生防解淀粉芽孢杆菌Bs-18 TnYLB-1突变体文库的构建

生防菌解淀粉芽孢杆菌抗菌蛋白的研究进展出晓铭1，2，林毅雄1，2，张珅1，2，严芬1，3，林河通1，2（1．福建农林大学食品科学学院，福州350002；2．福建农林大学农产品产后技术研究所，福州350002；3．福州大学生物科学与工程学院，福州350108）摘要：生防解淀粉芽孢杆菌具有强烈抑制真菌和细菌的能力，在果蔬采后病害防治方面具有巨大的应用潜力。

该文对解淀粉芽孢杆菌产生的抗菌蛋白、蛋白的分离纯化、抑菌机理和生防应用等方面进行了综述，并对其在果蔬采后病害防治应用前景进行了展望。

关键词：解淀粉芽孢杆菌；抗菌蛋白；采后病害；生物防治中图分类号：S476；TS255．3文献标志码：A 文章编号：1005－1295（2014）06－0049－06doi ：10．3969/j．issn．1005－1295．2014．06．013Ｒesearch Advances of Antifungal Proteins Produced by Biocontrol Bacterium ，Bacillus amyloliquefaciensCHU Xiao-ming1，2，LIN Yi-xiong 1，2，ZHANG Shen1，2，YAN Fen1，3，LIN He-tong 1，2（1．College of Food Science ，Fujian Agriculture and Forestry University ，Fuzhou 350002，China ；2．Institute of Postharvest Technology of Agricultural Products ，Fujian Agriculture and Forestry University ，Fuzhou 350002，China ；3．College of Biological Science and Engineering ，Fuzhou University ，Fuzhou 350108，China ）Abstract ：Bacillus amyloliquefaciens is a kind of biocontrol bacterium which has great ability against fungi and bacteria ，thereby it has high research values and potential for development in biological control of posthar-vest diseases of fruits and vegetables．The separation and purification of antifungal proteins produced by Bacil-lus amyloliquefaciens ，the disease resistant mechanisms and the application of biocontrol of antifungal proteins were summarized．The future potential application in biocontrol of postharvest diseases of fruits and vegetables was also discussed．Key words ：Bacillus amyloliquefaciens ；antifungal proteins ；postharvest diseases ；biological control 收稿日期：2014－06－23；修稿日期：2014－07－16基金项目：国家科技支撑计划专项（2007BAD07B06）；福建省高等学校新世纪优秀人才支持计划（闽教科〔2007〕20号）资助作者简介：出晓铭（1990－），男，硕士，研究方向为食品科学。

《解淀粉芽孢杆菌TJ抑菌物质的研究》一、引言解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）是一种广泛存在于土壤中的细菌，近年来引起了人们的关注，特别是其在植物生物防治中的应用潜力。

而本研究将专注于探讨一种来自解淀粉芽孢杆菌TJ（Bacillus amyloliquefaciens TJ）的抑菌物质，通过对其特性的研究，旨在了解其抑菌机制及其在农业上的应用价值。

二、材料与方法（一）材料1. 菌种：解淀粉芽孢杆菌TJ、测试的病原菌（如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等）。

2. 培养基：营养肉汤培养基、LB培养基等。

（二）方法1. 抑菌物质的提取与纯化：通过发酵、离心、浓缩、纯化等步骤提取解淀粉芽孢杆菌TJ的抑菌物质。

2. 抑菌活性检测：采用琼脂扩散法、微量稀释法等方法检测抑菌物质的活性。

3. 成分分析：利用生物化学、分子生物学等技术分析抑菌物质的化学成分和结构。

4. 抑菌机制研究：通过电子显微镜观察、基因敲除等方法研究抑菌物质的抑菌机制。

三、实验结果（一）抑菌物质的提取与纯化经过一系列的发酵、离心、浓缩和纯化步骤，成功从解淀粉芽孢杆菌TJ中提取出具有较强抑菌活性的物质。

（二）抑菌活性检测实验结果表明，该抑菌物质对多种病原菌（如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等）均具有较强的抑制作用。

