微生物菌体扫描电镜前处理.pdf

扫描电镜组织处理流程Scanning electron microscopy (SEM) is a powerful tool used in various scientific fields to examine the surface of materials at a high resolution. 扫描电子显微镜（SEM）是在各种科学领域中使用的强大工具，用于高分辨率地检查材料的表面。

SEM allows researchers to visualizethe microstructure of samples and obtain detailed information about their morphology and composition. SEM使研究人员能够可视化样品的微观结构，并获得关于其形态和组成的详细信息。

However, the process of preparing samples for SEM analysis can be complex and requires careful attention to detail. 然而，为SEM分析准备样品的过程可能会复杂，并需要仔细关注细节。

One of the key steps in the SEM sample preparation process is tissue processing, which involves fixing, dehydrating, and embedding biological samples to preserve their structure and allow for imaging with the electron microscope. SEM样品制备过程中的一个关键步骤是组织处理，它涉及固定、脱水和嵌入生物样品，以保留其结构，并允许使用电子显微镜进行成像。

菌种电镜检测标准操作规程依据：《中华人民共和国药典》2005年版第三部。

范围：适用于大肠杆菌为工程菌的菌种检测。

目的：检测以大肠杆菌为工程菌的菌种是否符合规定。

原理：以观察100个有效视野为底限，在所观察的视野中：（1）大肠杆菌菌体形态不应有可观察到的明显变异，即应为大肠杆菌的标准形态。

（2）不应有支原体、噬菌体、病毒样颗粒及其它微生物污染。

对有疑问的样品应加倍视野观察，并对有疑问处拍照。

内容：1 材料1．1试剂：2%磷钨酸、电镜铜网、火棉胶溶液1．2仪器电镜H600-A型2 方法2．1电镜样品制备2．1．1浓缩样品，使待检样品的密度在107/ml以上。

2．1．2负染法制备电镜样品（摘下“备用”标志牌，挂“运行”标志牌）：将浓缩后的样品滴于载有膜的电镜铜网上，用滤纸吸干多余的液体，然后将2%磷钨酸滴于其上，负染两分钟后吸干染液，此时样品制备完成，将制好的样品铜网置于样品盒中备用。

2．2准备工作2．2．1将制备好的铜网装入样品杯，将电镜调至合适状态并对样品进行观察。

2．3电镜检查标准：2．3．1对于以大肠杆菌为工程菌的样品，以观察100个有效视野为底限，在所观察的视野中：（1）大肠杆菌菌体形态不应有可观察到的明显变异，即应为大肠杆菌的标准形态。

（2）不应有支原体、噬菌体、病毒样颗粒及其它微生物污染。

对有疑问的样品应加倍视野观察，并对有疑问处拍照。

3 电镜检查报告所检电镜样品的观察结果应由观察者署名发出报告，一式两份，由观察科室和送检科室各保留一份。

4 清场4．1检查电源是否关闭，摘下“运行”标志牌，挂“备用”标志牌。

4．2认真填写工作记录及仪器设备使用记录。

4．3清理工作台面及地面，用专用抹布和拖布。

4．4使用后的玻璃器皿用纯化水洗净后，返回本室洗刷组处理。

5 清场后由车间工序负责人（质量监督员）检查合格后，摘下“待处理”标志牌，挂上“清场合格”标志牌。

扫描电子显微镜技术的使用方法与技巧扫描电子显微镜（Scanning Electron Microscope，SEM）作为一种非常强大的科学研究工具，在生物学、材料科学、纳米技术等领域都得到了广泛的应用。

