硫酸新霉素可溶性粉引发SD大鼠肝肾损伤模型的建立

肝损伤动物模型研究进展内容摘要：肝疾病；毒物，四氯化碳；醋氨酚；疾病模型，动物肝损伤是各种肝脏疾病的病变结果，对肝损伤的防治目前仍是一个严峻的课题。

通过建立实验性肝损伤动物模型，研究肝病的发生机制，筛选保肝药物，探索保肝作用原理，具有重要的现实意义。

现将近年来国内外对实验性肝损伤动物模型分类、作用原理、造模方法及其优缺点等研究进展作综述和探讨。

1化学性肝损伤动物模型1.1四氯化碳（carbontetrachloride,CCl4）CCl4导致肝损伤的主要机制目前认为与其自身和自由基代谢产物有关。

CCl4代谢产生的自由基进入机体后，在肝脏经细胞色素P450激活，生成三氯甲基自由基和三氯甲基过氧自由基，攻击肝脏细胞膜上的磷脂分子，使得细胞膜、内质网膜发生氯烷化和脂质过氧化，损伤细胞膜、细胞器；还能与膜脂质和蛋白质大分子进行共价结合，影响蛋白质代谢，并且破坏膜结构和功能的完整性，钙离子内流增加，影响细胞正常生理功能，最终导致肝细胞胞质中的可溶性酶渗出，细胞死亡[1]。

CCl4所致肝损伤可分为急性和慢性。

急性肝损伤：赖力英等应用4mL/kgCCl4剂量灌胃可诱发SD大鼠急性肝功能衰竭，死亡率达85%[2]。

慢性肝损伤：Zhang等采用2mL/kgCCl4腹膜内注射SD大鼠，每周2次，持续9周可伴有肝细胞坏死和明显炎症的肝硬化[3]。

CCl4导致肝损伤是经典模型之一，能准确反应肝细胞功能、代谢及形态学变化，重复性好且经济。

但CCl4同时还损伤动物的心、脾、肺、肾、脑等器官，另外，蒸汽和液体可由呼吸道、皮肤吸收，对人体也有一定毒性，操作时应注意。

1.2α萘基异硫氰酸酯(αNaphthylisothiocyanate,ANIT)ANIT是一种间接肝毒剂，其主要损害是通过膜脂质过氧化反应，致使肝细胞变性、坏死、胞内血清谷丙转氨酶(ALT）大量溢入血流，同时还导致胆管上皮细胞肿胀坏死，引起毛细胆管增生及小叶间胆管周围产生炎症，从而造成胆管阻塞，形成明显的胆汁淤积，并伴随以点状坏死为主的肝实质细胞损害，产生梗阻性黄疸，出现高胆红素血症和胆汁分泌减少。

大鼠早期酒精性肝损伤诱导模型的建立及观察[摘要目的探讨大鼠早期酒精性肝损伤模型的建立方法，为研究早期酒精性肝损伤的发病分子机制提供理想动物模型。

方法24只雄性SD大鼠随机分为模型组（16只）和对照组（8只）。

对照组饮用自来水；模型组饮用7%～56%梯度递增的白酒12周。

取材前24 h和12 h，分别以56%白酒急性灌胃后处死大鼠。

每天记录大鼠食用饲料量及饮用量；每周称量大鼠体重。

采用全自动生化分析仪测定大鼠血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、三酰甘油（TG）、总胆固醇（TC）含量。

观察大鼠肝脏病理学和形态学改变。

结果12周后，模型组大鼠体重增长率为（61.67±1.98）% ，明显低于对照组的（160.09±3.12）% （P＜0.05），肝脏指数模型组（3.74±0.54）高于对照组（2.85±1.26）（P 32%～65%；F3：>65%～75%；F4>75%。

1.3.6.2酒精性肝炎依据炎症程度分为4级（G0～G4）：G0无炎症；G1腺泡3带呈现少数气球样肝细胞，腺泡内散在个别点灶状坏死和中央静脈周围炎；G2腺泡3带明显气球样肝细胞，腺泡内点灶状坏死增多，出现Mallory小体，门管区轻至中度炎症；G3腺泡3带广泛的气球样肝细胞，腺泡内点灶状坏死明显，出现Mallory小体和凋亡小体，门管区中度炎症伴和（或）门管区周围炎症；G4融合性坏死和（或）桥接坏死。

1.3.6.3酒精性肝纤维化依据纤维化的范围和形态分为4期（S0～S4）：S0无纤维化；S1腺泡3带局灶性或广泛的窦周/细胞周纤维化和中央静脉周围纤维化；S2纤维化扩展到门管区，中央静脉周围硬化性玻璃样坏死，局灶性或广泛的门管区星芒状纤维化；S3腺泡内广泛纤维化，局灶性或广泛的桥接纤维化；S4肝硬化。

1.4统计学方法采用SPSS 14.0统计学软件进行数据分析，计量资料用均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用t检验；等级资料比较采用秩和检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

