骨碎补中总黄酮的提取、含量测定及抗氧化活性研究的答辩

不同提取方法对骨碎补中总黄酮含量的影响比较目的考察不同提取方法对生、制骨碎补中总黄酮提取效果的影响。

方法分别采用超声提取法、索氏提取法、回流提取法对骨碎补生品和砂烫品进行提取，通过紫外-可见分光光度（UV-Vis）法检测总黄酮的含量。

结果回流提取法测得的总黄酮含量最高。

结论骨碎补中总黄酮的提取方法以回流提取法为佳。

标签：骨碎补；总黄酮；提取方法骨碎补是较常用中药，具有补肾强骨、养伤止痛之功效，用于肾虚腰痛、耳鸣耳聋、牙齿松动、跌扑闪挫、筋骨伤折等症[1]。

其活性成分是以柚皮苷为主的二氢黄酮类化合物[2]。

笔者采用超声提取法、索氏提取法、回流提取法3种方法提取生、制骨碎补中总黄酮的含量，以比较不同提取方法对总黄酮提出量的影响。

1实验材料1.1仪器752紫外分光光度计（上海菁华科技仪器有限公司）；电子天平（赛多利斯科学仪器有限公司）。

1.2药品骨碎补药材（购于亳州市药材总公司第二中药批发部）；骨碎补生品和砂烫品均按《中国药典》一部方法制备[1]。

柚皮苷（批号110722-201312，购于中国药品生物制品检定所）；甲醇为AR级。

2方法与结果2.1样品提取方法2.1.1超声提取法取骨碎补生品及砂烫品粗粉于70℃干燥8 h，各精密称取1.0 g，加甲醇80 mL，超声提取1 h。

提取液滤过，置于100 mL容量瓶中，用甲醇定容至100 mL。

2.1.2索氏提取法取骨碎补生品及砂烫品粗粉于70℃干燥8 h，各精密称取1.0 g，置于索氏提取器中，加80 mL甲醇，抽提1 h，将提取液转移至100 mL 容量瓶中，甲醇定容至刻度。

2.1.3回流提取法取骨碎补生品及砂烫品粗粉于70℃干燥8 h，各精密称取1.0 g，加甲醇80 mL水浴回流提取1 h，提取液滤过，置于100 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度。

2.2总黄酮含量测定2.2.1供试品溶液的制备精密吸取上述三种提取方法提取液各1 mL至25 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，作为供试品溶液。

骨碎补总黄酮预防人工关节假体周围骨溶解的实验研究的开题报告标题：骨碎补总黄酮预防人工关节假体周围骨溶解的实验研究研究背景和意义：随着人口老龄化和骨关节疾病发病率的日益增加，全球人工关节置换手术的数量也在逐年增长。

然而，人工关节置换术后出现的假体周围骨溶解问题已经成为了困扰医生和患者的一个难题。

假体周围骨溶解可导致假体松动和关节不稳定，进而影响移动能力和生活质量。

因此，如何有效地预防和治疗假体周围骨溶解已成为了临床研究人员关注的重点。

骨碎补总黄酮是一种天然来源的化合物，已被证明具有一定的骨保护作用，包括可抑制骨吸收和促进骨形成。

然而，其对于假体周围骨溶解的预防作用尚未得到充分研究。

研究内容和方法：本研究旨在探讨骨碎补总黄酮在人工关节假体周围骨溶解中的预防作用。

在实验中，将利用体外实验和动物实验模型，检测不同浓度的骨碎补总黄酮对于假体周围骨溶解的影响。

具体方法如下：1. 体外实验：采用细胞培养技术，将人类骨母细胞（OBs）分为对照组和不同浓度的骨碎补总黄酮处理组，观察骨碎补总黄酮对于OBs细胞增殖、分化和骨基质沉积的影响。

2. 动物实验：选取老年大鼠建立假体置换模型，将大鼠分为对照组和不同剂量的骨碎补总黄酮处理组，观察骨碎补总黄酮对于假体周围骨质疏松、假体松动和假体周围炎症反应的影响。

