实验二 线虫部分(二)

线虫开放实验的补充说明1.培养基倒培养基一定在超净台中完成，注意无菌操作，平板不能高压灭菌，会变形。

2.线虫的食物滴菌同样在超净台中完成，菌滴于平板中央（防止线虫爬到平板边缘干死丢了），并且要进行测试无杂菌才可大规模使用，污染杂菌会影响观察和统计记录。

3.线虫的生活史和表型观察（重要）“磨刀不误砍柴工”这两部分是整个线虫遗传实验最重要的基本知识。

需要记录并熟悉线虫的生活史。

熟知不同阶段的线虫（特别是L4和adult），区分雌雄同体线虫（hermaphrodite）和雄虫（male），识别典型的突变体：unc 和dpy。

4.线虫的基本实验操作（重要）熟练使用picker(自制铂金丝小铲)，达到如下要求：1）注意操作迅速，干净，不污染杂菌，及时烧picker，防止交叉污染虫子和卵；2）两种方法“挑”和“粘”。

“挑”：在解剖镜下找到目标线虫后，用picker 末端在线虫的附近压琼脂培养基，使线虫爬到picker上再转移到新的平板中；“粘”：用picker末端蘸取少量OP50，轻轻地而且快速的碰触线虫的上部，线虫被picker上的菌液粘住。

3）用“挑”法时，往新的平板放线虫时，注意要慢慢降低picker末端，轻轻接触琼脂平面或菌苔边缘等线虫爬出来，不要将琼脂戳破，否则线虫喜欢钻入琼脂中，4）转移虫子不挑破培养基，不使虫子被挑死；如果是用“粘”法，直接将picker底部粘上的菌液线虫放到新平板的菌苔边缘即可。

3）挑虫准确性强，不顺带别的虫子和卵；4）要做到“挑的起”，“放的下”，掌握挑虫技巧。

5.线虫的遗传实验技巧1）掌握mating时期：充分利用L4的特点，使用L4早期的雌雄同体的虫子进行交配。

2）铺op50食物菌斑时，建议铺菌斑较小的平板作为mating plate，提高交配效率，另外雄虫比例较高时也可提高交配效率。

一般雄虫：雌雄同体为3：1至4：1能有不错的交配效率，当雌雄同体为比较弱的突变体时，建议增加雌雄同体的量，以防止某些母本产卵少或不产卵，导致交配后代很少。

第一部分线虫一、线虫纲特征⏹虫体圆柱形，左右对称，不分节。

⏹雌雄异体，雌虫大于雄虫，雌虫尾端直，雄虫尾端向腹面卷曲或膨大成伞状。

⏹体腔为原体腔。

⏹消化道完整，为管形。

⏹生殖系统：雄性为单管形，雌性多为双管形（鞭虫为单管形）。

⏹发育阶段：虫卵、幼虫和成虫三个阶段。

⏹幼虫发育显著特征：幼虫蜕皮4次。

⏹生活史类型：土源性线虫，生物源性线虫二、蛔虫——学名似蚓蛔线虫，是人体内最常见的寄生虫之一，成虫寄生于小肠，引起蛔虫病。

●蛔虫形态：⏹活体是呈淡红色，死后呈灰白色⏹雌虫长约20-35厘米，雄虫长约15-25厘米⏹体表有细横纹，虫体两侧有两条白色的侧线。

⏹口端有品字型排列的3个唇瓣（蛔虫的三个唇瓣呈品字形排列，借唇瓣咬附肠黏膜）⏹雌虫尾部钝圆，雄虫尾部卷曲，有两根交合刺⏹雌虫有两套对称的管状生殖系统，雄虫的生殖系统为单管型●蛔虫卵形态：⏹受精蛔虫卵：卵圆形，棕黄色，大小约(65×45)μm，卵壳厚，内含物为卵细胞，外被蛋白质膜。

