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蛋白酶的分类及酶切位点氨基酸0.ppt氨基酸的名称与符号alanine 丙氨酸Ala Aarginine 精氨酸Arg Rasparagine 天冬酰氨Asn Asx Naspartic acid 天冬氨酸Asp Asx Dcysteine 半胱氨酸Cys Cglutamine 谷氨酰胺Gln Glx Qglutamic acid 谷氨酸Glu Glx Eglycine 甘氨酸Gly Ghistidine 组氨酸His Hisoleucine 异亮氨酸Ile Ileucine 亮氨酸Leu Llysine 赖氨酸Lys Kmethionine 甲硫氨酸Met Mphenylalanine 苯丙氨酸Phe Fproline 脯氨酸Pro Pserine 丝氨酸Ser Sthreonine 苏氨酸Thr Ttryptophan 色氨酸Trp Wtyrosine 酪氨酸Tyr Yvaline 缬氨酸Val V血清终止胰酶消化的原理血清终止的原理其实是竞争抑制。
就是用过量的牛血清中含有的蛋白来和胰酶结合。
不给胰酶消化细胞蛋白的机会。
细胞传代时，血清为什么能终止胰酶消化？胰蛋白酶的酶切位点是肽链的Lys和Arg两个残疾的羧基端肽键，血清的加入可使酶饱和，严格上说不是竞争性抑制，因为血清蛋白不是抑制剂，还是底物！什么样的细胞不能用胰酶-EDTA消化植物细胞不能用胰酶-EDTA消化，要用纤维素酶消化。
应该是肿瘤细胞吧。
正常的细胞，貌似都需要用胰酶或者胶原酶消化。
EDTA-胰酶，只不过是在胰酶里加入了EDTA而已。
EDTA是乙二胺四乙酸，一种金属螯合剂。
一般和胰蛋白酶配合使用。
原因在于，钙，镁等金属离子会降低胰酶活力，故在使用胰酶消化液时要配合加入EDTA。
它可以螯合这些离子，消除对胰酶的抑制。
干细胞饲养层制作中，胰酶—EDTA消化成纤维细胞（MEF）时，EDTA的作用是什么？应该是胰酶分散细胞，EDTA鳌合金属离子使金属酶失活《军医进修学院学报》1992年02期加入收藏投稿正常人血浆蛋白酶解产物对胃癌细胞肺转移抑制作用的研究焦顺昌赵东海黄昌霞王洪海【摘要】：本文采用胰凝乳蛋白酶和胃蛋白酶联合消化方法得到正常人血浆(NHP)有限蛋白酶解产物(NHP-EP)。
蛋白酶的论述摘要：蛋白酶（英语：Protease）是生物体内的一类酵素（酶），它们能够分解蛋白质。
分解方法是打断那些将氨基酸连结成多肽链的肽键。
抑制蛋白酶活性的小分子化合物被称蛋白酶抑制剂。
许多病毒蛋白酶的抑制剂是很有效的抗病毒药。
1．木瓜蛋白酶1.1木瓜蛋白酶简介木瓜蛋白酶，是一种蛋白水解酶，可将抗体分子水解为3个片段。
是番木瓜中含有的一种低特异性蛋白水解酶，活性中心含半胱氨酸，属巯基蛋白酶，应用于啤酒及食品工业。
1.2木瓜蛋白酶的特点木瓜蛋白酶（Papain）简称木瓜酶，又称为木瓜酵素。
是利用未成熟的番木瓜（Carica papaya）果实中的乳汁，采用现代生物工程技术提炼而成的纯天然生物酶制品。
它是一种含巯基(-SH)肽链内切酶，具有蛋白酶和酯酶的活性，有较广泛的特异性，对动植物蛋白、多肽、酯、酰胺等有较强的水解能力，同时，还具有合成功能，能把蛋白水解物合成为类蛋白质。
溶于水和甘油，水溶液无色或淡黄色，有时呈乳白色；几乎不溶于乙醇、氯仿和乙醚等有机溶剂。
最适合PH值6～7(一般3～9.5皆可)，在中性或偏酸性时亦有作用，等电点（pI)为8.75；最适合温度55～65℃(一般10～85℃皆可)，耐热性强，在90℃时也不会完全失活；受氧化剂抑制，还原性物质激活。
