探讨自然流产与染色体异常之间的关系及其临床意义

79例自然流产绒毛的染色体分析李 凡,温庆荣,郑胤强,马 莉,郭 芸(赣州巿妇女儿童医院,江西 赣州 341000)摘 要:目的:探讨自然流产与染色体异常的关系,为临床提供科学依据。

方法:对79例自然流产绒毛采用直接法或培养法制备染色体,常规制片,G 显带,染色体核型分析。

结果:检出染色体异常42例;异常率为53.16%。

结论:染色体异常是导致自然流产的重要因素之一。

进行染色体检查,对自然流产的病因、诊断及再次妊娠具有重要的指导意义。

关键词:自然流产;染色体异常中图分类号:R 715.5 文献标识码:A 文章编号:1001-5779(2009)03-0376-02自然流产是妇科的常见病之一。

合子内在的缺陷是引起胚胎早死及自发流产的重要原因。

我室对79例自然流产绒毛进行染色体分析,现报告如下。

1 对象与方法1.1 对象 79例绒毛来自因有自然流产先兆,前来我院妇科门诊、遗传门诊就诊以及在妇科病房住院的患者,均B 超检查提示:/胚胎停育0或难免流产,而行清宫术(流产胚胎为孕37~84天,孕妇年龄20~36岁)1.2 方法 在无菌负压吸宫术中获得绒毛组织,置无菌生理盐水中进行挑选,选出优质绒毛组织5~7m g 剪碎置10mL 的离心管,加入1%枸橼酸钠3~4mL 及秋水仙素(最终浓度为0.5~0.6L g /mL)混匀,置37e 水浴箱中15m in ,取出加固定剂(甲醇B 冰醋酸=3B 1)0.5mL 混匀,以1500r /m i n 离心3m i n ,弃上清液。