本文将介绍扫描电子显微镜技术的使用方法与技巧，帮助读者更好地理解和应用这一先进的技术。

一、原理概述扫描电子显微镜通过发射出高能电子束照射样本表面，并测量样本表面反射的电子信号来实现对样品的观察和分析。

与光学显微镜相比，扫描电子显微镜具有更高的放大倍数和更好的分辨率，使得细小结构和样品表面形貌得以清晰可见。

二、样品制备在使用扫描电子显微镜之前，首先需要将样品进行适当的制备处理。

不同的样品可能需要不同的制备方法，下面以常见的生物组织样品为例进行介绍。

1. 固定和固化：对于生物组织样品，通常需要使用一些化学物质进行固定，以防止样品变形和腐败。

常用的固定剂包括冷冻甲醛、乙醛和洗涤液等。

固定后，样品需要进行固化，通常使用环氧树脂或冷冻干燥等方法。

2. 切片：之后，需要使用超薄切片机将固定和固化后的样品切割成薄片。

切片要求非常薄，一般在50-100 nm之间。

3. 上膜：切割好的样品薄片需要粘贴在导电载体上，常见的载体有导电胶带或碳薄膜。

上膜过程中需要注意避免气泡和脏污。

三、仪器操作1. 样品装入和真空抽取：准备好的样品载体需要被正确地装入到扫描电子显微镜的样品台上，并确保样品与电子束之间有足够的距离。

2. 参数设定：在开始观察之前，需要根据样品的特性和所需观察的目的进行一些参数的设定。

如加速电压、工作距离和探针电流等。

这些参数的选择需要根据具体的样品类型和所需观察的目的来确定。

3. 对焦和调节：通过调节显微镜的对焦装置和样品台的三维移动装置，将电子束对准样品表面，并使其形成清晰的像。

同时，还需要通过调节探针电感补偿装置，以保持较高的分辨率。

四、图像获取与分析1. 图像获取：当样品合适地装载在扫描电子显微镜中后，可以开始进行图像获取。

用扫描电镜观察DFRIKN-1分离物菌体的方法研究吉青战;张靠稳【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2011(039)010【摘要】[目的]选择合适的样品处理方式,在扫描电镜下清晰地观察DFRKN-1 分离物菌体的表面结构特征.[方法]以不经过固定液处理的菌体为对照.将使用戊二醛、卢戈氏碘液、福尔马林固定的DFRKN-1分离物菌体细胞采用离心法、直接干燥法收集,进行酒精梯度逐级脱水,干燥并真空喷金后在扫描电镜下观察.[结果]不经过固定液处理的菌体形态脱水变形,经过固定液固定后的样品仍然保持原细胞形态,且戊二醛的固定效果优于其他2种固定剂;离心法不能收集到游动孢子,而直接干燥法收集则弥补了这一缺陷.使用戊二醛固定,直接干燥法收集菌体是处理DFRKN-1 分离物样品的最优选择.在电镜下观察到DFRKN-1 分离物表面的假根、游动孢子以及孢子囊的释放孔.[结论]通过扫描电镜观察DFRKN-1 分离物的结构特征,为研究其与根结线虫的作用机制提供参考.【总页数】2页(P5833-5834)【作者】吉青战;张靠稳【作者单位】北方民族大学生物科学与工程学院,宁夏银川,750021;北方民族大学生物科学与工程学院,宁夏银川,750021【正文语种】中文【中图分类】S121【相关文献】1.新疆分离细菌的提取物对λ噬菌体紫外诱导的抑制作用 [J], 邹颖颖;辛晓红;方呈祥;杨桥;罗雪松;周国玲;张磊;唐雅丽;李红;张珞玲2.粘细菌Sorangium cellulosum So0087-3-3菌体提取物的分离和鉴定 [J], 鲁春华;赵林;李越中;沈月毛3.多耐药鲍曼不动杆菌噬菌体IME-AB6的分离、生物特性及保存方法研究 [J], 彭帆;童贻刚;柏长青4.金黄色葡萄球菌烈性噬菌体的分离鉴定和最佳保存方法研究 [J], 李陇平;张智英5.发酵后处理方法研究（Ⅶ）——肌苷发酵液中菌体的分离 [J], 林远声;林波;李晓燕因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

