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重庆工业职业技术学院教案由于甲基橙和亚甲基蓝的结构不同,极性不同,吸附剂对它们的吸附能力不同,洗脱剂对它们的解析速度也不同,极性小、吸附能力弱、解析速度快的亚甲基蓝先被洗脱下来，而极性大、吸附能力强、解析速度慢的甲基橙后被洗脱下来，从而使两种物质得以分离。
本实验以硅胶为吸附剂，95%乙醇作为洗脱剂，先洗出亚甲基蓝，再用蒸馏水作洗脱剂把甲基橙洗脱下来。
甲基橙结构式亚甲基蓝结构式二、实验操作1.仪器锥形瓶、玻璃漏斗、色谱柱2.试剂柱层析硅胶、脱脂棉、乙醇（95%）甲基橙、亚甲基蓝。
H2O∶ 95 %乙醇 = 1∶ 1 (A 液)0. 2mol· L -1HCl∶ 95 %乙醇 = 1∶ 1 (B 液)3、装色谱柱：（1）取一支色谱柱，在柱子的收缩部塞一小团脱脂棉花将色谱柱垂直固定在铁架台上。
(2) 关闭活塞，向柱中倒入蒸馏水（也是洗脱剂，至柱体积的1/2）（3）填吸附剂：称取10g 硅胶于小烧杯中 ,加入 15mL 蒸馏水 ,用玻璃棒调好通过漏斗慢慢装入玻璃柱, 使其逐渐沉入底部。
用洗耳球敲打柱身使硅胶装填紧密，打开活塞，用小锥型瓶承接, 控制滴速为1 滴／秒,装完后在上面加一层脱脂棉（，操作时要注意吸附剂始终不能露出液面）。
4、加样：当液面刚好流至脱脂棉平面相切时，立刻关闭活塞，加入 5mL左右的A 液 ,当硅胶面又将要露出时 ,关紧活塞 ,用量筒准确加入 0. 50mL 以 A 液做溶剂的混合液(含甲基橙和亚甲基蓝各为 0. 400 g· L -1)5、洗脱：待此混合液将要渗入柱内时 ,立即用 A 液洗脱 ,此时可以观察到有鲜明的黄、蓝两条色带形成。
黄色的甲基橙色带随洗脱剂的加入不断下移 ,而其顶部蓝色带不移动 ,当黄色带到达柱底部时 ,更换接受器 ,全部收集此黄色带 ,洗脱时间约 10 min。
此后改用B 液做洗脱剂 ,这时可看到蓝色带开始下移 ,当亚甲基蓝色带到达底部时 ,更换接受器 ,全部收集此蓝色带 ,洗脱时间约 30 min。
附件3-5色谱分离技术的演变和发展（张卫*****************.cn）一、本探究实验需要讨论的问题：A组：(1) 什么是色谱分离技术？它经历怎样的发展、演变过程？(2) 简要说明色谱分析方法的基本原理，固定相和流动相的作用分别是什么？(3) 柱色谱的色谱柱如何进行填充？填充过程中需要注意哪些问题？(4) 简述柱色谱常用的洗脱剂及其洗脱能力的次序，如何选择合适的洗脱剂？采用柱色谱分离甲基橙和次甲基蓝混合染料时，为什么先用95%乙醇溶液作为洗脱剂，再用去离子水做洗脱剂进行洗脱，如果两者换一下次序是否可以？为什么？(5) 设计实验：利用纸层析法进行植物色素的提取与分离任意采集叶片、果皮等有色植物适量，经过烘干、研磨、溶剂浸提、离心分离、点样、展开等操作，提取与分离植物色素。
设计要求：通过文献查阅，判断所选的植物色素样本所含的色素种类有哪些？可以选取哪些合适的提取和分离色素的有机溶剂？如何分离各种不同的色素？设计相应的实验方法和步骤，给出所用的试剂及仪器。