木瓜蛋白酶由212个氨基酸残基组成，当用氨基肽酶从N末端水解掉分子中的2/3肽链后，剩下的1/3肽链仍保持99%的活性，说明木瓜蛋白酶的生物活性集中表现在C末端的少数氨基酸残基及其所构成的空间结构区域。
木瓜蛋白酶papain属巯基蛋白酶，具有较宽的底物特异性，作用于蛋白质中L-精氨酸、L-赖氨酸、甘氨酸和L-瓜氨酸残基羧基参与形成的肽键。
此酶属内肽酶，能切开全蛋蛋白质分子内部肽链—CO—NH—生成分子量较小的多肽类。
存在于木瓜胚乳中的蛋白酶。
EC3．4．22．2。
作为植物来源的蛋白酶来说，此酶研究进展的最快。
此酶主要是以内肽酶的形态起作用。
蛋白酶的适宜pH值因不同的酶而异，不同类型的蛋白酶在不同的pH条件下具有最佳的活性。
一般来说，蛋白酶可以分为碱性蛋白酶、中性蛋白酶和酸性蛋白酶。
-碱性蛋白酶（如胃蛋白酶）通常在较低的pH范围内活性较高，最适宜pH约为2-4。
-中性蛋白酶（如胰蛋白酶）的最佳活性pH通常在中性范围，大约在pH 6-8之间。
-酸性蛋白酶（如木瓜蛋白酶）在较高的pH条件下活性较高，最适宜pH约为4-6。
需要注意的是，这些数值仅作为一般参考，实际情况可能因酶的来源、特性和应用环境的差异而有所变化。
因此，在具体实验或工业应用中，最好根据具体蛋白酶的要求和实际情况进行优化和调整。
1。
蛋白酶种类蛋白酶是一类具有催化作用的蛋白质分子，它们在生物体内起着至关重要的作用。
根据其催化的反应类型和底物特异性，蛋白酶可以分为多个种类。
本文将介绍几种常见的蛋白酶及其功能。
一、胰蛋白酶（trypsin）胰蛋白酶是一种水解蛋白质的酶，主要在胰腺中产生。
它能够将蛋白质分解为小分子的胺基酸，从而提供给机体进行能量代谢和新陈代谢。
胰蛋白酶的活性受到胃酸的抑制，一般在小肠中发挥作用。
二、淀粉酶（amylase）淀粉酶是一种水解淀粉为糖的酶，主要存在于唾液和胰液中。
它能够将淀粉分解为葡萄糖等小分子糖类，为机体提供能量。
淀粉酶在口腔中开始发挥作用，继续在胃和小肠中进行消化。
三、脂肪酶（lipase）脂肪酶是一种水解脂肪的酶，主要存在于胰液中。
它能够将脂肪分解为甘油和脂肪酸，从而使脂肪被人体吸收和利用。
脂肪酶主要在小肠中发挥作用，与胆汁中的胆盐一起协同作用，促进脂肪的消化和吸收。
四、蛋白酶K（proteinase K）蛋白酶K是一种特殊的蛋白酶，具有广泛的蛋白质水解能力。
它能够降解各种酶、蛋白质、肽链等，对于研究蛋白质结构和功能具有重要意义。
蛋白酶K在实验室中常用于DNA和RNA的提取过程中，用来去除蛋白质的污染物。
五、胃蛋白酶（pepsin）胃蛋白酶是胃液中的一种主要酶类，能够水解蛋白质。
胃蛋白酶在胃酸的酸性环境下才能发挥活性，它能够将蛋白质分解为小分子的多肽，为后续消化和吸收提供条件。
六、胰凝乳蛋白酶（chymotrypsin）胰凝乳蛋白酶是一种水解蛋白质的酶，主要存在于胰液中。
它能够将蛋白质分解为多肽和氨基酸，具有较强的蛋白质分解能力。
胰凝乳蛋白酶主要在小肠中发挥作用，与胰蛋白酶协同作用，促进蛋白质的消化和吸收。
七、胃蛋白酶原（pepsinogen）胃蛋白酶原是胃液中的一种前体酶，它在胃酸的作用下转化为活性的胃蛋白酶。
胃蛋白酶原的转化是一个自动催化的过程，它能够保护胃黏膜免受胃酸的腐蚀。
胃蛋白酶原的转化是胃液中消化蛋白质的重要步骤之一。
一、蛋白酶的分类、主要用途及作用二、产蛋白酶菌株的筛选三、产酶发酵四、蛋白酶活性测定的方法蛋白酶的分类、主要用途及作用酶：酶是具有生物催化功能的生物大分子。
