单增李斯特氏菌2

单增李斯特氏菌
单核细胞增生李斯特菌 (L.monocytohenes)
潜伏期：在感染后3-70天出现症状，健康成人可出现轻微类似流感症状，易感者突然发热，剧烈头痛、恶心、呕吐、腹泻、败血症、脑膜炎、孕妇出现流产。

在食品加工中，中心温度必须达到70℃持续2分钟以上。

李斯特氏菌。

该细菌喜冷不爱热，如果人被感染，将有三成的病死率。

李斯特氏菌。

此菌的特性是喜冷怕热，在低温环境中可大量繁殖。

人们习惯于把电冰箱当作食品的保险箱，将一次吃不完的食物随手放进冷藏室，未经加热消毒就食用，这是李斯特氏菌的一种重要传播途径。

人感染该菌后多表现为脑膜炎、败血症，孕妇感染则可引起流产、早产、死胎和新生儿败血症。

在夏季每个家庭都要格外注意饮食卫生，电冰箱要定期清洗，存放的食物要生熟分开，熟食在食用前要加热消毒，温度必须达到70℃以上且持续2分钟以上。

健康人粪便中单增李氏菌的携带率为0.6-16%,有70%的人可短期带菌，
4-8%的水产品、5-10%的奶及其产品、30%以上的肉制品及15%以上的家禽均被该菌污染。

人主要通过食入软奶酪、未充分加热的鸡肉、未再次加热的热狗、鲜牛奶、巴氏消毒奶、冰激凌、生牛排、羊排、卷心菜色拉、芹菜、西红柿、法式馅饼、冻猪舌等而感染，约占85-90%的病例是由被污染的食品引起的。

该菌可通过眼及破损皮肤、粘膜进入体内而造成感染，孕妇感染后通过胎盘或产道感染胎儿或新生儿,栖居于阴道、子宫颈的该菌也引起感染，性接触也是本病传播的可能途径，且有上升趋势。