此外，该物质对植物病原真菌也具有一定的抑制作用。

（三）成分分析经过生物化学和分子生物学分析，发现该抑菌物质主要由多种肽类化合物组成，具有较高的生物活性。

其中，某些肽类化合物可能具有特定的作用机制，如干扰病原菌的细胞膜结构等。

（四）抑菌机制研究研究发现，该抑菌物质主要通过破坏病原菌的细胞膜结构，干扰其代谢过程，从而达到抑制其生长的作用。

此外，该物质还可能通过其他机制（如诱导病原菌产生抗性等）发挥其抑菌作用。

四、讨论本研究成功从解淀粉芽孢杆菌TJ中提取出一种具有较强抑菌活性的物质，并对其化学成分和抑菌机制进行了初步研究。

专利名称：一株用于防控黄曲霉毒素B1污染的解淀粉芽孢杆菌及其应用
专利类型：发明专利
发明人：王洁,陈国浚,房倩安,方祥,廖振林,钟青萍,王丽,徐纯伟,梁智博
申请号：CN202210148253.8
申请日：20220217
公开号：CN114644995A
公开日：
20220621
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一株用于防控黄曲霉毒素B1污染的解淀粉芽孢杆菌及其应用。

本发明提供的芽孢杆菌WF2020，已于2022年1月5日保藏于广东省微生物保藏中心，保藏号GDMCCNO:62190。

本发明研究表明，WF2020菌株能大幅度抑制黄曲霉的生长，使其干重减少52.59％；同时，WF2020菌株可完全抑制黄曲霉毒素B1的合成；另外，WF2020菌株可高效的将黄曲霉毒素B1降解成无毒的物质，降解率高达95.47％，且该菌株的发酵液或胞内物也能降解黄曲霉毒素B1，同时发酵液还具有高温耐受性。

并且，WF2020菌株在使用过程中无污染、无公害，作为理想的防控农产品黄曲霉毒素B1污染的微生物。

申请人：华南农业大学
地址：510642 广东省广州市天河区五山路483号
国籍：CN
代理机构：广州粤高专利商标代理有限公司
代理人：赵崇杨
更多信息请下载全文后查看。

一株解淀粉芽孢杆菌生防蛋白的鉴定及分析郭继平;马光;王志杰;齐善厚;王宝梅;苏长青【期刊名称】《生物技术通报》【年(卷),期】2018(034)001【摘要】旨在鉴定一株拮抗葡萄霜霉病的解淀粉芽孢杆菌在NA液体培养基中的分泌蛋白中与生物防治相关的蛋白组分.采用蛋白质谱的方法对前期筛选到的一株拮抗葡萄霜霉病的解淀粉芽孢杆菌生防菌的在NA液体培养基中的分泌蛋白进行了鉴定.对鉴定到的蛋白采用基因本体论(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)的方法进行蛋白质组学分析,筛选与生物防治相关的蛋白.结果表明,从分泌蛋白中鉴定到了确定的53种蛋白质,其相对分子量大部分集中到0-100之间(占79.24％);涉及碳水化合物代谢、能量代谢、脂类代谢、氨基酸代谢和生物防御等过程,以及作为细胞组分参与结构组成.发现了6种参与植物与病原菌互作的蛋白,2种属于氨基肽酶家族,4种参与几丁质的生物降解过程.%It is aimed at the identification of protein composition with biocontrol function in the secretory protein while a strain of being antagonistic grape downy mildew,Bacillus amyloliquefaciens,was cultured in NA liquid medium,which was carried out by protein profile. The proteomics of the identified proteins was analyzed by gene ontology and KEGG pathway for screening the proteins related to biocontrol. The results showed that 53 proteins were identified from the secreted proteins. Their relative molecular weights were mostly(79.24％)in 0-100. The proteins involved in the processes of carbohydrate metabolism,energy metabolism,lipid metabolism,amino acidmetabolism,bio-defense,etc. They also were the cellular components in structural composition. Six proteins involved in the interaction of plant and pathogen were discovered,and among them,two belonged to the aminopeptidase family,and four were involved in the biodegradation of chitin.【总页数】6页(P202-207)【作者】郭继平;马光;王志杰;齐善厚;王宝梅;苏长青【作者单位】衡水学院生命科学系,衡水 053000;衡水学院生命科学系,衡水053000;衡水学院生命科学系,衡水 053000;衡水学院生命科学系,衡水 053000;宝鸡市农业科学院,宝鸡 722400;衡水学院生命科学系,衡水 053000;中国农业科学院植物保护研究所,北京 100193【正文语种】中文【相关文献】1.一株香蕉枯萎病生防解淀粉芽胞杆菌的分离、鉴定及其拮抗物质研究 [J], 陈燕红;陈远凤;黎永坚;喻国辉2.一株产淀粉酶、蛋白酶益生芽孢杆菌的分离与鉴定 [J], 张国庆;董晓芳;佟建明;王志红;张琪3.解淀粉芽孢杆菌Bs-18生防功能相关基因的初步鉴定 [J], 孙淑琴;杨秀荣;孙冰冰;张惟4.一株具有广谱抗真菌活性的解淀粉芽孢杆菌的分离鉴定 [J], 刘小玉;付登强;刘立云;黄丽云;齐兰5.一株具有产IAA能力的解淀粉芽孢杆菌的分离鉴定及功能评价 [J], 陈迪;芮凯;曾涛;田威;马瑞;谢圣华;罗诗彤因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