研究预期成果：本研究期望能够验证骨碎补总黄酮对于假体周围骨溶解的预防作用，并为临床提供新的治疗思路和药物选择。

同时，本实验所采用的体外和动物实验方法也可为同领域研究提供一定的参考价值。

参考文献：1. Gilbert JA, Nodzo SR. The stiff, painful total knee arthroplasty: evaluation and management. J Arthroplasty. 2019 Apr;34(4):658-662.2. Fang Y, Hu X, Liu X, et al. The protective effect of icariin on osteoporosis and bone turnover in ovariectomized rats by regulating the OPG/RANKL/NF-κB pathway in osteoblasts. Life Sci. 2019 Apr 1;222:25-32.3. Li SJ, Liang HW, Zhang Q et al. Effects of total flavonoids of Epimedium on osteoporosis in ovariectomized rats. Chin J Osteoporos. 2019;25(2):159-164.。

内部沸腾法提取骨碎补多糖及其抗氧化活性研究作者：梁家灿文慧香梁云贞来源：《安徽农业科学》2022年第14期摘要以骨碎补为试验材料，采用内部沸腾法来提取骨碎补中的多糖，并且测定骨碎补里提取出来的多糖的抗氧化活性，通过设置单因素试验和4因素3水平的正交试验，研究乙醇解吸液体积分数、乙醇解吸时间、水浴提取温度、水浴提取时间对骨碎补多糖提取率的影响。

结果表明，提取骨碎补中多糖的最佳条件为乙醇解吸液体积分数50%、解吸时间15min、水浴提取温度80 ℃、水浴提取时间4 min，在这个条件下的骨碎补多糖提取率为10.90%。

当骨碎补多糖质量浓度为0.5%时，其对DPPH自由基的清除率达74.8%，对羟基自由基的清除率达78.3%。

关键词骨碎补;多糖;内部沸腾法;抗氧化活性中图分类号 R 284;R 285文献标识码 A文章编号 0517-6611（2022）14-0153-03doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2022.14.037开放科学（资源服务）标识码（OSID）：Study on Extraction of Rhizoma Drynariae Polysaccharide and Its Antioxidant Activity by Internal Boiling MethodLIANG Jia-can1，WEN Hui-xiang2，LIANG Yun-zhen3（1.School of Agriculture and Life Sciences，Kunming University，Kunming，Yunnan 650200;2.School of Chemistry and Chemical Engineering，University of South China，Hengyang，Hunan 421000;3.School of Chemistry and Biological Engineering，Guangxi Minzu Normal University，Chongzuo，Guangxi 532500）Abstract Taking Rhizoma Drynariae as the test material，the internal boiling method was used to extract the polysaccharides in Rhizoma Drynariae，and the antioxidant activity of the polysaccharides extracted from Rhizoma Drynariae was determined.The effects of ethanol desorption liquid fraction，ethanol desorption time，water-bath extraction temperature and water-bath extraction time on the extraction rate of Rhizoma Drynariae were studied by setting up single factor experiment and orthogonal experiment with 4 factors and 3 levels.The results showed that the optimal conditions for extracting polysaccharides from Rhizoma Drynariae were 50% ethanol desorption liquid fraction，15min desorption time，80 ℃ water-bath extraction temperature，and 4min water-bath extraction time.Under these conditions，the extraction rate of Rhizoma Drynariae polysaccharide was10.90%.When the mass concentration of drynaria polysaccharide was 0.5%，its scavenging rate for DPPH free radicals reached 74.8%，and the scavenging rate for hydroxyl radicals reached 78.3%.Key words Rhizoma Drynariae;Polysaccharide;Internal boiling method;Antioxidant activity骨碎補（ Davallia mariesii Moore ex Bak.）是一种比较常用的中药，具有补肾、强骨、止痛等功效，用于治疗耳鸣耳聋、牙齿松动、筋骨伤折、肾虚腰痛、跌扑闪挫等症状[1]。

骨碎补总黄酮对成骨细胞增殖作用的实验研究的开题报告
一、研究背景和意义
骨碎补总黄酮是从骨碎补中提取得到的一种天然成分，已被证实具有多种生物活性，如抗氧化、抗炎、抗肿瘤等。

