免疫荧光的原理和应用

免疫组化(石蜡切片)

（一）脱腊，水化

1.二甲苯脱腊 10分钟×3次 （1、2、3） （若标本从冰箱中拿出，复温37℃ 30－40分钟 放入湿盒中）（此时间可以自己掌握）

2.水化

无水酒精 5分钟 1 可以为两次无水酒精，两次95%酒精，时间可

95％无水酒精 5分钟 2 为1分钟。

75％无水酒精 5分钟

3.PBS洗5分钟×3次

（二）抗原修复 10ml(0.2mol/l)+190ml=200ml

电炉或水浴锅加热『0.01mo/l枸橼酸钠（2/3）溶液（PH=6.0）至90－95℃』 放入切片，加热10-15分钟 (新鲜切片)25-30分钟(久放切片) （自然冷却到室温）

（三） 染色

（四） PBS浸泡5分钟,先放玻片,后加PBS.

（五） 重复(1)步骤

（六） 加3%H2O25-10分钟避光（H2O2抑制内源性过氧化物酶，使DAB显色，降低非特异性染色；放入湿盒目的：1、避光 2、保湿）

（七） PBS洗3分钟×3次或5分钟×2次（此时可将湿盒加温）

（八） 羊血清(A 蓝色)30分钟（5％BSA封闭30分钟）37℃（恒温床）（封闭被破坏抗原，此抗原可与一抗结合，减少非特异性染色）

（九） 加一抗4℃过夜：（稍微延长时间）(1:100TLR2, 1:100TLR4)用PBS稀释

（十） 回温37℃40分钟（恒温床）（此时间也可自己掌握）

（十一）PBS洗5分钟×2次

（十二）二抗(生物素 B 黄色)37℃ 40分钟（恒温床）

（十三）PBS洗5分钟×3次 （多洗）

（十四）三抗(亲和素 C 橙色)37℃ 30分钟

（十五）PBS洗5分钟×3次

（十六）1ml蒸馏水，A、B、C液各1滴

（十七）100ul枪染色 看镜 用水冲洗

请问你曾经被IHC、ICC和IF所困扰过吗？

作者：北京义翘神州

在实验中，有没有一种感觉，就是对免疫组化(IHC)，免疫细胞(ICC)，以及免疫荧光(IF)傻傻分不清，那么今天我们就来讨论一下这三者的区别，先贴图上来以便有个大致的区分。

从图中我们可以看出，免疫检测技术可以根据报告标签的不同，分为免疫化学和免疫荧光两类，而根据样品类型不同，可以分为组织和细胞检测技术。因此，才会延伸出三个相近的概念。

为了更好的区分这三个概念，我们还可以根据他们的英文词根来分析一下，他们的英文名分别是免疫组织化学Immunohistochemistry (IHC)，免疫细胞化学Immunocytochemistry (ICC)，免疫荧光 Immunofluorescence (IF)。

词根分析：

Immuno-指的是免疫技术（例如，抗体和抗原的结合）

Histo-指的是组织（细胞以及它周围的细胞外基质）

Cyto-指的是细胞（不包含细胞外的基质）

Chemistry-在这里指的是化学检测方法（例如，颜色的变化）

Fluorescence-对被激发的荧光团的检测

通过对词根的解释，相信你在心中不再迷茫了吧。

这三个应用技术都属于免疫技术，都是将抗原与抗体的结合可视化，即通过一定的方法可以直接看到实验结果。而常用的方法就是化学显色和荧光显色。如果报告标签是酶促的，就是免疫化学，如果是荧光的，就是免疫荧光。

其实我们纠结免疫荧光的一个原因还在于免疫荧光的英文名字Immunofluorescence

(IF)，但若是写成免疫组织荧光(IHF)或是免疫细胞荧光(ICF)，那我们是不是就豁然开朗了。虽然这两个词汇在英文文献中应用的还不是很广泛，但绝对不是我自己杜撰的哦，已经有些学者在使用了，规范化应该也只是时间的问题。

可能文字描述还是有些晦涩难懂，那我们就直接上图吧。先不看下面答案，仅从几张图片，你能明白哪张图代表哪种应用吗？

免疫荧光技术的原理及应用

1. 引言

免疫荧光技术是一种用于检测和定位特定抗原或抗体的广泛应用的方法。它基于免疫学原理和荧光显微镜技术，可用于分析和研究细胞、组织和细菌等样本中的特定抗体或抗原。本文将重点介绍免疫荧光技术的原理和应用。

