革兰氏染色法

实验革兰氏染色法实验目的1.1 实验器材1.1.1 菌种金黄色葡萄球16h牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物，枯草芽孢杆菌16h牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物，大肠杆菌16h牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物。

1.1.2 溶液和试剂香柏油，革兰氏染液，草酸铵结晶紫染液，卢戈氏碘液，95%乙醇，番红复染液等。

1.1.3 仪器和其他用品普通光学显微镜，擦镜纸，酒精灯，载玻片，接种环，试管架，滴管等。

2 实验现象与分析2.1 实验步骤2.1.1制片取生长活跃期菌种按常规方法涂片（不宜过厚）、干燥和固定。

2.1.2初染滴加草酸铵结晶紫染液覆盖涂菌部位，染色1-2min之后倾去染液，水洗至流出水无色。

2.1.3媒染先用卢戈氏染液冲去残留水迹，再用碘液覆盖1min，倾去碘液，水洗至流出无色。

2.1.4脱色将载玻片上残留水用吸水纸吸去，在白色背景下用95%乙醇脱色(20-30s)，当流出液无色时立即用水洗去乙醇。

2.1.5复染将玻片上残留水用吸水纸洗去，用番红复染液染色2min，水洗，吸去残水，晾干。

2.1.6镜检2.1.6.1观察前的准备(1)安置显微镜.(2)将聚光器调到最高位置,调节光源,使视野内光线均与,亮度适宜.(3)根据使用者的个人情况,调节双筒显微镜的目镜.(4)调节聚光器的数值孔径.2.1.6.2显微观察在低倍镜下找到要观察的样品区域后,用粗调节器将镜筒升高,将油镜转到工作位置,然后在待观察的样品区域滴加香柏油。

从侧面注视，用粗调节器将镜筒小心的降下，使油镜浸在镜油中并几乎与标本相接，调节聚光器的数值孔径以及视野的照明强度后，用粗调节器将镜筒镜筒徐徐上升，直至视野中出现物象并用细调节器使其清晰聚焦为止。

2.1.6.3显微镜用后的处理(1)上升镜筒，取下载玻片。

(2)用擦镜纸擦去镜头上的镜油，然后用擦镜纸沾取少许二甲苯擦去镜头上的油迹，最后用干净的擦镜纸擦去残留的二甲苯。

(3)用擦镜纸清洁其他物镜及目镜，用绸布清洁显微镜的金属部件。

革兰氏染色法
1 染色液
1.1 结晶紫溶液：结晶紫乙醇饱和溶液（取结晶紫约4~8g，溶于95%乙醇100ml中）20ml，1%草酸铵溶液80ml，将上述两溶液混合，过滤。

结晶紫不可用龙胆紫代替。

前者是纯品，后者不是单一成分，易出假阳性。

结晶紫溶液放置过久会产生沉淀，不能再用。

1.2 助染剂
碘1g
碘化钾2g
蒸馏水300ml
将碘与碘化钾先行混合，加入少许蒸馏水，充分振荡。

待完全溶解后再加入其余的蒸馏水。

当溶液由棕黄色变为淡黄色时应弃去。

为易于储备，可将上列碘与碘化钾溶于30ml蒸馏水中，用前稀释。

1.3 脱色剂
95%乙醇。

1.4 复染剂
沙黄0.25g
95%乙醇10ml
蒸馏水90ml
将沙黄溶于乙醇中，待完全溶解后加入蒸馏水。

2 染色步骤
2.1 将培养18~24h的培养物涂片，要涂得薄些。

2.2 将涂片在火焰上加温固定，待冷却后滴加结晶紫溶液，1min后水洗。

2.3 滴加助染剂，1min后水洗。

2.4 滴加脱色剂，摇动玻片，直至无紫色脱落为止（约20~30s）水洗。

2.5 滴加复染剂，1min后水洗，晾干，镜检。

呈紫色者为革兰氏阳性菌，红色者为阴性菌。

革兰氏染色法革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，1884年由丹麦医师Gram创立。

细菌先经碱性染料结晶染色，而经碘液媒染后，用酒精脱色，在肯定条件下有的细菌此色不被脱去，有的可被脱去，因此可把细菌分为两大类，前者叫做革兰氏阳性菌（G+），后者为革兰氏阴性菌（G—）。