5期医学研究与教育第26卷收稿日期：2009-07-09作者简介：刘林（1976-），男，河北保定人，讲师。

肝损伤动物模型制作的研究进展刘林，秦建军，史树堂，刘未华（河北大学基础医学院，河北保定071000）中图分类号：R363.2文献标志码：A文章编号：1674-490X （2009）-05-0092-03第26卷第5期医学研究与教育Vol.26No.52009年10月Medical Research and Education Oct.2009肝脏疾病是影响人类健康的常见疾病之一。

各种有害因素导致的肝损伤主要有化学性肝损伤、药物性肝损伤、免疫性肝损伤和酒精性肝损伤等类型，其临床表现为肝坏死、脂肪肝、肝纤维化、肝硬化以及肝癌等。

目前，对肝损伤的治疗仍是一个全球性的严峻课题。

建立较完善的肝损伤动物模型，可为其发生机制及其预防、治疗的研究提供一定的实验依据，也可作为临床筛选理想治疗药物的有效手段。

笔者对近年来以临床常用肝毒性物质建立肝损伤模型的相关研究进行总结综述。

1化学性肝损伤动物模型化学方法是通过化学性肝毒物质，如四氯化碳（CCl 4）、氨基半乳糖（D-gal ）、硫代乙酰胺、黄曲霉素等导致肝损伤。

应用CCl 4和D-gal 复制肝损伤动物模型，条件要求低，技术易于掌握，可靠性强，重复性好，是目前研究抗肝损伤新药经常采用的方法。

1.1CCl 4性肝损伤模型关于CCl 4肝毒的作用机制，存在多种假设，但都一致公认，自由基的形成及引发的链式过氧化反应是其主要机制。

王宇等[1]曾应用雄性Wistar 大鼠进行10%CCl 4致慢性肝损伤的研究，结果发现实验组染毒第8周后，仅出现肝纤维化现象，而未达到肝硬化。

提出少用该模型鉴定药物和保健食品对慢性肝损伤的保护作用。

杨开选等[2]应用雄性Wistar 大鼠研究40%CCl 4致大鼠慢性肝损伤病理变化过程，发现实验组染毒1周后，中央静脉周围出现较多坏死肝细胞，并伴有气球样变和脂肪变性；染毒3周后，气球样变和坏死进一步增多，并形成桥接坏死，局部网状纤维支架塌陷；染毒6周后出现肝纤维化；染毒第8周出现明显肝硬化。

肝损伤动物模型的研究进展近年来，肝脏疾病已经成为医学界关注的热点之一。

研究肝脏疾病的机制和治疗方法需要动物模型的支持，其可以模拟人体肝脏相关的疾病，从而可以更加直观、深入了解相关疾病的发生机制和治疗方法。

因此，肝损伤动物模型的建立与应用就成为了肝脏疾病研究的重要方向。

当前，常用的肝损伤动物模型主要包括化学性肝损伤模型、生物性肝损伤模型、物理性肝损伤模型、营养失衡性肝损伤模型等。

化学性肝损伤模型是最为常用的肝损伤模型之一。

化学性肝损伤模型主要通过注射或灌胃方式给予实验动物特定的化学药物，从而引起肝细胞的损伤，如四氯化碳、二乙酰氨基氮杂硫酰胺和苯并咪唑等。

这些化学药物能够诱导肝细胞代谢过程中产生活性自由基，损伤细胞内膜和细胞结构，导致肝细胞死亡，从而引发肝功能异常。

由于化学性肝损伤模型可以较为准确地模拟肝脏疾病的发生机制，因此被广泛应用于肝脏疾病的研究中。

生物性肝损伤模型主要是基于肝细胞灭活或毒性素材的应用。

由于某些病原微生物和毒菌分泌出的毒素会引起肝细胞死亡和肝损伤，因此可以通过注射病原微生物和毒菌，或者直接注射其中可引起肝损伤的毒素，模拟肝脏疾病的发生机制。

物理性肝损伤模型主要是利用某些物理性因素，如冷冻、高温、辐射等对肝脏进行一定程度的刺激，引起肝细胞的损伤。

其中，冷冻和高温是目前运用最广的方法。

物理性肝损伤模型通过简单、方便、易于操作的优点，被广泛应用于肝损伤的研究中。

营养失衡性肝损伤模型是指通过不同的营养缺乏模型所导致的肝损伤疾病模型。

如高脂饮食模型、蛋白质营养缺乏模型等。

这些模型通过调整实验动物的饮食结构和营养成分，使其出现代谢异常，最终导致肝脏损伤疾病的发生。

未来，随着科技的不断进步与人们对肝脏疾病认识的不断深入，肝损伤动物模型的研究也将不断展开。

尤其是一些新型疾病所需的动物模型，也将随之不断涌现。

这些动物模型的应用将为肝细胞病理学、免疫病理学、分子生物学等领域提供更为精准的支持，使得肝脏相关疾病治疗和预防工作取得更好的进展。

大鼠急性肝损伤（肝郁脾虚证）病证结合模型的研究建立適宜于抗急性肝损伤（肝郁脾虚证）中药复方活性发现、药效评价和新药研发的方证相应动物模型。

依照中医病因病机演变规律和现代病理机制研究，抽提适宜于急性肝损伤（肝郁脾虚证）大鼠动物模型评价的证候、确定积分，根据药证相符原则选定逍遥丸和水飞蓟宾葡甲胺片为模型反证药物，大鼠每天腹腔注射猪血清，并按分组给予不同配比高脂低蛋白饲料及食用乙醇进行诱导；共7 d。