加固定液3mL 混匀,置室温固定15m i n ,离心弃上清液。

再重复固定一次。

加60%冰醋酸数滴后再加固定剂数滴,离心弃上清液。

加新配固定剂数滴混匀,滴于预热玻片上,56e 烤箱烤片14h 。

G 显带,核型分析3个,计数20个以上。

结构异常或嵌合体增加计数及分析。

同时,对79例夫妇进行外周血染色体分析。

按照I SC N (1995)描述核型。

㊃论著㊃D O I:10.3969/j.i s s n.1672-9455.2023.08.010自然流产及指征引产组织与染色体异常的关系*胡勤,叶强,周子靖,金朝ә四川省自贡市妇幼保健院检验科,四川自贡643000摘要:目的探讨自然流产及指征引产组织与染色体异常的关系㊂方法采用低深度高通量全基因组拷贝数变异测序(C N V-S e q)技术对自然流产组织和指征引产胎儿组织进行染色体检测,其中自然流产标本141例,指征引产标本69例㊂结果自然流产组织141例,指征引产组织69例均检测成功㊂141例自然流产组织中染色体异常65例,检出率为46.10%,其中染色体数目异常46例,意义不明或良性结构异常12例,致病性结构异常7例;69例指征引产组织中染色体异常28例,检出率为40.58%,其中染色体数目异常13例,意义不明或良性结构异常10例,致病性结构异常5例㊂结论染色体异常(数目和结构)是导致自然流产和指征引产的主要原因,采用C N V-S e q技术检测自然流产和指征引产组织有利于查找遗传学病因,对再次生育指导有重要意义㊂关键词:低深度高通量全基因组拷贝数变异测序;稽留流产;指征引产;染色体异常中图法分类号:R715.5;R714.21文献标志码:A文章编号:1672-9455(2023)08-1063-05A n a l y s i s o f c h r o m o s o m a l a b n o r m a l i t i e s i n s p o n t a n e o u s a b o r t i o n a n d r e f e r e n c e a b o r t i o n t i s s u eb y w h o l e g e n o m ec o p y n u m b e r v a r i a t i o n s e q u e n c i n g*HU Q i n,Y E Q i a n g,Z H O U Z i j i n g,J I N Z h a oәD e p a r t m e n t o f C l i n i c a l L a b o r a t o r y,Z i g o n g M a t e r n a l a n d C h i l d H e a l t h C a r eH o s p i t a l,Z i g o n g,S i c h u a n643000,C h i n aA b s t r a c t:O b j e c t i v e T o i n v e s t i g a t e t h e r e l a t i o n s h i p b e t w e e n s p o n t a n e o u s a b o r t i o n t i s s u e,c i t a t i o n a n d c h r o m o s o m a l a b n o r m a l i t i e s.M e t h o d s L o w d e p t h a n d h i g h t h r o u g h p u t c o p y n u m b e r v a r i a t i o n s e q u e n c i n g (C N V-S e q)t e c h n i q u e w a s u s e d t o d e t e c t c h r o m o s o m e s i n s p o n t a n e o u s a b o r t i o n t i s s u e s a n d r e f e r e n c e f e t u s e s, i n c l u d i n g141c a s e s o f s p o n t a n e o u s a b o r t i o n t i s s u e a n d69c a s e s o f i n d u c e d l a b o r t i s s u e.R e s u l t s A t o t a l o f141 c a s e s o f s p o n t a n e o u s a b o r t i o n t i s s u e a n d69c a s e s o f i n d u c e d l a b o r t i s s u e w e r e d e t e c t e d s u c c e s s f u l l y.T h e r e w e r e65c a s e s o f c h r o m o s o m e a b n o r m a l i t y i n s p o n t a n e o u s a b o r t i o n(46.10%),i n c l u d i n g46c a s e s o f c h r o m o-s o m e a b n o r m a l i t y,12c a s e s o f u n k n o w n o r b e n i g n s t r u c t u r a l v a r i a t i o n,7c a s e s o f p a t h o g e n i c s t r u c t u r a l v a r i a-t i o n.A t o t a l o f28c a s e s o f c h r o m o s o m e a b n o r m a l i t y(40.58%)w e r e i d e n t i f i e d,i n c l u d i n g13c a s e s o f c h r o m o-s o m e