为观看便利，脱色后再用一种红色染料如碱性蕃红等进行复染。

阳性菌仍带紫色，阴性菌则被染上红色。

有芽胞的杆菌和绝大多数和球菌，以及全部的放线菌和真菌都呈革兰氏正反应；弧菌，螺旋体和大多数致病性的无芽胞杆菌都呈现负反应。

革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌在化学组成和生理性质上有许多差别，染色反应不一样。

现在一般认为革兰氏阳性菌体内含有特别的核蛋白质镁盐与多糖的复合物，它与碘和结晶紫的复合物结合很牢，不易脱色，阴性菌复合物结合程度底，吸附染料差，易脱色，这是染色反应的主要依据。

另外，阳性菌菌体等电点较阴性菌为低，在相同PH条件下进行染色，阳性菌吸附碱性染料许多，因此不易脱去，阴性菌则相反。

所以染色时的条件要严格掌握。

例如，在强碱的条件下进行染色，两类菌吸附碱性染料都多，都可呈正反应；PH很低时，则可都呈负反应。

此外，两类菌的细胞壁等对结晶紫—碘复合物的通透性也不全都，阳性菌透性小，故不易被脱色，阴性菌透性大，易脱色。

所以脱色时间，脱色方法也应严格掌握。

革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，详细操作方法是：１）涂片固定。

２）草酸铵结晶紫染1分钟。

３）自来水冲洗。

４）加碘液掩盖涂面染1分钟。

５）水洗，用吸水纸吸去水分。

６）加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，30秒后水洗，吸去水分。

７）蕃红梁色液（稀）染10秒钟后，自来水冲洗。

干燥，镜检。

染色的结果，革兰氏正反应菌体都呈紫色，负反应菌体都呈红色。

下面是革兰氏阴性杆菌和革兰氏阳性杆菌。

革兰氏染色法的原理革兰氏染色法是一种最常用的细菌染色方法之一，它是由丹麦细菌学家克里斯汀·格拉姆（Christian Gram）于1884年发明的。

这种染色方法可以将细菌分为两类，革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。

革兰氏染色法的原理是利用细菌细胞壁的化学成分差异，通过染色剂的作用，使得革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌在显微镜下呈现不同的颜色。

在进行革兰氏染色法时，首先需要将待检测的细菌样本涂抹在玻片上，然后经过热固定，使细菌固定在玻片上。

接着，将碘液滴在细菌上，碘液可以使细菌细胞壁中的革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都呈现出蓝紫色。

然后用酒精洗涤，革兰氏阳性菌由于细胞壁的特殊结构，可以保持蓝紫色，而革兰氏阴性菌则会被酒精冲淡。

最后再用碘液染色，使革兰氏阴性菌也呈现出蓝紫色，而革兰氏阳性菌则不受影响。

革兰氏染色法的原理主要是利用了细菌细胞壁的化学成分差异。

革兰氏阳性菌的细胞壁主要由大量的肽聚糖和穿链肽构成，而革兰氏阴性菌的细胞壁则含有较多的脂多糖。

由于革兰氏阳性菌的细胞壁结构较为复杂，具有较强的染色剂保持能力，因此在进行革兰氏染色时能够保持紫色，而革兰氏阴性菌的细胞壁结构相对简单，染色剂容易被洗去，因此在后续的酒精洗涤中会失去染色。

革兰氏染色法的原理虽然简单，但却具有重要的临床意义。

通过革兰氏染色法，医生可以快速准确地鉴别出细菌的类型，有助于选择合适的抗生素进行治疗。

此外，革兰氏染色法也是微生物学实验室中常用的一种方法，可以帮助科研人员进行对细菌的鉴别和分类。

总之，革兰氏染色法的原理是基于细菌细胞壁的化学成分差异，通过染色剂的作用，将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。

这种染色方法不仅在临床诊断中有重要意义，也在微生物学研究中发挥着重要作用。

通过了解革兰氏染色法的原理，我们可以更好地理解其在医学和科研领域的应用，为细菌研究和临床诊断提供更多的帮助。

革兰氏染色法的名词解释
革兰氏染色法是一种重要的细菌诊断技术。

它是由德国细菌学家因氏首先发明的一种实验技术，用来识别和鉴定细菌，从而更容易诊断细菌病的病原和致病机制。

它是一种基于色素的染色法，染色过程是由一种叫做革兰氏染料的特殊染料来完成的。

革兰氏染色法利用细菌细胞膜上结合迅速染料的特性来染色细菌。

某些细菌能够选择性地吸收染料，只有某一类的细菌才能吸收特定的染料，所以细菌在染色后就会呈现特定的颜色。

由于革兰氏染料染色过程所耗时间较短，容易操作，因此得到广泛应用。

革兰氏染色法涉及到实验材料和实验方法等多方面，首先要求有一定的植物知识，针对不同的细菌需要使用不同的染料来进行染色，然后从染色后的细菌样品中根据细菌的颜色特性进行判断。