扫描电镜
1、收集培养好的新鲜菌体，用1×PBS（pH7.0）或0.9% NaCl漂洗样品2-3次，每次15min ，5000rpm离心3min,去上清；
2、加2.5%的戊二醛溶液1ml,轻摇充分混匀，重悬菌液，4℃固定4h或过夜；
3、5000rpm离心3min,去上清，加入500ul PBS漂洗样品三次，每次15min （可用枪轻轻吹打，然后离心再加入新鲜PBS，混匀离心）；
4、加1%锇酸500ul或适量,摇动充分混匀，固定1-2h；
5、5000rpm离心3min,去上清，加入PBS 500ul漂洗样品三次，每次15min；
6、用梯度浓度（包括20%，50%，80%，100%五种浓度）的乙醇溶液脱水，每种浓度处理10min，5000rpm离心3min；
7、用纯丙酮或100%叔丁醇转换100%乙醇2-3次，即乙醇菌液离心的后，去上清，加200ul纯丙酮4℃放置20-30min,5000rpm离心3min，再加入新鲜纯丙酮。

8、自然风干，密封4℃保存，等待上样。

细菌前处理方法1、试剂和耗材所有试剂，除特别申明外，均为分析纯，水为去离子水。

甲醛：浓度不小于37.0%-40%（m/m）冰醋酸：浓度不小于99.5%（m/m）无水乙醇：浓度不小于99.5%（m/m）丙三醇：浓度不小于99%（m/m）叔丁醇：浓度不小于99%（m/m）离心机、量筒、离心管、塑料吸管、样品槽、导电胶、样品台FAA固定液配制：甲醛(37%—40%)5ml；冰醋酸5ml；50%酒精90ml；丙三醇5ml。

超声混匀。

2、样品前处理步骤：2.1取材：如果是细菌侵染植物组织，需将染菌部位的边缘剪下，按照植物样品前处理方法处理。

如果细菌被提取出来或在培养皿上离体培养的，那么挑取少量菌体至离心管中，加入固定液，过夜固定。

2.2乙醇梯度脱水：50%乙醇（15min，1次）→60%乙醇（15min，1次）→70%乙醇（15min，1次）→75%乙醇（15min，1次）→85%乙醇（15min，1次）→95%乙醇（15min，1次）→100%乙醇（15min，2次），每个步骤都得充分离心，将菌体离心至管底。

注意：梯度脱水过程中，管中液体倒出后，迅速加入下一梯度乙醇溶液，切不可一批全部倒完后，一个一个加溶液，这样很多样品就会变形。

2.3干燥：加入叔丁醇，放至4℃冰箱冷冻，30min观察叔丁醇是否凝固，若为液体需要更换叔丁醇。

叔丁醇全部固化后，放入冻干机中，冻干12h。

冻干的干净菌体呈粉末状，如果菌体粘在离心管壁上，或成块状，证明实验失败，需重新处理。

2.4粘托：用牙签挑取菌体，粘在导电胶带上。

用吹风机或洗耳球吹干净。

2.5镀膜：离子溅射仪中喷镀Pt。

2.6上机观测。

参考文献：谢家仪,董光军,刘振英.扫描电镜的微生物样品制备方法.电子显微学报.2005. 24(4):440-440。

透射电镜生物样品前处理步骤电镜样品制备步骤1、取材：放入2.5%戊二醛溶液中固定2-4h(4℃可保存1-2周，冷冻可保存2年)注：不可用自来水冲洗，被钳、镊夹取造成机械损伤的组织不可部分可取较大面积，但厚度必须小于1mm（戊二醛固定能力小于0.5mm）2、漂洗：牙签取出样品至新的1.5ml离心管，用0.1M pH7.0磷酸缓冲液（PBS）漂洗样品三次（摇床），每次15min3、锇酸固定与再漂洗：1%锇酸溶液固定样品1-2h（临用前计算用量≤50ul/样，用0.1M PBS将2%锇酸稀释至1%，通风橱操作），吸出固定液，用0.1M pH7.0 PBS漂洗样品三次，每次15min 注：漂洗以清除固定液，避免产生沉淀物干扰结构观察4、脱水剂梯度脱水：用梯度浓度（50%，70%，80%，90%和95%）乙醇溶液对样品进行脱水处理，每个浓度处理15min 再用100%乙醇处理20min （乙醇细胞内抽提少，但与包埋剂相容性差）最后用纯丙酮处理20min（若包埋剂为Epon改用环氧乙烷置换）注：脱水以清除游离水以便包埋剂均匀渗透；脱水剂易吸收空气中水分，密封，置换时应该迅速由低到高逐级脱水而不能急剧脱水，更换溶液时应迅速，以免组织内外产生气泡。