a b n o r m a l i t y a n d5c a s e s o f p a t h o g e n i c s t r u c t u r a l v a r i a t i o n.C o n c l u s i o n C h r o m o s o m e a b n o r m a l i t y(n u m-b e r a n d s t r u c t u r e)i s t h e m a i n c a u s e o f s p o n t a n e o u s a b o r t i o n a n d i n d u c t i o n o f l a b o r.T h e d e t e c t i o n o f a b o r t i o n a n d i n-d u c t i o n o f l a b o r b y c h r o m o s o m e c o p y n u m b e r v a r i a t i o n s e q u e n c i n g t e c h n o l o g y i s h e l p f u l t o f i n d t h e g e n e t i c c a u s e, w h i c h i s o f g r e a t s i g n i f i c a n c e f o r f e r t i l i t y g u i d a n c e a g a i n.K e y w o r d s:h i g h-t h r o u g h p u t w h o l e g e n o m e c o p y n u m b e r v a r i a t i o n s e q u e n c i n g; d e l a y e d a b o r t i o n;r e-f e r s t o t h e i n d u c t i o n o f l a b o r;c h r o m o s o m a l a b n o r m a l i t y自然流产指非人为目的造成的流产,在所有临床妊娠中,大约15%会发生自然流产[1]㊂近年来有研究表明,高龄㊁生殖器官异常㊁黄体功能不全㊁配偶精子异常㊁妊娠感染㊁初产妇㊁自然流产史及不良生活习惯等均是自然流产的主要危险因素[2]㊂从遗传学角度分析,染色体异常可导致自然流产,并且可增加后续妊娠失败和其他并发症的发生率㊂国外有研究表明, 50%的自然流产存在染色体异常,包括嵌合体㊁结构和数目异常,如三体㊁单体㊁多倍体和X单体[3]㊂因此,分析流产组织中的染色体有助于了解终止妊娠的病因,以及改善自然流产患者后续妊娠的管理㊂在所有孕妇中,胎儿结构异常占3%,几十年来,基于超声波的筛查一直是常规产前检查的组成部分,可发现明显的结构异常,临床推荐引产并查找畸形原因[4]㊂大约一半的主要结构异常可以在妊娠前3个月检测到,包括颅内/无脑畸形㊁腹壁缺陷㊁前脑无裂畸形和囊性水瘤等㊂然而,由于有些器官㊁系统的持续发展,部分异常直到怀孕后期才会显现出来㊂随着检查能力及经㊃3601㊃检验医学与临床2023年4月第20卷第8期 L a b M e d C l i n,A p r i l2023,V o l.20,N o.8*基金项目:四川省自贡市科学技术局重点项目(2019Y L S F35)㊂作者简介:胡勤,女,主管技师,主要从事产前诊断的分子遗传学及新生儿遗传代谢性疾病方面的研究㊂ә通信作者,E-m a i l: 452672995@q q.c o m㊂Copyright©博看网. All Rights Reserved.验的增加,让中枢神经系统和心血管系统的详细检查成为可能,目前在有产前诊断资质的机构广泛进行胎儿神经超声图和胎儿超声心动图等专门检查㊂当产前检查发现重大结构异常时,建议使用染色体芯片或者全基因组拷贝数变异测序技术进行基因检测,因为它具有更高的基因组分辨率[5]㊂本研究选取自然流产组织和指征引产胎儿组织,采用低深度高通量全基因组拷贝数变异测序(C N V-S e q)技术检测其染色体,并分析染色体与自然流产组织及指征引产胎儿组织的关系,现报道如下㊂1资料与方法1.1一般资料选取2019年1月至2020年12月于本院就诊孕妇的141例流产组织和69例胎儿组织作为研究对象,临床诊断为自然流产排出的绒毛组织㊁稽留流产行清宫术后留取的标本及有临床指征需要引产的胎儿组织㊂其中自然流产标本141例,指征引产标本69例㊂自然流产组织孕妇平均年龄(29.89ʃ4.45)岁,受检时平均孕周(9.50ʃ1.52)周,平均自然流产次数(1.29ʃ0.94)次;指征引产组织孕妇平均年龄(27.28ʃ3.88)岁,受检时平均孕周(20.52ʃ5.82)周㊂所有患者均知情同意并签署知情同意书,本研究经本院伦理委员会审核批准㊂1.2方法1.2.1取样自然流产组织为小孕周时,取约10 m g新鲜绒毛组织;可见胎儿组织时,取1c mˑ1c m 胎儿组织标本㊂使用生理盐水多次漂洗,除去血液㊁污物后剪碎㊂1.2.2基因组D N A提取采用博奥生物集团试剂盒提取基因组D N A,裂解液和蛋白酶K消化组织过夜,后续纯化和收集D N A,用于高通量测序检测; N a n o D r o p2000(美国T h e r m o F i s h e r s c i e n t i f i c I N C)测定D N A浓度,保证建库用量大于600n g,A260/A280为1.8~2.0,置于-70ħ冰箱储存备用,避免标本D N A反复冻融㊂1.2.3基因组建库将600n g基因组D N A通过片段化酶消化为片段,将末端修复,加上特异序列标签后扩增短片段,采用S Y B G r e e n实时荧光定量技术检测,为测序做准备㊂1.2.4测序检测及结果判读采用博奥生物集团I o n T o r r e n t测序平台对标本进行检测,严格按照实验室标准操作规程进行,设置检测400个F l o w s㊂芯片质控I S P L o a d i n g>75%,P o l y c l o n a l<35%,L o w Q u a l i