实验期间每日观察大鼠的体重、食量、饮水量及一般观察并对其进行中医证候积分，实验结束检测大鼠血清ALT，AST，PA，TBIL，TBA等肝功能指标的水平，检查肝组织病理学变化。

在造模1周后，各模型组的大鼠均达到明显急性肝损伤程度，且大鼠主证、次证均符合肝郁脾虚证的证候表现。

与正常对照组比较，血清ALT和AST活性升高，TBIL和TBA含量升高，PA含量降低；肝组织病理形态学检查显示各模型组的大鼠均出现炎细胞浸润、嗜酸性变或嗜酸性脂肪变，反证药物组可不同程度改善上述病变表现。

腹腔注射猪血清+高脂低蛋白饲料（895%玉米粉、10%猪油、05%胆固醇）+10%食用乙醇连续造模7 d，经药物反证，可建立拟临床肝郁脾虚证的急性肝损伤大鼠模型，具有成模耗时短、死亡率低、动物状态与临床患者证候表现相近等特点，可适用于抗急性肝损伤（肝郁脾虚证）中药复方活性发现、药效评价、新药研发和临床方证相关性研究与机制探讨。

标签：急性肝损伤；肝郁脾虚证；病证结合；大鼠；动物模型Research on rat models of acute liver injury with syndrome ofliver depression and spleen deficiencyHUANG Nana1，2，SUN Xiaoqian2，YANG Qian3，LI Xiaoyu1，SUN Rong1*（1 Shandong Academy of Chinese Medicine，Ji′nan 250014，China；2 Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Ji′nan 250355，China；3 Rizhao City Hospital of Traditional Chinese Medicine，Rizhao 276800，China）[Abstract]This paper aimed to establish animal models which are suitable for the activity found，efficacy evaluation of herbs resistant to acute liver injury with syndrome of liver depression and spleen deficiency and new drug research and development based on corresponding of formula and syndrome The symptoms that are suitable for evaluating the rat models of acute liver injury with syndrome of liver depression and spleen deficiency were extracted according to the evolution rule of theetiology and pathogenesis in traditional Chinese medicine and the modern pathological mechanism Xiaoyao pill and silibin meglumine tablets were used as drug counter evidence for models in accordence with the principle of consistence of prescription and syndrome Rats model were fed with highlipid and lowprotein fodder of different proportion and induced by intraperitoneal injection with pig serum，intragastric administration with edible alcohol once a day for 7 days Daily record of body weight，daily food intake and daily water intake were conducted day after day in experimental session Symptoms were also observed and evaluated by score at the same time The contents of ALT，AST，PA，TBIL and TBA in serum were detected and histopathological changes of liver were checked at the ending of experiment Obvious acute liver injury occurred to all rats in model groups at 1 week following model induction Both main symptoms and secondary symptoms were consistent with syndrome manifestation of liver depression and spleen deficiency Compared with normal control group，the activity of ALT，AST and contents of TBIL，TBA in serum increased and the content of PA decreased Liver tissue pathological morphology showed inflammatory cells infiltration，eosinophilic or eosinophilic adipose change in hepatocytes of rats in model groups All the above lesions manifestation could be improved by drug counterevidence By the disproof of medicine，rat models of acute liver injury with syndrome of liver depression and spleen deficiency could be induced by fed with highlipid and lowprotein fodder which contained 895% cornstarch，10% lard and 05% cholesterol，intraperitoneal injected with pig serum，intragastric administrated with edible alcohol for 7 days The rat models with a low mortality could be induced in a short time and animal status were similar to syndrome performance of patients So the rats models are suitable for the activity found，efficacy evaluation and drug discovery of herbs resistant to acute liver injury with syndrome of liver depression and spleen deficiency，and also can be used in the research of correlation between prescription and syndrome and its mechanism[Key words]acute liver injury；liver depression and spleen deficiency；combination of disease and syndrome；rat；animal modeldoi：10.4268/cjcmm20162318急性肝损伤主要是由病毒感染、药物服用不当、过量饮酒、高脂饮食因素造成的急性肝功能异常为代表的疾病。

大鼠早期酒精性肝损伤诱导模型的建立及观察作者：陈欢刘燕玲刘学睿来源：《中国当代医药》2017年第20期[摘要目的探讨大鼠早期酒精性肝损伤模型的建立方法，为研究早期酒精性肝损伤的发病分子机制提供理想动物模型。