5、包埋剂梯度渗透：①用包埋剂丙酮混合液（V/V=1/1）处理样品1h：计算用量80ul/样再配制(参考样品大小)②用包埋剂丙酮混合液（V/V=3/1）处理样品3h：计算用量80ul/样再配制(参考样品大小)③纯包埋剂渗透样品过夜：将样品移至干燥的新离心管中，常温过夜(所用器具均应干燥)注：样品周围不能有气泡6、加热聚合：牙签取出经渗透处理的样品至0.5ml干燥离心管（预先装入约300ul包埋剂），加热聚合仪70℃加热过夜。

7、莱卡EM UC 7超薄切片仪修快、切片（50-70nm）8、正染色：塑料包埋模具（刀划几道缝隙），染色时温度低影响染色效果，冬天空调醋酸双氧铀50%乙醇饱和溶液100ul染色（15min-1h），双蒸水冲洗柠檬酸铅100ul染色15min（极易吸收空气中CO2产生PbCO3,染色时毋对着说话、呼吸，同时放置数块NaOH）9、日立H-7650透射电镜观察spurr包埋剂配制：ERL 2.5gNSA 5.2 g 混合均匀后再加入催化剂DMAE，搅拌30min；低温干燥保存DER 2.5 gDMAE 0.1g宜新鲜配制但由于使用期限长(3-4天)，混合物可在使用前一天制备。

《不同前处理方式对枯草芽孢杆菌固态发酵过程的影响及机制研究》篇一一、引言枯草芽孢杆菌作为一种重要的微生物资源，在生物肥料、生物农药以及生物制造等领域具有广泛的应用价值。

近年来，固态发酵技术因其高效、环保等优点在枯草芽孢杆菌的发酵过程中得到了广泛应用。

然而，不同的前处理方式可能会对枯草芽孢杆菌的固态发酵过程产生显著影响。

本文旨在探讨不同前处理方式对枯草芽孢杆菌固态发酵过程的影响及机制，以期为优化发酵工艺提供理论依据。

二、材料与方法2.1 材料本研究所用枯草芽孢杆菌菌种、发酵原料以及其他实验试剂均采购自正规供应商。

2.2 方法2.2.1 前处理方式设置实验设置了三种前处理方式：自然晾晒、热处理（60℃）、化学处理（0.5% NaOH溶液）。

每种前处理方式均设置对照组（无前处理）。

2.2.2 固态发酵过程将经过前处理的原料与枯草芽孢杆菌混合，进行固态发酵。

定期取样，分析各组分的变化。

2.2.3 分析方法采用高效液相色谱法、气相色谱法、扫描电镜等技术手段，分析固态发酵过程中各组分的变化及菌体形态的差异。

三、结果与分析3.1 不同前处理方式对固态发酵过程中菌体生长的影响实验结果显示，经过不同前处理方式的原料对枯草芽孢杆菌的固态发酵过程产生了显著影响。

其中，热处理组在发酵初期菌体生长较快，但后期增长速度逐渐减缓；自然晾晒组和化学处理组在发酵过程中菌体生长较为平稳。

各组在发酵结束时，菌体数量均达到较高水平，但具体数值存在一定差异。

3.2 不同前处理方式对固态发酵过程中代谢产物的影响实验发现，不同前处理方式对固态发酵过程中的代谢产物产生了明显影响。

热处理组在发酵过程中产生的代谢产物较多，尤其是某些酶类物质和有机酸类物质；自然晾晒组和化学处理组在代谢产物的种类和数量上较为均衡。

各组之间在代谢产物的具体组成和含量上存在差异。

3.3 不同前处理方式对菌体形态的影响扫描电镜观察结果显示，不同前处理方式对枯草芽孢杆菌的形态产生了影响。

固定方法如图所示
②粉末样品的固定
可以直接固定在导电胶带或者液体导电胶上，见图
注意点：如果是导电胶带，揭下来的剥离纸一定要倒着放，撒完样品后在用剥离纸干净的面压一下，固定的才回牢
如果是液体导电胶，最好是用水溶性的，不容易和样品发生反应，撒样品的时间点控制在导电胶快干的时候撒，才能使样品达到半浸没状态。