蛋白酶：水解蛋白质肽键的一类酶的总称蛋白酶分类：1据水解多肽的方式分为内肽酶和外肽酶2据反应的最适pH值分为酸性，碱性，中性蛋白酶蛋白酶简介：广泛存在于动物内脏、植物茎叶、果实和微生物中。
微生物蛋白酶，主要由霉菌、细菌，其次由酵母、放线菌生产。
催化蛋白质水解的酶种类很多，重要的有胃蛋白酶、胰蛋白酶、组织蛋白酶、木瓜蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶等。
蛋白酶对所作用的底物有严格的选择性，一种蛋白酶只能作用于蛋白质分子中一定的肽键，如胰蛋白酶催化水解碱性氨基酸所形成的肽键。
蛋白酶分布广泛，主要存在于人和动物消化道中，在植物和微生物中含量丰富，由于动植物资源有限，工业生产上生产蛋白酶制剂主要利用枯草杆菌等微生物发酵设备。
一、酸性蛋白酶定义：酸性蛋白酶是一种能在酸性环境下水解蛋白质的酶类注：酸性蛋白酶是指蛋白酶具有较低的最适pH,不是指酸性基团存在于酶的活性部位.简介：主要来源于动物的脏器和微生物分泌物，包括胃蛋白酶、凝乳酶和一些微生物蛋白酶。
根据其产菌的不同，微生物酸性蛋白酶可以分为霉菌酸性蛋白酶、酵母菌酸性蛋白酶和担子菌酸性蛋白酶，根据作用方式可以分为两类：一类是与胃蛋白酶相似，主要的产酶微生物是曲霉、青霉和根酶等；另一类是与凝乳酶相似，主要产酶微生物是毛酶和栗疫酶等，从酶的活力-PH曲线分析,在酶的活性部位中含有一个或更多的羧基，这一类蛋白酶中研究最彻底的是胃蛋白酶。
酸性蛋白酶具有较好的耐酸性，目前用于工业化生产的酸性蛋白酶大多为霉菌酸性蛋白酶，此类酶的最适作用pH值为3.0左右，当pH值升高时，酸性蛋白酶的酶活会明显降低，且此类酶不耐热，当温度达到50℃以上时很不稳定，从而限制了酸性蛋白酶的应用范围。
基本性质酸性蛋白酶的最适PH从2左右(胃蛋白酶)到4左右应用1酿酒：酸性蛋白酶在酿酒的过程中起协同作用，具有溶解发酵原料，促进微生物繁殖，降解酵母菌体蛋白等多种功能。
蛋白酶的种类
1．木瓜蛋白酶
木瓜蛋白酶，是一种蛋白水解酶，可将抗体分子水解为3个片段。
是番木瓜中含有的一种低特异性蛋白水解酶，活性中心含半胱氨酸，属巯基蛋白酶，应用于啤酒及食品工业。
木瓜蛋白酶papain属巯基蛋白酶，具有较宽的底物特异性，作用于蛋白质中L-精氨酸、L-赖氨酸、甘氨酸和L-瓜氨酸残基羧基参与形成的肽键。
此酶属内肽酶，能切开全蛋蛋白质分子内部肽链—CO—NH—生成分子量较小的多肽类。
木瓜蛋白酶是一种在酸性、中性、碱性环境下均能分解蛋白质的蛋白酶。
它的外观为白色至浅黄色的粉末，微有吸湿性。
木瓜蛋白酶（Papain）简称木瓜酶，又称为木瓜酵素。
是利用未成熟的番木瓜（Carica papaya）果实中的乳汁，采用现代生物工程技术提炼而成的纯天然生物酶制品。
它是一种含疏基(-SH)肽链内切酶，具有蛋白酶和酯酶的活性，有较广泛的特异性，对动植物蛋白、多肽、酯、酰胺等有较强的水解能力，同时，还具有合成功能，能把蛋白水解物合成为类蛋白质。
溶于水和甘油，水溶液无色或淡黄色，有时呈乳白色；几乎不溶于乙醇、氯仿和乙醚等有机溶剂。
最适合PH值6～7(一般3～9.5皆可)，在中性或偏酸性时亦有作用，等电点（pI)为8.75；最适合温度55～65℃(一般10～85℃皆可)，耐热性强，在90℃时也不会完全失活；受氧化剂抑制，还原性物质激活。
2．胃蛋白酶
胃蛋白酶（英文名称：Pepsin）是一种消化性蛋白酶，由胃部中的胃粘膜主细胞所分泌，功能是将食物中的蛋白质分解为小的肽片段。
胃蛋白酶原由胃底主细胞分泌，在pH1.5～5.0条件下，被活化成胃蛋白酶，将蛋白质分解为胨，而且一部分被分解为酪氨酸、苯丙氨酸等氨基酸。