近年来，研究表明骨碎补总黄酮也具有相关骨代谢
调节作用，对骨细胞的增殖、分化、矿化等有一定影响。

成骨细胞是骨组织生成和修复的重要细胞类型，对于骨质疏松症、骨折等骨骼疾病的治疗具有重要意义。

因此，本研究旨在探究骨碎补总黄酮对成骨细胞增殖的影响，为寻找新型骨质疏松症治疗剂提供新思路和方法。

二、研究内容和方法
本研究将使用MTT法、CCK-8法、膜片计数法等实验手段，探究不同浓度的骨
碎补总黄酮对成骨细胞增殖的影响，并考查增殖相关的细胞信号通路。

三、预期结果和意义
预计本研究将获得骨碎补总黄酮对成骨细胞增殖作用的实验数据，并明确其作用机制与信号通路，为寻找新型骨质疏松症治疗剂提供实验基础和理论支持。

四、研究难点和创新点
研究难点：成骨细胞增殖与信号通路复杂多变，需找到关键的细胞因子和前驱物质，探讨其与骨碎补总黄酮之间的交互作用。

创新点：本研究将为骨质疏松症治疗剂的发现提供新思路和方法，对成骨细胞增殖的探究也将为骨科学领域提供新的研究深度和方向。

骨碎补不同炮制品中总黄酮与柚皮苷的含量测定骨碎补是较常用的中药，具有补肾强骨，活血续伤之功效。

骨碎补活性成分为柚皮苷等二氢黄酮类化合物［1,2］，为了考察不同炮制方法对骨碎补有效成分的影响，我们用分光光度法测定骨碎不同炮制品（生品骨碎补、砂烫骨碎补、酒骨碎补）中总黄酮的含量，用高效液相色谱法测定柚皮苷含量。

1 实验材料1．1 药品骨碎补购自湖北，经鉴定均为水龙骨科植物槲蕨Drymaria fortunei (Kunze)J.sm. 的干燥根茎。

1．2 炮制品生品：（1）除祛杂质，洗净，未去毛。

（2）鲜骨碎补洗净，除祛杂质，去毛。

砂烫骨碎补：取沙子置锅内，用武火加热后，加入净骨碎补或片，不断翻动，烫至鼓起时，取出，筛去沙子，撞去毛，放凉。

酒骨碎补：取去毛骨碎补片，加酒拌匀，用文火炒干为度，每骨碎补１００Ｋg，用酒或白酒１０Ｋg。

1．3 仪器7520型分光光度计，1050型液相色谱仪（惠普公司）；LA-204型电子天平（常熟市衡器厂）。

2、实验方法与结果2．1 总黄酮含量测定方法与结果标准曲线制备精密称取柚皮苷对照品4.9mg，置50ml容量瓶中，甲醇定容至刻度，作为对照品溶液，再分别吸取对照品溶液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0ml于10ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，以甲醇为空白，在283nm处测吸收度，以吸收度（A）为纵坐标，浓度（C）为横坐标，经回归得标准曲线方程A=0.0292C-0.0577，r=0.9998，线性范围4.9~29.4μg.ml-1.2.2 骨碎补不同炮制品样品溶液制备及测定精密称取骨碎补各炮制品干燥粉末(经80℃干燥4小时,过40目筛)1 g,置索氏提取器中，分别用50毫升甲醇提取12小时，将提取液转移至100毫升容量瓶中，甲醇定容至刻度，精密吸取1毫升于25毫升容量瓶中，甲醇定容至刻度，于283纳米处测定吸收度，按回归方程计算总黄酮含量未去毛的骨碎补甲醇提取液中总黄酮的含量平均值却为4.1，其它四组数据的平均值都在5.0左右，数据相差的很大，可见骨碎补经去毛炮制可使总黄酮在甲醇提取液中的含量增加，从而提示我们经去毛炮制有利于有效成分的溶出。

小驳骨中总黄酮、总酚酸含量测定及其抗氧化活性研究作者：陈燕霞等来源：《江苏农业科学》2014年第04期摘要：采用紫外-可见分光光度法测定小驳骨不同提取溶剂、不同部位总黄酮和总酚酸含量及其抗氧化性。

