壤结构改良、矿物质的释放、土壤酶的激活等。
3. 放线菌放线菌是一种非常特殊的细菌，与细菌和真菌都有相似的地方。
放线菌可以产生一些抗菌物质，对于土壤中的其他微生物有着很强的拮抗作用，但放线菌产生的抗菌物质对作物并不会造成危害，反而有很好的保护作物的作用。
4. 藻类藻类在自然界中到处都有，也存在于土壤中。
藻类能够利用土壤中的阳光和二氧化碳进行光合作用，从而产生能量和有机物质。
这些有机物质对于土壤中其他微生物和植物生长都有着很好的促进作用。
5. 原生动物原生动物是一种单细胞的生物，相比于细菌和真菌，数量比较少。
原生动物在土壤中有很好的控制土壤中其他微生物数量的作用，并且还能够对土壤中的有机物质进行分解和吸收，同时也是土壤中微生物链条中的一个重要环节。
三、作用土壤中的微生物在多个方面发挥着非常重要的作用。