革兰氏染色法也可用于病原细菌的鉴定、病原细菌的致病机理的研究和抗菌药物的筛选。

对于细菌的致病机制，某些可以通过革兰氏染色法来染色，从而可以研究出细菌病原体的致病机制。

而抗菌药物的筛选以及细菌鉴定也可以通过染色来完成，从而更加准确的确定细菌的类型。

革兰氏染色法的使用也可以降低实验的成本。

它可以简化细菌的染色过程，大大缩短实验时间，并可以提高实验效率，降低实验成本。

另外，它还可以帮助科学家精确的识别细菌的种类，从而更好的诊断细菌病的病原和致病机制。

综上所述，革兰氏染色法是一种重要的细菌诊断技术，它可以帮
助科学家快速准确地识别和鉴定细菌，并可以研究出细菌病原体的致病机制，有助于更准确的诊断细菌病，是一项重要的病原学技术。

革兰氏染色法名词解释
革兰氏染色法是一种显著的检测细菌生物技术，它是由柳氏革兰在1880年末发明的。

该技术是基于细菌和真菌细胞对dyes（染料）的特异性反应，根据它们对染色剂的不同反应，把它们从其他细菌和真菌区分开来。

革兰氏染色法是由于染色剂对细菌细胞表面分子特异性反应的
原因而产生的。

细菌细胞表面的分子具有某种特定的电性，因此，染色剂可以在表面具有相同或相似的电性的细菌上形成不同的立体构型，这种构型的变化会导致细菌的表面被染色。

革兰氏染色法是由染色剂特异性反应结合上形态鉴定原理而发
展而来的，可以根据染色后细菌细胞外形、大小、色泽等特征，将不同类型的细菌区分开来。

此外，染色后的细菌也可以作理化特性的分析，如氧化酵素的产生和酸碱反应的快慢等，以便于确定不同类型的细菌。

革兰氏染色法的方法是将染色剂溶解在抗原的溶液中，当接触到细菌细胞表面时，染色剂就会形成不同的立体构型，产生出特定的颜色，从而可以鉴别不同类型的细菌。

由于有不太抗原细菌也能够被染色，这就使得革兰氏染色法能够较准确地区分不同类型的细菌。

革兰氏染色法是一种落实到实际应用的显著细菌鉴定技术，它能够精确地区分不同类型的细菌，可以用于诊断和治疗感染性疾病。

这种技术也被广泛应用于药物研究，生物化学和环境污染控制等方面。

总之，革兰氏染色法是一种重要的细菌鉴定技术，它的发展及应
用具有重要的意义，为细菌研究及人类健康服务。

革兰氏染色法革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，1884年由丹麦医师、细菌学家Christain Gram创立。

细菌先经碱性染料结晶染色，而经碘液媒染后，用酒精脱色，在一定条件下有的细菌此色不被脱去，有的可被脱去，因此可把细菌分为两大类，前者叫做革兰氏阳性菌（G+），后者为革兰氏阴性菌（G—）。

为观察方便，脱色后再用一种红色染料如碱性蕃红、稀释复红等进行复染。

阳性菌仍带紫色，阴性菌则被染上红色。

有芽胞的杆菌和绝大多数和球菌，以及所有的放线菌和真菌都呈革兰氏正反应；弧菌，螺旋体和大多数致病性的无芽胞杆菌都呈现负反应。

革兰氏阳性菌对青霉素敏感，革兰氏阴性菌对链霉素敏感。

可根据革兰氏染色法鉴别不同菌种并对症下药。

革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌在化学组成和生理性质上有很多差别，染色反应不一样。

现在一般认为革兰氏阳性菌体内含有特殊的核蛋白质镁盐与多糖的复合物，它与碘和结晶紫的复合物结合很牢，不易脱色，阴性菌复合物结合程度底，吸附染料差，易脱色，这是染色反应的主要依据。

另外，阳性菌菌体等电点较阴性菌为低，在相同PH条件下进行染色，阳性菌吸附碱性染料很多，因此不易脱去，阴性菌则相反。

所以染色时的条件要严格控制。

例如，在强碱的条件下进行染色，两类菌吸附碱性染料都多，都可呈正反应；PH很低时，则可都呈负反应。

此外，两类菌的细胞壁等对结晶紫—碘复合物的通透性也不一致，阳性菌透性小，故不易被脱色，阴性菌透性大，易脱色。

所以脱色时间，脱色方法也应严格控制。

革兰氏染色原理：G﹢菌：细胞壁厚，肽聚糖网状分子形成一种透性障，当乙醇脱色时，肽聚糖脱水而孔障缩小，故保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上。