《生防萎缩芽孢杆菌β-l,3-葡聚糖酶拮抗功能的研究》篇一摘要本文旨在探讨生防萎缩芽孢杆菌所产β-l,3-葡聚糖酶的拮抗功能。

通过实验室研究，分析该酶的生物活性、作用机制及其在农业生物防治中的应用潜力。

研究结果表明，该酶具有显著的拮抗病原菌的能力，对农业病害的控制具有重要意义。

一、引言随着现代农业的快速发展，植物病害成为制约农业生产的重要因素之一。

生物防治作为一种环保、可持续的病虫害防治方法，日益受到科研工作者的关注。

生防萎缩芽孢杆菌作为一种重要的生防微生物，其产生的酶类物质在植物病害的生物防治中发挥着重要作用。

其中，β-l,3-葡聚糖酶作为一种重要的水解酶，在植物细胞壁的降解及病原菌的抑制中具有关键作用。

因此，研究该酶的拮抗功能对于推动生物防治技术的发展具有重要意义。

二、材料与方法1. 材料本研究所用生防萎缩芽孢杆菌菌株来自本实验室保存，β-l,3-葡聚糖酶的提取参照已有文献方法。

病原菌采用常见植物病原菌，如真菌和细菌。

2. 方法（1）酶的提取与纯化：采用合适的方法从生防萎缩芽孢杆菌中提取β-l,3-葡聚糖酶，并进行纯化。

（2）酶活性测定：通过酶活性测定方法，测定β-l,3-葡聚糖酶的活性。

（3）拮抗功能研究：将β-l,3-葡聚糖酶与病原菌共同培养，观察其对病原菌生长的影响，并分析其作用机制。

（4）田间试验：在田间条件下，评价β-l,3-葡聚糖酶对植物病害的控制效果。

三、结果与分析1. 酶的提取与纯化通过适当的提取与纯化方法，成功从生防萎缩芽孢杆菌中获得了纯度较高的β-l,3-葡聚糖酶。

2. 酶活性测定测定结果显示，该酶具有较高的活性，能够在适宜条件下有效水解葡聚糖。

3. 拮抗功能研究（1）体外实验：在体外条件下，β-l,3-葡聚糖酶对常见植物病原菌具有显著的拮抗作用，能够抑制病原菌的生长。

（2）作用机制：该酶通过水解病原菌细胞壁的主要成分葡聚糖，破坏其结构，进而抑制病原菌的生长与繁殖。

同时，该酶还能诱导植物产生抗病性，提高植物的抗病能力。

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201810537614.1(22)申请日 2018.05.30(71)申请人 南京工业大学地址 210000 江苏省南京市浦口区浦珠南路30号(72)发明人 徐虹　沙媛媛　李莎　许宗奇　冯小海　邱益彬　张亚涛　(74)专利代理机构 南京苏高专利商标事务所(普通合伙) 32204代理人 肖明芳(51)Int.Cl.C12N 1/21(2006.01)C12N 15/55(2006.01)C12N 15/75(2006.01)C12N 15/65(2006.01)C12N 15/66(2006.01)C12P 13/02(2006.01)C12R 1/07(2006.01) (54)发明名称一种重组解淀粉芽孢杆菌及其构建方法和应用(57)摘要本发明公开了一种重组解淀粉芽孢杆菌的构建方法，以消除内源质粒的解淀粉芽孢杆菌为宿主菌，将聚谷氨酸降解酶基因pgdS插入pNX01载体的Spe I和Not I酶切位点之间得到重组质粒，再将重组质粒导入宿主菌中，即得。

本发明还公开了所述构建方法构建得到的重组解淀粉芽孢杆菌及其在发酵产γ-聚谷氨酸中的应用。