也可以用分散法，见图
③截面样品制作
如果是硅片或者是玻璃，需要用到玻璃刀，见图
注意点：用玻璃刀划的时候要让开观察的面，也就是说可以上面和下面各划一下，然后再掰就可以了
根据不同样品材质，有的时候是正面掰好，有的时候是从背面掰好。

对于薄膜类的样品，可以用液氮粹断，如下图。

按以下步骤制备扫描电镜样品：
→将菌液以3000r/min转速离心10min后，弃上清液加2.5%戊二醛固定4h
→磷酸缓冲液洗涤3次
→乙醇梯度脱水（分别为30%、50%、70%、90%乙醇各1 次，100%乙醇2次，15min/次）
→
置换乙醇2次（20min/次），每一步完成后经8000r/min 离心5min。

→将样品分别在20℃和80℃冷冻12h，于冷冻干燥仪中干燥12h，备用。

磷酸缓冲液PBS（1/15 mol/L，pH=7.2；）
配方：Na2HPO4*12H2O取23.876g+KH2PO4取9.078g，分别溶于1L水中，然后将二者按照7:3的体积比混合（V:V），
注意以下问题：①戊二醛固定时间；②洗涤液不能用水，必须用磷酸缓冲液PBS；
③戊二醛应该用以上的PBS来配置；
④酒精梯度脱水，顾名思义就是要把水自由水除去，但是如果不按梯度，突然用100%来脱水是不行的，因为浓度太高，细胞形态就严重变形；
⑤ 在冷冻干燥前，必须把脱去自由水的样品按照从-20→-80的梯度冷冻，目的把结合水固定住，梯度原理与④相同；。

扫描电镜生物预处理方法我折腾了好久扫描电镜生物预处理方法，总算找到点门道。

我一开始也是瞎摸索，就知道个大概，要把生物样本准备好才能放到扫描电镜下面看，不然啥也看不见或者看的都是糊里糊涂的。

我最开始就简单地把生物样品取出来，比如我取了一片植物的叶子，就直接放上去了，结果啥清晰结构都看不到。

这才知道，生物样品得处理。

那怎么处理呢？首先要固定。

我当时就想这就像把一个调皮的小孩定在座位上一样，得让样品在之后的处理中保持原有的模样。

固定液很关键，我常用多聚甲醛，浓度大概要4%，这个浓度我也是试了好多次才确定的，一开始浓度不对的时候样品结构就变形了。

把样品泡在固定液里得有足够时间，我感觉像炖肉一样，小火慢炖才入味，这时间大概得几个小时，具体得看样品大小，小的可能两三个小时，大一点的就得四个小时以上。

固定好了之后要脱水。

这就像拧毛巾一样，要把样品里的水分慢慢地去掉。

我一般从低浓度到高浓度逐步用酒精脱水，从30%的酒精开始，然后50%、70%、80%、90%、100%这样一步步来，每个浓度浸泡个15 - 20分钟左右。

但这里我也走了弯路，浸泡时间不能太随意缩短，不然水分脱不干净，扫描电镜下就会有伪影。

还有干燥这一步也很要紧。

自然干燥不行，那样样品会变形。

我试过临界二氧化碳干燥法，就是把样品放在设备里，然后慢慢让二氧化碳达到临界状态，把样品里的液体替换掉，这个方法效果倒是挺好，但设备操作难度系数有点高，每一步参数设置都得很小心才行。

然后就是镀膜，这就像给样品穿上一层防护服，增加导电性。

我常用的是喷金，喷多少层多少厚度也是有讲究的，不过我还在摸索确切的数据。

我只知道太厚了会掩盖细胞的一些小结构。

这些就是我在扫描电镜生物预处理方法上的一些尝试和收获，虽然还不是很完美，但希望对大家有用吧。

在处理生物样品的时候一定要耐心，每一步都认真对待，可能你多尝试几次，就能找到最适合自己样品的预处理方法了。

扫描电镜高真空模式微生物样本的前处理一、取材将菌株接种中液体培养基中，培养至一定时间后，离心收集菌体，弃上清，留沉淀。

二、固定戊二醛固定向沉淀中加2.5 %（v/v）戊二醛（将25%的戊二醛母液用pH值6.8的磷酸缓冲液（PBS，配置方法见文后）稀释十倍）1ml，4℃固定12 h，用pH值6.8磷酸缓冲液洗涤3次，离心收集回收菌体，弃上清。