⏹未受精蛔虫卵狭椭圆形，大小约(90×41)微米，卵壳薄，内含屈光的卵黄颗粒，蛋白质膜较薄，没有蛔甙层，所以有一定的变形性●蛔虫生活史：虫卵随粪便排出→感染性虫卵→经口进入人体→小肠→穿过小肠壁进入静脉→通过门静脉进入肝血窦→通过肝静脉和下腔静脉进入心脏→通过肺动脉进入肺毛细血管网→穿出血管进入肺泡（对肺产生机械性损伤）→蜕皮（产生抗原，导致免疫损伤）→上行到咽部，在咽部有两条路，一条是咳嗽将幼虫排出体外，另一条路则是通过吞咽进入消化管，最终以成虫计生在小肠。

●生活史特点：⏹人是唯一终宿主，成虫寄生部位：小肠⏹感染期：感染性虫卵，感染途径：经口⏹成虫寿命一年左右，在肠腔内孵出的幼虫必须经组织移行后才能发育为成虫，其移行途径为侵入小肠黏膜和黏膜下层－入血－右心－肺/肺泡－支气管－咽喉部－胃－小肠。

⏹幼虫在发育过程中进行四次蜕皮，第一次（卵内）、第二次和第三次（肺泡内）、第四次（小肠内）。

动物线虫病常见病原的形态学观察（二）一、实验目的及要求熟悉线虫的基本构造，掌握小动物常见线虫的主要形态特征。

二、实验器材1．器械。

光学显微镜、手持放大镜、镊子、解剖针、平皿、载玻片与盖玻片等。

2．试剂。

乳酸酚透明液等。

3．标本。

（1）浸渍标本。

钩口科线虫：犬钩口线虫、锡兰钩口线虫及管形钩口线虫等。

尾旋科线虫：狼尾旋线虫。

双瓣科线虫：犬恶丝虫。

尖尾科线虫：疑似钉尾线虫。

异刺科线虫：鸡异刺线虫等。

比翼科线虫：斯氏比翼线虫、气管比翼线虫。

裂口科线虫：鹅裂口线虫。

毛细科线虫：有轮毛细线虫、鸽毛细线虫和膨尾毛细线虫等。

锐形科线虫：旋锐形线虫和钩状锐性线虫。

龙线科线虫：四川鸟蛇线虫和台湾鸟蛇线虫。

（2）病理标本。

异刺线虫引起的鸡盲肠病变、锐形线虫引起的鸡腺胃和肌胃病变、鸟蛇线虫引起鸭下颌和腿部瘤样肿块等。

三、实验方法、步骤和操作要领1．挑取犬钩口线虫、旋锐形线虫或钩状锐性线虫的雌雄虫各一条，分别放在两张载片上，滴加乳酸酚透明液1-2滴，盖上盖片，在光学显微镜下观察透明虫体的详细构造。

2．用肉眼或借助手持放大镜观察虫体浸渍标本及病理标本。

四、实验注意事项1．乳酸酚透明液具有一定的腐蚀性，因此不宜滴加太多，以防溢出载玻片之外而腐蚀光学显微镜的载物台。

2．虫体在滴加乳酸酚透明液后，应尽快放到光学显微镜下进行观察，若虫体透明过度，则不利于虫体内部形态构造的观察。

五、实验报告1．绘犬钩口线虫虫体头端、雄虫尾端构造；或绘出旋锐形线虫与钩状锐性线虫的前部、雌虫及雄虫后部的形态构造图，并标出各部的名称。

2．列出实验中所观察线虫的中间宿主、终末宿主与寄生部位。

附：参考资料（一）小动物常见线虫的形态特征1．犬、猫钩虫。

钩口科（Ancylostomatidae）的钩口属 (Ancylostoma)、板口属 (Necator)和弯口属 (Uncinaria)的一些线虫寄生于犬、猫的小肠（主要以十二指肠为主），是犬、猫较为常见的重要线虫之一。