t y<10%,T o t a l R e a d s>75M b,每个标本数据量>3.5M b㊂对染色体非整倍体及ȡ5M b的微缺失和微重复进行分析㊂通过人类染色体不平衡和表型数据库D E C I P H E R(h t t p s://d e c i p h e r.s a n g e r.a c. u k/i n d e x)㊁C l i n G e n(h t t p s://w w w.c l i n i c a l g e n o m e. o r g)㊁在线人类孟德尔遗传数据库(OM I M,h t t p s:// w w w.o m i m.o r g)和基因组变异数据库(D G V,h t-t p://d g v.t c a g.c a/d g v/a p p/h o m e)等公共数据库进行比对分析,判断所检出C N V的性质,进行结果判读㊂参照美国医学遗传学与基因组学学会遗传变异分类标准与指南[6],将检测标本中发现的C N V s分为以下5个级别:明确致病性C N V㊁可能致病C N V㊁良性C N V㊁可能良性C N V㊁临床意义不明C N V㊂2结果2.1自然流产组织和指征引产组织检出率及染色体异常结果比较纳入本研究的141例自然流产组织和69例指征引产组织均检测成功,数据达到质控标准㊂染色体异常93例,检出率为44.29%(93/210)㊂141例自然流产组织中染色体异常65例,检出率46.10%,其中染色体数目异常46例,致病性结构异常7例,意义不明或良性结构异常12例㊂69例指征引产组织中染色体异常28例,检出率40.58%,其中染色体数目异常13例,致病性结构异常5例,意义不明或良性结构异常10例㊂2.2染色体数目异常分析(1)65例自然流产组织染色体异常中染色体数目异常46例,占异常染色体的70.77%,其中三体型33例,单体型11例(T u r n e r 综合征10例,21号染色体单体1例),三倍体2例(多重S T R位点分析验证一致)㊂(2)28例指征引产组织染色体异常中染色体数目异常13例,占异常染色体的46.43%,其中三体型9例,单体型4例,均为T u r n e r综合征㊂9例三体中有7例为18号染色体三体,均因为B超检查提示异常而进一步进行诊断,其中4例胎儿水肿合并淋巴水囊瘤,2例胎儿多发畸形, 1例胎儿为足内翻;另外2例三体分别为13号染色体三体和21号染色体三体,表现为胎儿唇裂㊁全身水肿和先天性心脏病㊂4例T u r n e r综合征均表现为水肿㊁淋巴水囊瘤㊂见表1㊂表1 C N V-S e q技术检测流产组织染色体数目异常结果[n(%)]检测结果描述自然流产组织数目异常(n=46)指征引产组织数目异常(n=13)S e q(2)ˑ32号染色体三体1(2.17)0(0.00)S e q(5)ˑ35号染色体三体1(2.17)0(0.00)S e q(6)ˑ36号染色体三体1(2.17)0(0.00)S e q(7)ˑ37号染色体三体2(4.35)0(0.00)S e q(8)ˑ38号染色体三体1(2.17)0(0.00)S e q(9)ˑ39号染色体三体6(13.04)0(0.00)㊃4601㊃检验医学与临床2023年4月第20卷第8期 L a b M e d C l i n,A p r i l2023,V o l.20,N o.8Copyright©博看网. All Rights Reserved.续表1 C N V-S e q技术检测流产组织染色体数目异常结果[n(%)]检测结果描述自然流产组织数目异常(n=46)指征引产组织数目异常(n=13) S e q(12)ˑ312号染色体三体3(6.52)0(0.00)S e q(13)ˑ313号染色体三体4(8.70)1(7.69)S e q(15)ˑ315号染色体三体1(2.17)0(0.00)S e q(16)ˑ316号染色体三体8(17.39)0(0.00)S e q(17)ˑ317号染色体三体1(2.17)0(0.00)S e q(18)ˑ318号染色体三体1(2.17)7(53.85)S e q(20)ˑ320号染色体三体1(2.17)0(0.00)S e q(21)ˑ121号染色体单体1(2.17)0(0.00)S e q(21)ˑ321号染色体三体1(2.17)1(7.69)S e q(22)ˑ322号染色体三体1(2.17)0(0.00)S e q(x o)ˑ1T u r n e r综合征10(21.74)4(30.77)三倍体69,X X Y三倍体2(4.35)0(0.00)2.3染色体致病性结构异常组织分析自然流产组织染色体结构异常19例,其中致病性结构异常7例;指征引产组织染色体结构异常15例,其中致病性结构异常5例㊂见表2㊂表2 C N V-S e q技术检出的致病性结构异常组织分析致病性结构异常组织结果描述自然流产组织1S e q[h g19]3q29(193.04~197.84M b)ˑ3,S e q[h g19]5q35.2q35.3(174.70~180.72M b)ˑ1, S e q[h g19]22q11.1q11.2(17.06~18.62M b)ˑ33号染色体q29(193.04~197.84M b)位置存在约4.80M b的拷贝数重复;5号染色体q35.2q35.3(174.70~180.72M b)位置存在约6.02M b的拷贝数缺失; 22号染色体q11.1q11.21(17.06~18.62M b)位置存在约1.56M b的拷贝数重复㊂根据C N V评判标准,综合认定这3个位置的变异均为致病性C N V㊂自然流产组织2S e q[h g19]d e l(8)(p23.3p11.23), S e q[h g19]d u p(8)(q12.1q24.3)m o s 8号染色体p23.3p11.23(0.16~38.30M b)位置存在约38.14M b的拷贝数缺失;同时8号染色体q12.1q24.3(61.50~146.30M b)位置存在约84.80M b的拷贝数重复(拷贝数为2.6)㊂根据C N V评判标准,综合认定这2个位置的变异均为致病性C N V自然流产组织3S e q[h