三、脱水乙醇梯度脱水将沉淀依次在30 %、50 %、70 %、80 %、90 %、95 %、100 %、100 %乙醇中浸泡10 min进行梯度脱水，每个梯度乙醇脱水后离心收集菌体，再进行下一个梯度的脱水处理。

最后再离心收集菌体。

四、媒介剂置换（临界点干燥法此步可省略）乙酸异戊酯置换乙醇乙酸异戊酯置换乙醇两次，每次20 min，每次置换后8000 rpm，离心5 min回收菌体。

五、干燥方法一：空气干燥法（效果不好）将样品从醋酸异戊酯中取出，放置于干燥钵中干燥2~4 h。

方法二：临界点干燥法将样品从乙醇中取出，充入液体二氧化碳，液体二氧化碳置换乙醇，20－60分钟，升温升压达到二氧化碳临界点(31℃, 72.8大气压)，维持4分钟，保持温度和压力并缓慢放出二氧化碳，大约持续30分钟。

方法三：冷冻干燥法将样品从醋酸异戊酯中取出，分别于-20℃、-40℃、-80℃冷冻12 h，于冷冻干燥仪中干燥12 h备用。

六、导电处理离子溅射镀膜法将样本固定到导电胶布上，竖直放置到离子溅射仪的样品台上，按照抽真空1 min，离子溅射30 s对样本进行离子溅射镀膜。

七、电镜观察将样品从离子溅射仪中取出，放入扫描电镜中，高真空模式观察。

扫描电镜制样步骤
生物样品（如动植物、细胞）需进行1-7步骤的操作（耗时长）
干燥的非导电样品（如花粉、制剂粉末、塑料等）无需进行1-5步骤操作而粘于样品台喷金再于电镜观察即可
导电样品（如金属样品）直接粘于样品台电镜观察，无需1-7步
注：取材时所需2.5%戊二醛溶液、0.1M PH7.0磷酸盐缓冲液需自行配置，配方详见《电镜固定液、缓冲液、染液配方》
送样前请先与我们联系以安排时间在我处制样。

生物样品制样耗时，请安排好个人时间
生物样品（小于1cm3）于2.5%戊二醛溶液4℃固定过夜，再按下列步骤操作：
1、漂洗：弃去戊二醛固定液，用0.1M PH7.0磷酸盐缓冲液漂洗3次，每次15min
2、1%饿酸固定1-2h（通风厨操作）
3、漂洗：弃去饿酸固定液，用0.1M PH7.0磷酸盐缓冲液漂洗3次，每次15min
4、梯度洗脱：50%、70%、80%、90%、95%系列浓度的乙醇溶液梯度脱水各15min，
再用100%的乙醇脱水2次每次20min
注：样品较大延长脱水时间
5、乙醇：醋酸异戊酯=1:1（V:V）处理30min，再用纯醋酸异戊酯处理1-2h
注：通风厨操作
相容性较差，需用醋酸异戊酯置换
乙醇、丙酮等脱水剂与CO
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6、自然干燥/临界点干燥（英国EMTIECH K850）
7、日立E1010型离子溅射仪喷金30s，利用导电碳胶将样品固定于样品台，调节样品台高度，
8、日立S-3000N扫描电镜观察。

细胞生物学实验报告扫描电子显微镜生物样品制备与观察姓名：学号：班级：专业：同组成员：【实验目的】1、了解扫描电镜的基本结构与工作原理2、了解扫描电镜的基本使用方法3、了解临界点干燥仪的工作原理了解扫描电镜生物样品制备的基本过程【实验原理】扫描电镜主要用于观察样品表面几何形貌。

