螺旋体、支原体、立克次体、衣原体

千里之行，始于足下。

第 1 页/共 6 页 第十章 螺旋体

螺旋体是一类菌体细长、柔软、弯曲呈螺旋状、能活泼运动的原核单细胞微生物。基本结构与细菌类似，有细胞壁、核质，以二分裂繁殖，广义上属于细菌。革兰氏阴性，但大多数不易着色。多数需厌氧培养，营养要求较高，有些不能用人工培养基培养。有些可通过细菌滤器或滤膜。

疏螺旋体属、密螺旋体属、蛇形螺旋体属、钩端螺旋体属

微生物学检查：

1.直接镜检：以病猪的清新粪便粘液，或病变结肠粘膜刮取物制成薄涂片，染色镜检多用姬姆萨氏法染色法。也可用印度墨汁作负染或镀银染色法染色镜检。相差或暗视野显微镜活体检查，若每个高倍视野中见有2-3个或更多个蛇样运动的较大螺旋体即可确诊。

2）分离培养

过滤培养法：将样品作5-10倍稀释，轻度离心，上清用0.8μm和0.45μm滤膜依次过滤。取滤液直接涂布接种于鲜血琼脂平板上，厌氧培养37-38℃培养3-6d，每隔2d检查1次，当看见到平板上浮上β溶血现象时，即可挑取可疑菌落，作成悬滴或压滴标本，用暗视野显微镜检查。

6. 微生物学检查

直接镜检 标本离心集菌后做暗视野检查或用Fontana镀银法染色镜检

分离与鉴定 接种至Korthof 培养基，置28℃孵育。

阳性标本在2周内可见培养液呈轻度混浊→暗视野显微镜检查→有→则用已知诊断血清鉴定其血清群和血清型。

阴性标本:分离培养应延续看见4个月，仍无生长者。

动物接种

是分离钩体的敏感主意。尤其相宜检查有杂菌污染的标本。常用幼龄豚鼠和地鼠。

分子生物学主意

核酸探针或PCR技术

血清学诊断

血清学诊断 病初和发病后第3~4周各采血清一次。有脑膜刺激，症状者采取脑脊液

显微镜凝集实验

补体结合实验

间接凝集实验

疫水检查

第十一章 支原体/霉形体

霉形体（Mycoplasma）

霉形体又译作支原体，是一类无细胞壁的细菌，是目前已知能在无生命的培养基中繁殖的最小微生物。

概述

是一类无细胞壁的原核单细胞微生物；

多形性，能通过细菌滤器，是目前所知的能够在无生命人工培养基中生长繁殖的最小微生物。

基因组小（0.58-1.35Mb），含有DNA和RNA，

二分裂或芽生方式繁殖；

GC含量低（E.coli 1/5）。 朽木易折，金石可镂。

主要特征

⑴ 缺乏细胞壁；三层结构C膜，C外胞浆膜。

⑵ 在固体培养基上形成“煎荷包蛋”状菌落；

⑶ 能通过200-450nm的细菌滤器；

⑷ 基因组富含A、T；

⑸ 在任何条件下不能回复为具有细胞壁的细菌.

（与L型细菌/Amp有本质上的区别 ）

1．形态染色

无细胞壁，故具有多形性和滤过性。常呈球状、两极状、环状、杆状和丝状，球状细胞直径在300nm以内。革兰氏染色呈阴性。姬姆萨染色呈淡紫色。

2．培养特性

·营养要求较高

培养基中除基础营养外，需牛心浸液，酵母膏，辅酶I、氨基酸等，有的需要加10％-20％的动物血清。

为抑制细菌生长，常参加青霉素、醋酸铊、叠氮钠等药物。

·培养时光较长

在琼脂培养基(1-1.5%)上孵育2-6d，才长出低倍显微镜下可见的极小菌落（10-600μm）。

·培养条件

有氧生长良好，但用固体培养基分离培养时，在5％CO2和95％N2的环境中，生长为佳。相宜温度为36℃。

·菌落特征

典型菌落呈“煎荷包蛋状”。可在鸡胚卵黄囊或绒毛尿囊膜上生长，也能在细胞培养中生长。

 生长缓慢，菌落呈“荷包蛋状”（猪肺炎霉形体除外），菌落中央深入培养基中，致密、色暗；周围长在培养基表面，较透明。

3．生理生化特性

按照对糖类分解能力，分为两群。

一群能分解多种糖类产酸不产气，称发酵型。另一群不能分解糖，称为非发酵型，但能利用精氨酸作为碳素和能量来源。

某些菌株在含血液的培养基中其菌落周围可形成β型或α型溶血。

禽败血支原体、肺炎支原体的菌落能吸附禽类红细胞。“附红细胞体”

4．抗原与分型

主要抗原：

膜蛋白、类脂

交错很少、鉴定

ELISA

PCR

5．生态

自生 热原体是郑重自生

共生 专性厌氧的厌氧原体栖息于牛羊瘤胃内

寄生

支原体广泛寄生于人体、动物和植物。

多种支原体能侵染人类和畜禽的消化道、呼吸道、泌尿生殖道和关节等部位，引起各种炎症和流产、不育等。

支原体的粘附能力相当强，营粘附式“外寄生”，很少侵染到血液和组织内。

6．抵御力

支原体对理化因素敏感。对热敏感。对醋酸铊、结晶紫等有较强的抵御力。

对青霉素、先锋霉素有抵御作用；

对影响蛋白质合成的抗生素敏感：

如泰乐菌素、强力霉素、红霉素、支原净等。 千里之行，始于足下。

第 3 页/共 6 页 7．微生物学诊断

1) 分离培养

将无污染病料用液体培养基稀释，稀释至10-5-10-6，37℃培养2-7d。初代培养未发生色彩变化时可盲目传代2-3次。初代分离时在含有5％-10％CO2的环境中生长更佳。