方法 24只雄性SD大鼠随机分为模型组（16只）和对照组（8只）。

对照组饮用自来水；模型组饮用7%～56%梯度递增的白酒12周。

取材前24 h和12 h，分别以56%白酒急性灌胃后处死大鼠。

每天记录大鼠食用饲料量及饮用量；每周称量大鼠体重。

采用全自动生化分析仪测定大鼠血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、三酰甘油（TG）、总胆固醇（TC）含量。

观察大鼠肝脏病理学和形态学改变。

结果 12周后，模型组大鼠体重增长率为（61.67±1.98）% ，明显低于对照组的（160.09±3.12）% （P[关键词]酒精性肝病；大鼠；肝病模型；肝功能[中图分类号] R575 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2017）07（b）-0007-04[Abstract]Objective To explore the method of establishing a model of early alcoholic liver disease（ALD） in rats in order to provide an ideal animal model for studying the molecular mechanism of early alcoholic liver injury.Methods Twenty-four male SD rats were randomly divided into experimental group （16 rats） and control group （8 rats）.In the control group，SD rats were fed with tap water.In the experimental group，SD rats were fed with alcohol of which the concentration of 7%-56% increased gradually for 12 weeks.During the experiment，the quantity of the fodder and the value of drinking were recorded everyday.Then the weight was weighed every week.24 and 12 hours before rats in experimental group were killed，they were treated with acute lavages with 56% alcohol.The activities of alanine aminotransferase （ALT），spartate aminotransferase （AST），riglyceride （TG） and total cholesterol （TC） in serum were determined by the fully automatic biochemical analyser.Moreover，the histological and morphological changes of liver tissues were observed. Results The growth rate of body mass was （160.09±3.12）% in the control group at the end of 12th week，while it was（61.67±1.98）% in the experimental group （P[Key words]Alcoholic liver disease；Rat；Liver disease model；Hepatic function酒精滥用与依赖日益严重已成为世界性公共卫生问题。

专利名称：一种大鼠肝损伤模型建立的方法
专利类型：发明专利
发明人：刘欢,安全,李建国,秦秀军,尹晶晶,李曙芳,孙鸽,袁慧,黄立群,许文黎,高洁,王新钢,李梅,刘梦雅,王远飞,胡
波
申请号：CN201910650767.1
申请日：20190718
公开号：CN110367190A
公开日：
20191025
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明属于动物模型技术领域，涉及一种大鼠肝损伤模型建立的方法。

所述的方法是对大鼠注射CCl食用油溶液，结合X射线照射的方式进行造模。

利用本发明的大鼠肝损伤模型建立的方法，能够周期短、费用低、重现性好、操作简便的造模，避免传统的四氯化碳造模过程中反复注射对大鼠皮肤及其他脏器的损伤。

本发明建立的模型可以用于保肝护肝食品和药物的研究。

申请人：中国辐射防护研究院
地址：030006 山西省太原市小店区学府街102号
国籍：CN
代理机构：北京天悦专利代理事务所(普通合伙)
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肝损伤动物模型制作研究进展Progress on animal models of liver injury researchBU XiujuanDepartment of Pharmacy, School of Pharmacy and Medical Examination, Daqing Medical College, Heilongjiang Province, Daqing *****, China[Abstract] Liver disease is a common disease which affects human health. So, it is great importance for the study of the pathogenesis and the screening of liver disease by the establishment and improvement of liver injury animal models. Progress in recent years on the liver injury animal modelswill be summarized and explored.[Key words] Liver injury animal models; Chemical liver injury: Drug-induced liver injury; Immunological liver injury肝脏疾病是临床常见的，严重危害人类健康的疾病之一。

因此, 重中之重是要研发治疗肝脏疾病的有效药物。

在研发过程中，以人本身作为实验对象受空间、时间、方法乃至道义上的局限，于是，对各种肝脏疾病治疗药物的筛选与发病机制的探究，很大程度上要依赖于实验动物模型的建立和应用。