拟提供的试剂与仪器：石油醚、丙酮、乙醇、碳酸钙、烘箱、纸层析滤纸、表面皿、培养皿、研钵、离心机等；B组：(6) 常用的色谱分析方法有哪些？分别有怎样的特点和适用范围？(7) 薄层色谱中，最常用的固定相（吸附剂）有哪些？其颗粒的大小对于分离效果有何影响？影响固定相活性的主要因素有哪些？(8) 薄层色谱的分离效果的评价指标是什么？如何进行计算？若化合物本身无色，薄层色谱的色谱图中组分迁移产生的展开斑点位置如何确定？试举例说明两种常用的确定方法。
(9) 采用薄层色谱分离顺式偶氮苯和反式偶氮苯的混合物时，若分别采用20:1环己烷-乙酸乙酯和10:1环己烷-乙酸乙酯作为展开剂，展开效果有何不同？为什么？(10) 设计实验：利用纸层析法进行植物色素的提取与分离任意采集叶片、果皮等有色植物适量，经过烘干、研磨、溶剂浸提、离心分离、点样、展开等操作，提取与分离植物色素。
柱色谱实验教学中甲基橙和亚甲基蓝的分离和测定方法柱色谱是一种常见的分离和纯化化学物质的方法，本实验旨在通过柱色谱法对甲基橙和亚甲基蓝进行分离和测定。
通过实验发现，使用甲醇-水（70:30）混合溶剂作为流动相，可以实现对两种染料的有效分离。
同时，通过紫外可见光谱测定，可以得出染料的浓度和吸光度等相关参数。
该实验可以有效提高学生对柱色谱分离和测定方法的理解和掌握。
关键词：柱色谱，甲基橙，亚甲基蓝，分离，测定引言柱色谱是一种常见的分离和纯化化学物质的方法，其基本原理是通过样品在柱中的吸附、分配和排出等过程，实现对不同成分的分离。
柱色谱法有很多种，如薄层色谱、高效液相色谱、气相色谱等，其应用范围广泛，可用于生物、医药、化工等领域。
本实验旨在通过柱色谱法对甲基橙和亚甲基蓝进行分离和测定，以提高学生对柱色谱分离和测定方法的理解和掌握。
实验设计实验仪器和试剂仪器：柱色谱仪、分光光度计试剂：甲基橙、亚甲基蓝、甲醇、水实验步骤1. 准备样品溶液将甲基橙和亚甲基蓝各取适量，分别加入到10ml的容量瓶中，用甲醇-水（70:30）混合溶剂稀释至刻度线，摇匀后备用。
2. 柱层析实验将样品溶液注入柱色谱仪中，使用甲醇-水（70:30）混合溶剂作为流动相，调整流速至0.5ml/min，记录吸光度曲线。
根据染料的吸光度曲线，确定各染料的保留时间和峰面积，并计算出各染料的纯度和浓度等相关参数。
3. 分光光度计测定将染料样品分别加入到分光光度计中，测定其在不同波长下的吸光度。
根据吸光度和浓度的线性关系，计算出染料的浓度和摩尔吸光系数等参数。
实验结果1. 柱色谱实验使用甲醇-水（70:30）混合溶剂作为流动相，可以实现对甲基橙和亚甲基蓝的有效分离。
甲基橙的保留时间为3.2min，峰面积为0.034，纯度为98.2%，浓度为0.042mg/ml；亚甲基蓝的保留时间为5.7min，峰面积为0.047，纯度为99.1%，浓度为0.034mg/ml。
柱层析分离甲基橙与亚甲基蓝目的：1．理解柱层析分离有机化合物的原理及在精细有机分离中的应用；2．掌握柱层析分离的操作步骤；3．了解有机化合物层析分离的原理及应用。
原理：二十世纪初，人们就开始应用柱色谱法来分离复杂的有机物。
目前，仍是一种分离复杂有机化合物的有效方法。
柱色谱法涉及到被分离的物质在液相和固相之间的分配。
因此，可以把它看是一种固—液吸附色谱法。
固定相是固体，液体样品通过固体时，由于固体表面对液体中各组分的吸附能力不同而使各组分分离开。