园林植物病⾍害实验实验⼀园林植物病害主要症状类型观察⼀、实验⽬的通过对园林植物病害的观察，识别园林植物病害的病状和病症类型，熟悉观察对象的基本特征，初步掌握有病植物与⽆病植物的区别，为病害诊断奠定基础。

⼆、实验材料与⽤具1．实验材料园林植物病害的各种症状类型标本2．实验⽤具放⼤镜三、⽅法与步骤⽤⾁眼或放⼤镜观察每种标本的症状，仔细观察各种病害的典型病状和病症，认识各类症状特点及其所属类型。

（⼀）病状类型观察1．变⾊主要类型有(1)褪绿与黄化整株或局部叶⽚均匀褪绿。

观察栀⼦黄化病、⾹樟黄化病等。

(2)花叶与斑驳整株或局部叶⽚颜⾊深浅不均，浓绿和黄绿互相间杂，有时出现红、紫斑块。

观察⼀串红花叶病、⼤丽花花叶病等。

2．坏死主要类型有(1)斑点多发⽣在叶⽚和果实上，其形状和颜⾊不⼀，可区分为⾓斑、圆斑、轮斑、不规则形斑或⿊斑、褐斑、灰斑、漆斑等，病斑后期常有霉层或⼩⿊点出现。

观察桂花褐斑病、杜鹃⾓斑病、菊花⿊斑病等。

(2)炭疽症状与斑点相似。

病斑上常有轮状排列的⼩⿊点，有时还产⽣粉红⾊黏液状物。

观察兰花炭疽病、荷花⽟兰炭疽病等。

(3)穿孔病斑周围⽊栓化，中间的坏死组织脱落⽽形成空洞。

观察桃树细菌性穿孔病、樱花穿孔病。

(4)溃疡枝⼲⽪层、果实等部位局部组织坏死，病斑周围隆起，中央凹陷，后期开裂，并在坏死的⽪层上出现⿊⾊的⼩颗粒或⼩型的盘状物。

观察槐树溃疡病、樟树溃疡病等。

(5)疮痂发⽣在叶⽚、果实和枝条上。

局部细胞增⽣⽽稍微突起，形成⽊栓化的组织。

观察⼤叶黄杨疮痂病、柑桔疮痂病等。

(6)猝倒与⽴枯幼苗近⼟表的茎组织坏死。

观察松、杉⽊苗⽴枯病和猝倒病。

3．腐烂发⽣在根、⼲、花、果上，病部组织细胞的破坏与分解。

枝⼲⽪层腐烂与溃疡症状相似，但病斑范围较⼤，边缘隆起不显著，常带有酒糟味。

(1)湿腐观察柑桔青霉病、杨树腐烂病等。

(2)⼲腐观察桃褐腐病。

(3)流胶观察桃树流胶病、柑桔树脂病等。

(4)流脂观察松脂。

4．畸形主要类型有：(1)肿瘤枝⼲和根上的局部细胞增⽣，形成各种不同形状和⼤⼩的瘤状物。

临床寄生虫学和寄生虫检验实验指导（2011级检验专业用）昆明医学院基础医学院寄生虫学教研室贾雪梅申丽洁二零一三年二月实验注意事项人体寄生虫学是一门基础医学课程，它与预防医学、临床医学紧密联系，属形态学范畴。

因此，实验课是我们学习本课程的重要部分，其目的就是通过实物标本的观察、实验技术操作的训练，使理论联系实际，培养自己动手的能力。

为此必须做到以下几点：一．实验操作前必须明确实验指导中的内容和要求，严格按照实验指导的顺序进行实验。

二．上实验课时务必带上实验指导、教科书、图谱和绘图铅笔及绘图本，并按要求完成作业和实验报告。

三．爱护显微镜、标本及各种实验器材，不慎发生损害时，应立即报告带教老师并按规定照价赔偿。

四．仔细操作，认真观察标本，培养实事求是的作风。

提高独立思考、分析问题和解决问题的能力。

五．遵守课堂纪律，保持安静、爱护卫生、轮流作好值日，离开实验室前必须关好门窗、水电。

2011级检验专业人体寄生虫学教学进度表实验一疟原虫（一）(Plasmodium)一、实验目的要求1．掌握间日疟原虫(Plasmodium vivax)红细胞内期(erythrocytic stage)形态特征及被寄生的红细胞变化。