建立较完善的肝损伤动物模型，对肝脏疾病的研究有着重要的现实意义。

动物肝损伤模型建立的研究进展周仲强;魏恩巍【摘要】肝损伤涉及短期内突发的肝细胞损害,其病因较多,机理复杂.动物实验是研究该病发病机制及临床前药物筛选的重要方法之一.本文基于肝损伤的模型建立,对四氯化碳、D-半乳糖胺、乙醇,以及人源性肝嵌合体小鼠等模型建立进行综述,为研究动物实验肝损伤提供有针对性的选择方法.【期刊名称】《吉林化工学院学报》【年(卷),期】2018(035)011【总页数】4页(P14-17)【关键词】动物;肝损伤;模型【作者】周仲强;魏恩巍【作者单位】吉化集团总医院药剂科,吉林吉林132000;吉林大学药学院,吉林长春130021【正文语种】中文【中图分类】R575.3肝脏是人体内主要的代谢器官，而肝损伤引起的多种肝脏疾病是严重影响人们的身体健康的常见疾病.造成肝损伤的原因有很多，包括化学性、代谢性、药物性、酒精性及环境因素等，长期的肝损伤往往会进一步发展成肝纤维化、肝硬化、肝癌及肝功能衰竭[1].肝损伤是各种肝脏疾病的病变结果，对肝损伤的防治目前仍是一个严峻的课题.构建恰当的肝损伤动物模型，是研究肝损伤的发病机制，探索新的治疗方法的基础[2].近年来对于肝损伤的治疗似乎是热点[3]，通过建立实验性肝损伤动物模型，研究肝病发生的机制与靶点，筛选出较优的保肝药物，探索保肝的作用原理，是具有重要的现实意义.因此本文阐述了近些年动物不同肝损伤模型的概况以及相应抗肝损伤机制，对日后关于肝损伤的研究提供理论基础，具有一定的应用价值.1 CCl4诱导肝损伤四氯化碳(CCl4)肝损伤动物模型是最经典的试验性模型.CCl4 进入体内后,在肝细胞的内质网中经细胞色素P450氧化酶的代谢,生成活泼的三氯甲基自由基和氯自由基.这些自由基可与细胞内和细胞膜的大分子共价结合,使酶的功能丧失,细胞膜脂质过氧化,胞浆Ca2+ 浓度升高,胞浆内转氨酶渗入血液[4],导致肝细胞损伤.Rofiee[5]等人将文定果叶子干燥粉碎后浸泡在甲醇里72h后，取上清液浓缩后保存在4 ℃条件下.分成3个剂量组对大鼠进行灌胃处理，其中模型组给予生理盐水，最后一次给药24 h后再给予50% CCl4(按1.5 mL/kg体积给药).实验结果表明，到第八天时，大鼠的体重逐渐降低，与正常组产生一定的差异；麻醉，取血，测得生化指标(ALT、AST、ALP)与正常组相比较出现了明显的升高趋势；利用代谢组学可以观察到CCl4起到肝损伤作用的两条途径，一条是初级胆汁酸的生物合成.在一个健康的状态中大部分的胆汁酸重吸收回到肠的顶端，通过钠依赖性胆汁酸转运(ASBT)到细胞和分泌胆汁的基底门静脉，胆汁酸在到达基底膜后可以通过具有钠依赖性的牛磺胆酸钠转运体(NTCP)再次分泌到胆囊[6].然而当肝功能受损时，由于肠肝循环周期的不充分，胆汁酸过多停留在流通期间，空腹血清胆汁酸水平的含量被认为是早期肝功能不全的检查指标，同时伴有肝脏炎症[7]；另一条是花生四烯酸的代谢.环氧二十碳三烯酸(EET)是花生四烯酸代谢物，它参与多种信号通路调节炎症的发生和传播，是疼痛和稳态功能的一个关键的信号分子[8].给予四氯化碳后，肝细胞发生死亡，导致它的酶未能转换为更为稳定和低生物活性的EET羟基酸(DHETs).两条代谢途径的改变，从而释放出大量的炎症因子引起肝损伤.2 D-半乳糖胺诱导肝损伤Jia[9]等人探究氧化白藜芦醇调节脂多糖诱导急性小鼠肝损伤的机制.采用试剂盒测定ALT、AST、CAT、SOD、 T-AOC、 iNOS和MDA等血清指标；运用Western-blot分析方法测定相关的蛋白表达；采用苏木精-伊红染色法对固定的肝脏进行染色，利用组织病理学荧光显微镜下观察肝组织的变化.实验结果表明，通过抑制TLR4/NF-kB通路，并且活化Keap1/Nrf2通路和PI3K/Akt的信号通路，氧化白藜芦醇可减轻LPS/D-氨基半乳糖诱导的肝损伤，进而参与调节炎症因子的释放，减轻氧化应激和减少肝细胞凋亡程度；其中关于PI3K/Akt信号通路的激活与抗凋亡的作用，是一种新的见解与发现.蛋白水平表达的高低有助于确定药物起到肝保护作用的相关通路，对于深入了解氧化白藜芦醇作为一种有前途的保护肝脏天然产物起到了关键作用，同样对于药物的研发指引了更明确的方向.D-半乳糖胺的致毒机理是在代谢过程中与体内尿苷二磷酸(UDP)大量结合形成稳定的尿苷衍生物，造成体内UDP 耗竭，从而导致具有依赖磷酸尿苷的核酸、糖蛋白、糖元等物质的合成减少和受阻，最终导致肝损伤甚至死亡[10].因此，研究D-半乳糖胺诱导的急性肝损伤具有重要的临床意义.3 乙醇诱导肝损伤乙醇进入体内后主要是通过肝脏来完成代谢，一旦摄入过量的乙醇，细胞色素P4502E1( CYP2E1)会被诱导参与乙醇的代谢，产生活性氧(ROS).ROS能够与生物大分子反应造成蛋白变性、酶失活、DNA 结构改变、脂质过氧化，从而造成肝细胞的损伤[11].Bai[12]等人探究白桦脂醇调节乙醇诱导肝损伤的通路.