g19]X q25(122.90~123.18M b)ˑ1X染色体q25(122.90~123.18M b)位置存在约0.28M b的拷贝数缺失,临床表型特征为:X-连锁淋巴增生综合征2型自然流产组织4S e q[h g19]d e l(11)(q13.3q14.1)11号染色体q13.3q14.1(69.30~82.90M b)位置存在约13.60M b的拷贝数缺失,常见特征包括发育迟缓㊁智力障碍㊁行为问题和独特的面部特征自然流产组织5S e q[h g19]2p25.3(0.02~3.04M b)ˑ3,S e q[h g19]13q21.2q34(61.58~115.10M b)ˑ12号染色体p25.3(0.02~3.04M b)位置存在约3.02M b的拷贝数重复,为临床意义不明确C N V;13号染色体q21.2q34(61.58~115.10M b)位置存在约53.52M b的拷贝数缺失,为致病性C N V自然流产组织6S e q[h g19]3q29(195.66~197.34M b)ˑ13号染色体q29(195.66~197.34M b)位置存在约1.68M b的拷贝数缺失,为致病性C N V自然流产组织7S e q[h g19]6p25.3p24.3(0.14~9.40M b)ˑ1, S e q[h g19]6q13q27(71.50~170.92M b)ˑ3[50%]6号染色体p25.3p24.3(0.14~9.40M b)位置存在约9.26M b的拷贝数缺失;同时6号染色体q13q27(71.50~170.92M b)位置存在约99.42M b拷贝数嵌合重复,嵌合比例约为50%㊂根据C N V评判标准,综合认定这2个位置的变异均为致病性C N V指征引产组织1S e q[h g19]3q22.3q25.1(138.08~151.16M b)ˑ13号染色体q22.3q25.1(138.08~151.16M b)位置存在约13.08M b的拷贝数缺失,为致病性C N V指征引产组织2S e q[h g19]10q23.2q26.3(88.70~135.44M b)ˑ310号染色体q23.2q26.3(88.70~135.44M b)位置存在约46.74M b的拷贝数重复,为致病性C N V指征引产组织3S e q[h g19]11q24.2q25(124.30~134.94M b)ˑ111号染色体q24.2q25(124.30~134.94M b)位置存在约10.64M b的拷贝数缺失,为致病性C N V指征引产组织4S e q[h g19]8p23.2(2.34~2.78M b)ˑ3,S e q[h g19]17p13.3p13.2(2.48~3.80M b)ˑ18号染色体p23.2(2.34~2.78M b)位置存在约0.44M b的拷贝数重复,为临床意义不明确C N V;常染色体17号染色体p13.3p13.2(2.48~3.80M b)位置存在片段大小约1.32M b的拷贝数缺失,为致病性C N V指征引产组织5S e q[h g19]d u p(10)(q23.2q26.3)10号染色体q23.2q26.3(88.70~135.44M b)位置存在约46.74M b的拷贝数重复,为致病性C N V㊃5601㊃检验医学与临床2023年4月第20卷第8期 L a b M e d C l i n,A p r i l2023,V o l.20,N o.8Copyright©博看网. All Rights Reserved.3讨论染色体病是由于先天性染色体数目异常或结构异常导致的具有多发畸形㊁发育迟缓等一系列临床症状的疾病[7]㊂不明原因流产及指征引产主要原因为染色体数目异常,这与本研究结果一致,不明原因流产组织中32.62%是由于染色体数目异常导致的,指征引产组织中18.84%是因为染色体数目异常引起的[7]㊂C N V-s e q技术除了能检测染色体非整倍体问题外,还可以检测>5M b的染色体微小拷贝数变异,目前,C N V-s e q技术被应用于生长发育迟缓㊁多发畸形㊁智力障碍等表现的儿童㊁成人罕见病或者自然流产物㊁指征引产物原因分析,可对产前诊断中核型结果异常进行分析,但无法对异常片段的来源进行D N A水平分析,还可对产前超声检查异常而染色体核型分析结果正常的胎儿进行进一步遗传学检测等[8-9]㊂本研究结果显示,自然流产组织染色体数目异常46例,占异常染色体的70.77%(46/65),其中三体型33例,单体型11例(T u r n e r综合征10例,21号染色体单体1例),三倍体2例㊂不明原因自然流产高发原因核型分别为X O㊁T16㊁T9等,这些三体或单体核型还存在不同程度的嵌合,46例染色体数目异常标本中13例为嵌合体㊂指征引产组织染色体数目异常13例,占异常染色体的46.43%(13/28),其中三体型9例;单体型4例,均为T u r n e r综合征㊂9例三体中有7例为18号染色体三体,均因为B超检查提示异常而进一步进行诊断,其中4例胎儿水肿合并淋巴水囊瘤,2例胎儿多发畸形,1例胎儿为足内翻;另外2例三体分别为13号染色体三体和21号染色体三体,表现为胎儿唇裂㊁全身水肿和先天性心脏病㊂4例T u r n e r综合征均表现为水肿㊁淋巴水囊瘤㊂除染色体数目异常外,本研究还发现染色体结构异常,结构异常会表现出较为严重的临床症状㊂自然流产组织染色体结构异常19例,其中致病性结构异常7例㊂有1例自然流产组织受检原因为孕妇反复稽留流产3次,孕妇35岁,第4次怀孕同样不明原因流产,检测结果有3个染色体片段异常:(1)3号染色体q29(193.04~197.84M b)位置存在约4.80M b的拷贝数重复,q29区域共涉及41个蛋白编码基因,包含10个已知的M o r b i d基因,该区域重复完全覆盖 3q29微重复综合征 (3:195726835-197344663,约1.61M b;OM I M611936),大部分由父母一方遗传,少数为新发突变㊂个体间临床表型存在差异,该重复为致病性结构变异㊂(2)5号染色体q35.2q35.3 (174.70~180.72M b)位置存在约6.02M