单增李斯特氏菌说明书安全操作及保养规程一、引言单增李斯特氏菌（Listeria monocytogenes）是一种常见的食品中毒病原菌，可引起人类严重的感染。

为了确保操作过程的安全性和实验结果的准确性，本文档将介绍单增李斯特氏菌的安全操作和保养规程。

二、实验前准备1.工作区域：选择干净整洁、通风良好的实验室，并确保无人员流动和非实验人员进入实验区域。

2.实验器材：准备好需要使用的培养皿、试管、移液器、离心机等实验器具，并进行消毒处理。

3.个人防护措施：穿戴实验服、手套、护目镜等个人防护装备，避免直接接触菌株。

三、操作步骤1.培养基准备：根据实验需求，制备适当培养基，并严格按照配方进行配置、混合和消毒。

2.菌株接种：取一支保存有单增李斯特氏菌的细菌种子液，并使用无菌的移液器将其接种到培养基中。

3.培养条件：将接种好的培养基置于恒温培养箱中，以适当的温度和湿度进行培养。

根据具体需要，可以选择不同的培养条件。

4.培养时间：根据菌株的生长特性和实验目的，设定适当的培养时间。

在培养过程中，定期观察培养基的变化情况。

四、实验后处理1.菌株保存：实验结束后，将培养好的菌株进行分装并保存。

使用无菌的容器和保护液，防止菌株失活或变异。

2.器材清洗：实验器材需要彻底清洗，以防止交叉污染。

使用适当的消毒剂和清洁剂，对实验教具进行彻底清洁和消毒处理。

3.工作区清理：清理工作区域，包括实验台面、废弃物和其他杂物的清理。

确保实验室的环境整洁，以减少潜在的污染风险。

五、安全注意事项1.个人防护：在实验操作过程中，要正确佩戴实验服、手套、护目镜等个人防护装备，避免直接接触菌株。

2.实验环境：选择合适的实验环境，保持实验室的通风良好，并避免非实验人员进入实验区域。

3.消毒处理：在实验前后对实验器材、工作区域进行彻底的消毒处理，以减少交叉污染的风险。

4.废弃物处理：将实验中产生的废弃物，如培养基、菌株等，正确处理和清理，并根据实验室的要求进行垃圾分类处理。

食品中单增李斯特菌检测食品中单核细胞增生李斯特氏菌的检测实验目的1）了解单核细胞增生李斯特氏菌的生物学特性。

2）熟悉单核细胞增生李斯特氏菌的分离鉴定方法。

基本原理单核细胞增生李斯特菌(L. monocytogenes)归属于李斯特菌属(Listeria)。

单核细胞增生李斯特菌是李斯特菌属中唯一对人致病的病菌。

李斯特菌是一种细胞内寄生菌，它不仅可能存在于肉类产品中，也可能存在于乳制品、蔬菜、沙拉及海产品等日常食物里面。

此菌广泛分布于自然界中，在土壤、排污下水、地表水、青贮饲料、烂菜中均可分离到。

人也可作为无症状携带者。

据报道，健康人粪便中该菌的携带率为0.6％～16％，4％～8％的水产品、5％～10％的奶及其制品、30％以上的肉制品及15％以上的家禽均被该菌污染。

李斯特菌能在1～45℃的温度下生存，能在家用电冰箱的冷藏室内较长时间生长、繁殖。

该菌为革兰氏阳性短杆菌，有的菌体略弯曲，两端钝圆，大小约为0.4～0.5μm ′0.5～2.0μm。

多单在，有时是V字型排列。

无芽孢，不产生荚膜。

在陈旧培养物中或粗糙型菌落的菌体长度可达6～20μm 或更长的丝状。

在20～25℃培养时可产生2～4根鞭毛而运动，但在37℃培养时鞭毛发育不良，无运动性。

本菌需氧或兼性厌氧，生长温度为1～45℃，最适温度为30～37℃。

对营养要求不高，可在普通琼脂培养基中生长，但在血琼脂培养基或胰酪胴琼脂上生长更好。

加入0.2％～1％(W/V)的葡萄糖及2％～3％(V/V)的甘油生长更佳。

在含1%(W/V)NaCl的复合培养基中能生长。

在4℃可缓慢增殖，形成菌落约需7d。

在液体培养基中培养18～24h后，肉汤呈轻度均匀混浊，数天后形成粘稠沉淀附着于管底，摇动时沉淀呈螺旋状，继续培养可形成颗粒状沉淀。

不形成菌环、菌膜。

在营养琼脂上，光滑(S)型可形成直径0.5～1.5mm、圆形、露滴状半透明、低隆起、边缘整齐、表面有细致纹理的蓝灰色菌落，斜射光照射时，菌落呈特征性蓝绿光泽。

单增李斯特菌的检验方法
一.增菌：
1.EB肉汤
2.LB肉汤（根据我的实验结果和请教其他老师的说法，LB增菌
效果优于EB）
LB分为LB1和LB2，两者基础培养基相同，区别在于添加辅助试剂丫啶黄、萘啶酮酸的量（基础培养基--杭州天河生物试剂公司；丫、萘—上海疾控中心。

上海的辅助试剂已按一定浓度配置成溶液，使用起来比较方便）
25g样品加入到225mlLB1增菌液中，30℃培养24h，吸0.1mlLB1增菌液到LB2增菌液中，30℃培养24h。

二.选择分离
挑一环LB2增菌液划线接种到科玛嘉选择性培养基上，37℃培养24h，观察现象，可疑菌落在此培养基上为兰色，周围有白晕的菌落。

（国标上使用的选择性培养基是MMA，但是其选择性不强，科玛嘉选择性培养基是法国制造，选择性比MMA强的多，而且现象明显，许多发达国家使用。

此培养基是国标编委白萍女士向我推荐的）三.生化实验
挑可疑菌落穿刺接种到SIM，25℃培养3---5d，观察伞状生长情况、TSI（三糖铁）斜面30℃培养24h—48h，观察，单增李斯特菌在TSI上应该是底面、斜面均产酸，不产H2S，不产气的培养物.
这是单增李斯特菌落在SIM动力培养基上的伞状情形再挑取TSI上培养物接种其他生化管。

七叶苷鼠李糖木糖甘露醇尿
素
硝
酸
盐
还
原
VP MR H2O2
++----+++。