白桦脂醇治疗组与模型组相比都能够降低血清中ALT、AST和TG的表达水平，初步说明了白桦脂醇是一种较为有效的抑制剂；HE分析的结果表明，模型组小鼠的肝组织与正常组相比发生严重的脂肪变性、炎性浸润和纤维化，肝损伤比较严重；免疫组化染色分析肝纤维化的重要特征α-SMA，模型组小鼠的门静脉区域和中央静脉周围的α-SMA表达强度远远强于正常组小鼠，而几个治疗组通过染色法分析没有检测出相应的α-SMA，并且在Western-blot也得到了一致的结果，collagen-I和α-SMA的蛋白表达水平与模型组相比降低；为了进一步确认白桦脂醇是否能够有利于酒精在体内的代谢，对SREBP-1(固醇调节元件结合蛋白-1)的蛋白表达水平进一步探究.结果也表现出模型组SREBP-1 蛋白表达水平增加，而给药治疗组则减轻了SREBP-1表达.蛋白水平表达的高低离不开相关通路的调节，利用Western-blot方法分析出，模型组中的LKB-1和AMPK的信号表达水平降低，而在给药治疗组；则恢复到了正常水平，这也说明了白桦脂醇对于乙醇诱导肝损伤的调节通路与LKB-1和AMPK相关.4 人源性肝嵌合体小鼠通过预测人体药物代谢和药物动力学(PK)在药物安全有效筛选中是重要的.常用的方法包括定性筛查评估，代谢稳定性，细胞色素(P450)等参数的抑制和诱导.代谢物评价，包括使用人体生物样本的体外代谢研究，如肝微粒体和肝细胞，以及使用实验动物的体内研究.然而由于体外和体内结果不稳定以及药物代谢的种间差异，使用这些方法的预测往往是不准确的.因此，为了得到精确的预测，研究出了一个更有效的方法是开发人源化的动物，如具有人源化肝的嵌合体小鼠.人源性嵌合体小鼠是指通过将人肝细胞移植到有免疫缺陷的小鼠体内来构建基因改造，具有免疫缺陷的小鼠有利于将人类细胞植入小鼠肝脏并且防止移植的人类细胞产生排斥反应而损伤内源性小鼠细胞[13].小鼠肝细胞的大部分被人肝细胞取代，从而表达人类药物代谢酶[14].因此，这些人源性嵌合体小鼠的药物代谢和PK研究可用于改善这种药物预测.有三种常用的人源性嵌合体小鼠[15].第一种为尿激酶型纤溶酶原活化剂(UPA)严重联合免疫缺陷人肝细胞移植(SCID)小鼠，UPA代表尿激酶型纤溶酶原激活物，是一种丝氨酸蛋白水解酶，主要作用是用于组织重建，SCID代表重症联合免疫缺陷，由于小鼠自身肝细胞代谢具有缺陷，所以移植的肝细胞更容易存活，并且肝细胞置换率(RI)能达到80%.但是由于删除了原UPA而导致RI逐渐减少.为了解决这个问题，Tateno[16]等人构建半合子基因uPA NOD/SCID小鼠，能够使RI保持在一个较高的状态.Hasegawa[17]等人构建了第二种TK-NOG人源性小鼠，这类小鼠具有单纯疱疹病毒1型胸苷激酶的基因，在高度免疫缺陷NOG小鼠肝脏产生高度表达.通过更昔洛韦来消融小鼠肝细胞，随后将肝细胞移植并保持在TK-NOG小鼠体内的肝脏，进而构建成人源性嵌合体小鼠.Azuma[18]等人构建了第三种Fah//Rag2/Il2rg/(FRG)小鼠.延胡索酰乙酰乙酸水解酶(FAH)是参与酪氨酸代谢途径的最后一个酶，Fah基因缺失导致有毒产物的积累，进而损伤小鼠肝细胞，造成免疫缺陷后将人类的干细胞移植到小鼠体内，并且维持一个很高的置换率.为了检查人类的转运蛋白(mRNA)表达水平及其药物代谢酶活性，通过对比人类的CYP1A1基因，结果表明人源化肝UPA/SCID小鼠的CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19，CYP2D6和CYP3A4与供体相似；Katoh[19]等人报道了人类肝细胞中主要蛋白质和酶的活性，结果显示肝脏中的磺基转移酶(SULT)、N-乙酰基转移酶和谷胱甘肽-S-转移酶在人源化UPA/SCID小鼠体内的RI接近90%，表明UPA/SCID小鼠的蛋白表达水平与人类肝脏蛋白表达是相似的.因此，人源性肝嵌合体小鼠可保留人类肝脏中具有药物代谢功能的相关酶和转运蛋白[20，21].5 结语与展望近年来，人们对肝损伤认识的不断深入，有关肝病的起因，防治等各方面的研究也日渐增多.伴随着肝保护作用研究的深入，对各种类型所引发的肝损伤研究有待成为热点.为了深入地研究肝损伤及其相关疾病，就需要建立相应的动物模型，从而筛选出治疗和防止肝病的有效药物，同时选择一种理想的实验动物损伤模型也是十分重要的.理想的损伤模型应具备与人类疾病特征相似，病变有一定发展过程并且造模死亡率低和简便易行.因此选用CCl4、D-半乳糖胺、乙醇和人源性嵌合体小鼠等其它损伤模型具有一定的优势.其中人源性嵌合体小鼠的使用价值非常高，尽管价格昂贵，但能够更加准确地预测出药物的安全性与有效性，并且能够较好的表现出药物在体内的代谢分布，这种动物模型同小鼠损伤模型有一定的区别，主要在于肝细胞分布的酶及其相应的蛋白表达，人源性嵌合体小鼠肝细胞能够最大化的反映出人肝细胞所具有的酶.目前国内很少采用人源性嵌合体小鼠的方法构建动物损伤模型，有待于不断探索.