本发明将发酵生产γ-PGA和聚谷氨酸降解酶过程相偶联，实现一步发酵直接获取低分子量γ-PGA和聚谷氨酸降解酶两种产物，在产高分子γ-PGA的过程中，γ-PGA被同时分泌到胞外的聚谷氨酸降解酶水解，避免了外源添加降解酶的繁琐，简化了生产工艺，一步发酵合成低分子聚谷氨酸。

权利要求书2页 说明书13页序列表9页 附图3页CN 108624546 A 2018.10.09C N 108624546A1.一种重组解淀粉芽孢杆菌的构建方法，其特征在于，以消除内源质粒的解淀粉芽孢杆菌为宿主菌，将聚谷氨酸降解酶基因pgdS插入pNX01载体的Spe I和Not I酶切位点之间得到重组质粒，再将重组质粒导入宿主菌中，即得。

专利名称：一株解淀粉芽孢杆菌及其应用专利类型：发明专利
发明人：刘洪亮,王慧,于琳
申请号：CN201510702202.5
申请日：20151026
公开号：CN105176889A
公开日：
20151223
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：一株解淀粉芽孢杆菌及其应用，本发明涉及一株解淀粉芽孢杆菌及其应用。

本发明的目的是要解决现有防治玉米大斑病中化学药剂对环境污染，病菌易产生抗药性，且对玉米增产效果不好的问题。

本发明的一株解淀粉芽孢杆菌为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus？amyloliquefaciens)KB1-01，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期是2014年09月12日，保藏编号为CGMCC？No.9649。

本发明的应用是指在抑制玉米大斑病菌的同时增加玉米产量上的应用。

本发明对玉米大斑病的防效为80.8％，玉米增产率为18.26％。

本发明应用于农业领域。

申请人：刘洪亮
地址：150038 黑龙江省哈尔滨市公滨路37号
国籍：CN
代理机构：哈尔滨市松花江专利商标事务所
代理人：侯静
更多信息请下载全文后查看。

专利名称：一株解淀粉芽胞杆菌生防功能基因序列及其应用专利类型：发明专利
发明人：孙淑琴,杨秀荣,孙冰冰,霍建飞,张惟
申请号：CN201910326009.4
申请日：20190423
公开号：CN109988776A
公开日：
20190709
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及一株解淀粉芽胞杆菌Bs‑18的生防功能基因序列。

野生生防菌株解淀粉芽胞杆菌Bs‑18防治黄瓜白粉病菌大田防治效果达79.2%，通过构建Bs‑18的突变体文库，从突变体库中筛选到一株生防功能发生明显变化的突变体T4‑7，反向PCR方法获得其插入基因片段的序列。

为了验证此基因片段与生防作用相关，通过电击转化的方法获得了基因恢复株，大田防治试验结果表明基因恢复株的生防效果高于T4‑7菌株，但又略低于野生生防菌株Bs‑18。

由此说明此基因片段与生防菌株
Bs‑18的生防作用相关，可以达到防治黄瓜白粉病菌的目的。

申请人：天津市植物保护研究所
地址：300384 天津市西青区津静公路17公里
国籍：CN
代理机构：天津市杰盈专利代理有限公司
代理人：朱红星
更多信息请下载全文后查看。