b的拷贝数缺失,5号染色体q35.2q35.3区域完全覆盖 5q35复发(S o t o s综合征)区域(包括N S D1) (c h r5:175,728,979-177,047,793),C l i n G e n数据库单倍剂量不足,评分为3分,目前有足够证据表明其发生一个拷贝数的缺失可以导致疾病,单倍剂量不足关联 S o t o s 综合征 ,又称小儿巨脑畸形综合征,主要临床表型特征包括特殊面容㊁学习障碍㊁过度生长等[10],为致病性C N V㊂(3)22号染色体q11.1q11.2(17.06~18.62 M b)位置存在约1.56M b的拷贝数重复,22号染色体q11.1q11.2区域完全覆盖 22q11.2复发(猫眼综合征)区域(包括C E C R2) (c h r22:17,392,953-18, 591,860),C l i n G e n数据库三倍剂量敏感评分为3分,敏感关联的表型为 猫眼综合征 (OM I M115470)[11]㊂ 猫眼综合征 是一种罕见的染色体疾病,具有高度可变的临床表现,主要临床特征:虹膜缺损和肛门闭锁合并瘘管,下斜睑裂,耳前皮赘和/或凹陷,心脏畸形和肾畸形频发,精神发育正常或接近正常[11],该重复为致病性C N V㊂综合3个位置的染色体结构异常,评估该标本的异常可能源自父母染色体易位,存在一定再发风险㊂经过与产前诊断中心和生殖中心沟通,建议该对夫妇进行胚胎移植前诊断技术(第3代试管婴儿)㊂指征引产组织染色体结构异常15例,其中致病性结构异常5例,1例因B超检查显示胎儿颅内结构发育异常引产,分子诊断为S e q[h g19]8p23.2(2.34~ 2.78M b)ˑ3,S e q[h g19]17p13.3p13.2(2.48~3.80 M b)ˑ1,8号染色体约0.44M b的拷贝数重复,17号染色体约1.32M b的拷贝数缺失㊂8号染色体p23.2区域不涉及蛋白编码基因,不包含已知的M o r b i d基因,为临床意义不明确C N V;17号染色体p13.3p13.2区域共涉及17个蛋白编码基因,包含5个已知的M o r b i d基因:其中P A F A H1B1基因的单倍剂量不足,评分为3分,有足够证据表明其发生一个拷贝的缺失可以导致疾病,单倍剂量不足关联 经典无脑畸形 (MO N D O:0015146),为致病性C N V,所以该胎儿B超检查显示颅内结构异常的原因可能是17号染色体发生缺失引起的㊂染色体微小的结构异常涉及重要基因同样导致严重的疾病及表型,当然C N V-S e q技术只能检测到染色体>5M b的非整倍体问题,对于整倍体和平衡性易位等问题导致的流产会漏检,所以临床常推荐C N V-s e q技术与染色体核型分析联合应用,虽然染色体核型分辨率较C N V-S e q技术差,但能检测整倍体和平衡性易位等染色体异常,两种技术互补应该可以提高检出率㊂染色体微阵列分析技术是胎儿超声影像检查异常时的首选推荐检测方法,是利用涵盖大量染色体重要片段的高密度D N A探针与经荧光标记的样品D N A特异性杂交,从而获得样品分子的序列和数量等信息,除了检测拷贝数变异外,该方法还可以查出单亲二倍体㊁杂合性缺失㊁三倍体或多倍体,但因㊃6601㊃检验医学与临床2023年4月第20卷第8期 L a b M e d C l i n,A p r i l2023,V o l.20,N o.8Copyright©博看网. All Rights Reserved.芯片上探针有限,范围不如C N V-S e q技术广㊂每种技术均有其优势与局限性,各种技术联合检测是最理想的状态,但现实是患者会根据自己的经济情况只选择其一,这也是本研究的局限性,没有完全统计各种检测技术的检出率及漏检情况㊂通过累计更多的检测数据,希望可以进一步完善该研究㊂产前诊断方法多样化可以避免因检测方法局限而漏诊,完善出生缺陷二级预防㊂综上所述,染色体异常(数目和结构)是造成自然流产和指征引产的主要原因,C N V-s e q作为新的分子检测技术,通过对染色体非整倍体问题及>5M b的染色体微小拷贝数变异进行分析,可快速㊁有效地检测流产和引产组织的遗传学病因,对再次生育指导具有重要意义㊂参考文献[1]B I Y I K I,A L B A Y R A K M,K E S K I N F.P l a t e l e t t o l y m-p h o c y t e r a t i o a n d n e u t r o p h i l t o l y m p h o c y t e r a t i o i n m i s s e d a b o r t i o n[J].R e v B r a s G i n e c o l O b s t e t,2020,42(5):235-239.[2]G O N G G F,Y I N C X,HU A N G Y Q.A s u r v e y o f i n f l u-e n c i n gf a c t o r s o f m i s s e d a b o r t i o n d u r i ng th e t w o-c hi l d p e a k p e r i o d[J].J O b s t e t G y n a e c o l,2021,41(6):977-980.[3]L I F X,X I E M J,Q U S F,e t a l.D e t e c t i o n o f c h r o m o s o m a la b n o r m a l i t i e s i n s p o n t a n e o u s m i s c a r r i a g e b y l o w c o v e r a g e n e x t g e n e r a 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徐州地区57对复发性流产夫妇的染色体核型分析王一波,胡方方,韩从辉,顾 娟,郝 林(江苏省徐州市中心医院生殖医学中心 东南大学(徐州),生殖医学研究所,江苏 徐州 221009)摘 要:目的 探讨复发性自然流产与外周血染色体异常核型之间的关系。