随着研究的深入，动物损伤模型的建立也会更加适应于人类自身所具有的相关条件，以此来推动药物行业的发展，为人类的健康做出更大的进步.【相关文献】[1] 孙晓梅,阎姝,田书霞.中药治疗肝损伤的研究进展[J].中药材,2016(39):1001-4454.[2] 田冬冬,任艳,郑素军.急性肝损伤动物模型的研究动态[J].北京医学,2012,34(3):211-214.[3] 吕晓梅,马丽杰.中药治疗急性肝损伤的研究进展[J].中国新药杂志,2016(2):170-174.[4] Berger ML,Bhatt H,Combes B,et l4 -induced toxicity in isolatedhepatocytes[J].Hepatology，1986(6)：36-45.[5] M.S.Rofiee,M.I.M.Yusof,E.E.Abdul Hisam,et al.Isolating the metabolic pathways involved in the hepatoprotective effect of Muntingia calabura against CCl4-induced liver injury using LC/MS Q-TOF[J].Journal of Ethnopharmacology,2015(166)：109-118.[6] Li T,Chiang J Y L.Bile Acid Signaling in Liver Metabolism and Diseases[J].Journal of Lipids,2012(4):754067.[7] Aranha M M,Cortez-Pinto H,Costa A,et al.Bile acid levels are increased in the liver of patients with steatohepatitis[J].European Journal of Gastroenterology &Hepatology,2008,20(6):519.[8] Li N,Liu J Y,Qiu H,et e of metabolomic profiling in the study of arachidonic acid metabolism in cardiovascular disease[J].Congestive Heart Failure,2011,17(1):42-46.[9] Jia Y N,Lu H P,Peng Y L,et al.Oxyresveratrol prevents lipopolysaccharide/d-galactosamine-induced acute liver injury in mice[J].International Immunopharmacology,2018(56):105.[10] 李萍,谢金鲜.余甘子对D-半乳糖胺致小鼠急性肝损伤的影响[J].云南中医中药杂志.2003,24：31-33.[11] Alejandra M M,Alejandro L B,Juan A B.Molecular Basis and Current Treatment for Alcoholic Liver Disease[J].International Journal of Environmental Research & Public Health,2010,7(5):1872-1888.[12] T.Bai,Y.Yang,Y.L.Yao et al.Betulin alleviated ethanol-induced alcoholic liver injury via SIRT1/AMPK signaling pathway[J].Pharmacological Research,2016(105)：1-12.[13] Peltz G.Can ‘humanized’ mice improve drug development in the 21stcentury[J].Trends Pharmacol Sci，2013(34):255-260.[14] Yoshizato K,Tateno C.In vivo modeling of human liver for pharmacological study using humanized mouse[J].Expert Opin Drug Metab Toxicol.2009(5)：1435-1446. 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一种小鼠急性肝肾损伤病理模型的建立相亦飞;纪敏;吴莉芩;何家康【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2022(43)10【摘要】不合理用药是导致动物机体急性肝肾损伤的主要原因之一,为了筛选缓解肝肾损伤的药物,试验建立简单高效易复制的小鼠肝肾损伤病理模型。