2．了解卵形疟原虫(Plasmodium ovale)红细胞内期形态特征。

3．了解三日疟原虫(Plasmodium malariae)红细胞内期形态特征。

二、实验内容(一) 示教标本1. 卵形疟原虫基本形态似间日疟原虫，被卵形疟原虫寄生的红细胞略胀大，有的细胞变长，边缘成锯齿状;薛氏点较间日疟原虫的粗大，而且出现早，在环状体(ring form) 期即出现。

2. 三日疟原虫(Plasmodium malariae)带状滋养体是三日疟原虫的大滋养体，被寄生的红细胞不胀大，疟原虫的细胞质呈圆形或带状，滋养体横跨红细胞，细胞质呈蓝色。

细胞核一个，呈紫红色，疟色素（malarial pigment）为深褐色的粗大颗粒，常沿胞质边缘分布。

寄生虫实验课项目安排及学时分配序号实验名称教学实验学时强化实验学时备注实验一常见线虫的形态观察 2 0实验二常见吸虫、绦虫的形态观察 2 0实验三实验考核 2 0实验一常见线虫的形态观察［知识目标］通过观察掌握蛔虫、鞭虫、钩虫、蛲虫成虫和虫卵的形态特征。

［能力目标］掌握粪便涂片中虫卵的显微镜观察方法，了解透明胶纸检查法。

［情感目标］观察线虫病变标本，加强理解蛔虫、鞭虫、钩虫及蛲虫对人体的危害，体会医务人员的责任之重大，培养医乃仁术之情感。

一、似引蛔线虫（蛔虫）［实验内容］1.蛔虫的成虫形态观察。

2.蛔虫的虫卵观察。

［肉眼观察］1. 蛔虫成虫（瓶装标本）成虫为长圆柱体状，形似蚯蚓。

新鲜虫体呈淡红色，固定后呈灰白色，体表有横纹和两条侧线。

雌虫大小为20～40cm×0.3～0 .6 cm，尾部挺直而钝园。

雄虫较小为15～31cm×0.2～0.4 cm，尾端向腹侧弯曲呈钩状，可见一对交合刺。

［镜下观察］1．虫卵（1）受精蛔虫卵（玻片标本）虫卵呈宽椭圆形，大小为（45～75）μm×（35～50）μm，卵壳厚，通常表面有一层凸凹不平的蛋白质膜，呈黄色或棕褐色，内含有一个未分裂的受精卵细胞，与卵壳之间形成半月形间隙。

（2）未受精蛔虫卵（玻片标本）虫卵呈长椭圆形或不规则形，大小为（88～94）μm×（39～44）μm，卵壳较薄，淡黄色，内含有许多大小不一的屈光颗粒。

受精蛔虫卵和未受精蛔虫卵外附着的蛋白质膜有时可脱落，称脱膜卵。

二、毛首鞭形线虫（鞭虫）［实验内容］1. 鞭虫成虫的形态观察。

2. 鞭虫卵的形态观察。

［肉眼观察］1.成虫（瓶装标本）虫体形似马鞭，灰白色，前3/5处细如发丝，，后2/5处较粗，雄虫长30～45mm，尾端向腹面弯曲。

雌虫较大，长30～50mm，尾端直而钝圆。

［镜下观察］1．虫卵（玻片标本）鞭虫卵较小，（50～54）μm×（22～23）μm，纺锤形，棕黄色，卵壳较厚，卵壳两端各有一个透明的塞状突起，称盖塞，虫卵从粪便排出时，卵内含有一个未分裂的卵细胞。