方法 采用外周血淋巴细胞培养,常规G 显带技术行染色体核型检查,后结合临床资料对其进行分析。

结果 57对复发性自然流产夫妇中,检出异常染色体核型20例,检出率17 54%。

结论 染色体核型异常是导致复发性自然流产的重要原因之一,对复发性流产患者进行染色体检查及遗传咨询具有一定的临床意义。

关键词:复发性自然流产;染色体核型分析中图分类号:R714 21 文献标识码:B 文章编号:1006-9534(2009)11-0045-03The re l a ti v it y study on t he per i p he ra l b l o od ch romosom a l ana lys is and the recurren t spon t aneous abortion s.WAN G Y i -bo,H U F ang-fang,H AN Cong-hui,HAO L i n.(R e p roducti ve M edicine C enter,X uzhou CentralH osp ital,J iang su P rovince and(Xuzhou)ReproductiveM edicine Research Instit u te of Sou t heast University,Xuzhou)Abstrac:t O bjecti ve:T o ana l yze the relati onship bet w een recurrent spontaneous abor tions and abnor m a l chro m osom al karyo t ypes fro m periphera l b l ood.M ethods:Chromosom a l prepa ration fro m pe ri phe ra l blood l ymphocytes by conventi ona l m ethods.S li des w ere processed for G-band i ng w ith T rypsi n-G i em sa by standard techniques.R us u lts:T here w ere20abno r m al karyo t ypes i n57couples w it h recu rrent spontaneous aborti ons,and the rate of abnor m a l ka ryotypesw as17 54%.Concl usions:The abno r m ality o f chrom oso m e w as one o f t he reasons of recurrent spon taneous aborti ons.It i s necessary to ana l yse chro m osom e and genetic counse l i n couples w it h recurrent spontaneous aborti ons.Key words:Spontaneous abo rti on;Chrom oso m e karyo t ype ana l y se近年来学者将连续两次流产者称为复发性流产(recur-rent spon taneous aborti ons),复发性流产在临床上十分常见,病因包括免疫因素、病毒因素、生理因素、遗传因素等多种原因,但最常见的原因是细胞遗传学问题,其致病的遗传因素越来越受到人们的关注,因此,我们采用细胞遗传学方法对57对复发性流产夫妇进行外周血染色体核型分析,旨为遗传咨询和生育提供一些指导。

91例对复发性自然流产夫妇的染色体解析作者：李玉霞等来源：《中国保健营养·下旬刊》2013年第12期【摘要】目的探讨和分析复发性自然流产患者和夫妻染色体异常之间的关系。

方法对我院收治的91例复发性自然流产患者进行外周血淋巴细胞培养，同时进行G显带核型分析。

结果 6例患者为染色体异常，占6.6%；其中平衡易位为2例、倒位3例、染色体随体柄延长变异1例。

结论在临床上，复发性自然流产患者与染色体异常存在十分紧密的关系，同时染色体异常是导致患者发生复发性自然流产的主要原因，因此建议患者进行染色体检查，对病原的查找和诊断有一定的帮助，同时对优生优育和产前诊断有一定的指导。

【关键词】复发性自然流产；染色体异常；平衡易位；到位文章编号：1004-7484（2013）-12-7155-02复发性自然流产在育龄妇女人群中是一种常见性的疾病，2次和2次以上流产患者大约占生育妇女的5.0%[1]。

导致患者发生复发性自然流产的发病原因十分复杂，主要原因有：子宫解剖异常、染色体异常、内分泌异常、感染因素、免疫紊乱等。

然而比较常见的发病原因为染色体异常，为此，对我院收治的91例复发性自然流产夫妻进行染色体检查和分析，以下是详细报道。

1 资料与方法1.1 一般资料此次研究的91例对复发性自然流产患者，都是我院在2012年2月——2013年6月期间收治。

其中患者的年龄在19-38岁之间，平均为（29.0±2.0）岁。

在这91对患者中，自然流产2次患者60例，≥3次31例。

其中原发性流产患者50例，继发性流产患者41例。

1.2 方法抽取每对夫妻的外周静脉血液2.0ml，安排遗传研究室的专业工作人员对淋巴细胞进行培养，并采用常规的方法进行制片和阅片，在必要的时候，加做高分辨率显带和C带分析以及银染技术分析。