将40只雄性Balb/c小鼠随机分4组,每组10只,即对照组、不同剂量顺铂(CP)模型组。

按体重一次性单剂量腹腔注射不同剂量CP(10 mg/kg、20 mg/kg、40 mg/kg)诱导小鼠急性肝肾损伤,于72 h后检测血清ALT、AST、BUN、CRE含量;摘取肝、肾、脾脏并计算脏器系数,制作切片并观察肝肾组织病理变化。

结果显示,CP模型组均可导致肝肾组织病理学改变,且CP可剂量依赖性升高ALT、AST、BUN、CRE含量,显著升高肾系数,降低脾系数。

结果表明,一次性单次腹腔注射(i.p.)20 mg/kg的CP可成功建立急性肝肾损伤病理模型,该方法简单、稳定、高效、可复制。

【总页数】4页(P56-59)【作者】相亦飞;纪敏;吴莉芩;何家康【作者单位】广西大学动物科学技术学院【正文语种】中文【中图分类】S852.31;S865.13【相关文献】1.磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶在急性肝衰竭小鼠模型及HBV相关慢加急性肝衰竭患者肝组织中的表达及意义磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶在急性肝衰竭小鼠模型及HBV相关慢加急性肝衰竭患者肝组织中的表达及意义2.小鼠急性缺血-再灌注肾损伤模型的建立及体会3.小鼠急性缺血-再灌注肾损伤模型的建立及体会4.缺血再灌注及顺铂诱导小鼠急性肾损伤模型的建立及评估5.小鼠急性脂肪肝模型的建立及脂肝清作用观察因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

低温环境诱导下急性大鼠肝损伤模型的建立【摘要】目的：1.建立-10℃低温冷冻箱环境下急性大鼠肝脏损伤模型；2.研究冷刺激诱导下急性肝脏损伤的机制；方法：建立-10℃低温环境诱导下的急性大鼠肝损伤模型，通过检测大鼠血清中ALT、AST等指标的变化，观察大鼠肝脏病理的改变，以研究低温环境诱导下大鼠急性肝损伤的发生机制。

结果：经过2h、4h、6h进行低温暴露后，4h模型组ALT、AST水平对比正常组升高明显，具有显著统计学意义（P＜0.01），实验数据表明，大鼠4h冷暴露后造模成功，且6h冷暴露后大鼠肝功仍能维持一定的损伤的程度。

结论：本实验建立了一种操作方便，易复制的低温环境诱导下急性大鼠肝损伤模型。

【关键词】低温环境；急性肝损伤；大鼠模型；机制本实验通过将大鼠置于-10℃低温冷冻箱环境中建立急性肝细胞损伤大鼠模型，连续观察大鼠分别于2h、4h、6h后血清检验指标ALT、AST等指标，并进行病理学检测以确定大鼠肝细胞损伤造模成功时间，以及不同冷暴露时间下肝细胞损伤及凋亡的情况，为探讨冷刺激诱导下肝脏损伤的机制，并为对比中、西药在改善冷刺激诱导下急性肝细胞损伤时的疗效评估提供依据。

资料与方法1.材料：采用清洁雄性大鼠75只，体重约180-220g，来源于山东大学动物实验中心，室内温度22℃±1℃，采用12小时光照，12小时黑暗循环动物房。

适应性饲养一周后，随机分为2组，正常温度组（N=15），冷暴露组(N=60)，冷暴露组分为实验组（N=45）、造模组（N=15）,并将冷暴露组大鼠置于-10℃低温冷冻箱中，造模组冷暴露前7天灌服蒸馏水，冷暴露组大鼠分别暴露时间为2h、4h、6h三个时间点，每个时间点20只大鼠，每个铁丝网笼放5只大鼠，造模期间可适当进食、水，正常温度组放置于22±1℃的环境中，造模期间正常饮食。

2.标本采集2.1 血清学检测于2h、4h、6h分别处死2h模型组、4h模型组大鼠、6h模型组大鼠。

肝损伤动物模型的建立和应用
王福根;孙静霞
【期刊名称】《中国药房》
【年(卷),期】2006(17)9
【摘要】肝脏疾病是人类最常见的疾病之一，严重威胁着人类健康。

为此，研发抗肝脏疾病的有效药物显得尤为重要。

动物实验是药物进入临床的必经之路，在研发抗肝脏疾病药物过程中，选择有科学性、实用性、重现性的肝损伤动物模型的意义十分重要。

本文即对国内、外肝损伤的动物模型作一综述，以供参考。

【总页数】2页(P702-703)
【作者】王福根;孙静霞
【作者单位】浙江杭州市第六人民医院,杭州市,310014;浙江杭州市第六人民医院,杭州市,310014
【正文语种】中文
【中图分类】R965.1
【相关文献】
1.四氯化碳致小鼠急性肝损伤动物模型建立方法的研究 [J], 周琼;刘芳萍;刘颖姝;赵玉林;李昌文;李睿;张秀英
2.以结直肠癌常用化疗药建立肝损伤动物模型的分析与探讨 [J], 曹雪;王晓鹏;张颖;杨孟丹;周华;王颖
3.大鼠慢性酒精性肝损伤动物模型的建立 [J], 任彬彬;李国莉;刘贺荣;杨林;李敏;建兵
4.高温应激致麒麟鸡(卷羽鸡)肝损伤试验动物模型的建立 [J], 叶伟庆;杜炳旺;李东华;李乃宾
5.抗结核药物致肝损伤动物模型建立的研究进展 [J],
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