图1 柱色谱柱法示意图柱色谱法是通过色谱柱(如图l)来实现分离的。
色谱柱内装有固体吸附剂(固定相)，如氧化铝或硅胶。
液体样品从柱顶加入，在柱的顶部被吸附剂吸附。
然后，从柱的顶部加入有机溶剂(作洗提剂)。
由于吸附剂对各组分的吸附能力不同，各组分以不同的速率下移，被吸附较弱的组分在流动相(洗提剂)里的百分含量比被吸附较强的组分要高，以较快的速率向下移动。
此过程与气相色谱过程相似。
各组分随溶剂以不同的时间从色谱柱下端流出，用容器分别收集之。
如各组分为有色物质则可以直接观察到不同颜色谱带，但如为无色物质，则不能直接观察到谱带。
有时一些物质在紫外光照射下能发出荧光，则可用紫外光照射。
有时则可分段集取一定体积的洗提液，再分组签定。
吸附剂选择吸附剂时，需考虑到以下几点：它不溶于所使用的溶剂；与要分离的物质不起化学反应，也不起催化作用等；具有一定的组成；一般要求是无色的；颗粒大小均匀。
颗粒越小，则混合物的分离程度越好，但溶液或溶剂流经柱子的速度也就越慢，因此要根据具体情况选择吸附剂。
最广泛使用的吸附剂是活性氧化铝，非极性的一些物质通过氧化铝的速率较极性物质为快。
有一些物质由于被吸附剂牢牢吸附，将不能通过。
活性氧化铝不溶解于水，也不溶于有机溶剂，含水的与无水的物质都可使用这种吸附剂。
吸附剂的吸附能力不仅取决于吸附剂本身，也取决于在色谱分离中所用的溶剂。
因此，对不同物质，吸附剂按其相对的吸附能力可粗略分类如下：(1) 强吸附剂：低水含量的氧化铝，活性炭。
介绍一个零排放的有机化学实验-柱色谱分离亚甲基蓝和甲基
橙
尹庚明;杨园园;陈汝萍
【期刊名称】《广东化工》
【年(卷),期】2018(045)012
【摘要】以层析用中性氧化铝为吸附剂,95％乙醇、蒸馏水为洗脱剂,分离亚甲基蓝和甲基橙,实验用时约15 min.实验结束后,所用试剂除蒸馏水外均可回收重复使用.【总页数】1页(P245)
【作者】尹庚明;杨园园;陈汝萍
【作者单位】五邑大学化学与环境工程学院,广东江门 529020;五邑大学化学与环境工程学院,广东江门 529020;五邑大学化学与环境工程学院,广东江门529020
【正文语种】中文
【中图分类】O62
【相关文献】
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4.氧化石墨烯对甲基橙/亚甲基蓝的吸附性能探究 [J], 刘雅娟; 王悦; 张锋
5.普鲁兰多糖菌丝球对亚甲基蓝和甲基橙染料的吸附 [J], 陈洁; 魏云霞; 赵苑; 赵丹因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
柱色谱法分离甲基橙和亚甲基蓝实验目的1. 了解柱色谱的分离原理及应用。
2. 掌握柱色谱法的实验操作技术。
实验原理甲基橙和亚甲基蓝均为指示剂，它们的结构式如下:甲基橙亚甲基蓝由于甲基橙和亚甲基蓝的结构不同,极性不同,吸附剂对它们的吸附能力不同,洗脱剂对它们的解析速度也不同。
极性小，吸附能力弱，解析速度快的亚甲基蓝先被洗脱下来;而极性大，吸附能力强，解析速度慢的甲基橙后被洗脱下来，从而使两种物质得以分离。
本实验以中性氧化铝作为吸附剂，95%乙醇作为洗脱剂，先洗出亚甲基蓝，再用蒸馏水作洗脱剂把甲基橙洗脱下来。