可分解蛋白质中苯丙氨酸或酪氨酸与其他氨基酸形成的肽键，产物为蛋白胨及少量的多肽和氨基酸，该酶的最适pH为2左右。
3．中性蛋白酶
中性蛋白酶是由枯草芽孢杆菌经发酵提取而得的，属于一种内切酶，可用于各种蛋白质水解处理。
在一定温度、PH值下，本品能将大分子蛋白质水解为氨基酸等产物。
可广泛应用于动植物蛋白的水解，制取生产高级调味品和食品营养强化剂的HAP和HVP，此外还可用于皮革脱毛、软化、羊毛丝绸脱胶等加工。
利用中性蛋白酶的酶促反应，可把动植物的大分子蛋白质水解成小分子肽或氨基酸，以利于蛋白质的有效吸收和利用，其水解液AN%高，水解度高，风味佳，已广泛用于生产高级调味品和食品营养强化剂，各种动物来源性抽提物生产功能性骨、肉提取物（骨素）、水产提取物、蛋白胨、肽等及研究开发一些高附加值的功能食品。
4．胰凝乳蛋白酶
胰凝乳蛋白酶chymotrypsin 又叫糜蛋白酶，是一种典型的丝氨酸蛋白酶，脊椎动物的消化酶。
属于肽链内切酶，主要切断多肽链中的芳香族氨基酸残基的羧基一侧。
5．胰蛋白酶
胰蛋白酶Trypsin (Parenzyme) 为蛋白酶的一种，是肽链内切酶，它能把多肽链中赖氨酸和精氨酸残基中的羧基侧切断。
它不仅起消化酶的作用，而且还能限制分解糜蛋白酶原、羧肽酶原、磷脂酶原等其它酶的前体，起活化作用。
是特异性最强的蛋白酶，在决定蛋白质的氨基酸排列中，它成为不可缺少的工具。
6．羧肽酶
一类肽链端解酶，作用于肽链的游离羧基末端释放单个氨基酸。
羧肽酶是催化水解多肽链含羧基末端氨基酸的酶。
酶活性与锌有关。
羧肽酶A：是水解由芳香族和中性脂肪族氨基酸形成的羧基末端。
比如酪氨酸，苯丙氨酸，丙氨酸等
羧肽酶B：主要水解碱性氨基酸形成的羧基末端。
羧肽酶A可以切割C端除了Lys、Arg、Pro的氨基酸
羧肽酶B可以切割C端的Lys或Arg
但如果倒数第二个氨基酸为Pro，两种羧肽酶均不能作用
羧肽酶是一种消化酶。
可专一性地从肽链的C端开始逐个降
解，释放出游离氨基酸的一类肽链外切酶。
以酶原形式存在于生物体内。
常用的有A、B、C及Y ，4种羧肽酶。
羧肽酶A能水解蛋白质和多肽底物C端芳香族或中性脂肪族氨基酸残基，释放除脯氨酸、羟脯氨酸、精氨酸和赖氨酸之外的所有C末端氨基酸，更易于水解具有芳香族侧链和大脂肪侧链的羧基端氨基酸。
比如酪氨酸，苯丙氨酸，丙氨酸等。
羧肽酶A （carboxypeptidase A）,CPA，因其底物的首位字“A”而得名羧肽酶A 。
7．弹性蛋白酶
催化弹性蛋白的肽键或由中性氨基酸形成的其他肽键水解的一种酶。
别名: 胰酞酶E；胰肽酶Ⅰ；弹性蛋白酶(猪胰)；胰弹性蛋白酶(猪胰)。
化学性质: 弹性蛋白酶的性状：
1.其外观呈淡黄色至深黄色粉末，也可是浅褐至深褐色液体。
可溶于水，不溶于乙醇，有吸湿性。
2.纯胰弹性蛋白酶，由240个氨基酸残基组成的单一肽链，相对分子质量约为25000，等电点为9.5。
3.弹性蛋白酶可使结缔组织蛋白质中的弹性蛋白消化分解，包括肽键结合的、酰胺结合的和酯结合的进行加水分解。
作用的最适pH值7.8，最适作用温度25℃。
4.弹性蛋白酶具有明显的β-脂蛋白酶作用，能活化磷酯酶A，降低血清胆固醇，改善血清脂质，降低血浆胆固醇及第密度脂蛋白、甘油三酯，升高高密度脂蛋白、阻止脂质向动脉壁沉积和增大动脉的弹性，具有抗动脉粥样硬化及抗脂肪肝作用。
弹性蛋白酶的用途：
在医学临床主要用于治疗高血脂症，防止动脉粥样硬化、脂肪肝。
也可用于肉类和水产加工中的嫩化。
弹性蛋白酶的制备方法：
一般由动物的胰脏用水提取而得，也可用细菌的培养液在低温下用水提取而得。