人体寄生虫学
授课对象：07级临床医学教学时数： 46学时（讲课：26学时；实验：20学时）主讲教师：郑善子实验负责：郑善子
口腔科学
课程名称：口腔医学授课对象：2007级临床医学教学时数：20学时（讲课：14学时；实验：6学时）
主讲教师：申载贤实验负责：张香子
职称：讲师职称：助教
讲课：
核医学
课程名称：核医学授程对象：医学07级教学时数：学时24学时（讲课：18学时；实验：6学时）。

主讲教师：李明浩实验负责：董全宇
职称：副教授职称：主治医师
实验（实习）：核医学
医学营养学
课程名称：医学营养学授课对象：2007级临床医学专业教学时数：学时（讲课：18学时；实验：6学时）
主讲教师：韩春姬实验负责：许妍姬
职称：教授职称：副教授
实验（实习）：
眼科学（临床医学2007级）教学时数：32 学时(讲课：26 学时；实验,实习：6 学时)
主讲教师：金龙山实验负责：孟欢
职称：主任医师职称：主治医师
教室：西部教学楼D-403
卫生政策与法规
课程名称：卫生政策与法规授课对象：临床医学 2007级教学时数：24学时（讲课：学时；实验：学时）
主讲教师：郑培芬实验负责：
职称：教授职称：
西部教学楼 D-404
耳鼻咽喉科(医学07级)
教学时数: 32 学时 (其中讲课: 22 学时 ; 实验,实习: 10 学时)
主讲教师: 崔哲洙、修世国实验负责: 姜宪、金玉莲、崔春莲姜宪、白尚杰金香花
职称: 教授、副教授职称: 副教授、主治医师。

动物线虫病常见病原的形态学观察（二）一、实验目的及要求熟悉线虫的基本构造，掌握小动物常见线虫的主要形态特征。

二、实验器材1．器械。

光学显微镜、手持放大镜、镊子、解剖针、平皿、载玻片与盖玻片等。

2．试剂。

乳酸酚透明液等。

3．标本。

（1）浸渍标本。

钩口科线虫：犬钩口线虫、锡兰钩口线虫及管形钩口线虫等。

尾旋科线虫：狼尾旋线虫。

双瓣科线虫：犬恶丝虫。

尖尾科线虫：疑似钉尾线虫。

异刺科线虫：鸡异刺线虫等。

比翼科线虫：斯氏比翼线虫、气管比翼线虫。

裂口科线虫：鹅裂口线虫。

毛细科线虫：有轮毛细线虫、鸽毛细线虫和膨尾毛细线虫等。

锐形科线虫：旋锐形线虫和钩状锐性线虫。

龙线科线虫：四川鸟蛇线虫和台湾鸟蛇线虫。

（2）病理标本。

异刺线虫引起的鸡盲肠病变、锐形线虫引起的鸡腺胃和肌胃病变、鸟蛇线虫引起鸭下颌和腿部瘤样肿块等。

三、实验方法、步骤和操作要领1．挑取犬钩口线虫、旋锐形线虫或钩状锐性线虫的雌雄虫各一条，分别放在两张载片上，滴加乳酸酚透明液1-2滴，盖上盖片，在光学显微镜下观察透明虫体的详细构造。