主要装置装柱装样品亚甲基蓝先被洗脱甲基橙后被洗脱实验步骤1. 取口径10mm，长200mm洁净干燥的层析柱一支，在活塞处涂上一层薄薄的凡士林，向一个方向旋转至透明，竖直安装在铁架台上。
关闭活塞，向柱中倒入95%乙醇至柱高4/5处，通过一个干燥的玻璃漏斗慢慢地加入10g中性氧化铝，待氧化铝粉末在柱内有一定沉积高度时，打开柱下活塞，调节流速约1滴/秒，并用木棒轻轻敲打柱身下部，使氧化铝装填紧密。
装满100mm高度后在上面加一层石英砂(约5mm)。
在此过程中应始终保持吸附剂沉积面上有一段液柱。
2. 打开柱下活塞放出柱中乙醇，待液面降至刚好与石英砂平面相切时，立即关闭活塞，向柱内滴加10滴甲基橙和亚甲基蓝的混合物。
打开活塞，待液面降至刚好与石英砂平面相切时，用少量95%乙醇沿加样处冲洗柱内壁。
再打开活塞将液面降至与石英砂平面相切。
依上法重复操作直至柱壁和顶部的淋洗剂均无颜色。
3. 用95%乙醇作为洗脱剂，打开柱下活塞，控制流出速度为1滴/秒。
观察柱中色带下行情况。
随着色带向下行进逐渐分为两个色带，下方的为蓝色，上方为黄色。
当蓝色带(亚甲基蓝)到达柱底时更换接收瓶接收(在此之前接收的无色淋洗剂可重复使用)。
当蓝色带接收完后更换接收瓶接收空白带，并改用蒸馏水继续洗脱甲基橙。
当空白带接完后再换接收瓶接收黄色带(甲基橙)。
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在大学有机实验教学中 ,往往都设有柱色谱实验课。
在实验教材中 ,一般采用中性氧化铝为固定相分离甲基橙和亚甲基蓝的混合物[1～3 ],但此方法分离的色谱带有扩散现象 ,影响分离效果;且实验中只有定性观察 ,不进行定量操作。
在本实验中 ,我们改用硅胶为固定相 ,选用了新的样品溶剂和洗脱剂 ,在很大程度上抑制了色带扩散 ,而且色谱带分明 ,大大提高了分离效果。
在实验中还增加了定量测定的内容 ,通过计算回收率 ,可对同学们的实验情况进行评判 ,使你们能够认真收集分离物质 ,不断地提出问题 ,调动了你们做实验的积极性。
1 实验材料和方法1. 1 材料分光光度计(岛津 UV22201) ,玻璃色谱柱。
柱色谱用硅胶(100～140 目) ,甲基橙(指示剂) ,亚甲基蓝(指示剂) ,H2O∶ 95 %乙醇= 1∶ 1 (A 液) ,0. 2mol· L - 1HCl∶ 95 %乙醇= 1∶ 1 (B 液) 。
1. 2 甲基橙标准曲线的绘制用A 液做溶剂 ,配制甲基橙系列标准溶液 ,在λmax = 450nm处测得甲基橙吸光度(表 1) 。
1. 3 亚甲基蓝标准曲线的绘制用B 液做溶剂 ,配制亚甲基蓝系列标准溶液 ,在λmax = 661nm 处测得亚甲基蓝吸光度(表1) 。
柱色谱法分离甲基橙和碱性湖蓝BB一、实验目的1、学习柱色谱法技术的原理和方法；2、掌握柱色谱技术分离甲基橙和碱性湖蓝BB的方法；3、掌握甲基橙的定量方法。
二、实验原理柱色谱有吸附色谱和分配色谱两种。
实验室中最常用的是吸附色谱，其原理是利用混合物中各组分在固定相上的吸附能力和流动相的解吸能力不同，让混合物随流动相流过固定相，发生反复多次的吸附和解析过程，从而使混合物分离成两种或多种单一的纯组分。