软件：德国Lecia公司的CW4000Karyo染色体核型分析软件，计数2次独立培养的20个细胞中期分裂相分析5个核型[2]。

FISH对自然流产染色体异常检测作用的初步探讨的开题报告摘要：随着生殖技术的发展，自然流产的发生率在逐年上升。

而自然流产的主要原因之一是胚胎染色体异常，因此对流产组织进行染色体异常检测具有重要的价值。

FISH技术为一种高效、准确、快速的染色体异常检测方法，在该领域也受到了广泛关注。

本文将探讨FISH技术在自然流产染色体异常检测方面的作用和应用前景。

关键词：自然流产，染色体异常，FISH技术一、研究背景和意义自然流产是常见的生殖障碍，每年有数百万的女性因流产而受到影响。

流产可能由于多种原因引起，其中胚胎染色体异常是最常见的原因之一。

胚胎染色体异常包括染色体数目异常和结构异常，如Patau综合征、Edward综合征和Down综合征等。

而这些异常往往导致胚胎死亡和自然流产的发生。

因此，及早检测染色体异常可以减少自然流产的发生，增加高质量的胚胎的获得率，提高生殖成功率。

目前，人类染色体检测主要有两种方法：核型分析和FISH技术。

核型分析能够检测大部分染色体异常，但有些不能检测出来。

而FISH技术准确性更高，特异性更好，可以检测到核型分析无法检测到的染色体异常。

因此，FISH技术在自然流产染色体异常检测上的应用前景十分广阔。

二、研究内容和方法本研究将利用FISH技术对自然流产组织进行染色体检测。

首先，对自然流产组织进行样本筛选，选取合适的样本进行FISH检测。

然后，设计FISH探针，通过荧光染色观察染色体的数目和结构是否正常。

最后，对检测结果进行数据统计和分析，评估FISH技术在自然流产染色体异常检测方面的准确性和稳定性。

三、预期结果和意义本研究预计能够成功利用FISH技术进行自然流产染色体异常检测，探究FISH技术在该领域的应用前景。

通过研究，我们可以深入理解自然流产的发生机理和染色体异常的特点，为防止自然流产提供科学依据。

此外，本研究还可能为其他遗传疾病、染色体异常的检测和诊断提供一定的参考价值。

四、研究的可行性分析本研究选取自然流产组织进行FISH检测，具有手术取材方便、样本加工简单、易于获取等特点。

孕妇自然流产的症状与治疗作者：黄杰来源：《家庭医学·下半月》2017年第03期自然流产是与人工流产相对而言的，它属于妊娠疾病，是指在妊娠28周前妊娠中断，胎儿死于宫内或死后排出宫腔。

其中妊娠12周以前发生的流产为早期流产；12～28周之间发生的为晚期流产；连续三次以上发生自然流产为习惯性流产。

文献报道，自然流产的发生率为10%～18%。

其发病率如此之高，应为青年夫妇所重视。

自然流产的原因很多，主要有以下五种情况。

1.孕卵发育异常：此种情况约占自然流产的半数以上，尤其在早期流产中所占比例更高。

孕卵异常多是由卵子或精子的缺陷造成。

另外，在受孕的最初阶段，母体内缺乏维生素、叶酸、透明质酸酶等，也可以使孕卵发育异常，以致流产。

孕卵的发育还与受精的时间有关，即受精时间距排卵时间越长，孕卵发育异常的机会就越多。

2.内分泌失调：雌激素过多和孕激素不足是早期流产的常见原因。

此外，甲状腺机能不足，可使细胞的氧化过程发生障碍，影响胚胎的发育。

甲状腺机能亢进和糖尿病等也可引起流产。

3.生殖器官病变：子宫发育不良、子宫畸形、子宫肌瘤等可影响胎儿的生长发育，导致流产。

4.染色体异常：据统计，染色体异常造成的流产占自然流产的47.8%～60%，染色体异常易使孕卵在妊娠的极早期死亡。

5.血型不合：由于以往妊娠或输血致RH因子、不合的ABO血型因子在母体中产生抗体，并由胎盘进入胎儿体内，与红血球凝集而产生溶血，造成流产。

6.其他：母体全身性疾病，如传染病、严重贫血、心脏病、慢性肾炎、严重高血压，以及营养不良、药物中毒、前列腺素增高，甚至严重精神刺激等都可造成流产。

自然流产的临床表现主要是阴道流血和腹痛，而且多为进行性加重。

根据不同的临床表现，分为先兆流产、难免流产，不全流产、完全流产、稽留流产和习惯性流产。

先兆流产有流产的主要表现———腹痛和阴道流血，但腹痛轻，流血量少，子宫大小符合停经月份，子宫口未开，妊娠试验为阳性。