2．用肉眼或借助手持放大镜观察虫体浸渍标本及病理标本。

四、实验注意事项1．乳酸酚透明液具有一定的腐蚀性，因此不宜滴加太多，以防溢出载玻片之外而腐蚀光学显微镜的载物台。

2．虫体在滴加乳酸酚透明液后，应尽快放到光学显微镜下进行观察，若虫体透明过度，则不利于虫体内部形态构造的观察。

五、实验报告1．绘犬钩口线虫虫体头端、雄虫尾端构造；或绘出旋锐形线虫与钩状锐性线虫的前部、雌虫及雄虫后部的形态构造图，并标出各部的名称。

2．列出实验中所观察线虫的中间宿主、终末宿主与寄生部位。

附：参考资料（一）小动物常见线虫的形态特征1．犬、猫钩虫。

钩口科（Ancylostomatidae）的钩口属 (Ancylostoma)、板口属 (Necator)和弯口属 (Uncinaria)的一些线虫寄生于犬、猫的小肠（主要以十二指肠为主），是犬、猫较为常见的重要线虫之一。

一种线虫培养方法引言线虫是一种广泛存在于土壤中的微小无脊椎动物，常被用于生物学研究、遗传学研究以及毒理学研究中。

线虫具有短生命周期、易于培养和繁殖快的特点，因此成为许多实验室中研究的理想模式生物之一。

本文将介绍一种简单高效的线虫培养方法，以供科研工作者参考。

实验材料- 线虫菌株- 对照菌株- 线虫培养基- 培养皿- 镜片实验步骤1. 准备线虫培养基将线虫培养基按照配方比例配置好，通常包括以下成分：- 1L 蒸馏水- 3 g 葡萄糖- 0.35 g NaCl- 0.25 g MgCl2·6H2O- 1.7 g K2HPO4- 1.5 g KH2PO4- 1 mL 1M CaCl2·2H2O- 1 mL 1M MgSO4·7H2O- 1 mL 1M cholesterol (溶于无毒有机溶剂)将蒸馏水倒入容器中，依照给定比例逐一加入其他成分，充分搅拌溶解，最终调整pH值为6.0-7.0。

将培养基分装至适当的容器中，称为培养皿，并在每个培养皿上标记日期。

2. 添加线虫菌株取一定数量的线虫菌株，用标准螺旋棒在对照菌株旁边划出同样大小的圈，以控制对照试验。

然后，用镜片粘取一小部分线虫菌株，将其转移到培养皿中，尽量避免混入过多的对照菌株。

关闭培养皿盖，并用透明胶带在盖子四周密封，以防止线虫逃跑。

3. 孵化培养皿将培养皿置于恒温培养箱中，温度设置为20-25摄氏度。

培养皿应水平摆放，避免倾斜，以确保线虫正常分布。

根据需要，每隔一段时间检查排泄物和线虫的数量，观察其生长情况。

4. 线虫转移当线虫菌株的数量逐渐增加并占据大部分培养皿时，可以考虑将线虫转移到新的培养皿中，以确保其充足的空间和营养。

为此，首先准备好新的培养皿和培养基，将一部分线虫菌株转移到新的培养皿中。

此时可以适量增加培养基的营养成分，以促进线虫生长，但不要过量，以免对线虫产生毒性。

5. 防止污染为了保持线虫培养的纯度，需要随时保持实验台面和培养器具的清洁。

线虫RNA干扰的基因沉默一、实验背景及目的1、RNA干扰（RNAi）是一种使基因使失活的有效方法，在线虫中，RNA干扰因为简单快速成为研究基因功能的有效手段。

2、秀丽线虫是一种生活在土壤中的线虫，长约1mm，直径70um，由959个细胞组成。

它具有生活周期短、易培养和保存等优点。

秀丽线虫具有雌雄同体和雄性个体两种性别。

雌雄同体的线虫有两条X染色体和5对常染色体。

其基因组大小为80Mb，包含13000个基因。

秀丽线虫在20℃时生活周期为3.5天，25℃时约为3天，15℃时约为6天。

受精卵经过胚胎发生孵化出L1、L2、L3 、L4，最后成为成熟的幼虫。

当食物缺乏或群体密度过大等环境不良的条件时，L2会不进入L3而成为dauer幼虫来抵御不良环境，当环境恢复后dauer幼虫不经过L3直接进入L4。

因此可以利用该特性保存线虫品系。

3、RNAi是一种基因knock down 技术，将体外合成的含有目的基因的dsRNA 通过某种方式引入到线虫体内，导致其体内相应的目的基因mRNA降解，从而达到基因沉默的目的。

