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乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒(LD-P微板法)

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1.5ml
RT
1份
操作步骤(仅供参考)：
1、 准备样品： ①血浆、血清样品：血浆、血清按照常规方法制备，可以直接用于本试剂盒的测定， 室温保存 3 天，用于 LDH 的检测。 ②细胞或组织样品：取恰当细胞或组织进行匀浆，低速离心取上清，室温保存 3 天， 用于 LDH 的检测。 ③长期保存样品：如果提取后的样品无法及时检测，需要放置时间较长，按下列方法 操 作：按待测样品(如血清)：LDH 保护工作液=9:1 的比例混合，4℃避光保存。 ④(选做)样品准备完毕后可以用 BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续 计算单位蛋白重量组织或细胞内的 LDH 含量。
组成：
名称 试剂(A): NADH 试剂(B): LD-P Assay buffer 试剂(C): 丙酮酸溶液 试剂(D): 丙酮酸稀释液 试剂(F): LDH 保护稀释液 使用说明书
编号
TE01 55 100T
Storage
2 支 -20℃ 避光
100ml
RT
2×1.5ml 4℃ 避光
30ml
RT
北京雷根生物技术有限公司
乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒(LD-P 微板法)
简介：
乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase，LDH 或 LD)属于氧化还原酶，能够催化氢氧原 子或电子从一中底物转移到另一种底物上乳酸脱氢酶是糖酵解和糖异生的一个极其重要的 酶，含有锌离子，广泛分布于人和动物组织、植物和微生物中，能可逆的催化乳酸(L)和丙 酮酸(P)之间的氧化还原反应。乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒(LD-P 微板法)是利用乳酸脱氢 酶催化上述逆反应，即丙酮酸+NADH+H+→乳酸+NAD+。该 LD-P 法的优点是：1、操作 比二硝基苯肼法简单；2、重复性好；3、准确性比二硝基苯肼法好；4、适用于自动分析仪 该试剂盒仅用于科研领域，丌宜用于临床诊断或其他用途。
自动分析仪计算公式：LDH(U/L)=ΔA/min×(106/6220)×(296/10)=ΔA/min×4758.8 注意：如果待测样品加入 LDH 保护工作液，其结果应除以 0.9。
参考范围：
成年健康人
200～380U/L
注意事项：
1、 本法线性范围可达 3000U/L，当 LDH 浓度高于该范围可使用 LD-P Assay buffer 适当 稀释后再进行检测，测出结果乘以稀释倍数。
温度 pH 波长 延迟时间 待测样品 LDH 检测工作液 丙酮酸工作液
记录待测样品管吸光度的下降速率(ΔA/min)。
37℃ 7.4 340nm 0 10μl 260μl 26μl
计算： 手工比色计算公式：LDH(U/L)=ΔA/min×(106/6220)×(230/10)=ΔA/min×3697.8
2、 处理后的样品应及时检测，否则 LD4 和 LD5 易失效。 3、 血清或肝素抗凝血浆检测效果较好，草酸类、EDTA 抗凝剂对 LDH 活性有抑制作用。 4、 避免使用溶血样本。
北京雷根生物技术有限公司
5、 为了您的安全和健康，请穿实验服幵戴一次性手套操作。
有效期：6 个月有效。
Hale Waihona Puke LDH 检测工作液200
混匀，孵育。
丙酮酸工作液(37℃提前预热)
20
混匀，立即于 340nm 处读取各孔吸光度，记录为 A 测定 1。每 1min 读取各孔吸光度， 记录为 A 测定 2。 5、自动分析仪检测：如果样品中的浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。 根据实验室的自动分析仪性能，设置参数，下列参数仅供参考：
2、 酶标仪比色检测：按照下表设置测定孔，溶液应按照顺序依次加入，幵注意避免产生气 泡。如果样品中的 LDH 浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。样品 的检测最好能设置平行管。
加入物(μl)
测定孔
北京雷根生物技术有限公司
待测样品(血清、血浆、体液等)
10

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乳酸脱氢酶(LDH)活性检测试剂盒说明书 微量法

乳酸脱氢酶(LDH)活性检测试剂盒说明书 微量法

乳酸脱氢酶（LDH）活性检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。

货号：BC0685规格：100T/48S产品内容：提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体7mL×1瓶，4℃保存；试剂二：粉剂×1支，-20℃保存，用时加入1.3mL双蒸水充分溶解备用，配好后可分装成小管-20℃保存，可保存两周，禁止反复冻融；试剂三：液体7mL×1瓶，4℃保存；试剂四：液体25mL×1瓶，4℃保存；丙酮酸钠标准液：液体1mL×1支，4℃保存，2μmol/ml。

产品简介：LDH（EC 1.1.1.27）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是糖酵解途径的末端酶，催化丙酮酸与乳酸之间的可逆反应，伴随着NAD+/NADH之间互变。

LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸，丙酮酸进一步与2,4-二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙，在碱性溶液中显棕红色，颜色深浅与丙酮酸浓度成正比。

试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

操作步骤：一、粗酶液提取：1.细菌、细胞或组织样品的制备：细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20%或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。