呈紫色。

Gˉ菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，其脂含量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，沙黄复染后呈红色。

革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：１）涂片固定。

革兰氏染色法步骤详解革兰氏染色法是微生物学中常用的染色方法之一，用于区分细菌的结构和特征。

本文将深入讨论革兰氏染色法的步骤，并提供对这个方法的观点和理解。

一、引言在微生物学中，革兰氏染色法是一种重要的技术手段，通过染色可以将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。

这个方法的基本理念是利用染料与细菌细胞壁的化学成分相互作用，以实现细菌分类和分析的目的。

二、步骤详解1. 准备细菌标本在进行革兰氏染色前，需要准备细菌培养物或细菌纯培养物作为标本。

可以从实验室中的细菌培养物中选取一个单一的菌落，或者从培养基上划取一小段细菌生长物。

2. 固定细菌标本取一片清洁的玻璃载玻片，利用火焰将其杀菌。

将玻片放在洁净的培养皿中，并滴加一滴蒸馏水。

用平净的无菌棒或无菌铂丝取一小部分细菌标本，涂抹在玻片上。

用火焰消毒无菌棒或无菌铂丝，然后将其放回细菌培养物中。

3. 固定细菌标本将滴有细菌标本的玻片迅速通过火焰，使细菌固定在玻片上。

这一步骤中的火焰杀菌具有重要意义，可以避免后续步骤中的交叉污染问题。

4. 革兰氏染液的使用革兰氏染液通常由蓝色染料结晶紫（crystal violet）、碘化物、脱色剂和红色染料伊苏胺组成。

将预先制备好的革兰氏染液滴在固定的细菌标本上，让其覆盖整个玻片。

5. 染色时间控制整个样本与染色剂接触的时间是关键因素之一，通常控制在1分钟左右。

过长或过短的染色时间都会对结果产生影响，甚至会导致假阳性或假阴性。

6. 去色在染色后，用脱色剂洗去多余的染色剂。

一般来说，用酒精或乙醚轻轻洗涤玻片，直到洗涤剂下流出的颜色不再变深为止。

7. 洗净将玻片放在自来水龙头下冲洗，直到洗涤液中不再有染色剂冲走为止。

这个步骤至关重要，因为过多的染色剂残留可能影响结果的准确性。

8. 透明化将玻片轻轻摇干，然后在显微镜下观察。

可以用透明液（一般为苏木精或环己烷）再次冲洗玻片，使细菌更加透明。

9. 观察细菌将处理过的玻片放在显微镜下观察。

简述革兰氏染色法革兰氏染色法是由19世纪德国医学家威廉革兰发展的一种医学染色方法，是一种利用化学特性显示细胞中各种结构的常用技术。

1882年，威廉革兰开创了这种技术，被公认为医学染色的先驱。

革兰氏染色法也称革兰染色法，简称革兰氏染色。

革兰氏染色是一种化学反应技术，通过配制特定的染料与植物、细菌细胞或血液中的其他活体物质发生反应，其反应结果是使得特定的染料在物体表面形成明亮的染色，从而可以简单准确地观察、分类和研究植物、细菌、血液、病毒等活体结构的特性。

革兰氏染色的原理是，活体的细胞结构具有固有的电荷，当染料与活体细胞发生反应时，染料就会因为电荷的作用而在活体细胞表面结合，产生染色。

根据染料结合细胞表面的类型和强度，可以得出不同的深浅程度和颜色。

革兰氏染色法的应用非常广泛，它不仅可以用来研究细胞的结构，而且还可以用于检测血液中的疾病，如感染性疾病、肿瘤等，还可以检测细菌的抗药性，以及病毒、血液中抗原和抗体的存在。

此外，由于革兰氏染色法反应和结果都很明显，也常常用于活体组织学研究，如病理检查、局部病原学研究和病理病理学研究。

在革兰氏染色法中，染料是细胞杂质检测的关键因素，它们必须是安全、可以长期存储，具有良好的抗氧化性和可溶性，能够在活体组织中稳定存在，同时能够与活体细胞中的其他物质发生反应，以达到染色的效果。

常用的染料包括绿唑酮（Gram）、南方染料（Safranin）、血蛋白（Haematoxylin）和紫色素（Purple）等。

革兰氏染色法在19世纪被发明出来，是一种广泛应用于医学检测、医学研究和病理学研究的重要技术。

它有助于研究细胞结构特性，进一步提高活性物质的筛选，提高疾病的检测效率，也有助于解决很多医疗难题，为现代医学技术提供了重要的帮助。