通过显微注射dsRNA或者把线虫浸入到含有dsRNA的溶液中，或者用能够表达dsRNA的大肠杆菌喂食线虫，可以将dsRNA导入大肠杆菌中。

在大肠杆菌HT115中，含有目的基因发夹结构的质粒，在IPTG的诱导下转录出正义和反义的RNA,两条RNA链通过退火形成dsRNA。

当线虫以此大肠杆菌为食时，他们就摄取了大肠杆菌合成的dsRNA，并触发了线虫体内RNA干扰的发生。

4、本实验将利用表达tag--214dsRNA大肠杆菌喂食线虫来介导RNAi，以达到鉴定tag--214基因功能以及观察实验效果的目的。

二、实验材料及试剂1、材料：1）秀丽线虫（C.elegans）rrf-3突变体（RNAi敏感型）2）大肠杆菌（E.coli）野生型菌株OP503）带有tag-214发夹结构质粒的HT115菌株。

2、试剂：1）NGM普通固体培养基2）含有Amp+和IPTG的NGM固体培养基（用于RNAi）3）LB培养基4）M9缓冲液三、实验操作由于此次试验培养基配制以及大肠杆菌培养等的前期过程是由两个大组分别进行的，我询问了第二大组的实验相关步骤，但还是会有纰漏，所以有些实验过程和实际的操作会有差错，有些细节也会省略。

线虫遗传学实验报告生75 董润2007030039同组实验者: 周梦宇实验时间: 2009年10月28日—12月22日【实验目的】确定突变的类型（性染色体连锁、常染色体连锁或常染色体不连锁）对突变基因进行染色体定位确定突变基因与标记基因的遗传距离【实验原理】线虫的形态和生活史秀丽线虫（C.elegance）长约1mm, 直径70μm, 通体透明, 有雄体和雌雄同体两种性别个体。

图.秀丽线虫雌雄同体虫和雄虫的形态结.上为雌雄同体, 下为雄体。

雄体的尾部扇区是其重要特征（D.Pette.Snustad等, 2003）。

图2 秀丽线虫的生活史（Lelend H等, 2000）线虫的繁育线虫以微生物为食, 实验中用大肠杆菌（OP50品系）喂养。

雄性线虫的繁育是通过在同一平板饲养雄体和雌雄同体的线虫, 使得后代中有50%是雄性。

雌雄同体线虫的繁育是通过其自交而不断产生后代。

实际操作过程中, 可用灭菌后的小刀切下一小块琼脂, 将其转移到新的平板上。

保种的方法是使线虫在无食物, 较低温（10℃）的环境下生存。

进行雄性线虫和雌雄同体交配时, 一般将4-5条L4或成熟早期的雄虫, 与2-3条L4或成熟早期的雌雄同体虫置于同一平板。

为区别自交和雌雄交配的子代, 可根据子代性状的, 或只统计雄体。

后者就要求在引入亲代雄虫时不能混有卵或幼虫。

而且, 统计子代雄体时, 需将亲代雄体排除掉, 这些亲代雄虫一般有3-4条, 是雄虫中最衰老, 体型最大的。

如果需要用子代雄虫进行下一步交配, 要选择L4或成熟早期的雄虫, 而不能错取成亲代雄虫。

如果需要子代雌雄同体进行下一步交配, 要选择L4幼虫, 因为成虫可能已与雄虫交配过。

操作方法无菌操作必须在实验的全过程中进行。

不可以用受到污染的培养基, 若发现生长线虫的培养基被污染, 需将线虫转接到干净的培养基上。

挑线虫的工具是镶在玻璃管一端的铂金丝, 铂金丝尖端做成铲子状。

条每条线虫之前均需要将铂金丝灼烧。