8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2.血清（浆）样品：直接检测。

3.丙酮酸钠标准液：取100μL标准液，倍比稀释至1、0.5、0.25、0.125、0μmol/mL，用2、1、0.5、0.25、0.125、0μmol/mL做标准曲线。

乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性检测试剂盒一站式解决方案

乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性检测试剂盒一站式解决方案

乳酸脱氢酶（LDH）细胞毒性检测试剂盒一站式解决方案乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LD 或LDH ，EC1.1.1.27 ）是一类NAD依赖性激酶，有LDHA、LDHB、LDHC三种亚基，可构成6种四聚体同工酶。

动物乳酸脱氢酶是由4个亚单位组成的四聚体，常见的A、B 两种亚基构成的5种LDH同工酶（LDH1-5），C亚基则仅组成一种LDH同工酶即LDH-C4。

乳酸脱氢酶为含锌离子的金属蛋白，分子量为135-140kD，是糖无氧酵解及糖异生的重要酶系之一，可催化丙酸与L-乳酸之间的还原与氧化反应，也可催化相关的α-酮酸。

LDH广泛存在于人体组织中，以肾脏含量最高，其次是心肌和骨肌。

红细胞内LDH约为正常血清的100倍。

一、乳酸脱氢酶分类1.根据结合辅酶的不同，微生物体一般包含两种乳酸脱氢酶，NAD-依赖型乳酸脱氢酶（NAD-dependent lactate dehydrogenases，nLDHs）和NAD-非依赖型乳酸脱氢酶（NAD-independent lactate dehydrogenases，iLDHs）两大类。

2.按其催化底物的构型不同，NAD-依赖型乳酸脱氢酶可以分为NAD依赖型-L-乳酸脱氢酶（L-NAD-依赖型乳酸脱氢酶）和NAD依赖型-D-乳酸脱氢酶（D-NAD-依赖型乳酸脱氢酶）两大类，分别催化丙酮酸合成L-乳酸和D-乳酸。

3.根据天然电子受体的不同，可以将NAD-非依赖型乳酸脱氢酶分为三类。

第一类为膜蛋白，利用膜醌类作为外部的电子受体；第二类直接利用O2作为电子受体，根据氧化终产物的不同，又将其细分为乳酸氧化酶（Lactate oxidase，LOX）和乳酸单氧酶（Lactate monooxygenases，LMO），其中前者产生丙酮酸和H2O2，而后者产生乙酸、CO2和H2O；第三类是硫胺b2（flavocytochrome b2），存在于真菌中，它天然的电子受体为细胞色素c。

乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒(LD-P比色法)

乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒(LD-P比色法)

2、 手工比色检测：按照下表设置测定管，溶液应按照顺序依次加入，幵注意避免产生气泡。 如果样品中的 LDH 浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。样品的检 测最好能设置平行管。
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加入物(ml) 待测样品(血清、血浆、体液等) LDH 检测工作液
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乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒(LD-P 比色法)
简介：
乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase，LDH 或 LD)属于氧化还原酶，能够催化氢氧原 子或电子从一中底物转移到另一种底物上乳酸脱氢酶是糖酵解和糖异生的一个极其重要的 酶，含有锌离子，广泛分布于人和动物组织、植物和微生物中，能可逆的催化乳酸(L)和丙 酮酸(P)之间的氧化还原反应。乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒(LD-P 比色法)是利用乳酸脱氢 酶催化上述逆反应，即丙酮酸+NADH+H+→乳酸+NAD+。在上述反应过程中，丙酮酸还 原成乳酸，同时 NADH 氧化成 NAD+，引起 340nm 处吸光度的下降。该 LD-P 法的优点 是：1、操作比二硝基苯肼比色法简单；2、重复性好；3、准确性比二硝基苯肼法好；4、
2、 处理后的样品应及时检测，否则 LD4 和 LD5 易失效。 3、 血清或肝素抗凝血浆检测效果较好，草酸类、EDTA 抗凝剂对 LDH 活性有抑制作用。
北京雷根生物技术有限公司
4、 避免使用溶血样本。 5、 为了您的安全和健康，请穿实验服幵戴一次性手套操作。
自动分析仪计算公式：LDH(U/L)=ΔA/min×(106/6220)×(296/10)=ΔA/min×4758.8 注意：如果待测样品加入 LDH 保护工作液，其结果应除以 0.9。
小鼠乳酸脱氢酶(LDH)ELISA试剂盒操作说明操作说明

小鼠乳酸脱氢酶(LDH)ELISA试剂盒操作说明操作说明

小鼠乳酸脱氢酶(LDH）ELISA试剂盒操作说明操作说明小鼠乳酸脱氢酶(LDH）ELISA试剂盒操作说明小鼠乳酸脱氢酶(LDH）ELISA试剂盒实验原理小鼠乳酸脱氢酶(LDH）ELISA试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。

往预先包被小鼠乳酸脱氢酶(LDH）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻di洗涤。

用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的小鼠乳酸脱氢酶(LDH）呈正相关。

用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

样本处理及要求1. 血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

2. 血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。

将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。

推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。

为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。

最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。

4. 细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。