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侵袭性真菌病临床实验室诊断操作侵袭性真菌病是一种由致病性真菌引起的严重感染性疾病，在临床上常常表现为快速进展的、具有高度侵袭性的感染。
诊断这种疾病对于及时采取恰当的治疗非常关键。
实验室诊断操作在确定侵袭性真菌病的病原体和提供治疗指导方面起着重要作用。
本文将介绍侵袭性真菌病临床实验室诊断的一般操作流程。
1. 样本采集与处理：1.1 采集样本：侵袭性真菌病的常见感染部位包括血液、呼吸道、皮肤和组织等。
根据患者症状和病灶位置，选择适当的样本进行采集。
例如，可以采集血液、呼吸道分泌物、皮肤刮擦物或活体组织标本。
1.2 样本处理：对于血液样本，应使用无菌技术将其接种于培养基上进行培养。
对于其他类型的样本，可以先进行显微镜检查，然后选择适当的培养方法。
2. 微生物学检测：2.1 直接检测：可以使用显微镜检查样本制片，进行真菌形态学观察。
采用染色方法如格罗科托菲洛玛抗体染色或维尔森染色，可以更好地观察到真菌的特征结构。
2.2 培养方法：将样本接种于适宜的真菌培养基，如Sabouraud葡萄糖琼脂培养基。
通过观察培养基上的菌落特征，如颜色、形态、菌落特点等，判断是否有真菌的生长。
2.3 生物化学鉴定：对于培养出的真菌菌株，可以使用生物化学鉴定方法，如API脂多糖、API快速20C系统等，对菌株的生化特征进行鉴定，以确定病原物种。
3. 分子生物学检测：3.1 核酸提取：根据样本类型，选择适当的核酸提取方法。
例如，对于血液样本，可采用商用核酸提取试剂盒，按照说明书进行提取。
3.2 PCR扩增：设计合适的引物和探针，选择特异性基因进行PCR扩增反应。
常用的基因包括ITS rDNA、18S rDNA和内转录间隔区等。
3.3 扩增产物检测：利用凝胶电泳或实时荧光定量PCR等技术，检测扩增产物，并根据产物大小和序列确定菌株的分类。
4. 药敏试验：4.1 药敏试验建立：对分离得到的致病真菌菌株，可以进行药敏试验以确定抗真菌药物的敏感性。
侵袭性真菌病的G试验和GM试验侵袭性真菌病（invasive fungal disease, IFD）系指真菌侵入人体，在组织、器官或血液中生长、繁殖，并导致炎症反应及组织损伤的感染性疾病。
随着器官移植、肿瘤化疗、免疫抑制剂使用、侵袭性操作等不断增多，侵袭性真菌病的发病率越来越高，尤其是免疫功能低下者。
早期诊断及恰当的抗真菌治疗是降低病死率的关键，但IFD的临床表现相对缺乏特异性，仅根据临床症状难以早期诊断，故误诊率高。
因此，所有国内外IFD指南中均明确指出，临床诊断和确诊的依据必须包括病原微生物的实验室检查，后者是诊断标准极为重要的组成部分。
临床上迫切希望能有更加简便、快速、创伤性小、耐受性好、敏感性和特异性均较高的检测方法，帮助临床早期诊断和及时治疗。
因此，近些年来，G试验和GM试验得到了大家的关注和热门推崇，其在临床上用于诊断侵袭性真菌病具有非常重要的价值和意义。
什么是G实验？G试验是用于检测真菌细胞壁主要成分之一的(1-3)-β-D葡聚糖，因为其他微生物、动物及人的细胞成分和细胞外液均不含有此成分，且人体发生侵袭性深部真菌感染过程中，(1-3)-β-D葡聚糖可持续释放入血及其他体液中，使其含量增高（浅部真菌感染无类似现象）。
在临床表现、微生物学证据及胸部高分辨率CT出现征象前，血清中(1-3)-β-D葡聚糖水平已经高于正常值（比发热或其他临床症状平均早4～5天，比胸部高分辨率CT平均早9.3天），且不受机体免疫状态影响。
因此，血液中检测到(1-3)-β-D葡聚糖是诊断深部真菌感染的有效依据，对除了隐球菌和接合菌之外的所有侵袭性深部真菌感染的早期诊断具有重大意义，即可用于念珠菌属、镰刀菌属、曲霉属、青霉/拟青霉、毛孢子菌等真菌所致侵袭性感染的诊断，能很好地指导临床及早使用抗真菌药物，尤其是对于念珠菌血症，G试验是首选检验，可在1.5-2小时快速出结果。
另外强调G 试验对于检测耶氏肺孢子菌（PJP）也有很大价值，在排除其他侵袭性真菌病的情况下，2 次或 2 次以上的血清BDG ≥80 pg/mL，可以考虑PJP，但阴性排除PJP 的价值高于阳性诊断PJP 的价值。