一般扫描电镜生物样品制备过程包括取材、固定、脱水、干燥以及导电处理等步骤。

取材时应尽量保护待观察的样品表面（如细胞表面、组织或器官的上皮表面等），并且避免样品表面在清洗过程中的人为损伤。

一般生物样品需经干燥后才能在扫描电镜下观察。

由于表面张力的作用，含水量大的生物样品在自然干燥过程中，其表面形貌将发生严重变形。

为了观察生物样品真实的表面形貌，通常采用临界点干燥法对样品进行干燥处理。

当气液两相处于临界点时，气体、液体密度相等，表面张力为零。

因此，对生物样品进行临界点干燥，可以较好地保护其表面形貌。

水的临界温度和压力分别为374.1℃和218.3大气压，显然，此条件下生物样品将受到严重损坏。

由于CO2的临界温度和压力较低，为31.4℃和72.9大气压，故通常选择CO2作为生物样品临界点干燥的工作介质。

固定、脱水后的样品需经过乙酸异戊酯处理，然后利用临界点干燥仪对样品进行干燥。

由于生物样品导电性低，未经过导电处理的样品在扫描电镜下观察时会产生荷电现象，从而影响观察和照相记录。

为了减少荷电效应，对生物样品表面要进行导电处理，通常使用离子溅射仪在样品表面喷镀金属导电薄层。

喷镀的金属包括：金（Au），铂（Pt）及其合金等，喷镀导电薄层厚度在10nm左右为宜。

对于花粉粒等含水量较少的生物样品，可以经过自然干燥后在扫描电镜下观察。

入射电子术与固体样品原子之间的相互作用1、入射电子术与固体样品原子之间的相互作用。

具有一定的能量的电子入射固体厚样品后收到样品原子的散射，产生二次电子、背散射电子以及特征x射线等。

二次电子是从样品表面约10nm深度范围内被入射电子激发的低能电子，其能量约为0~50eV。

生物样品的扫描电镜制样干燥方法一、本文概述扫描电子显微镜（SEM）是一种广泛应用于生物学、医学、材料科学等领域的高分辨率显微成像技术。

在生物学研究中，SEM被用于观察和分析各种生物样品的超微结构，如细胞、组织、微生物等。

然而，生物样品的电镜制样过程复杂且精细，其中干燥环节尤为关键，因为不当的干燥方法可能导致样品结构变形、失真，甚至破坏。

因此，本文旨在探讨和总结生物样品扫描电镜制样过程中的干燥方法，包括各种方法的原理、优缺点以及应用注意事项，以期为提高生物样品SEM分析的准确性和可靠性提供参考和指导。

二、生物样品扫描电镜制样概述扫描电子显微镜（Scanning Electron Microscope，SEM）是一种用于观察和研究材料表面微观形貌和组成元素分布的强大工具。

在生物学领域，SEM常被用于研究生物样品的微观结构和形态，如细胞、组织、微生物等。

然而，由于生物样品往往含有大量水分，且结构复杂、易变形，因此在SEM制样过程中，干燥方法的选择和应用至关重要。

生物样品的扫描电镜制样过程一般包括前处理、固定、脱水、干燥、镀金等步骤。

其中，干燥是制样过程中的关键步骤之一。

干燥不当可能导致样品变形、结构破坏、微生物活性丧失等问题，从而影响后续的观察和分析。

因此，选择适合的干燥方法对于保证生物样品SEM制样的质量至关重要。

目前，常见的生物样品干燥方法包括自然干燥、临界点干燥、冷冻干燥等。

自然干燥方法简单易行，但可能导致样品变形和微生物活性丧失；临界点干燥通过控制温度和压力，避免样品在干燥过程中发生收缩和变形，适用于一些对结构要求较高的样品；冷冻干燥则通过在低温下将样品中的水分升华，从而避免样品在干燥过程中发生变形和破坏，适用于一些对微生物活性要求较高的样品。