甲基橙为橙黄色的鳞状晶体或粉末，稍溶于水而成黄色，不溶于乙醇，用作pH值指示剂，变色范围3.1~4.4，其结构式为：碱性湖蓝BB又称为亚甲基蓝，可含有3~5个结晶水，三水合物是暗绿色结晶，其稀的乙醇溶液为蓝色，其结构时为：1、柱色谱装置色谱柱是一根下端具塞的玻璃管，柱高和直径比应为8：1。
在柱底部塞脱脂棉，上盖石英砂，中间是固定相，最上层再铺一层石英砂。
（如没有色谱柱，可用一根25mL酸式滴定管代替。
）2、装柱装柱前应先将色谱柱洗干净，进行干燥，在柱底铺一小块脱脂棉，再铺约0.5cm厚的石英砂，然后进行装柱。
装柱分为湿法装柱和干法装柱两种。
（1）湿法装柱将吸附剂（氧化铝或硅胶）用洗脱剂中极性最低的洗脱剂调成糊状，在柱内先加入约3/4高的洗脱剂，再将调好的吸附剂边敲边倒入柱中，同时，打开下旋活塞，在色谱柱下面放一个干净并且干燥的锥形瓶或烧杯，接收洗脱剂。
当装入的吸附剂有一定的高度时，洗脱剂下流速度变慢，待所有吸附剂全部装完后，用流下来的洗脱剂转移残留的吸附剂，并将柱内壁残留的吸附剂淋洗下来。
（注意若填装不紧密或留有气泡层等现象，会影响渗透速度和显色均匀。
但如果填装时过分敲击，又会因太紧密而流速太慢。
）在此过程中，应不断敲打色谱柱，以使色谱柱填充均匀并没有气泡。
柱子填充完成后，在吸附剂上端覆盖一层约0.5cm厚的石英砂。
在整个色谱柱过程中，柱内洗脱剂的高度始终不能低于吸附剂最上端，否则柱内会出现裂痕和气泡。
（加沙子目的是在加料时不致把吸附剂冲起，影响分离效果，若无沙子也可用玻璃毛或剪成比柱子内径略小的滤纸压在吸附剂下面。
柱色谱法分离甲基橙和亚甲蓝
主讲教师：王双燕色谱法又称为层析法，是目前广泛被运用分离纯化化合物的常用方法，按操作方式可以分为柱色谱、薄层色谱等。
柱色谱是将分离材料放入玻璃柱中，以适当的洗脱剂进行洗脱而使不同成分得以分离的方法。
常用的装柱方法有干法装柱和湿法装柱两种方法，我们本次试验使用湿法装柱分离两种染料。
操作步骤分为装—上样—洗脱与收集—后处理。
实验器材：铁架、铁夹、玻璃柱、玻璃棒、敲振棒、脱脂棉、烧杯、滴管、试管、试管架、硅胶、洗脱剂。
实验操作：（1）装柱：用烧杯称取6.0g硅胶，加入洗脱剂中，搅拌至无气泡，玻璃柱用铁夹固定在铁架台上，在管柱下方放一锥形瓶，承接洗脱液，玻璃柱内塞入一小团棉花防止固定相流出，用洗脱剂将棉花润湿，以赶走气泡，将搅拌好的固定相迅速倒入管柱中，用少量洗脱剂将粘附于管壁上的固定相冲洗至管柱中，沉降过程中可用敲振棒轻敲管壁赶出气泡，让固定相平整紧实，若不紧实会影响分离效果，若洗脱液流动较慢，可用干净的滴管将之从管中上方吸出，减少等待时间。
（2）上样：当洗脱液面和硅胶面平行时，将样品沿管壁靠近硅胶面顺着管壁环形小心加入，当被分离的甲基橙和甲基蓝混合试液下移至被固定相平面是，可沿管壁加入洗脱剂。
（3）洗脱与收集：加入洗脱剂至柱顶端，洗脱过程需要注意随时补充洗脱剂，切勿使洗脱剂流干，这会使管中填充材料内有空气，影响分离。
收集洗脱液，每3ml收集一支试管，注意收集先后顺序，也可以在试管壁上贴上标签，在收集过程中注意观察记录颜色变化，直至所有颜色被洗脱出来。
（4）后处理：实验结束后得到多只不同颜色的试管，试管内的收集液必须必须进一步用薄层色谱法分析以判定分离效果。
洗净试管，收拾好台面即可以离开。