2. 原理

免疫荧光技术的原理基于特定抗原与特异性抗体之间的结合反应。该技术利用荧光染料的特性，在荧光显微镜下可观察到荧光信号的产生。主要包括以下步骤：

2.1 抗原-抗体结合

在免疫荧光技术中，首先需要特异性抗体与抗原结合。抗体可以通过免疫化学方法从动物或人体中获得。抗原可以是细胞表面蛋白、细胞器、病原体、药物或其他生物分子。抗原-抗体结合反应是免疫荧光技术的核心步骤。

2.2 荧光染料标记

为了观察到抗原-抗体结合，需要将荧光染料标记在抗体上。荧光染料有多种选择，常用的包括荧光素、荧光素同分异构体、荧光蛋白等。荧光染料标记后的抗体可通过荧光显微镜观察到荧光信号。

2.3 荧光显微镜观察

标记了荧光染料的抗体与抗原结合后，可以使用荧光显微镜进行观察。荧光显微镜利用特殊的光源和滤光片，能够选择性地激发和检测荧光信号。观察到的荧光信号可以通过相机或其他图像采集设备记录下来，用于定量分析和图像处理。

3. 应用

免疫荧光技术在生物医学研究和临床诊断中有广泛的应用。以下是免疫荧光技术的一些常见应用：

3.1 免疫组织化学

免疫组织化学是免疫荧光技术的重要应用之一。它可以用于检测和定位细胞和组织中的特定蛋白。例如，在肿瘤研究中，免疫荧光技术可以用于检测肿瘤标志物的表达，并观察其在细胞或组织中的分布和定位。 3.2 免疫细胞化学

免疫细胞化学是研究细胞表面标志物、细胞器和细胞间相互作用的重要方法。通过使用荧光染料标记的抗体，可以准确地检测和定位细胞表面受体、膜蛋白和其他细胞分子。这对于研究细胞信号传导、细胞生理学以及疾病机制等方面具有重要意义。

3.3 病原体检测

免疫荧光技术在病原体诊断和研究中也有广泛应用。例如，在流感病毒检测中，可以使用特异性抗体标记的荧光染料来检测并定位病毒在细胞或组织中的存在。这对于快速准确地诊断疾病和研究病毒感染机制具有重要意义。

免疫荧光技术实验报告

免疫荧光技术实验报告

免疫荧光技术是一种通过将荧光标记的抗体与特定抗原结合来检测和定位生物分子的方法。本实验旨在探究免疫荧光技术的原理和应用，并通过实验验证其可行性。

一、实验原理

免疫荧光技术基于抗原与抗体的特异性结合原理。在本实验中，我们选择了一种常用的抗原-抗体反应，即兔抗小鼠IgG。首先，将小鼠IgG注射到兔体内，兔体会产生针对小鼠IgG的抗体。然后，将这些抗体与荧光染料标记，形成荧光标记的抗体。当荧光标记的抗体与小鼠IgG结合时，可以通过荧光显微镜观察到荧光信号。

二、实验步骤

1. 准备样本：将小鼠IgG溶解在缓冲液中，制备不同浓度的小鼠IgG溶液。

2. 固定标本：将小鼠IgG溶液滴加到载玻片上，使其均匀分布，并用乙醇固定。

3. 孵育抗体：将荧光标记的兔抗小鼠IgG加入载玻片上，与固定的小鼠IgG反应。

4. 清洗样本：用缓冲液洗涤载玻片，去除未结合的抗体。

5. 观察结果：在荧光显微镜下观察载玻片上的荧光信号。

三、实验结果

在实验中，我们观察到荧光显微镜下载玻片上出现了荧光信号。荧光的强度与小鼠IgG的浓度成正比，即小鼠IgG浓度越高，荧光信号越强。这表明荧光标记的抗体与小鼠IgG发生了特异性结合。 四、实验分析

免疫荧光技术的原理是利用抗体与抗原的特异性结合来检测和定位生物分子。在本实验中，我们成功地将荧光标记的抗体与小鼠IgG结合，形成荧光信号。这表明免疫荧光技术可以用于检测特定抗原，并通过荧光显微镜观察到信号。

免疫荧光技术在生物医学研究中具有广泛的应用。它可以用于检测病原体、研究细胞蛋白定位、诊断疾病等方面。例如，在病原体检测中，可以使用荧光标记的抗体来检测病原体的存在和定位，从而提高病原体的检测灵敏度和准确性。在细胞蛋白定位研究中，免疫荧光技术可以用于观察蛋白在细胞内的分布情况，从而揭示蛋白的功能和相互作用关系。在疾病诊断中，荧光标记的抗体可以用于检测特定抗原的存在，从而帮助医生进行疾病的早期诊断和治疗。