在实际操作中，应根据样品的性质和研究目的选择合适的干燥方法，并结合其他制样步骤，如固定、脱水、镀金等，以确保制样质量和后续观察的准确性。

随着技术的不断进步，新型的干燥方法和技术也在不断发展，为生物样品SEM制样提供了更多的选择和可能性。

场发射扫描电子显微镜实验操作扫描电子显微镜（SEM）是一种能够获得高分辨率表面形貌信息的重要工具。

在实验室中，我们经常会使用场发射扫描电子显微镜来观察样品的微观结构和形貌。

本文将介绍场发射扫描电子显微镜的实验操作步骤。

实验准备在进行场发射扫描电子显微镜实验之前，我们需要进行一些准备工作。

首先，确保实验室环境干净整洁，以避免样品受到污染。

其次，检查扫描电子显微镜设备，确保设备正常工作。

最后，准备好待观察的样品，并确保样品表面平整干净。

样品处理与加载处理样品是进行场发射扫描电子显微镜实验的关键步骤。

首先，将待观察的样品切割成适当大小，并利用相关方法处理表面以去除可能的杂质。

然后，将样品加载到扫描电子显微镜样品台上，并使用夹具固定样品。

参数设置在进行扫描电子显微镜实验前，需要设置合适的参数以获得清晰的显微结构图像。

首先，调整加速电压和工作距离，以适应待观察样品的性质和尺寸。

其次，设置扫描速度和倍率，以获得所需的图像分辨率。

最后，根据需要选择不同的检测模式和滤波器。

图像获取与分析当参数设置完成后，可以开始进行样品的图像获取。

通过扫描电子束对样品进行成像，获得样品表面的细微结构信息。

在获取图像后，可以利用相应软件对图像进行分析，包括测量尺寸、分析形貌等。

同时，可以记录图像和相应数据以备后续分析。

结束实验与维护实验结束后，及时关闭扫描电子显微镜设备，并对设备进行清洁和维护。

将样品从样品台取下，妥善保存或处理。

同时，整理实验记录和数据，保留有关信息以备后续参考。

通过以上步骤，我们可以完成一次成功的场发射扫描电子显微镜实验操作。

这不仅可以帮助我们深入了解材料的微观结构和形貌，还可以为科学研究和工程应用提供重要参考。

希望本文对您进行场发射扫描电子显微镜实验操作有所帮助。

材料实验技术扫描电子显微镜使用方法详述材料实验技术-扫描电子显微镜使用方法详述引言：材料实验技术的不断发展与进步，为实验研究工作提供了广阔的空间和更为精细的方法。

其中，扫描电子显微镜（Scanning Electron Microscope，SEM）是一种重要的观测仪器，被广泛应用于材料科学领域。

本文将详述扫描电子显微镜的使用方法，从样品准备到操作过程的若干关键步骤，以期帮助读者更好地掌握这一实验工具。

一、样品准备：在使用扫描电子显微镜之前，首先需要进行样品准备。

通常，样品应具备以下条件：1. 平整表面：样品表面应尽量光滑、平整，以便在显微镜中获得更清晰的图像。

2. 干燥：样品应完全干燥，以防在观测过程中产生电磁干扰或损坏显微镜零部件。

3. 导电：样品应具备一定的导电性，以便在显微镜中形成导电层。

对于非导电性材料，可以通过涂覆一层金属或碳薄膜来增加导电性。

4. 适当尺寸：样品的尺寸应适合显微镜的观测区域，以确保获得全面和清晰的图像。

二、显微镜操作：1. 打开显微镜：首先，将显微镜电源连接到稳定的电源插座，并打开主电源开关。

稍等片刻，直到仪器完全启动并进入工作状态。

2. 设置加速电压：根据实际需要，选择合适的加速电压。

较低的电压适用于低分辨率的观测，而较高的电压则适用于高分辨率的观测。

注意，在改变加速电压时，需要进行较长时间的倍频和/mag对齐过程。

3. 调整亮度和对比度：通过调节亮度和对比度控制旋钮，使图像明亮且清晰可见。

此时，可以通过目镜观察到显微镜中样品的粗略外观。

4. 焦距调整：使用焦距调节旋钮，使样品的某个特定区域清晰可见。

这一步骤需要耐心和细致的操作，以确保图像的高清晰度。

5. 选择观察模式：根据需要，选择不同的观察模式。

扫描电子显微镜常见的模式有二次电子（SE）和反射电子（BSE）。

二次电子模式适用于表面形貌的观察，而反射电子模式适用于化学成分的分析。

6. 开始观察：将样品插入显微镜，并对样品进行定位和调节。