固体培养基接种后须置高湿环境培养。

2) 生理生化性状测定

毛地黄苷敏感性测定、葡萄糖、精氨酸分解实验。

3) 血清学鉴定

a．生长抑制实验(GIT) 支原体在固体培养基上生长可被相应的抗血清所抑制，常用圆纸片法。

b．表面免疫荧光法(ep-IF) 用已知抗血清制成荧光抗体，直接染色琼脂块上的支原体菌落，在荧光显微镜下看见菌落的特异性荧光。

c．代谢抑制实验(MIT) 支原体的代谢活性可被相应的抗血清抑制。常用的有精氨酸、脲酶代谢抑制实验以及发酵抑制实验。

一、禽类支原体

按照病原性差异，可将禽支原体分为三组：

① 显然具有病原性

鸡毒支原体 M.gallisepticum ;

慢性呼吸道疾病（CRD), 难以根除

新城疫（ND）, E.coli继发

具有N毒素。p237

滑液支原体 M.synoviae;

火鸡支原体 M.meleagridis。

② 在某些情况下具有致病性的支原体 鸡支原体、鸭支原体、莱氏无胆甾原体、尿原体和鹅支原体；

二、猪支原体

猪肺炎支原体 （M. hyopneumoniae）

猪地方流行性肺炎. “猪喘气病”

猪鼻支原体

小猪呼吸道，异常是鼻腔的正常寄居菌，某些条件下能从肺组织中发现，主要是起继发性病原菌作用。

猪滑液支原体

引起关节炎

三、嗜血支原体

附红细胞体（Eperythrozoon）

嗜血巴通体（Haemobartonella）

16SrRNA与肺炎支原体密切；新定为嗜血支原体。

附红细胞表面、昆虫媒介、多无临床症状。

猪、犬、附红细胞体，猫血巴通体更名为猪支原体、犬血支原体、猫血支原体。

第十二章 立克次体与衣原体

立克次体和衣原体都是专性细胞内寄生的原核微生物，结构及繁殖方式与细菌类似，生长要求类似病毒。

介于细菌与病毒之间的微生物。

第一节 立克次体（Rickettsia）

立克次体是一类郑重细胞内寄生、介于细菌和病毒之间的原核细胞型微生物。主要寄生于节肢动物，以其为传扬媒介。许多成员对动物和人朽木易折，金石可镂。

有致病性传染。

如Q热、斑疹伤寒、恙虫病等。

个性

1．多数为专性细胞内寄生、以二分裂方式繁殖；

2. 含有RNA和DNA

3. 多形，G-, 大小介于细菌和病毒之间；

4. 节肢动物作为寄生宿主，或储存宿主，或同时为传扬媒介。

5. 多种抗生素敏感等。

一、生物学特性

1．多形性，主要是球杆状。

2．大小介于细菌和病毒之间，多数不能通过细菌滤器。

3．革兰氏阴性，有细胞壁

4．专性细胞内寄生

5．以二分裂方式繁殖

6．对理化因素抵御力不强，尤对热敏感

7．主要寄生于节肢动物中，通过叮咬感染人和动物

二、培养特性

大多数只能在活的宿主细胞内生长

（郑重的真核细胞内寄生）。

立克次体酶系统不够残破，必须依赖于宿主细胞提供ATP、辅酶I、辅酶A、NAD等才干生长繁殖。

（书：罗沙利马体和巴通体可以在养育基中生长）

常用的培养主意有

动物接种：豚鼠、大鼠、小鼠

鸡胚（卵黄囊）接种：传代 细胞培养

三、抗原结构

立克次体有两种主要抗原：群特异性抗原和型特异性抗原

1．群特异性抗原—脂多糖：为可溶性抗原，耐热，与细 胞壁表面的粘液层有关；

2．型特异性抗原—外膜蛋白：为颗粒性抗原（外膜），不耐热，与细胞壁成分有关。

四、诊断防治

菌血症、血管内皮细胞坏死。

1．特异性预防接种灭活疫苗

2．灭虱、蚤、螨、鼠和注重个人卫生

3．治疗用广谱抗生素

4．磺胺类药物能刺激立克次体生长

五、微生物学诊断

一）病原检查

1. 将病料制成血片或组织抹片，染色镜检或荧光抗体法检查；

2. 病料培养后，利用荧光抗体技术、血清中和实验或补体结合实验等。

二）抗体检查

1. 特异性实验：可应用可溶性抗原和/或颗粒性抗原举行补体结合实验和/或凝集实验。

2. 非特异性实验：魏-斐二氏反应（Weil-Felix

reaction)

第二节 衣原体（Chlamydia）

一类能通过细菌滤器、郑重细胞内寄生，并经独特发育周期的原核细胞型微生物。