结果表明，小驳骨茎总黄酮含量高于叶，茎水提取液总黄酮含量最高，为4.26%；小驳骨叶总酚酸含量高于茎，叶醇提取液总酚酸含量最高，为11.90%；在抗氧化性方面，茎水提液>茎醇提液>叶水提液>叶醇提液；小驳骨不同部位总黄酮、总有机酸含量、抗氧化性存在差异；总黄酮含量和抗氧化性具有相关性，表明抗氧化活性可能与黄酮类物质有关。

关键词：小驳骨；总黄酮；总酚酸；抗氧化性中图分类号： R284.1 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2014）04-0258-02收稿日期：2013-10-14作者简介：陈燕霞（1988—），女，广东汕头人，硕士研究生，研究方向为中药炮制现代化、中药饮片质量标准化。

E-mail：973414396@。

通信作者：陈康，男，广东阳江人，教授，研究方向为中药炮制现代化、中药饮片质量标准化及中药新药研究。

E-mail：chenkang@。

小驳骨（Gendarussa vulgaris Nees.）别名驳骨丹、接骨草、四季花、小还魂、百节芒、小叶金不换、小接骨草、裹篱樵、长生木、细骨风等，为双子叶植物爵床科小驳骨属植物小驳骨的干燥地上部分，全年均可采收，广泛分布于我国的广东、广西、海南等地。

小驳骨性味辛、温，归肝、肾经；功能为祛瘀止痛，续筋接骨；主用于跌打损伤，筋伤骨折，风湿骨痛，血瘀经闭，产后腹痛[1]。

民间常取小驳骨鲜品捣烂，或用酒调后热敷患处。

据报道，小驳骨含有挥发油、无机元素、生物碱、黄酮苷、有机酸、糖类、氨基酸等[2-4]；卢胜明研究了小驳骨地上部分的95%乙醇提取物的化学成分，从中分离并鉴定了19个化合物[5]；江秀娟等对小驳骨药材进行了性状鉴别、显微鉴别、薄层鉴别，对水分、总灰分、水溶性浸出物含量等进行了测定[6]。

骨碎补总黄酮的实验及临床研究概况李晋玉;赵学千;孙旗;郑晨颖;白春晓;刘楚吟;李亚芳;贾育松【摘要】骨碎补总黄酮作为从中药骨碎补中提取的有效成分,被广泛应用于实验及临床研究.特别是在骨质疏松方面的研究尤为突出,从分子通路,如BMP-Smads信号通路、Wnt/β-catenin通路、MAPK信号通路、CTSK信号通路及OPG/RANKL/RANK信号通路等,到体内雌激素水平、体外细胞、骨组织及临床研究等,从不同的层面论证了骨碎补总黄酮抗骨质疏松的作用.骨碎补总黄酮还可以治疗骨折、骨缺损、膝骨关节炎、类风湿关节炎、股骨头坏死、骨牵张技术等.骨碎补总黄酮在治疗各种不同骨科疾病时,可通过相同的分子蛋白通路发挥作用,从微观角度体现了中医异病同治的治疗特点.虽然骨碎补总黄酮在基础研究及临床治疗方面应用广泛,但是其作用机理仍有待探究,不同分子通路之间的相互作用需要进一步明确.另外,骨碎补总黄酮仍然属于混合成分,其中柚皮苷的作用较为突出,但是并不能完全代替骨碎补总黄酮的作用,需要进一步分离提取,更精准地找到治疗不同骨科疾病不同靶点的有效成分.【期刊名称】《中国骨质疏松杂志》【年(卷),期】2018(024)010【总页数】8页(P1357-1364)【关键词】骨碎补总黄酮;骨质疏松;信号通路;实验研究;临床研究【作者】李晋玉;赵学千;孙旗;郑晨颖;白春晓;刘楚吟;李亚芳;贾育松【作者单位】北京中医药大学东直门医院骨1科,北京100700;北京中医药大学东直门医院骨1科,北京100700;北京中医药大学东直门医院骨1科,北京100700;北京中医药大学东直门医院骨1科,北京100700;北京中医药大学东直门医院骨1科,北京100700;北京中医药大学东直门医院骨1科,北京100700;北京中医药大学东直门医院骨1科,北京100700;北京中医药大学东直门医院骨1科,北京100700【正文语种】中文【中图分类】R285骨碎补为水龙骨科植物槲蕨的干燥根茎，是一味常用的传统中药。